Enterobacter

BAB I PENDAHULUAN

1.1 LATA LATAR BELAKANG

Bakteri Bakteriolog ologii merupak merupakan an ilmu yang yang mempelaj mempelajari ari kehidup kehidupan an dan klasifik klasifikasi asi bakteri bakteri.. Bakteri Bakteriolog ologii dapat dapat dikatak dikatakan an juga sebagai sebagai biologi biologi bakteri bakteri.. Di dalamny dalamnya a dipelaja dipelajari ri struktur struktur anatomi sel bakteri, klasifikasi, cara kerja sel bakteri, interaksi antarsel bakteri, dan juga tanggapan bakteri terhadap perubahan pada lingkungan hidupnya. Bakteriologi merupakan satu bagian penting dalam mikrobiologi. Kebany Kebanyakan akan penyakit penyakit bakteria bakteriall dimulai dimulai dengan dengan kolonis kolonisasi asi bakteri. bakteri. Pengec Pengecuali ualian an terhadap cara ini adalah pada bakteri yang menyebabkan penyakit dengan menghasilkan eksotoksin ketika perkembangannya. Eksotoksin teringesti dan bertanggungjawab terhadap gejala penyakit. Bakteri penyebab penyebab toksin merupakan salah satu bakteri yang dapat membawa dampak terhadap masalah kesehatan dan kerugian ekonomi terutama disebabkan oleh diare, nekrotik enteritis, hepatitis, dan renitis. Untuk mendapatkan metode pengendalian dan pencegahan infeksi infeksi suatu suatu penyakit penyakit harusl haruslah ah diketahu diketahuii interak interaksi si antara antara agen penyeba penyebab b infeksi infeksi dengan dengan hospes. Enterob Enterobacte acteriac riaceae eae adalah adalah family family besar besar bakte bakteri ri yang yang ditemuk ditemukan an cukup cukup banyak banyak dan dikenal lebih akrab sebagai bakteri yang patogen , seperti almonella , higella, Proteus, dan Klebsiella. Bakt Bakteri eri!b !bak akter terii Enter Enterob obact acteri eriac aceae eae umumny umumnya a berbe berbent ntuk uk

batan batang g,

dan dan

biasa biasany nya a

panjangnya "!# um. Umunya bersifat $ram!negatif,anaerob fakultatif , memfermentasi gula untuk untuk mengh menghasi asilka lkan n asam asam lakta laktatt dan dan berba berbagai gai produ produk k akhir akhir lainny lainnya. a. Keba Kebany nyaka akan n juga juga mengurai mengurai nitrat. nitrat. Kebany Kebanyaka akan n memiliki memiliki banyak banyak flagela flagela digunaka digunakan n untuk untuk bergera bergerak, k, tetapi tetapi

Identifkasi Enterobacter

1

beberap beberapa a juga bersifat bersifat non!mot non!motil. il. Entero Enterobact bacteri eriacea aceae e

tidak tidak membentu membentuk k spora. spora. %eaksi %eaksi

katalase ber&ariasi pada setiap anggota Enterobacteriaceae. Banyak Banyak juga bakteri bakteri anggota anggota keluarga keluarga Enterob Enterobacte acteriac riaceae eae adalah adalah bagian bagian normal normal dari flora usus yang ditemukan dalam usus manusia dan hewan lainnya, sementara yang lain ditemukan dalam air atau tanah, atau parasit pada berbagai hewan dan tanaman. Escherichia coli 'E.

coli (

adalah

salah

satu

yang

paling

penting ,

banyak

dipelajari

secara genetika dan biokimia. Kebanyakan anggota Enterobacteriaceae tipe ) peritrichous fimbriae berperan dalam adhesi

sel!sel

bakteri

untuk

host

mereka. Beberapa

memproduksi

enterobacteria endotoksin . Endotoksin berada dalam sitoplasma sel dan dilepaskan ketika sel

mati

dan

ketika

dinding

sel

hancur. Beberapa

anggota

keluarga Enterobacteriaceae menghasilkan infeksi sistemik ke dalam aliran darah dan ketika semua sel!sel bakteri bakteri mati melepaskan endotoksin endotoksin yang dikenal dikenal sebagai shock endotoksik endotoksik dan dapat menyebabkan kematian seketika.


2

1.2 MAKSUD PRAKTIKUM

"( *engetahui cara mengidentifikasi bakteri Enterobacter +( *engetahui prosedur pembuatan media pertumbuhan pada bakteri ( *engetahui cara penanaman koloni - biakan kuman Enterobacter

pada media

pertumbuhan bakteri ( *engetahui berbagai macam spesies dan genus bakteri Enterobacter 1.3 TUJUAN PRAKTIKUM

+( Untuk mengidentifikasi bakteri Enterobacter ( Untuk membuat media pertumbuhan pada bakteri ( Untuk melihat morfologi serta sifat bakteri dengan jalan isolasi bakteri dan pewarnaan gram #( Untuk mengamati pertumbuhan bakteri Enterobacter pada media pertumbuhan bakteri


3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

Enterobacter sakazakii adalah bakteri gram negatif berbentuk batang yang termasuk

ke dalam famili Enterobacteriaceae, bersifat motil, reaksi oksidase negatif, bersifat thermotolerant , menghasilkan pigmen kuning pada /ryptic oy 0gar '102 0gar(, tidak

memfermentasi D!sorbitol, menghasilkan 3!glucosidase dan tween 80 esterase, tidak menghasilkan fosfoamidase, dan lambat menghasilkan D40se. Bakteri ini merupakan salah satu patogen yang pada tahun "567 dipisahkan dari spesies Enterobacter cloacae, berdasarkan unsur genetik penyusunnya. ebelumnya E. sakazakii dikenal dengan yellowcloacae yang

pigmented

pertama

kali

dilaporkan

oleh

Pangalos

'"5+5(. E.

sakazakii dimasukkan dalam tren perkembangan patogen dunia sejak tahun +77# dan

banyak diulas oleh para peneliti dari seluruh dunia. Bakteri ini menjadi perhatian karena menyebabkan tingkat mortalitas yang tinggi '7!678( pada bayi yang baru lahir '7!9 bulan(, terutama sekali bayi prematur atau yang memiliki imunitas lebih rendah dari rata!rata bayi! bayi lainnya. *enurut beberapa penelitian yang telah dilakukan, keberbahayaan E. sakazakii adalah karena kemampuannya menyebabkan meningitis 'radang selaput otak( pada bayi baru lahir, sepsis dan necrotizing enterocolitis . ecara umum, angka kematian yang dilaporkan akibat bakteri ini berkisar 7 : 678 pada bayi baru lahir. 0ngka ini cukup tinggi dikarenakan tipe meningitis yang diakibatkan oleh E. sakazakii dapat mengakibatkan abses pada otak atau infarction dengan pembentukan cyst dan kerusakan yang parah pada saraf. /ahun "5#6 adalah tahun dilaporkannya kasus pertama mengenai keterlibatan E. sakazakii sebagai penyebab meningitis pada bayi baru lahir. ejak saat itu terdapat ;7 kasus

serupa lainnya yang juga dilaporkan. 4amun tampaknya tidak semua negara melaporkan kasus infeksi E. sakazakii diwilayahnya. Darimana

Enterobacter sakazakii

berasal 


4

berkoloni di dalam saluran pencernaan manusia dewasa. pesies Enterobacter ini juga dapat ditemukan di produk pangan lain selain susu formula= keju, daging, sayuran, biji!bijian, kondimen dan bumbu!bumbuan. 4amun, beberapa penelitian menunjukkan bahwa bakteri ini juga dapat diisolasi dari lingkungan rumah sakit dan lingkungan processing plant . E. sakazakii berkembang dengan optimal pada kisaran suhu 7!7>1.

?aktu

regenerasi bakteri ini terjadi setiap 7 menit jika diinkubasi pada suhu +>1, dan tentunya kecepatan ini akan meningkat pada suhu optimum pertumbuhannya. *enurut 1. 0rtinya, cukup " sel hidup E. sakazakii mengontaminasi produk susu formula pada proses produksi, maka dalam waktu # hari saja, produk tersebut telah menjadi sangat berbahaya bagi bayi. elain bersifat in&asif, E. sakazakii juga memproduksi toksin ' endotoxin( yang juga berbahaya bagi mamalia yang baru lahir dan belum memiliki sistem kekebalan yang baik. Sia!a "an# !alin# ren$an $er%a&a! En$er'ba($er sa)a*a)ii 

ebenarnya infeksi E.sakazakii bisa menyerang segala usia, namun yang paling rentan adalah bayi berusia dibawah satu tahun, terutama bayi neonatal '+6 hari pertama(, bayi

premature

dan

bayi

dengan

sistem

daya

tahan

tubuh

bermasalah

'immunocompromized (. Bayi dari ibu penderita <)A juga masuk dalam kelompok yang sangat rentan terhadap infeksi E. sakazakii . Pada tahun "557 : "55", Kanada melaporkan + kasus meningitis pada bayi baru lahir yang

disebabkan

oleh E.

sakazakii . Dilaporkan

juga

bahwa

telah

terjadi

beberapa outbreaks E. sakazakii pada ruang 4eonatal )ntensi&e 1are Units '4)1Us( di %umah akit hampir diseluruh dunia. /ermasuk )nggris, Belanda, unani, dan U0.
5

melaporkan adanya kasus dimana bayi yang sebelumnya lahir sehat dan cukup umur kemudian mengalami kerusakan syaraf permanent akibat infeksi E. sakazakii. ebagai informasi tambahan, hingga saat ini belum ditemukan bukti terjadinya transmisi bayi!bayi atau transmisi dari lingkungan.
Ba#aimana !r'&+) s+s+ &a!a$ $er)'n$aminasi

Banyak

kasus

infeksi E.

Enterobacter sakazakii

sakazakii tidak

diketahui

secara



jelas

darimana

sumbernya. 4amun, penelitian!penelitian yang dilakukan selama ini menunjukkan adanya hubungan antara pemberian susu bubuk formula kepada bayi dengan kasus infeksi E. sakazakii. Pada kenyataannya produk susu formula memang bukan suatu produk steril.

Keberadaan E. sakazakii dalam produk susu formula menjadi perhatian dan merupakan medium kontaminasi yang dominan dikarenakan produk ini pada umumnya dikenal sebagai produk yang aman untuk langsung dikonsumsi bayi tanpa memerlukan pemrosesan lebih lanjut 'Kandhal et al, +77(. Penelitian yang dilakukan di Kanada memberikan hasil bahwa produk susu bubuk formula yang berbahan dasar kedelai (Powdered soy-based infant formulas( juga tetap beresiko terkontaminasi E. sakazakii jika kebersihan pada proses

maupun ruangan produksi tidak memadai. Pada dasarnya ada  jalur kemungkinan E. sakazakii mengontaminasi susu formula bayi= ". kontaminasi bahan baku +.kontaminasi susu formula atau kandungan susu lainnya setelah proses pasteurisasi .kontaminasi susu formula pada saat persiapan untuk pemberian susu kepada bayi.
6

pada industri susu dan rumah tangga 'Kandhal et al, +77(, sehingga diperlukan penanganan tambahan terhadap bakteri ini dalam mekanisme azard !nalysis "ritical "ontrol Point <011P 'analisis titik penanganan kritis pada bahaya( di tingkat produksi susu formula. Di tingkat pengguna rumahan, susu bayi pada umumnya disiapkan dengan proses yang minim pemanasan. Dalam hal ini, susu bayi biasanya hanya dicampur air hangat panas!panas kuku 'suhu C ;7>1( yang tidak cukup tinggi untuk mematikan bakteri tersebut. elain itu, membiarkan susu formula yang siap diberikan kepada bayi pada suhu ruang ataupun pada wadah penghangat ' warmer ( dalam waktu lama akan meningkatkan resiko infeksi E. sakazakii terhadap bayi. usu bubuk yang disimpan dalam kaleng ataupun plastik multi!lapisan pada suhu ruang '+7!+;>1( untuk konsumsi "! hari saja, diasumsikan relatif aman, karena kadar airnya yang rendah. 4amun pada kenyataannya, mengingat sifat in&asif yang telah dijelaskan sebelumnya, dalam waktu relatif singkat, bakteri E. sakazakii mampu menduplikasikan dirinya dengan cepat. 0kibatnya, E. sakazakii dalam jumlah cukup untuk menyebabkan penyakit '" juta sel-g produk( pun terkonsumsi oleh bayi kita. Bahkan beberapa peneliti ada yang menemukan bahwa dalam jumlah yang sangat sedikit sekalipun, yaitu C cfu-"77 g, E. #akazakii sudah dapat menyebabkan infeksi pada bayi.

Penyimpanan pada suhu dingin merupakan hal yang tidak umum untuk produk susu bubuk. elain itu, penggunaan sanitizer juga tidak dimungkinkan. Padahal, pertumbuhan E. sakazakii dilaporkan dapat direduksi dengan penggunaan sanitizer pada produk buah!

buahan, apalagi diikuti dengan penyimpanan pada suhu dingin 'Kim, %yu, dan Buechat, +779(. Ba#aimana me$'&e analisa )ebera&aan

E. sakazakii



0dalah dengan metode D0-B0* yang dikeluarkan pada 0gustus +77+ dan masih berlaku

hingga

saat

ini.

etelah

sampel

melewati

tahap

pengayaan

' Pre-

enrichment dan #electi$e enrichment ( dalam media Buffered Peptone ?ater 'BP?( dan EE

Broth, metode tersebut menggunakan media agar Aiolet %ed Bile $lucose 'A%B$0( dan kemudian diikuti dengan identifikasi biokimia menggunakan /ryptic oy 0gar '102 0gar( untuk mengamati ciri khusus, yaitu pembentukan pigmen kuning yang dimiliki E. Identifkasi Enterobacter

7

sakazakii . Pada media A%B$0 setelah inkubasi selama + jam pada suhu 9>1, E. sakazakii akan tampak sebagai koloni berwarna ungu yang dikelilingi oleh halo berwarna

ungu yang merupakan hasil endapan dari bile salt. Pada media /0 '102 0gar( E. sakazakii akan tampak sebagai koloni berwarna kuning setelah inkubasi selama 6 : ;+ jam pada suhu +#>1. *etode D0-B0* ini secara keseluruhan membutuhkan sekitar ; hari untuk melakukan analisa. elain membutuhkan waktu yang sangat lama, ternyata berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh )&ersen dan orsythe '+77;( menunjukkan bahwa sekitar +8 dari strain E. sakazakii tidak membentuk pigmen kuning pada saat ditumbuhkan pada media 102 0gar di

suhu +#>1. Padahal, karakteristik itulah yang sering digunakan sebagai identifikasi E. sakazakii . Bahkan beberapa penelitian sebelumnya juga menyebutkan bahwa seringkali

beberapa strain E. sakazakii tidak dapat tumbuh pada media standar untuk bakteri Entrobacteriaceae dan 1oliform. 2leh

karena

itulah

metode

baru

yang

lebih

baik

untuk

mengidentifikasi E.

sakazakii kemudian dikembangkan oleh para ahli. etelah dilakukan berbagai penelitian,

kemudian

diketahui

bahwa E.

sakazakii memiliki

karakteristik

yang

lebih

spesifik

dibandingkan dengan pembentukan pigmen kuning pada 102 0gar, yaitu bakteri tersebut memiliki enim 3!D!glucosidase. Karakteristik ini dimiliki oleh "778 strain E. sakazakii dan tidak dimiliki oleh "778 strain Enterobacter lainnya '*anafi dan Fang, +77#(.


8

BAB III MET,DE PRAKTIKUM

3.1 -AKTU DAN TEMPAT

Praktikum Enterobacter

bakteriologi

mengenai

identifikasi

dan

cara!cara

identifikasi

bakteri

yang dilaksanakan hari enin, + Desember +7" pukul 75.7!"+.77 ?)/0.

Bertempat di Faboratorium *ikrobiologi Poltekkes Kemenkes *akassar Gurusan 0nalis Kesehatan. 3.2 ALAT

0lat yang digunakan pada pemeriksaan ini adalah sebagai berikut = A Pen#ambilan sam!el

Pot-wadah sampel Fabel Kecil B Is'lasiPenanaman 

1entrifuge



%ak H tabung reaksi



)nkubator



/abung centrifuge



2se



Bunsen



Pipet tetes



Kertas pembungkus media

/ I&en$i0i)asi 

*ikroskop



2se



4all



%ak /abung Identifkasi Enterobacter

9



2bjek glass



Fampu piritus dan korek api



Bak pewarnaan

3.3 BAHAN

Bahan yang digunakan pada percobaan ini= A. Pen#ambilan sam!el

ampel yang digunakan adalah Urine B. Is'lasi

"( *edia pemupuk 

B<)B

+( *edia elektif 

B0P 'Blood 0gar Darah(



*10 ' *ac 1onkey 0gar(

/. I&en$i0i)asi 

*edia differensial •





/)0 '/riple ugar )ron 0gar(

Untuk Uji biokimia pada deretan gula!gula = •

$lukosa

•

Faktosa

•

ukrosa

•

*altosa

•

*annitol

•

)* 'ulfur )ndol *otility(

•

10 'immon 1itrat 0gar(

•

*%!AP

•

Urea

Untuk Pewarnaan Identifkasi Enterobacter

10

•

1$A '1arbol $entian Aiolet(

•

Fugol

•

•

0lcohol 598 afranin

3. /ara Is'lasi Dan I&en$i0i)asi A. Hari I 1 Penanaman !a&a Me&ia Pem+!+)

a. iapkan alat dan bahan yang akan digunakan. b. ampel urine terlebih dahulu dicentrifuge selama "# menit dengan +.#77 rpm, kemudian ambil endapannya menggunakan ose steril lalu ditanam pada media pemupuk B<)B. c. )nkubasi pada suhu ; o1 selama "6!+ jam di inkubator. B. Hari II 1. *engamati

hasil

penanaman

pada

media

pemupuk

dengan

melakukan

pemeriksaan mikroskopik dengan pewarnaan gram yaitu = a 0mbil " ose biakan kuman dengan ose steril lalu buat preparat pada objek

glass yang bersih dan bebas lemak, keringkan. b etelah kering, preparat tersebut difiksasi diatas nyala api dengan melewatkan

maksimal kali. ( Falu tetesi dengan at warna 1$A pada bagian apusan, diamkan selama +!

menit. & 1uci air mengalir e /etesi dengan lugol, diamkan #!97 detik. 1uci air mengalir. 0 Dekolorisasi - lunturkan dengan alkohol 598,diamkan selama +7!7 detik. # 1uci air mengalir % /etesi kembali dengan at warna safranin, diamkan sekitar +! menit. Falu cuci

air mengalir Identifkasi Enterobacter

11

i Keringkan preparat, setelah kering tetesi sekitar " tetes oil imersi dan lakukan

pemeriksaan dibawah mikroskop dengan pembesaran lensa objektif "77I.  0mati dan catat hasil 2. etelah dilakukan pewarnaan, dan didapatkan hasil maka dilanjutkan dengan

isolasi pada media selektif yaitu media *1 0gar, dan B0P dengan metode gores kuadran. 3. Diambil " ose biakan kuman, ditanam pada media *1 0gar, dan B0P dengan

menggoreskan dengan metode kuadran. . etelah digoreskan, media dibungkus kembali lalu di masukkan ke inkubator. 4. Dieramkan pada suhu ; o1 selama "6!+ jam. /. Hari III 1. Pengamatan pada media selektif, diamati pertumbuhan koloninya. 2. *edia yang dapat menghasilkan pertumbuhan koloni maka dilakukan pemeriksaan

mikroskopik dengan pewarnaan gram yaitu = a 0mbil " ose biakan kuman dengan ose steril lalu buat preparat pada objek

glass yang bersih dan bebas lemak, keringkan. b etelah kering, preparat tersebut difiksasi diatas nyala api dengan melewatkan

maksimal kali. ( Falu tetesi dengan at warna 1$A pada bagian apusan, diamkan selama +!

menit. & 1uci air mengalir e /etesi dengan lugol, diamkan #!97 detik. 1uci air mengalir. 0 Dekolorisasi - lunturkan dengan alkohol 598,diamkan selama +7!7 detik. # 1uci air mengalir % /etesi kembali dengan at warna safranin, diamkan sekitar "!+ menit. Falu cuci

air mengalir i Keringkan preparat, setelah kering tetesi sekitar " tetes oil imersi dan lakukan

pemeriksaan dibawah mikroskop dengan pembesaran lensa objektif "77I. 3. etelah dilakukan

pemeriksaan mikroskopik dengan pewarnaan gram dan

didapatkan hasil sesuai dengan cir!ciri bakteri yang diidentifikasi, maka koloni Identifkasi Enterobacter

12

tersangka bakteri Proteus diambil " ose koloni dari media selektif yang koloninya tumbuh dan ditanam pada media differensial /)0. . )nkubasi pada inkubator pada suhu ; o1 selama "6!+ jam. D. Hari I5 1. Pengamatan hasil penanaman pada media differensial /)0 2. etelah diamati, diambil " ose koloni lalu ditanam untuk uji biokimia pada media

gula!gula '$lukosa, laktosa, sukrosa, maltosa, mannitol(, )*, 10, *% dan AP, dan Urea 3. )nkubasi pada incubator dengan suhu ; o1 selama "6!+ jam E. Hari 5 1. Pengamatan pertumbuhan koloni pada media pertumbuhan 2. 0mati dan catat hasil, cocokkan dengan tabel reaksi uji biokimia dan catat

kesimpulan bakteri apa yang didapat.


13

BAB I5 HASIL DAN PEMBAHASAN

.1 HASIL PENGAMATAN A. HARI I 6 ". Penanaman pada media pemupuk "( *edia B<)B

Ket = *enjadi keruh +. Pemeriksaan *ikroskopik
Keterangan = Bentuk = Basil ifat = $ram negatif usunan = tunggal dan berantai /ersangka

= Enterobacter

B. HARI II

". Pengamatan hasil isolasi = N'

/iri

*edia B0P


*edia *10

14

".

Bentuk Koloni =

Kecil!edang

Bulat, Besar

+.

?arna Koloni =

Putih keabuan

Putih!merah keruh

.

Ele&asi =

edikit cembung

1embung

.

ifat =

mooth

mooth

". Pemeriksaan mikroskopik B0P

*10

Basil gram positif

Basil gram positif

/.HARI III

". Pengamatan hasil penanaman pada media differensial

15



Fereng = 0cid  Dasar = 0cid  $as = Positif 'H(  <+ = Positif 'H( +. Uji Biokimia Deretan gula!gula

$lukosa = Positif H-$as ukrosa = Positif H-$as *altosa = Positif H-$as *anitol = Positif H-$as Faktosa = Positif H-$as )* = ulfur = Positif Identifkasi Enterobacter

16

)ndol = Positif *otilily = Positif *% = Positif AP = 4egatif 10 = Positif Urea = Positif


17

.2

PEMBAHASAN


18

BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN 4.1KESIMPULAN

Dari hasil praktikum, setelah dilakukan beberapa tahap identifikasi dari sampel urine dapat diambil kesimpulan bahwa tidak ditemukan adanya bakteri Enterobacter karena hasil yang didapatkan bukan ciri!ciri dari bakteri klebsiella. emua hasil yang didapatkan lebih mengarah ke ciri!ciri bakteri Enterobacter dan dari hasil biokimia.

4.2SARAN

0dapun saran yang ingin disampaikan praktikan melalui laporan adalah sebagai berikut = ". Diharapkan didalam praktikum, praktikan harus menggunakan 0PD lengkap. +. *enggunakan alat!alat yang steril dan bersih. . *elakukan tahap pemeriksaan sesuai tandar 2perasional Prosedur '2P( yang ada. . elama melakukan praktikum, praktikan harus berhati!hati dalam bekerja dan tetap menjaga kebersihan dan keutuhan alat!alat yang digunakan


19

DA7TAR PUSTAKA



http=--www.merckmillipore.co.id-chemicals- en$er'ba($er8 sakaakii-cJjKmb.s"2i%000EdiU*DLg"



http=--analiskesehatan!indonesia.blogspot.com-+7""-76-identifikasi!bakteri!gram! positif!dan.html


20

Enterobacter

Recommend Documents