RANDOX Manual Tecs. Química Clínica-2013

ALBUMINA (ALB)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Verde de Bromocresol MANUAL RX MONZA PARA SU USO La determinación cuantitativa in vitro de albúmina en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza. Cat. No. AB 362 6 x 100 ml

R1. CAL

BCG Concentrado Patrón

6 x 13.5 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO (1) La albúmina es la proteína sérica más abundante representando el 55-65% de las proteinas totales. Se sintetiza en el hígado y tiene una vida media de 2 a 3 semanas. Las principales funciones biológicas de la albúmina son mantener el equilibrio de agua en suero y plasma, transportar y almacenar una amplia variedad de ligandos ej: acidos grasos,calcio,bilirrubina y hormonas como tiroxina. La albúmina también es una fuente endógena de aminoácidos. La hipoalbuminemia está asociada con las siguientes condiciones :analbuminemia; sintesis deteriorada de albúmina en el higado; enfermedades hepaticas; malnutrición o malabsorción; shock generalizado; quemaduras o dermatitis; enfermedades renales e intestinales .La hiperalbuminemia tiene poca relevancia diagnóstica excepto tal vez en deshidratación. PRINCIPIO(2) La medición de albúmina en suero se basa en su unión cuantitativa con el indicador 3,3',5,5'-tetrabromo-m cresol sulfontaleina (verde de bromocresol BCG). El complejo albúmina-verde de bromocresol presenta una absorción máxima a 578 nm, siendo la absorbancia directamente proporcional a la concentración de albúmina en la muestra. PREPARACION Y EXTRACCION DE LA MUESTRA Suero, plasma heparinizado o plasma con EDTA. Se pueden utilizar los procedimientos normales de recogida y almacenamiento del suero para las muestras que se vayan a analizar con este método. El suero es estable durante 3 días a una temperatura de entre 2 y 8 C, o durante 6 meses a -20C. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

Concentración inicial de las soluciones

Atención: Patrón El material de origen humano del que se deriva este producto ha sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO. Los métodos utilizadon están aprobados por FDA. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar como posibles transmisores de enfermedades infecciosas y eliminar apropiadamente. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO Y DEL PATRON R1. Concentrado BCG Diluya el contenido de una botella con 87 ml de agua destilada. Estable durante 3 meses si se conserva entre +15 y +25C. CAL. Estandard Contenido listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si se conserva entre +15 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Concentrado BCG Patron Albumina MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Pipetas para dispensar volumenes 10 l y 3,0 ml. Cronómetro y baño de agua o bloque de calentamiento para mantener la temperatura entre 20 - 25ºC. Espectrófotómetro con una capacidad de longitud de onda de 600 a 650 nm Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).

R1.

Verde de Bromocresol (BCG) concentrado Tampón succinato 75 mmol/l, pH 4.2 Verde de bromocresol (BCG) 0.15 mmol/l Brij 35 Conservante CAL Patrón Especifico para cada lote

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MANUAL AB 362

PROCEDIMIENTO(2) Utilice H2O de doble destilación para realizar una nueva calibración de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione ALB en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo S0

Patrón S1

Muestra

H2O de doble destilación 3 μl Patrón Muestra Reactivo 1000 μl

3 μl 1000 μl

3 μl 1000 μl

Mézclelo e incúbelo durante 20 minutos a 20-25 oC o durante 10 minutos a 37 oC. Introdúzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda llevar a cabo una calibración diaria mediante el patrón CAL que se proporciona en el kit o mediante el suero de calibración de nivel 3 de Randox. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Espectrofotómetro: Cubeta: Temperatura de incubación: Medición:

578 nm o 623 nm 630 nm (600 - 650 nm) 1 cm de espesor 20 - 25C Frente al blanco de reactivo

Pipetear en tubos de ensayo:

H2O destilada Patrón (CAL) Suero o Plasma Reactivo de BCG (R1)

Reactivo

Patrón

Muestra

0,01 ml ----3,00 ml

--0,01 ml --3,00 ml

----0,01 ml 3,00 ml

Mezclar e incubar durante 5 min entre +20 y +25C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al blanco de reactivo CÁLCULO MANUAL La concentración de albúmina en la muestra puede calcularse utilizando la fórmula siguiente:

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIA Se analizaron los siguientes analitos hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren: Bilirrubina Intralípido® Triglicéridos Hemoglobina

500 mol/l 1,2% 22,75 mmol/l 6 g/l

VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO(2) Adultos 38 - 44 g/l (3,8 – 4,4 g/dl) Recién nacidos 38 - 42 g/l (3.8 - 4.2 g/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar las diferencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC. LINEALIDAD Este método es lineal hasta 7,55 g/dl. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 1 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 2. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de albúmina con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 0,287 g/dl.

Conc. de albúmina (g/l o g/dl) Amuestra =

x Apatrón

Concentración del patrón

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia DA470 de la albúmina (IFCC).

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MANUAL AB 362

PRECISION (Suero) Análisis (Intra) Nivel 1 Media (g/dl) 2,86 DE 0,036 CV (%) 1,28 n 20

Nivel 2 4,36 0,031 0,71 20

Análisis (Inter) Media (g/dl) DE CV (%) n

Nivel 1 2,86 0,129 4,52 20

Nivel 2 4,36 0,174 3,99 20

CORRELACION Se comparó el método Randox (Y) con un método comercial disponible (X). Se analizaron 51 muestras con valores abarcando un rango de 22 a 46 g/l en un analizador Hitachi 747. El análisis de regresión lineal de los datos resultó en la siguiente ecuación: Y = 1,073 X + 0,204 con un coeficiente de correlación r = 0.9910 Se analizaron 40 muestras con valores de entre 1,66 y 4,51 g/dl. REFERENCIAS 1. Grant G.H., et al Amino Acids and Proteins; Fundamentals of Clinical Chemistry, Tietz N.W. Editor, Third Edition, WB Saunders Company Philadelphia USA, 328-329, 1987 2. Doumas, B.T., Watson, W.A., Biggs, H.G., Clin. Chim. Acta. 1971; 31: 87.

Revised 10 Sep 10 bm Rev. 001

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FOSFATASA ACIDA (ACP)

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS R1. Bufer Contenios listos para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad si se conserva entre +2 to +8C.

Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Fosfatasa Acida en el suero. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. No. Cat. AC 1011 20 x 3 ml

R1. Tampón R2. Sustrato R3. Tartrato SAM STAB Estabilizador

1 x 70 ml 20 x 3 ml 10 frascos 1 frasco

METODO COLORIMETRICO

fosfatasa ácida

fosfato + 1-naftol

1-naftol+sal de 4-cloro-2-metilfenildiazonio* colorante azo * = Sal TR Fast Rojo PREPARACION DE LA MUESTRA Suero. La muestra puede ser estabilizado mediante la adición de 1 gota de ácido acético estabilizador (STAB SAM) a 1 ml de suero. Estable durante 3 días a +2 y +8C ó 24 horas a +15 y +25C. Suero. La muestra se estabiliza añadiendo una gota de ácido acético (estabilizador 4) a 1 ml de suero. Es estable durante 3 días entre +2 y +8C ó 24 horas entre +15 y +25C. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1 Tampón Tampón citrato R2. Sustrato 1-naftilfosfato Sal TR Fast Rojo R3. Tartrato Tartrato sódico SAM STAB Estabilizador Acido acético

Para la Fosfatasa ácida no prostática: R2. Substrato (R2B) Disuelva el contenido de 1 botella de sustrato R2 en 3 ml de tampón R1. A continuación, transfiera el contenido a un vial de tartrato R3. Estable durante 5 días si se conserva entre +2 to +8C o 24 horas entre +15 y +25C, Conservese protegido de la luz. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Sustrato Tartrato Estabilizador

PRINCIPIO(1) 1-naftil-fosfato + H2O

Para la Fosfatasa ácida total: R2. Substrato (R2A) Disuelva el contenido de 1 botella de sustrato R2 en 3 ml de tampón R1. Estable durante 5 días si se conserva entre +2 y +8C o 24 horas entre +15 to +25C, Conservese protegido de la luz.

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351). PRPROCEDIMIENTO FOSFATASA ÁCIDA TOTAL Seleccione ACP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

0,05 ml 0,5 ml

Mézclelo, incúbelo durante exactamente 5 minutos a 37 °C o durante 10 minutos a 20-25 °C y aspírelo en Rx Monza.

Concentraciones en la prueba 75 mmol/l, pH 5,2 10 mmol/l 2,5 mmol/l

FOSFATASA ÁCIDA NO PROSTÁTICA Seleccione NACP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

0,05 ml 0,5 ml

135 mmol/l 3 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio.

Mézclelo, incúbelo durante exactamente 5 minutos a 37 °C o durante 10 minutos a 20-25 °C y aspírelo en Rx Monza. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.

Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

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MANUAL/ RX MONZA AC 1011

FOR MANUAL USE Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

Hg 405 nm 1 cm de espesor 30/37C frente al aire


Muestra Solución de reactivo R2

Macro

Semi Micro

0,20 ml 2,00 ml

0,10 ml 1,00 ml

Mezclar, verter en la cubeta e incubar durante 5 min a 30/37C. Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. CÁLCULO MANUAL Para calcular la actividad de la fosfatasa ácida en la muestra utilizar las fórmulas siguientes: Fosfatasa ácida total: U/l = 743 x ΔAsol.2a/min Fosfatasa prostática: U/l = 743 x (ΔAsol.2a/min - ΔAsol.2b/min) CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. INTERFERENCIA Sueros hemolíticos e ictéricos (bilirrubina > 3 mg/dl) interfieren en la prueba. VALORES NORMALES EN SUERO (2)

Fosfatasa ácida total Hombre Mujer Fosfatasa ácida prostática

30C

37C

Hasta 4,2 U/l Hasta 3,0 U/l

Hasta 4,7 U/l Hasta 3,7 U/l

Hasta 1,5 U/l

Hasta 1,6 U/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza. FOSFATASA ÁCIDA TOTAL LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 159 U/I. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 4 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de fosfatasa ácida con un nivel aceptable de precisión se determinó en 2,53 U/l. PRECISION Intraensayo Media (U/l) DE CV(%) n Interensayo Media (U/l) DE CV(%) N

Nivel 2 15.9 0.717 4.51 20

Nivel 3 43.6 1.90 4.35 20

Nivel 2 15.9 1.05 6.59 20

Nivel 3 43.6 3.04 6.98 20

CORRELACIÓN Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9723 X + 0.5527 y un coeficiente de correlación de r = 0,9925 se analizaron 42 muestras de pacientes abarcando un rango de 2,5 a 93,9 U/l. FOSFATASA ÁCIDA NO PROSTÁTICA LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 80,8 U/I. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 4 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de fosfatasa ácida con un nivel aceptable de precisión se determinó en 1,76 U/l. PRECISION Intraensayo Media (U/l) DE CV(%) n Interensayo Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 6.65 0.289 4.34 20

Nivel 2 17.8 0.765 4.30 20

Nivel 1 6.65 0.295 4.43 20

Nivel 2 17.8 0.892 5.01 20

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MANUAL/ RX MONZA AC 1011

CORRELATION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9653 X + 0.1849 y un coeficiente de correlación de r = 0,9971. se analizaron 40 muestras de pacientes abarcando un rango de 2,1 a 80,2 U/l. REFERENCIAS 1. Hillmann, G.J., Clin. Chem. Clin. Biochem. 1971; 9: 273. 2. Silver, D., et al., J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21: 519.

Revisado 05 Sep 11 bm Rev. 002

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ALDOLASA (ALS)

PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD R1. Tampón/Sustrato Reconstituir un vial de Tampón/Sustrato 1 con 20 ml e agua bidestilada. Es estable durante 2 semanas si se conserva entre +2 y +8C.

Fructosa-1,6-difosfato aldolasa MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Aldolasa en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma Manual y en el analizador RX monza. No. Cat. AD 189 5 x 20 ml

R1. Tampón/Sustrato R2. NADH R3. GDH/TIM/LDH

5 x 20 ml 2 x 1 ml 1 vial

PRINCIPIO La aldolasa convierte la fructosa-1,6-difosfato (F-1,6-DP) en gliceraldehído-3-fosfato (GAP) y dihidroxiacetona fosfato (DAP). La adición de triosafosfato isomerasa (TIM), glicerolfosfato deshidrogenada (GDH) y NADH convierte la dihidroxiacetona fosfato en glicerol-1-fosfato. El grado de la reacción de la aldolasa se mide por la disminución de la absorbancia a 340 nm como consecuencia de la conversión de NADH en NAD+. aldolasa

F-1,6-DP DAP

GDH

2DAP + 2NADH + 2H+

2Glicerol-1-P + 2 NAD+

MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1. Tampón/Sustrato Tampón colidina Monoyodoacetato F-1,6-DP R2. NADH R3. GDH/TIM/LDH GDH TIM LDH Ammonium Sulphate

R3. GDH/TIM/LDH Componentes listos para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DEL REACTIVO EN FUNCIONAMIENTO PARA RX MONZA Prepare el reactivo en funcionamiento como se indica en la tabla siguiente:Tampón/Sustrato R1 2.5ml 5.0ml 10.0ml

NADH R2 0.05ml 0.1ml 0.2ml

GDH/TIM/LDH R3 0.01ml 0.02ml 0.04ml

Estable durante 8 horas entre +2 y +8ºC.

GAP + DAP

TIM

GAP

R2. NADH Reconstituir un vial de NADH 2 con 1 ml de agua bidestilada. Es estable durante 4 semanas entre +2 y +8C.

Concentración en la prueba 51 mmol/l, pH 7,4 0,27 mmol/l 2,7 mmol/l 0,23 mmol/l ≥ 326 mU/ml ≥ 4,35 U/ml ≥ 616 mU/ml > 35%

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas.

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Sustrato NADH GDH/TIM/LDH MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Calibrador de aldolasa de Randox (No. Cat. AD 5000) Control de Aldolasa Randox Nivel 2 (Cat. No. AD 5001) y Nivel 3 (Cat. No. AD 5002) 0.9% Solución NaCl. PROCEDIMIENTO Seleccione ALS en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo:

H2O de doble destilación ALS CAL Muestra Reactivo en funcionamiento

SO*

Patrón S1

Muestra

35µl ----450 µl

--35 µl --450 µl

----35 µl 450 µl

Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a 2025ºC y aspírelo en RX monza. *blanco de reactivo CALIBRACIÓN PARA RX MONZA El uso de solución salina y Randox Aldolasa sérica de calibración se recomienda para la calibración. LA calibración se recomienda a los cambios en el lote del reactivo como se indica en los procedimientos de control de calidad.

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MANUAL/ RX MONZA AD 189

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm (Hg 365 nm o Hg 334 nm) 1 cm de espesor 37C frente a muestra blanco

Pipetear en tubos de ensayo: Muestra Blanco Muestra Tampón/Sustrato (R1 Solución NaCl 0,9% NADH (R2) GDH/TIM/LDH (R3)

0,2 ml 2,50 ml -

Calibrador

Muestra

0,2 ml 2,50 ml 0,05 ml 0.01 ml

0,2 ml 2,50 ml 0,05 ml 0,01 ml

Mezclar la muestra, R1, R2 y R3 y se incuba durante 5 minutos a 37C y leer la absorbancia A1 contra el blanco de muestra. Dejar reposar a 37C durante exactamente 20 minutos. después de la primera lectura y entonces medir la absorbancia A2 frente al blanco. * Si A1 es < 0,95 diluir 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir el test. Multiplicar el resultado por 2. MANUAL DE CÁLCULO Para calcular la actividad aldolase utilizar la siguiente fórmula: (A1 - A2) Muestra x Conc. de calibrador (A1 - A2) Calibrador CONTROL DE CALIDAD Los controles de Aldolasa Randox Niveles 2 y 3 se recomiendand para el control de calidad diario. Se deberían procesar 2 niveles de control al menos una vez por día. Los valores que se obtengan deberían entrar dentro de un rango específico. Si los valores no estan dentro de este rango, y la repetición excluye el error, se deberían lleva a cabo los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 106 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1+4 con una solución de NaCl del 0,9% y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Aldolasa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 1,73 U/l. PRECISION Precisión intraensayo Media (U/l) DE CV(%) n Precisión interensayo Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 2 6.36 0.295 4.64 20

Nivel 3 19.1 0.854 4.47 20

Nivel 2 6.36 0.402 6.32 20

Nivel 3 19.1 1.35 7.09 20

CORRELACIÓN El método de Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0,9815 X + 0,183 y un coeficiente de correlación r = 0,9917. Se analizaron 42 muestras con valores de entre 2,46 y 89,86 U/l. REFERENCIA 1. Feissli, S., et al., (1966). Klin. Wschr. 44: 390.

INTERFERENCIA La hemólisis interfiere en la prueba. VALORES DE REFERENCIA(1) Suero: Hasta 7,6 U/l (37C) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICAS Se obtuvieron las siguientes características de rendimiento mediante un analizador RX monza y un modo de célula de flujo a 37ºC.

Revisado el 15 de Sep 2010 bm Rev. 001

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ALT


Alanina Aminotransferasa IFCC MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Alanina Aminotransferasa en el suero y plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. No. Cat. AL 1200 20 x 2 ml AL 1205 10 x 10 ml AL 1268 5 x 20 ml AL 2360 5 x 100 ml

R1a. R1b. R1a. R1b. R1a. R1b. R1a. R1b.

Tampón/Substrato Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato

1 x 70 ml


1 x105 ml

20 x 2 ml

10 x 10 ml


1 x 105 ml


5 x 100 ml

5 x 20 ml

5 x 100 ml

METODO UV Este es un método estandard optimizado de acuerdo con las concentraciones recomendadas por la IFCC. PRINCIPIO ALT

-oxoglutarato + L-alanina

L-glutamato + piruvato LD

piruvato + NADH + H+

L-lactato + NAD+

MUESTRA Suero, plasma heparinizada o plasma EDTA. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes

Concentración en la Prueba

R1a. Tampón/Substrato Tampón Tris 100 mmol/l, pH 7,5 L-alanina 0,6 mol/l R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato -oxoglutarato 15 mmol/l LD ≥1,2 U/ml NADH 0,18 mmol/l

La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se desechen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD R1a. Tampón/Substrato Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y+8C R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato R1b con el volumen apropiado de Tampón/Substrato R1a: 2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AL 1200) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AL 1205) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (AL 1268) Estable durante 14 días entre +2 y+8C e ó 24 horas entre+15 y +25C. Cat. No. AL 2360 5 x 100 ml Reconstituir un vial of Enzima/Coenzima/-oxoglutarato R1b con una parte de Tampón/Substrato R1a y después transferir todo el contenido a la botella R1a, enjuagando la botella R1b varias veces. Estable durante 14 días entre +2 y+8C e ó 24 horas entre+15 y +25C. R1 = Bufer/Substrato/Enzima/Coenzima/-oxoglutarato R2 = Ninguno MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Substrato Enzima/Coenzima/-oxoglutarato MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) Salino RX series (Cat. No. SA 3854)

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MANUAL AL 1200 PROCEDIMIENTO Aspire H2O de doble destilación y realice una nueva calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo. Seleccione ALT en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

INTERFERENCIA Evitar la hemólisis ya que interfiere con el análisis. VALORES DE NORMALIDAD EN SUERO(1) 25C

30C

hasta 22 U/l hasta 17 U/l

hasta 29 U/l hasta 22 U/l

Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

Hombres Mujeres

0,05 ml 0,5 ml

Mézclelo y aspírelo en Rx Monza. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm (Hg 334 nm o Hg 365 nm) 1 cm de espesor 30/37C frente al aire

Pipetear en la Cubeta:

Muestra R1. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato

Macro

Micro

0,2 ml 2,0 ml

0,1 ml 1,0 ml

37C hasta 40 U/l hasta 31 U/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37 ºC. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de ALT con un nivel aceptable de precisión se determinó en 7,99 U/l. LINEALIDAD Este método es lineal hasta 500 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + x con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por x + 1. PRECISION

Mezclar. Leer la absorbancia inicial después de 1 minuto. Leer de nuevo tras 1, 2 y 3 minutos. Observar si el cambio de absorbancia por minuto está entre 0,11 y 0,16 a 340 nm/Hg 334 nm 0,06 y 0,08 a Hg 365 nm usar sólo los valores para los 2 primeros minutos del cálculo.

Análisis (Intra)

CÁLCULO MANUAL Para calcular la actividad de la ALT utilizar la siguiente fórmula:

Análisis (Inter)

Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 2 38.9 1.79 4.61 20

Nivel 3 134 1.59 1.19 20

Nivel 2 38.9 1.78 4.58 20

Nivel 3 134 5.22 3.90 20

U/l = 1746 x A 340 nm/min U/l = 1780 x A Hg 334 nm/min U/l = 3235 x A Hg 365 nm/min


NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia JSCC TS01 de ALT.

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal:

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Y = 0,99 X + 17,2 y un coeficiente de correlación r = 0,9935 Se analizaron 47 muestras de pacientes con valores de entre 18 y 522 U/l. REFERENCIAS 1. International Federation of Clinical Chemistry, Scientific Committee. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1980; 18: 521-534.

Revisado el 04 Apr 11, bm Rev. 004

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AMONIACO (NH3)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Método Enzimático - UV MANUAL PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Amoníaco en plasma. Este producto es adecuado para su utilización en Manual. No. Cat. AM 1054 20 x 3 ml

R1a. R1b. R2. CAL.

Reactivo Tampón GLDH Patrón

20 x 3 ml 70 ml 1,0 ml 5,5 ml

RELEVANCIA CLÍNICA La mayor fuente de amoniaco en circulación es el tracto gastrointestinal. En condiciones normales, el amoniaco se metaboliza a la urea por las enzimas hepáticas. Muchas enfermedades, tanto heredadas como adquiridas, causan un incremento en los niveles de amoniaco (hiperamonemia). Las deficiencias heredadas de las enzimas del ciclo de la urea son la mayor causa de hiperamonemia en niños. La hiperamonemia adquirida está provocadas por una enfermedad hepática, insuficiencia renal o el síndrome de Reye. Un nivel de amoniaco elevado resulta tóxico para el sistema nervioso central. PRINCIPIO(1)

Las soluciones R1b, R2 y CAL contienen azida sódica. Evitar su ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se desheche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materials Biológicos y Químicos de acuerdo a las pautas locales. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio

GLDH

-oxoglutarato + NH3 + NADH

glutamato + NAD+

El amoníaco se combina con -oxoglutarato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa (GLDH) para + formar glutamato y NAD . La correspondiente disminución de la absorbancia a 340 nm es proporcional a la (1) concentración de amoníaco en plasma. MUESTRA(2) Plasma heparinizado o EDTA plasma. Se obtiene sangre venosa sin estancar y se conserva en un baño de hielo. El plasma se separa dentro de 30 min. El ensayo de amoníaco debería llevarse a cabo inmediatamente. El plasma puede conservarse durante 2 horas a +4C. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes R1a. Reactivo NADH -oxoglutarato R1b. Tampón Trietanolamina R2. GLDH CAL. Patrón

Concentración inicial de las soluciones 0,16 mmol/l 2 mmol/l 0,15 mol/l, pH 8,6 1200 U/ml See lot specific insert

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Reactivo Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1a con 3 ml de Tampón R1b. Es estable 24 horas entre +15 y +25C ó 2 días entre +2 y +8C. R1b. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8C. R2.

GLDH Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8C.

CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8C. R1 = Reactivo/Tampón R2 = GLDH MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Tampón GLDH Patrón MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS Controles Randox de Amonio Etanol: NIvel 1 (Cat. No. EA 1366) Nivel 2 (Cat. No. EA 1367) Nivel 3 (Cat. No. EA 1368)

MANUAL - AMONIACO - AM 1054

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PROCEDIMIENTO

CÁLCULOS Ablanco = Blanco A1 - Blanco A2

Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 25/30/37C Frente al aire

Utilizando un patrón: Amuestra - Ablanco

Procedimiento Macro

Conc. de Amoníaco =

Pipetear en la cubeta: Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

--0,2 ml --3,0 ml

----0,2 ml 3,0 ml

0,2 ml ----3,0 ml

Muestra Agua destilada Patrón Reactivo (R1)

Amuestra = Muestra A1 - Muestra A2

x Patrón de conc. Apatrón

-

Ablanco

INTERFERENCIA La hemólisis interfiere con el análisis. En muestras normales se observa un pequeño cambio de absorbancia. Esto puede ser aumentado añadiendo 0,3 ml de muestra en vez de 0,2 ml. para el procedimiento macro y 0,15 ml de muestra en vez de 0,1 ml para el procedimiento semi micro.

Mezclar, dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la muestra y del blanco (A1).

Para utilizar un método completamente automatizado de amoníaco recomendamos No. Cat. AM 1015.

GLDH (R2)

VALORES NORMALES (2) Amoníaco en plasma:

0,02 ml

0,02 ml

0,02 ml

Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y del blanco (A2). Procedimiento Semi Micro Pipetear en la cubeta:

Muestra Agua destilada Patrón Reactivo (R1)

Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

--0,1 ml --1,5 ml

----0,1 ml 1,5 ml

0,1 ml ----1,5 ml

10 - 47 mol/l 0,17 -0,80 g/ml

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. LINEALIDAD El método es lineal hasta 1180 µmol/l (20 µg/ml). REFERENCIAS 1. Dewan J.G., Biochem J., 1938; 32: 1378. 2. Mondzac A., Ehrlich G.E., Seegmiller J.E., J Lab Clin. Med., 1965; 66: 526.

Mezclar, y dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la muestra y del blanco (A1). GLDH (R2)

0,01 ml

0,01 ml

0,01 ml

Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y del blanco (A2). CONTROL DE CALIDAD Los controles Randox de Amonio Etanol Nivel 1, Nivel 2 y Nivel 3 se recomiendan para el control diario de calidad Deberían utilizarse como mínimo dos niveles de controles una vez al día. Los valores obtenidos deberían entrar dentro de un rango determinado. Si estos valores se salen de ese rango aun habiéndolo repetido, se deben seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar los ajustes del instrumento y el foco de luz. 2. Comprobar la limpieza de todo el equipo. 3. Comprobar el agua y la presencia del algún posible agente contaminante que pueda interferir en los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y los componentes del mismo. 6. Contactar con el Servicio Técnico de Laboratorios Randox. Irlanda del Norte (028) 94422413.

Revisado el 26 Abril 2010 bm Rev. 001

ANTITROMBINA III (AT III) SEMIAUTOMÁTICO

INDICACIONES Determinación cuantitativa in vitro de la antitrombina III (AT III) en plasma humano mediante el método cromogénico. El producto es adecuado para uso con métodos manuales o semiautomáticos. Núm. cat. ANT 2754 R1a. Reactivo de trombina 26 ml R1b. Tampón R2. Sustrato

4 x 2 ml 1 x 10 ml 4 x 2 ml

RELEVANCIA CLÍNICA La antitrombina III es un inhibidor de las proteasas plasmáticas del tipo serina. Una función importante de la antitrombina III es inhibir la actividad de la trombina. Por lo general, la velocidad de inhibición de la trombina causada por la antitrombina III es lenta (actividad antitrombina progresiva). Sin embargo, dicha velocidad puede aumentar miles de veces en presencia de heparina (actividad cofactor de la heparina). Tolefsen y Blank(1) han descubierto otro inhibidor rápido de la trombina que depende de la heparina, el cofactor II de la heparina, en el plasma humano. Esta proteína puede interferir en las mediciones de antitrombina III, especialmente a concentraciones de heparina elevadas (2 unidades/ml USP). PRINCIPIO En este método de dos fases(2) se añade trombina a la solución diluida de plasma que contiene antitrombina III en presencia de exceso de heparina. Tras un período de incubación inicial (fase 1) la actividad residual de la trombina se determina con un sustrato cromogénico específico de la trombina (fase 2). La actividad residual de la trombina es inversamente proporcional a la concentración de antitrombina III. Con el fin de conferir especificidad para la antitrombina III, este sistema de ensayo utiliza un concentración final de heparina más baja, en la cual la inactivación de la trombina aumentada por heparina, debida al cofactor II de la heparina, es desdeñable. Además, el cofactor II de la heparina humana reacciona más fácilmente con la trombina humana que con la bovina(3). Así, este sistema de ensayo presenta mayor especificidad para la antitrombina III al utilizar trombina bovina. MUESTRA Plasma citrado. Plasma diluido 1+40 en NaCl al 0,9%.

RECOGIDA DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN (4) Mezcle nueve partes de sangre recién extraída con una parte de citrato trisódico al 3,2% (0,109 mol/l). Evite la hemólisis y la contaminación de la muestra sanguínea con fluidos corporales. Se deben rechazar las muestras que contengan menos del 90% del volumen previsto de llenado. Centrifugue la sangre durante 15 minutos a 1500 g. Realice el análisis en un lapso de 4 horas, si las muestras se conservan entre 20 y 25°C. Si la prueba no se realiza antes de las 4 horas, el plasma puede mantenerse congelado a -20°C hasta 2 semanas, o a -70°C durante un máximo de 6 meses. Para obtener más detalles sobre la recogida de muestras consulte el documento NCCLS H21-A3.  No postergue el mezclado de la sangre con el anticoagulante.  Evite la formación de espuma en la muestra.  Utilice exclusivamente recipientes de plástico o de vidrio siliconado.  Las muestras turbias, ictéricas, lipémicas y hemolizadas pueden generar resultados erróneos.  La congelación y consiguiente descongelación de muestras de plasma que contengan células residuales podría generar membranas celulares dañadas que pueden afectar a los resultados.  El las muestras de plasma con un hematocrito fuera del intervalo del 20 al 55% puede que la concentración de anticoagulante errónea, por lo que debe ajustarse el anticoagulante según proceda. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Contenido R1a. Reactivo de trombina Trombina bovina liofilizada R1b. Tampón Tampón tris R2. Sustrato Tosyl-Gly-Pro-Arg-4-nitranilida acetato

Concentración inicial de las soluciones 8 UI/ml 90 mmol/l, pH 8,2 2,5 mmol/l

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD Solo para uso diagnóstico in vitro. No pipetee con la boca. Aplique las precauciones habituales necesarias para la manipulación de reactivos de laboratorio. El reactivo tampón de la antitrombina III (R1b) contiene acida sódica. Evite la ingestión o el contacto con la piel o las mucosas. En caso de contacto con la piel, lave el área afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, busque atención médica de inmediato. La acida sódica reacciona con las tuberías de plomo y cobre, con el consiguiente riesgo de generación de acidas explosivas. Al eliminar estos reactivos, hágalo con gran cantidad de agua para evitar la acumulación de acidas. Las superficies expuestas de metal deben limpiase con hidróxido sódico al 10%. Están disponibles, previa petición, las fichas técnicas de salud y seguridad. Los reactivos deben utilizarse solo para la finalidad prevista y por personal de laboratorio adecuadamente cualificado, en unas condiciones de laboratorio apropiadas.

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MANUAL ANT 2754

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Reactivo de trombina Reconstituya un vial de reactivo de trombina (R1a) con 2 ml de tampón (R1b). Estable durante 2 días entre +15 y +25°C; 14 días entre +2 y +8°C; 30 días a -20°C.

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS Trace el gráfico de la ∆Abs/min obtenida con cada calibrador de antitrombina III frente al % de antitrombina III correspondiente en papel de escala lineal. La antitrombina III en las muestras de plasma del paciente se puede determinar mediante la interpolación de la curva de calibración.

R1b. Tampón Contenido listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a una temperatura entre +2 y +8°C.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los controles de coagulación Randox de nivel 1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Deben analizarse tres niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deben situarse dentro de un intervalo determinado. Si estos valores están fuera del intervalo y la repetición excluye un posible error, debe procederse como sigue: 1. Comprobar los parámetros del instrumento. 2. Comprobar que todo el equipo utilizado esté limpio. 3. Comprobar los contaminantes, como un crecimiento bacteriano, que pueden contribuir a la obtención de resultados imprecisos. 4. Comprobar la temperatura de la reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y su contenido. 6. Póngase en contacto con el servicio técnico de atención al cliente de Randox Laboratories, llamando al teléfono +44 (0) 28 9442 2413 (Irlanda del Norte).

R2. Sustrato Reconstituya un vial de sustrato (R2) con 2 ml de agua desionizada. Estable durante 8 días entre +15 y +25°C; 14 días entre +2 y +8°C; 90 días a -20°C. Precaliente las partes alícuotas de reactivo de trombina (R1a) y sustrato (R2) a +37°C antes de utilizarlas. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo de trombina Tampón Sustrato MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Calibrador de coagulación Randox (N.º cat. CG5037) Controles de coagulación Randox de nivel 1, 2 y 3 (N.º cat. CG5021, CG5022 y CG 5023) Micropipetas Micropuntas Analizador de coagulación foto-óptico Temporizador PROCEDIMIENTO Pipetear en una cubeta Muestra diluida/control/calibrador Reactivo de trombina (R1)

100 µl 100 µl

Mezclar bien e incubar a +37°C durante 3 minutos, añadir sustrato (R2)

100 µl

Mezclar bien y tras 5 segundos leer la absorbancia inicial a 405 nm. Volver a leer la absorbancia transcurridos 30 segundos. Determinar la velocidad de cambio de absorbancia (∆Abs/min) Siga las instrucciones del fabricante del instrumento para realizar la prueba. CALIBRACIÓN Para la calibración se recomienda el calibrador de coagulación Randox (valor específico de lote). Use salino como calibrador del 0%, con el calibrador de coagulación Randox como 50% y 100%. Se recomienda calibrar cambiando el lote de reactivo o tal como indican los procedimientos de control de calidad.

VALORES PREVISTOS Los valores normales con el reactivo Randox AT III están comprendidos dentro del 75 y 125%. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia, ya que pueden existir diferencias entre instrumentos, laboratorios y poblaciones locales. INTERFERENCIA Evite utilizar muestras fuertemente hemolizadas y lipémicas, ya que pueden interferir con el ensayo. Se comprobaron los siguientes analitos, hasta los niveles que se indican, sin encontrar interferencias: Bilirrubina conjugada Bilirrubina libre Intralípidos Triglicéridos Hemoglobina

12 mg/dl 12 mg/dl 300 mg/dl 320 mg/dl 140 mg/dl

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Se han obtenido los siguientes datos de rendimiento mediante un coagulómetro semiautomático a +37ºC. SENSIBILIDAD La actividad mínima detectable de la antitrombina III se determina como 30,0%. LINEALIDAD Este método es lineal hasta un 130% de actividad de la antitrombina III. Si la muestra excede este valor, diluya las muestras previamente diluidas (1+40) de plasma aún más 1+1 con salino al 0,9% y repita el análisis. Multiplique el resultado por 2.

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MANUAL ANT 2754

PRECISIÓN Intraensayo Media (%) DE CV (%) n

Normal 102 1.89 1.86 20

Patológica 65,5 2,35 3,59 20

Normal 85.0 1.86 2.19 20

Patológica 59.4 2.24 3.77 20

Interensayo Media (%) DE CV (%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se ha comparado con otro método disponible en el mercado (X) y se ha obtenido la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1,00X + 0,22 y un coeficiente de correlación de 1,00 Se analizaron 40 muestras de pacientes que abarcaron un rango del 38,3 al 113,7% REFERENCIAS 1. Tolefsen DM and Blank MK, J. Clin. Invest. 68: 589-596, 1981. 2. Odegard OR, Lie M and Abildgaard U: Thromb Res. 6: 287-294, 1975. 3. Friberger P, Egberg N, Holmer E, Hellgren M and Blomback M, Thromb. Res. 25: 433-436, 1982. 4. Rosemary Biggs, Human blood Coagulation, Haemostasis and Thrombosis, Blackwell Scientific Publications, Oxford, England, 1972.

Revisado 25 may 12 rw Rev. 002

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ALP

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C.

Fosfatasa Alcalina MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de la Fosfatasa Alcalina (ALP) en suero yl plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. No. Cat. AP 542 20 x 3 ml

R1a. Tampón R1b. Substrato

1 x 70 ml 20 x 3 ml

AP 307 10 x 10 ml


1 x 105 ml 10 x 10 ml

METODO COLORIMETRICO (1) Este es una método estándar optimizado de acuerdo a las recomendaciones del Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie. PRINCIPIO

R1b. Substrato Reconstituir un frasco de Substrato R1b con el volumen apropiado de Tampón R1a:3 ml para el kit de 20 x 3 ml (AP 542) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AP 307) Estable durante 30 días entre +2 y +8C ó 3 días entre +15 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Substrato MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351). Salino  (Cat. No. SA 3854)

ALP

p-nitrofenilfosfato + H2O

fosfato + p-nitrofenol

MUESTRA(2) Suero o plasma heparinizado. Las muestras son estables durante 5 días cuando se conservan entre +2 y +8C.

Pipetee en un tubo de ensayo:

COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1a. R1b.

Tampón Tampón Dietanolamina MgCl2 Substrato p-nitrofenilfosfato

PROCEDIMIENTO Aspire H2O de doble destilación y realice una nueva calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo. Seleccione ALP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

Concentraciones en la Prueba 1 mol/l, pH 9,8 0,5 mmol/l 10 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. La Solución R1a contiene dietanolamina que puede dañar seriamente los ojos y que es dañino si se traga. Evitar la ingestión y llevar protección adecuada para los ojos. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas.

Muestra Reactivo

0,01 ml 0,5 ml

Mézclelo y aspírelo en Rx Monza. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición: Pipetear en la cubeta: Muestra Reactivo (25C, 30C, 37C)

Hg 405 nm 1 cm de espesor 25C, 30C, 37C frente al aire Macro

SemiMicro

Micro

0,05 ml 3,00 ml

0,02 ml 1,00 ml

0,01 ml 0,50 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 minutos.

MANUAL / RX MONZA - ALP - FOSFATASA ALCALINA - AP542 / AP 307 MANUAL CALCULO Utilizar la siguiente formula para calcular la actividad de ALP:

PRECISION

U/l = 3300 x A 405 nm/min MACRO U/l = 2760 x A 405 nm/min SEMI-MICRO U/l = 2760 x A 405 nm/min MICRO


CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte (028) 94422413.

Análisis Inter

Análisis Intra

INTERFERENCIA Evitar la hemólisis ya que interfiere con el análisis. Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren: Bilirrubina Intralípidos® Triglicéridos Hemoglobina

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300 mol/l (17 mg/dl) 2% 22,75 mmol/l (2010 mg/dl) 1 g/l (100 mg/dl)


Nivel 2 262 8.11 3.10 20

Nivel 3 486 9.49 1.95 20

Nivel 2 262 11.59 4.43 20

Nivel 3 486 17.01 3.50 20

CORRELATION Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.076X - 14.5 y un coeficiente de correlación de r = 0.9975 se hicieron análisis a 43 pacientes abarcando un rango de 52 a 965 U/l. REFERENCIAS 1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1972; 10: 182. 2. Englehardt A., et al, Aerztl Labor 1970 16 42.

VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO 25C Hombres/Mujeres 60-170 U/l

30C

37C

73-207 U/l

98-279 U/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Los siguientes datos de rendimiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de ALP con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 49,9 U/l LINEALIDAD El método es lineal hasta 1609 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 9 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplicar el resultado por 10. Revisado el 10 Sep 2010 bm Rev. 001

AST Aspartato Aminotransferasa IFCC MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de aspartato aminotransferasa (AST) en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza. Cat. No. AS 1202 20 x 2 ml

R1a. R1b.

Tampón/Sustrato Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato

1 x 70 ml 20 x 2 ml

AS 1204 10 x 10 ml

R1a R1b


1 x 105 ml 10 x 10 ml

AS 1267 5 x 20 ml

R1a R1b


1 x 105 ml 5 x 20 ml

AS 2359 5 x 100 ml

R1a R1b


5 x 100 ml 5 x 100 ml

METODO UV Este es un método estándar optimizado según las concentraciones recomendadas por la IFCC. SIGNIFICADO CLINICO(1,2,3,4) Las aminotransferasas son un grupo de enzimas que catalizan las inter conversiones de aminoácidos y -oxoácidos por medio de la transferencia de grupos amino. La GOT (aspartato aminotransferasa o transaminasa de oxaloacetato glutamato) se ha encontrado en el citoplasma y mitocondrias de las células estudiadas. En caso de un ligero daño del tejido como por ej. el hígado, la forma predominante de la GOT en suero es la del citoplasma, con una cantidad más pequeña proviniente de las mitocondrias. Un daño más severo del tejido dará como resultado una mayor liberación de enzima mitocondrial. Los niveles elevados de AST pueden ser una señal de infarto de miocardio, enfermedad hepática, distrofia muscular y daño de órganos. Los músculos del corazón son los que muestran más actividad de ésta enzima, sin embargo también se ha encontrado en el cerebro, hígado, mucosa gástrica, tejido adiposo y riñones humanos. La IFCC recomienda actualmente (1980) procedimientos estandarizados para los análisis de GOT incluyendo:1. optimización de las concentraciones de substrato. 2. Empleo de tampones Tris (en lugar de fosfato, el cual se ha demostrado que inhibe la recombinación de la apoenzima con el fosfato piridoxal). 3. Preincubación de suero y tampón combinado para permitir que tengan lugar posibles reacciones con NADH. 4. Substrato de inicio (-oxoglutarato) 5. Activación de fosfato piridoxal opcional. Este es un método estándar optimizado de acuerdo a las recomendaciones de la IFCC.

PRINCIPIO El -oxoglutarato reacciona con la L-aspartato en presencia de GOT para formar L-glutamato mas oxaloacetato. La reacción indicadora utiliza el oxaloacetato para la determinación cinética del consumo de NADH. -oxoglutarato + L-aspartato oxaloacetato + NADH + H+

AST

MDH

L-glutamato + oxaloacetato L-malato + NAD+

EXTRACCION Y PREPARACION DE MUESTRAS (5) Suero:Use serum free from hemolysis. Plasma:- Se puede utilizar EDTA o heparina como anticoagulante. El plasma se degerá separar de las células durante la hora siguiente a su extracción. Las muestras se deberán refrigerar si no se utilizan inmediatamente:Las muestras que se almacenen durante más de 3 días se deberán congelar a -20C. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes R1a. R1b.

Concentraciones en la prueba

Tampón/Sustrato Tampón Tris 80 mmol/l, pH 7,5 L-aspartato 240 mmol/l Enzima/Coenzima/-oxoglutarato -oxoglutarato 12 mmol/l MDH ≥ 420 U/l LD ≥ 600 U/l NADH 0,18 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La Azida Sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas explosivas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359 ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón/Sustrato Listo para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8C. R1b. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2 con el volumen adecuado de Tampón/Sustrato 1: 2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AS1202) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AS1204) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (AS1267) Es estable durante 14 días conservado entre +2 y +8C ó 24 horas entre +15 y +25C Cat. No. AS 2359 5 x 100 ml Disolver el contenido de una botella de Enzima/ Coenzima/-oxoglutarato 2 con un pequeño volumen de Tampón/Sustrato 1 y luego transferir el contenido a la botella 1, enjuagando varias veces la botella 2. Es estable durante 14 días cuando se conserva entre +2 y +8oC ó 24 horas entre +15 y +25oC. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Sustrato Enzima/Coenzima/-oxoglutarato MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) Salino  (Cat. No. SA 3854) PROCEDIMIENTO Aspire H2O de doble destilación y realice una nueva calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo. Seleccione AST en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

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MANUAL CALCULOS Para calcular la actividad de la GOT utilizar las fórmulas siguientes: U/l = 1746 x A 340 nm/min U/l = 1780 x A Hg 334 nm/min U/l = 3235 x A Hg 365 nm/min NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia JSCC TS01 de AST. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIA(6,7) La hemólisis bruta producirá falsos resultados elevados. Se deberá tomar en consideración los efectos de varios fármacos en la actividad de La GOT en los casos de pacientes que estén recibiendo grandes dosis de fármacos. Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren: Hemoglobina Bilirrubina libre Bilirrubina conjugada Triglicéridos Intralipid®

0.05 ml 0.5 ml

Mix and aspirate into the Rx Monza.

250 mg/dl 25 mg/dl) 25 mg/dl) 1000 mg/dl) 200 mg/dl

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.

Young et cols y Friedman et cols dan una lista de sustancias y condiciones que se conoce que afectan a la actividad in vivo de La GOT . La integridad de esta lista y la exactitud de la información que en ella se suministra no representa necesariamente la opinión de Randox Laboratories, Ltd.

PARA USO MANUAL

VALORES NORMALES EN SUERO(8,9)


340 nm (Hg 334 nm ó Hg 365 nm) 1 cm de espesor 25/30/37C Frente al aire

Pipetear en cubeta:

Macro

Micro

Muestra Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2

0,2 ml 2,0 ml

0,1 ml 1,0 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 1 min. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. Observar si la variación de la absorbancia por minuto se sitúa entre 0,11 y 0,16 a 340/Hg 334 nm 0,06 y 0,08 a Hg 365 nm para el cálculo usar sólo los valores obtenidos durante los 2 primeros minutos.

25C Hombre: Mujer :

Hasta 18 U/l Hasta 15 U/l

30C

37C



Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37oC.

MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359

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LINEALIDAD Este método es lineal hasta una concentración de 562 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 9 con una solución de NaCl del 0,9% y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplicar el resultado por 10. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de AST con un nivel aceptable de precisión se determinó en 9,3 U/l. PRECISION Análisis (Intra) Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 2 35.6 1.66 4.65 20

Nivel 3 153 1.47 4.63 20

Nivel 2 35.6 1.77 4.86 20

Nivel 3 153 7.10 4.63 20

Análisis (Inter) Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELATION Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.07X + 4.9 y un coeficiente de correlación de r = 0.9975 se hicieron análisis a 43 pacientes abarcando un rango de 28 a 559 U/l. REFERENCIAS 1. Wroblewski F, La Due J.S: Ann Intern Med. 1956; 45: 801. 2. Wroblewski F, La Due J.S: Proc Soc Exp Biol Med 1956; 91: 569. 3. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: Clin Chem 1977; 23: 887. 4. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al: J.Clin Chem Clin Biochem 1980; 18: 521-534. 5. Tietz N W: Fundamentals of Clinical Chemistry ed 3. Philadelphia, WB Saunders Co. 1987, pg 372. 6. Young D S, et al: Clin Chem 1975, 21; No5. 7. Friedman RB, et al: Clin Chem 1980, 26; No4. 8. Wallnofer H, Schmidt.E, Schmidt FW, eds: Synopsis der Leberkrankheiten Stuttgart, Georg Thieme Verlag, 1974. 9. Thefeld W, et al: Dtsch Med Wschr 1974; 99: 343.


AMILASA (AMY)


Etilideno Bloqueado-pNPG7 MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de la Amilasa en el suero y orina. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza. No. Cat. AY 2751 20 x 2 ml


1 x 50 ml 20 x 2 ml

AY 1580 20 x 5 ml


1 x 105 ml 20 x 5 ml

AY 1582 9 x 20 ml


2 x 105 ml 9 x 20 ml

METODO COLORIMETRICO(1,2) El método utiliza etilideno bloqueado p-nitrofenil-maltoeptaosida como substrato. También se utiliza en este método el indicador enzima glucosidasa, utilizado para liberar el p-nitrofenol. La glucosa terminal del sustrato se bloquea químicamente, previniendo la división por el enzima indicador. -amilasa

etilideno-G7 pNP

etilideno -Gx + Gx-pNP

-glucosidase

Gx-pNP

glucosa + pNP-glucosido

La Solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles. Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO Reconstituir el contenido de un frasco de Substrato R1b con el volumen apropiado de Tampón R1a:2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AY 2751) 5 ml para el kit de 20 x 5 ml (AY 1580) 20 ml para el kit de 9 x 20 ml (AY 1582) Estable durante 21 días entre +2 y + 8oC. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Substrato

- glucosidasa

pNP-glucosido G pNP x

glucosa + pNP

= glucosa = paranitrofenol = 2 to 5

MUESTRA Suero, plasma heparinizado u orina. Diluir la orina 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 3. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

Concentración Inicial de los Reactivos

R1a. Tampón Tampón Pipes Cloruro de Calcio Cloruro Sódico R1b. Substrato Tampón Pipes etilideno-G7 pNP -glucosidasa

50 mmol/l, pH 7.0 5.0 mmol/l 50 mmol/l 12.5 mmol/l, pH 7.0 1.0 mmol/l ≥12 U/ml

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Suero de Calibración Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351). NOTA Evitar la hemólisis ya que puede disminuir los resultados. Evitar la contaminación del reactivo, muestras y material de cristal por medio de la saliva o sudor, dado que poseen altos contenidos de amilasa. No pipetear con la boca. PROCEDIMIENTO Seleccione AMY en la pantalla de prueba de funcionamiento y lleve a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

0.01 ml 0.5 ml

Mezclar y aspirar en el Monza RX CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de Calibración Randox nivel 3 para la calibración. Se recomienda calibrar cada cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.

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MANUAL/ RX MONZA AY 2751

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

405 nm (400-420 nm) 1 cm de espesor 37C frente al aire

Pipetee en una cubeta: Muestra Reactivo

0.02 ml 1.0 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial después de 60 segundos y al mismo tiempo iniciar el temporizador. Leer de nuevo pasados 1, 2 y 3 minutos. CÁLCULO MANUAL Para calcular la actividad de la amilasa utilizar la siguiente fórmula: U/l = 4712 x A 405 nm/min NORMALIZACIÓN El suero de Calibración Randox nivel 3 es trazable a los materiales de referencia amilasa IFCC456 y BCR476. CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de la amilasa con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada en 17.9 U/l. PRECISION Intraensayo Media (U/l) DE CV (%) n

Nivel 2 72.1 3.17 4.39 20

Nivel 3 251 7.35 2.93 20

Nivel 2 72.1 3.97 5.50 20

Nivel 3 251 8.81 3.51 20

Interensayo Media (U/l) DE CV (%) n

CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.077 X - 8.548 con un coeficiente de correlación r = 0.9963 se analizaron 49 muestras de pacientes abarcando un rango de 28 - 838 U/l. REFERENCIAS 1. Ranscher, E. et al (1986) Fresenius Z. Analyt. Chem. 324: 304. 2. Kruse - Jarres, J.D. et al (1989). J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 27: 103.

VALORES NORMALES Suero: hasta 95 U / l (37°C) Orina: Aleatorias hasta 490 U / l (37°C) 24 horas de orina hasta 450 U/24 horas (37°C) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar las diferencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de Rx Monza en el modo de flujo de células a 37C. LINEARIDAD El método es lineal hasta una concentración de 880 U / l. Diluir las muestras con mayor concentración en 1 + 9 con 0,9% de Solución NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 10. Revised 14 Sep 10 bm Rev. 001

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CALCIO (Ca)

PREPARACION DE LOS REACTIVOS DE TRABAJO Y ESTABILIDAD Mezclar volúmenes iguales de las soluciones R1 y R2 en cantidad suficiente para el número de muestras que se vayan a ensayar. Estable durante 7 días cuando se conserve entre +2 y +8°C ó 3 días entre +15 y +25°C.

Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Calcio en el suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza. No. Cat. CA 590 200 ml

CAL. R1. R2. R3.

Patrón Tampón Cromógeno EDTA

5.5 ml 1 x 100 ml 1 x 100 ml 10 ml

METODO COLORIMETRICO(1) O-cresolftaleína complexona sin desproteinización.

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) PROCEDIMIENTO DE NOTA Si la muestra tiene un color fuerte intrínseca (hemoglobina: > 200 mg/dl, bilirrubina> 20 mg/dl, o lipemia marcada), un blanco de muestra se debe ejecutar. (Ver abajo)

PRINCIPIO Los iones calcio forman un complejo violeta con la o-cresolftaleína complexona en medio alcalino.

Esta prueba es muy sensible, por lo tanto el uso de material desechable es aconsejable. Recipientes de vidrio deberán lavarse con ácido clorhídrico diluido y luego enjuagar con agua destilada antes de su uso.

MUESTRA Suero, plasma heparinizado u orina. Diluir la orina 1 + 1 en NaCl 0,9%. Multiplicar el resultado por 2. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes

MATERIALES SUMINISTRADOS Patrón Tampón Cromógeno EDTA

Concentraciones iniciales de las soluciones

PROCEDIMIENTO Seleccione Calcio CPC en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la cubeta:

CAL. Patrón Calcio R1. Tampón 2-amino-2-metilpropan-1-ol R2. Cromógeno o-Cresolftaleína complexona 8-hidroxiquinolina Acido clorhídrico R3. EDTA

Vedi inserto lotto-specifico 3.5 mol/l, pH 10,7 0,16 mmol/l

ddH20 Muestra Patrón Reactivo

Blanco de reactivo S0

Patrón S1

Muestra

12.5 µl 500 µl

12.5 µl 500 µl

12.5 µl 500 µl

6,89 mmol/l 60 mmol/l 150 mmol/l

Mezclar, incubar por 5 min a +25, +30 o +37C Inserte la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse Leer.

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Para ejecutar un blanco de muestra: Después de medir la absorbancia de la muestra de acuerdo con el procedimiento de ensayo, añadir una gota de solución R3 (EDTA) a la muestra y la solución del reactivo. Cuando las muestras han convertido incoloro (después de aproximadamente 10 segundos) insertar la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse leer. Este resultado debe ser manualmente resta de la muestra para obtener el valor corregido de calcio.

Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendó el uso de CAL Patrón proporcionado en el kit. La calibración se recomienda con un cambio en la cantidad de reactivo o como se indica por procudures de control de calidad.

PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD Todas las soluciones están listas para su uso. Mantener las botellas cerradas después de utilizarlas. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C.

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MANUAL/ RX MONZA CA 590

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Espectrofotómetro: Cubeta: Medición:

Hg 578 nm (550-590 nm) 570 nm 1 cm de espesor frente a blanco de reactivo sólo se requiere un blanco por serie +20 y +25°C/+37°C

Temperatura: 1. Para ensayos individuales Pipetear en tubos de ensayo:

Muestra Agua destilada CAL Solución R1 Solución R2

Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

--25 µl --0,5 ml 0,5 ml

----25 µl 0,5 ml 0,5 ml

25 µl ----0,5 ml 0,5 ml

Mezclar, leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco al cabo de 5 a 50 min. 2. Para ensayos en serie

Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

--25 µl --1,0 ml

----25 µl 1,0 ml

25 µl ----1,0 ml

Mezclar, leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco al cabo de 5 a 50 min. Aunque la absorbancia se puede leer durante los 5 a 50 minutos siguientes, el tiempo de intervalo desde la adición de la muestra a la lectura deberá ser exactamente el mismo para el Patrón/Control y Muestra. Para ejecutar un blanco de muestra: Después de medir la absorbancia de la muestra de acuerdo con el procedimiento de ensayo, añadir una gota de solución R3 (EDTA) a la muestra y la solución del reactivo. Cuando las muestras han convertido incoloro (después de aproximadamente 10 segundos) insertar la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse leer. Este resultado debe ser manualmente resta de la muestra para obtener el valor corregido de calcio. CALCULOS Concentración = (mmol/l) Concentración = (mg/dl)

INTERFERENCIA/LIMITACIONES Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren: Bilirrubina Intralipid® Triglicérido Hemoglobina

Gadodiamida (OMNISCAN: se utiliza en la RM) interfiere con el calcio sérico causando que los niveles bajos (3).

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza en el modo de cubeta a +37ºC. SUERO LINEALIDAD El método es lineal hasta 5,67 mmol / l (22,7 mg/dl). Las muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 +1 con el 0,9% de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de calcio con un nivel aceptable de precisión se determinó como 1,16 mg/dl (0,290 mmol/l). PRECISION Intra Assay

Amuestra Apatrón Amuestra Apatrón

500 mol/l (29 mg/dl) 2% 22,75 mmol/l (2010 mg/dl) 6 g/l (600 mg/dl)

VALORES NORMALES(2) Suero: 2,02 -2,60 mmol/l (8,10-10,4 mg/dl) Orina: 2,5 -6,2 mmol/24hrs (100 - 249 mg/24 hrs)


Muestra Agua destilada Patrón Reactivo de trabajo

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

x Concentración del patrón (mmol/l)

Mean (mg/dl) SD CV(%) n

x Concentración del patrón (mg/dl)

Inter Assay

STANDARDISATION Randox Calibration Serum Level 3 is traceable to Calcium reference material NIST 909b and NIST 956b.

Mean (mg/dl) SD CV(%) n

Nivel 1 9.02 0.220 2.44 20

Nivel 2 12.4 0.249 2.01 20

Nivel 1 9.02 0.352 3.91 20

Nivel 2 12.4 0.317 2.56 20

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CORRELACION Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y=0.9914 X -0.089 con un coeficiente de correlación r = 0.9931 Se analizaron 42 muestras con valores de entre 4,1 y 16,5 mg/dl. ORINA LINEALIDAD El método es lineal hasta 7,13 mmol / l (28,6 mg / dl). Las muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 +1 con el 0,9% de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de calcio con un nivel aceptable de precisión se determinó como 1,29 mg/dl (0,321 mmol/l). REFERENCIAS 1. Ray Sarkar,B.C., and U.P.S. Chauhan., Anal Biochem. 1967; 20: 155. 2. Barnett, R.N., et al. (1973) Amer. J. Clin. Path. 59: 836. 3. Prince et al, Radiology 2003; 227: 639-646

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CALCIO (Ca)


ARSENAZO III Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA

Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Calcio en suero, plasma u orina. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza. No. Cat. CA 2390

R1. Reactivo Arsenazo

6 x 100 ml

SIGNIFICADO CLINICO(1) El calcio es el quinto elemento más abundante en el cuerpo. La mayor parte del calcio en el adulto humano es extracelular y el 99% existe como hidroxiapatita cristalina en los huesos y los dientes donde confiere rigidez. El calcio en el suero existe en tres formas: unido a proteínas (45%); ionizado (45%) y un 10% forma un complejo con pequeños ligantes difusibles tales como citrato, lactato, fosfato y bicarbonato. El calcio juega un papel importante en los mecanismos de transmisión del impulso nervioso, la contracción muscular y la coagulación sanguínea. El calcio también participa en la regulación de la actividad de la adenilato ciclasa y fosfodiesterasa a través de la combinación reversible con la calmodulina. La secreción de las glándulas paratiroides, células tiroideas C y las células pancreáticas B está controlada por la concentración de calcio ionizado extracelular en la superficie celular. Los niveles elevados de calcio en suero se encuentran en los casos de hiperparatiroidismo, los carcinomas, sobredosis de vitamina D y son de valor diagnóstico en la detección de la enfermedad renal crónica y enfermedad pancreática aguda. Los bajos niveles de calcio sérico se asocian con hipoparatiroidismo, deficiencia de vitamina D y la insuficiencia renal. PRINCIPIO Arsenazo III se une específicamente al calcio formando un complejo coloreado que puede medirse a 650 nm. Ca++ + Arsenazo III

Complejo Coloreado

La cantidad de calcio presente en la muestra es directamente proporcional a la intensidad del complejo coloreado. MUESTRA(4) Suero/Plasma: (Lithium heparinzed)

Orina:

NO USAR oxalato sódico, EDTA fluoruro sódico como anticoagulantes, ya que interfieren. El suero es estable durante 8 horas a temperatura ambiente o 24 horas cuando se conservan entre +2 y +8C Se recomienda realizar un ensayo sobre la orina dentro de las dos horas posteriores a la recolección.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

Concentración Inicial de las soluciones

R1. Reactivo Arsenazo III Acetato Sódico Arsenazo Estabilizadores No reactivos

54.2 mmol/l, pH 5.9 approx. 250 mol/l

Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautes locales. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Reactivo listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Arsenazo MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Pipetear el dispositivo para suministrar 5 µl y 1 ml. Sincronizar el dispositivo y el lavado de agua o el bloque calefactor para mantener la temperatura a 25, 30 ó 37C. Espectrofotómetro con capacidad de longitud de onda de 640 a 660 nm. Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Suero de Calibración Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351). PROCEDIMIENTO Seleccione Ca en la pantalla Ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo/ S0

Patrón S1

Muestra

7.5 l 500 l

7.5 l 500 l

7.5 l 500 l

ddH2O Muestra Calibrador Reactivo

Mezclar, incubar por 5 min a 25ºC, 30ºC o 37ºC. Inserte la cubeta en el soporte de la célula de flujo del Rx Monza y pulse Leer. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura Medición:

650 nm (640 nm - 660 nm) 1 cm light path 25/30/37C against air

Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo Agua destilada Muestra Calibrador Reactivo 1

15 l 1.0 ml

Calibrador

Muestra

15 l 1.0 ml

15 l 1.0 ml

Mezclar y leer la absorbencia de la muestra (Amuestra) y calibrador (Acalibrador) contra el blanco de reactivo después de 5 minutos.

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CÁLCULO MANUAL Concentración =

Amuestra ────── Acalibrador

PRECISION x calibrador de valor

CALIBRACIÓN Se recomienda el uso de solución salina y Suero de Calibración Randox Nivel 3 para la calibración. La calibración se recomienda en los cambios de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad. CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIAS / LIMITACIONES (5) Gadodiamida (OMNISCAN: usado en el RM imagin) interfiere con el calcio sérico causando niveles bajos. VALORES NORMALES(3) Suero: 2.02 - 2.60 mmol/l ( 8.10 - 10.4 mg/dl ) Orina: 2.5 - 6.2 mmol/24 hrs (100 - 249 mg/24 hrs) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar las diferencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador Rx Monza funcionando a una temperatura de 37ºC.

Precisión Dentro del Análisis Muestra Nivel 2 Media (mg/dl) 10.1 DE 0.337 CV (%) 3.34 n 20

Nivel 3 12.8 0.392 3.07 20

Precisión Total Muestra Media (mg/dl) DE CV (%) n

Nivel 3 12.8 0.371 2.90 20

Nivel 2 10.1 0.424 4.20 20

METHOD COMPARISON El método Randox (Y) se comparó con un método alternativo disponible comercialmente (X). Cuarenta muestras de los pacientes con valores que abarca el rango de 1,7 a 12.1mg/dl se pusieron a prueba. El análisis de regresión lineal resultó en la siguiente ecuación: Y = 0.961 X + 0.4 con un coeficiente de correlación r = 0.9929 ORINA LINEARIDAD Este método es lineal hasta 14,5 mg / dl. Diluir las muestras por encima de esta concentración a 1+1 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 2. SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable de calcio con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada como 0,78 mg / dl. REFERENCIAS 1. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry 2nd Edition W.B. Saunders Co., Philadelphia (1976) 2. Michaylova, V., and IIIkova, P., Anal Chem Acta, 53: 194 (1971). 3. Barnett, R.N., et al. (1973) Amer. J. Clin. Path. 59: 836. 4. Young, D. Pestaner L., Clin Chem. 21: 5 (1975). 5. Prince et al, Radiology 2003; 227: 639-646.

SUERO LINEALIDAD Este método es lineal hasta 14,4 mg / dl. Diluir las muestras por encima de esta concentración a 1 +1 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 2. SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable de calcio con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada como 0,54 mg / dl.

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CO2 TOTAL (CO2)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Y CONSEJOS Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para la manipulación de reactivos de laboratorio.

PARA SU USO Determinación cuantitativa in vitro de dióxido de carbono en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización en Manual.

La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua durante 10 minutos. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

340 nm Manual

No. Cat. CD 127 10 x 10 ml CD 129 10 x 50 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo CO2 CAL. Standard

1 x 105 ml 10 x 10 ml 1 x 5.5 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo CO2 CAL. Standard

10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLÍNICO(1) El incremento de CO2 sanguíneo (hipercapnia) provoca una acidosis respiratoria. El CO2 aumenta cuando la ventilación alveolar está disminuida en patologías pulmonares o bronquiales, o también al respirar aire con niveles elevados de CO2. La depresión de la capacidad pulmonar total provocada por algunos medicamentos puede conllevar una retención de CO2. PRINCIPIO(2,3)

La azida sódica reacciona con el plomo y el cobre de las cañerías, formando azidas potencialmente explosivas. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de azidas. Las superfcies metálicas expuestas deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas sanitarias y de seguridad disponibles previa solicitud. Los reactivos deben ser utilizados solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8oC.

PEPC

Fosfoenolpiruvato + HCO3-

oxaloacetato + H2P04-

R1b.

MDH

oxaloacetato + NADH + H+

malato + NAD+

La disminución de la absorbancia a 340 nm provocada por la oxidación del NADH es directamente proporcional a la concentración de bicarbonato en la muestra. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS(4) Suero o plasma heparinizado. No deben usarse como anticoagulantes EDTA, oxalato ó citrato, ya que podrían afectar a los resultados. Sumergir la muestra en hielo y analizarla en la hora que sigue. Las muestras se deberán conservar cerradas herméticamente, ya que el CO2 se difunde de la muestra, causando valores erróneos (hasta 6 mmol/hr) COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS Contents

NOTA: No agitar el reactivo cuando se reconstituya, ya que esto puede causar una absorción de CO2 excesiva. Es suficiente con invertir el frasco con cuidado una vez.

Concentration in the Test

R1a. Tampón Tampón Tris 25 mmol/l, pH 6.5 R1b. Reactivo CO2 Fosfoenolpiruvato (PEP) 6.3 mmol/l NADH 0.45 mmol/l Fosfoenolpiruvato Carboxilasa (PEPC) 200 U/l Malato Deshidrogenasa (MDH) 600 U/l Mg2+ 8.0 mmol/l CAL. Patrón Vedi inserto lotto-specifico

Reactivo CO2 CD 127 Reconstituir 1 vial de CO2 R1b con 10 ml de tampón R1a. Estable durante 15 días entre +2 y +8C, en su frasco original sellado, 70 horas entre +2 y +8C o 25 horas entre +15 y +25C expuesto a la atmósfera cuando se almacena en el recipiente original o en un recipiente con un cuello estrecho. Véase la nota 4. CD 129 Reconstituir el contenido de un vial de CO2 R1b con una parte de tampón R1a. Transferir todo el contenido de la botella de tampón 1, enjuagando el vial 2 varias veces. Estable durante 15 días entre +2 y +8C, en su frasco original sellado, 70 horas entre +2 y +8C o 25 horas entre +15 y +25C expuesto a la atmósfera cuando está en su envase original o en en un recipiente con un cuello estrecho. Véase la nota 4.

CAL.

Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8oC.

MATERIAL SUMINISTRADO Tampón Reactivo CO2 Patrón MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Randox Assayed Multisera, Nivel 2, No. Cat. HN1530 y Nivel 3, No. Cat. HE1532.

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MANUAL CD 127 NOTAS DE PROCEDIMIENTO 1. Para permitir que el reactivo para alcanzar el equilibrio, se recomienda que se reconstituye preferiblemente la noche antes, pero por lo menos 4 horas antes de su uso. El reactivo es entonces estable durante 15 días entre +2 y +8C en su vial original sellado o 70 horas entre +2 y +8C expuesto a la atmósfera. 2. No exponer el reactivo al aire más de lo necesario y almacenarlo cerrado herméticamente. 3. No pipetear con la boca. 4. No agitar el reactivo vigorosamente ya que se podría producir una absorción excesiva de CO2 . PROCEDIMIENTO Longitud de onda: Cuveta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 37C frente a agua destilada

Pipetear en la cubeta:

Muestra Agua bidestilada Patrón Reactivo

Test

Blanco

Patrón

5 l --1000 l

-5 l -1000 l

--5 l 1000 l

Incubar durante 5 min. a 37oC y medir la absorbancia del patrón (Apatrón), de la muestra (Amuestra), y del reactivo blanco (Ablanco). CACULO Amuestra = Ablanco - Amuestra Amuestra CO2 Total = ──── x conc. de patrón (mmol/l) Apatrón

SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN(4) La mayor interferencia en este ensayo la constituye el CO2 del aire o del aliento del analista. Existen otros medicamentos y sustancias que modifican los niveles de CO2 sanguíneo. La hemoglobina no afecta en el ensayo hasta una concentración de 2 g/l. VALORES NORMALES EN SUERO(5) Adultos : Arterial Venoso Arterial

Recién nacidos Niños pequeños

21 - 28 mmol/l 22 -29 mmol/l 17,2 -23,6 mmol/l 19,0 -23,9 mmol/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para referirse a la edad, el sexo, la dieta y la situación geográfica de la población. LINEALIDAD Este método es lineal hasta una concentración de 50 mmol/l. Las muestras con concentraciones superiores deberán diluirse 1+1 con solución NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango se sensibilidad, ya que está limitada por el espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones del análisis, un cambio de la absorbancia de 0,001 unidades es equivalente a 0,8 mmol/l. REFERENCIAS 1. Tietz, N. N., et al "Textbook of Clinical Chemistry" W. B. Saunders Co., 1986; 1172-1253. 2. Jacobs, N., et al "Laboratory Test Handbook" 2nd. ed., Williams and Wilkins 1990. 3. Forrester, R.L., Wataji, L.J., Silverman, D.A., Pierre K.J., Clin, Chem. 1976; 22/2: 243-245. 4. Young D.S., Effects of Drugs on Chemical Laboratory Tests, 3rd ed., AACC Press 1990. 5. Norris, K.A., Atkinson, A.R., Smith, W.G., Clin. Chem. 1975; 21/8: 1093 - 1101.

CALIBRACIÓN Se recomienda para la calibración el patrón CO2 Randox suministrado con el kit. El patrón está preparado gravimétricamente utilizando bicarbonato sódico grado A.C.S. Se recomienda recalibrar para cada serie de muestras analizadas. CONTROL DE CALIDAD Se aconseja Randox Assayed Multisera, Nivel 2 y Nivel 3 para un control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de control como mínimo una vez al día. Los valores obtenidos deben encontrarse dentro de un rango específico. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye el error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar los parámetros del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo el material esté limpio. 3. Comprobar el agua y la contaminación (el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados). 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y de sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. Revised 01 Feb 11 bm Rev. 002

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COLESTEROL (CHOL)

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS(5) Suero: Puede ser utilizado. Plasma: Tratado con EDTA (1 mg/ml) o heparina (up to 75 U/ml) No utilizar citrato, oxalato o fluor. Las muestras de Plasma y Suero pueden almacenarse durante 4 días +4°C.

Método Enzimático de Punto Final MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Colesterol en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.

COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1.

Cat. No. CH 200 6 x 30 ml

R1. CAL.

Reactivo Patrón

6 x 30 ml 1 x 5.5 ml

CH 201 6 x 100 ml

R1. CAL.

Reactivo Patrón

6 x 100 ml 1 x 5.5 ml

CH 202 8 x 250 ml

R1. CAL.

Reactivo Patrón

8 x 250 ml 1 x 5.5 ml

UTILIDAD CLÍNICA(1,2,3) El análisis de Colesterol és utilizado para el diagnóstico y tratamiento de dislipemias y desórdenes metabólicos. Los lípidos representan un importante papel en el cuerpo humano: ya sea cómo homonas o precursores hormonales, ayuda a la digestión, fuente o almacén de recursos energéticos, componentes estructurales y funcionales de membranas biológicas, o funcionando como aislantes para prevenir pérdidas de calor y permitir la conducción nerviosa En Química Clínica, los lípidos han sido asociado durante la última década con el metabolismo de las lipoproteínas y la ateriosclerosis El método descrito por Abell y cols (1952) se refiere a la extracción del colesterol con disolventes orgánicos y una posterior hidrólisis alcalina de los ésteres de colesterol. La reacción és altamente específica, pero la metodología es laboriosa y requiere reactivos corrosivos, siendo por tanto impracticable en la rutina diaria del laboratorio Richmond (1973) describió el método de la colesterol oxidasa, trás la saponificación de la muestra. Este método fué el primer paso hacia un procedimiento totalmente enzimático. Allain y cols junto con Roeschaw y cols publicaron en 1974 el primer procedimiento completamente enzimático para determinar colesterol, reemplazando así la saponificación química por la saponificación enzimática. PRINCIPIO(4) El colesterol se determina tras una hidrólisis enzimática y una oxidación. El indicador quinoneimina se forma a partir de peróxido de hidrógeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa. colesterol

Ester de colesterol + H2O

colesterol + Acidos grasos

esterasa colesterol

Colesterol + O2

Colesten-3-ona + H2O2

CAL.

Concentración inicial de la solución

Reactivo 4-aminoantipirina Fenol Peroxidasa Colesterol esterasa Colesterol oxidasa Tampón Pipes Patrón

0,30 mmol/l 6 mmol/l ≥0,5ml ≥0,15 U/ml ≥0,1 U/ml 80 mmol/l;pH 6,8 Vedi inserto lotto-specifico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1 contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS (R1) Reactivo Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C en ausencia de contaminación y protegido de la luz. (CAL.) Patrón Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Patrón

oxidasa peroxidasa

2H2O2+fenol+4-aminoantipirina

quinoneimina + H2O

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).

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MANUAL/ RX MONZA CH 200

PROCEDIMIENTO Utilice H2O de doble destilación para realizar una nueva calibración de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione CHOL en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetear en tubos de ensayo: Blanco de reactivo S0

Patrón S1

Muestra

5 l 500 l

5 l 500 l

5 l 0.5 ml

ddH2O Patrón Muestra Reactivo

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

Mézclelo e incúbelo durante 10 minutos a 20-25C o durante 5 minutos a 37C. Introdúzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos.

INTERFERENCIA Valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de bilirrubina hasta 5 mg/dl y de triglicérido hasta 4,64 mmol/l, no interfieren en la prueba.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendó el uso de CAL estándar en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3. La calibración se recomienda con un cambio en la cantidad de reactivo o como se indica por los procedimientos de control de calidad.

VALORES NORMALES EN SUERO/PLASMA(6) Niveles de riesgo Interpretación

< 5,17 mmol/l (200 mg/dl) 5,17 - 6,18 mmol/l (200-239 mg/dl)

PARA USO MANUAL Longitud de onda Cubeta Temperatura Medición

500 nm, Hg 546 nm 1 cm de espesor 20-25°C, 37°C frente a reactivo blanco

Pipetear en la cubeta: Reactivo Blanco (l) Agua Destilada Patrón Muestra Reactivo

Valor

Patrón (l)

Muestra (l)

--10 --1000

----10 1000

10 ----1000

Mezclar, incubar durante 10 min. a 20-25°C ó 5 min. a 37°C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) frente al blanco antes de 60 min. CÁLCULO MANUAL 1. Utilizando un patrón: Amuestra Conc. de colesterol = en la muestra Apatrón

x Conc. de patrón

2. Utilizando un factor: Longitud de onda

mmol/l

Hg 546 nm 500 nm

21,7 x A 14,3 x A

mg/dl 840 x A 553 x A

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia NIST 909b and NIST 1952a de la Colesterol.

≥ 6,20 mmol/l (240 mg/dl)

Colesterol en sangre deseado Colesterol en sangre límite-alto Colesterol en sangre alto

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 25oC. LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de colesterol de 656 mmol/l (17.0 mg/dl). Las muestras con concentraciones de colesterol superiores a ésta, deben ser diluidas 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 3. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Colesterol con un nivel aceptable de precisión se determinó en 13,7 mg/dl (0,354 mmol/l). PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n Análisis (Inter) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 3.65 0.100 2.74 20

Nivel 3 7.18 0.088 1.23 20

Nivel 2 3.65 0.143 3.92 20

Nivel 3 7.18 0.333 4.64 20

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MANUAL/ RX MONZA CH 200

CORRELACION Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.963 X - 0.157 y un coeficiente de correlación r = 0,9943 Se analizaron 44 muestras de pacientes con valores de entre 0,42 y 15,85 mmol/l. REFERENCIAS 1. Abell, L.L, Levey, B.B., Brodie B.B., et al, J. Biol Chem 195 : 357, 1952 2. Richmond, N., Clin Chem 19 : 1350 - 1356, 1973 3. Roeschlau, P., Bernt, E. and Gruber, J.W., Clin Chem Clin Biochem. 12 : 403, 1974 4. Trinder, P., Ann clin Biochem 6 : 24, 1969. 5. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st Edition (1998) p169; Lothar Thomas ed. TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany 6. Third Report of the National Cholesterol Education Programme (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation and treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA Publication, Vol 285, No. 19, P2486 - 2497; 2001.


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CK-NAC-activada

METODO UV(1) Este es un método estándar optimizado según las recomendaciones de la Deutschen Gesellschaft für Klinische Chemie.

Creatina Quinasa MANUAL RX MONZA

PRINCIPIO PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Creatina Quinasa en suero y plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza.

CK

Fosfato de creatina + ADP

Creatina + ATP

HK

Glucosa + ATP

Glucosa-6-P + ADP G-6-PDH

No. Cat. CK 110 20 x 2,5 ml

Glucosa-6-P + NADP+ R1a. Tampón/Glucosa R1b. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato

1 x 70 ml 20 x 2,5 ml

R1a. Tampón/Glucosa R1b. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato

1 x 70 ml 20 x 3,0 ml

CK 522 10 x 10 ml


1 x 105 ml 10 x 10 ml

CK 113 6 x 30 ml


2 x 100 ml 6 x 30 ml

CK 335 20 x 3,0 ml

MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

SIGNIFICADO CLINICO(3) La Creatina Quinasa (CK) se encuentra principalmente en el músculo estriado, el cerebro y los tejidos musculares. El análisis de la actividad de la CK en plasma o suero, provee un marcardor sensible para la detección de enfermedades del tejido muscular esesquelético. Por ej. En la distrofia muscular del tipo Duchenne se pueden encontrar niveles de CK hasta 50 veces superior al límite de normalidad establecido. En el caso de la distrofia muscular progresiva la actividad máxima de ésta enzima se observa en niños y lactantes La actividad de la CK es también útil en el diagnóstico del infarto de miocardio y acidentes cerebrovasculares. La determinación de la CK utilizando creatina fosfato y adenosin5’-difosfato (ADP) como substratos en lugar de creatina y adenosin-5’-trifosfato (ATP), tiene varias ventajas en el funcionamiento del test ya que permite un valor de reacción más rápido resultando en una sensibilidad mayor. Se utilizan cantidades de muestra pequeñas y no se necesitan los blancos de muestra. Debido a la oxidación de los grupos sulfidril en la zona activa de la creatina quinasa, la enzima es muy inestable. Sin embargo, el enzima se reactiva añadiendo compuestos tiol. Por este motivo se incluye N-acetil-L-cisteina (NAC) en el test. También se incluyen en el sistema del test adenosin-5'monofosfato (AMP) y diadenosin pentafosfato, para inhibir la actividad mioquinasa la cual interfiere. En este sistema de test no existen sulfatos ya que alteran la reacción ,

Gluconato-6-P + NADPH + H+


R1a. Tampón/Glucosa Tampón Imidazol Glucosa Mg-Acetato EDTA R1b. Enzimas/Coenzimas/Sustrato ADP AMP Pentafosfato de diadenosina NADP HK G-6-PDH N-Acetilcisteina Fosfato de creatina

0,10 mol/l, pH 6,7 20 mmol/l 10 mmol/l 2,0 mmol/l 2,0 mmol/l 5,0 mmol/l 10 mol/l 2,0 mmol/l ≥ 2,5 U/ml ≥ 1,5 U/ml 20 mmol/l 30 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10% Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

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ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón/Glucosa Listo para usar. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8C.

CALCULOS Para calcular la actividad de la CK utilizar las fórmulas siguientes:

R1b. Enzimas/Coenzimas/Sustrato Reconstituir un vial de Enzimas/Coenzimas/Sustrato R1b con el volumen adecuado de Tampón/Glucosa R1a: 2,5 ml para el kit de 20 x 2,5 ml (CK 110) 3,0 ml para el kit de 20 x 3,0 ml (CK 335) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (CK 522) 30 ml para el kit de 6 x 30 ml (CK 113) Estables durante 3 semanas entre +2 y +8C ó 3 días entre +15 y +25C.

U/l = 4127 x ∆A340 nm/min U/l = 4207 x ∆A Hg 334 nm/min U/l = 7429 x ∆A Hg 365 nm/min

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Glucosa Enzimas/Coenzimas/Sustrato MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Randox Calibration Serum Level 3 (Cat. No. CAL 2351). PROCEDIMIENTO PARA RX MONZA Aspirar ddH2O fresco y realizar una nueva calibración de ganancia en el modo de flujo de células. Seleccione la NAC en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones

25/30C

Muestra Reactivo

10 µl 500 µl

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia AD455 (IFCC) de la CK-NAC. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

VALORES NORMALES EN SUERO(2,3)

Mezclar y aspirar a la RX monza. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad. MANUAL PROCEDURE 340 nm, Hg 365 nm o Hg 334 nm 1 cm de espesor 25C/30C/37C Frente al aire

25/30C

Hombre Mujer

25C

30C

37C

10 - 80 U/l 10 - 70 U/l

15 - 130 U/l 15 - 110 U/l

24 - 195 U/l 24 - 170 U/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza en el modo de flujo de células a 37C. LINEARIDAD Este método es lineal hasta 2804 U / l. Si la concentración de la muestra supera este valor, diluir la muestra 1 +9 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 9 +1.


Macro Enzimas/Coenzimas/ Sustrato 2,5 ml Muestra 0,1 ml

U/l = 8095 x ∆A340 nm/min U/l = 8252 x ∆A Hg 334 nm/min U/l = 14571 x ∆A Hg 365 nm/min

INTERFERENCIA Evitar la hemólisis ya que interfiere con el ensayo.



37C

37C

Semi Micro

Macro

Semi Micro

1,0 ml 0,04 ml

2,5 ml 0,05 ml

1,0 ml 0,02 ml

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de la Creatina Quinasa con un nivel aceptable de precisión se determinó como 21,7 U/l.

Mezclar, incubar durante:

3 min a 25C 2 min a 30C 1 min a 37C Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.

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PRECISION Análisis (Intra) Media (U/l) DE CV(%) n Análisis (Inter) Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 215 4.97 2.31 20

Nivel 2 549 8.51 1.55 20

Nivel 1 215 8.41 3.91 20

Nivel 2 549 18.4 3.35 20

CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9538 X + 7.5746 con un coeficiente de correlación r = 0.9988 Se analizaron 47 muestras con valores de entre 37 y 2755 U/l. REFERENCIAS 1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem 1977; 15: 255. 2. Stein, W. (1985), Med. Welt 36: 572. 3. Szasz, G., et al. Clin. Chem 1976; 22: 650.


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CK-MB (NAC-act.) Método UV MANUAL RX MONZA


PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de CK-MB en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza.

La solución R1a contiene Azida Sódicas. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

No. Cat. CK 1296 R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 70 ml 19 x 2.5 ml R1b. Enzima/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo 19 x 2.5 ml CONTROL 1 x 2 ml

Las azidas sódicas reaccionan con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido sódico al 10%.

CK 1553 5 x 20 ml

Atención: Suero de Control El material de origen humano del que se deriva este producto ha sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar como posibles transmisores de enfermedades infecciosas.

R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 105 ml R1b. Enzima/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo 5 x 20 ml CONTROL 2 x 2 ml

SIGNIFICADO CLINICO(1) La Creatina Kinasa (CK) está aceptada internacionalmente como un indicador sensitivo y específico del infarto de miocardio agudo (AMI). Existen 3 tipos de iso-enzimas CK, CK-MM, CK-MB y CK-BB. El CK-BB lo produce el cerebro a partir del tejido del esqueleto y el corazón y el CK-MB se produce a partir del músculo del corazón. En la mayoría de los casos la actividad de CK aumenta durante las 6 horas posteriores a un infarto agudo. Los valores máximos se observan al cabo de unas 20 horas. La actividad de CK normalmente vuelve a su normalidad durante el cuarto o quinto día posterior al infarto. PRINCIPIO(3) Análisis de Inmunoinhibición: Se incorpora un anticuerpo en el reactivo CK. Este anticuerpo se unirá e inhibirá la actividad de la subunidad M de CK-MB. Esto significa que sólo se mide la actividad de la subunidad B en el suero. Si la actividad se multiplica por el factor 2, nos dará la actividad de la CK-MB en suero. MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes

Concentraciones en la Prueba

R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa Tampón Imidazola 0.10 mol/l, pH 6.7 Glucosa 20 mmol/l Mg-acetato 10 mmol/l EDTA 2.0 mmol/l R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo ADP 2.0 mmol/l AMP 5.0 mmol/l Pentafosfato de Diadenosina 10 μmol/l NADP 2.0 mmol/l HK ≥ 2.5 U/ml G-6-PDH ≥ 1.5 U/ml N-acetilcisteina 20 mmol/l Fosfato de Creatina 30 mmol/l Antibody to CK-M CONTROL

Hojas de Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautes locales. Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C. R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo Reconstituir un frasco de Enzimas/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo R1b con el volumen adecuado de Tampón/Glucosa R1a: 2,5 ml para el kit de 19 x 2,5 ml (CK 1296) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (CK 1553) Estable durante 21 días entre +2 y +8C y 3 días entre +15 y +25C. CONTROL Abrir un frasco de suero de control cuidadosamente, evitando la pérdida de material, y reconstituir en exactamente 2 ml de agua doblemente destilada. Cerrar el frasco y dejar reposar durante 15 minutos, disolver el contenido completamente agitando o rotando suavemente. La CK-MB es estable en suero durante 5 días entre +2 y + 8C, 8 horas a +25C y 4 semanas a -20C cuando se congela sólo una vez.

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MANUAL/ RX MONZA CK 1296

MATERIAL SUMINISTRADO CK NAC/CK-MB Buffer/Glucose Enzimas/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo Suero de control

CÁLCULO MANUAL

MATERIALES NECESARIO NO SUMINISTRADOS Control CKMB Randox No. (Cat. CK 1212) Control Cardíaco de Tres Niveles Randox, No. (Cat. CQ 3100 Nivel y Nivel 3) Randox CK-MB Calibración (Cat. No. CK 2393) NOTA DE PROCEDIMIENTO(4) La Macro-CK es una forma atípica de CK y se compone de complejos de Inmunoglobulina de Isonenzimas normales. Esta forma migra entre MM y MB y se observa principalmente en mujeres ancianas. Esto no tiene significación clínica, pero su presencia puede causar resultados falsamente elevados. Si se sospecha la contribución de Macro-CK se deberá confirmar su presencia por medio de electroforésis. PROCEDIMIENTO Antes de llevar a cabo el análisis para medir la actividad de la CKMB en suero, es necesario medir la actividad de la CK total utilizando el método NAC activado. PARA RX MONZA Seleccione CK-MB en la pantalla ejecutar prueba y lleve a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo: Blanc Reactivo S0

Patrón S1

Muestra

50 µl 500 µl

50 µl 500 µl

50 µl 500 µl

Salino Patrón Muestra Reactivo

Long. de onda

CK-B (U/l)

CK-MB (U/l)

340 nm Hg 334 nm Hg 365 nm

825 x ∆A 841 x ∆A 1486 x ∆A

1651 x ∆A 1683 x ∆A 2972 x ∆A

El cambio de absorbancia por minuto (∆A/min) también se puede medir y la media de las 5 mediciones de deberá utilizar en el cálculo. Los factores a utilizar entonces serán:Longitud de onda

CK-B (U/l)

CK-MB (U/l)

4127 4207 7429

8254 8414 14858

∆A 340 nm/min ∆A Hg 334 nm/min ∆A Hg 365 nm/min

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario el Control de CKMB Randox o el Control Cardíaco de Tres Niveles Randox. Se deberán analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIAS La hemólisis interfiere con el análisis.

Mezclar y aspirar en la Rx Monza. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de solución salina y el Calibrador Randox CKMB para calibración.

RANGO DE REFERENCIA Infarto de Miocardio(MI) La probabilidad de daño del miocardio es elevado cuando se presentan los siguientes 3 factores:-

PARA USO MANUAL Temperatura Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm, Hg 334 nm o Hg 365 nm 1 cm de espesor 25C, 30C y 37C frente al aire

30C

37C

Semi-micro

Macro

1 CKhombres >80 U/l1 >130 U/l2 >195 U/l* CKmujeres >70 U/l1 >110 U/l2 >170 U/l* 2 CK-MB >10 U/l1 > 16 U/l2 > 25 U/l* 3 una actividad de CK-MB entre 6 y 25% de la actividad CK total

0,04 ml

0,1 ml

*Valores calculados

1,0 ml

2,5 ml

Se puede sospechar un MI aunque los valores obtenidos sean inferiores a los límites especificados. Para confirmar si ha ocurrido un infarto reciente, el test se deberá repetir al cabo de 4 horas.


Muestra Enzimas/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo

25C

Mezclar, y dejar reposar a la temperatura apropiada durante 10 minutos. Después añadir a la cubeta, y leer la absorbancia A1. Leer la absorbancia A2 exactamente 5 minutos más tarde. ∆A = A2 - A1

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para reflejar la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

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MANUAL/ RX MONZA CK 1296

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza. LINEARIDAD El Anticuerpo inhibe hasta 2000 U/l de CK-MM. Este ensayo es linear hasta 2044 U/l de actividad CKMB. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de CKMB con un nivel de precisión aceptable se determinó como 23,5 U/l. PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Nivel 1 Mean (U/l) 136 161 SD 4.89 7.03 CV(%) 3.61 4.37 n 20 20 Precisión Total Nivel 1 Mean (U/l) 136 SD 6.83 CV(%) 5.04 n 20

Nivel 2 161 6.56 4.08 20

CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.0756 X - 18.799 con un coeficiente de correlación r = 0.9903 Se analizaron 43 muestras con valores de entre 34,4 y 1733 U/l. REFERENCIAS 1. Stein, W., Med. Weit 1985; 36: 572. 2. Szasz, G., and E. W. Busch. Paper presented at 3rd Eur. Congr. Clin. Chem., Brighton/England, June 1979; 3 - 8 (abstract). 3. Wurburg, U., et al., Clin. Chem. 1976; 54: 357. 4. Jacobs et al, The Laboratory Test Handbook, 2nd edition

Revisado 29 July 11 bm Rev. 001

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CREATININA (CREA)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Creatinina en suero plasma u orina. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza. Cat. No. CR 510 200 ml CR 524 6 x 500 ml

CAL. Patrón R1a. Acido pícrico R1b. Hidróxido sódico

1 x 5.5 ml 1 x 100 ml 1 x 100 ml

CAL. Patrón R1a. Acido pícrico R1b. Hidróxido sódico

1 x 30 ml 3 x 500 ml 3 x 500 ml

SIGNIFICADO CLINICO La creatinina se deriva de la creatina y la creatina fosfato en tejido muscular y puede ser definida como un producto de desecho del nitrógeno.La creatinina no es reutilizada pero es excretada por el cuerpo en la orina via renal. La creatinina es producida y excretada con un ratio constante ,el cual es proporcional a la masa muscular del cuerpo.Como consecuencia de la forma en que la creatinina es excretada por el riñon, la determinación de creatinina se utiliza principalmente para diagnosticar el funcionamiento del riñon.La creatinina es considerada como el marcador endógeno más útil en el diagnostico y tratamiento de enfermedades renales. La creatinina se mide principalmente para valorar el funcionamiento del riñon y tiene ciertas ventajas sobre la determinación de urea.Los niveles de creatinina en plasma son relativamente independientes de la ingesta proteica, de agua ,ratio de producción de orina y del ejercicio.Siendo su ratio de producción constante,una elevación de creatinina en plasma es un indicativo de infraexcreción sugiriendo un mal funcionamiento de riñon.Los niveles bajos de creatinina en plasma son raros y no son clinicamente significativos. METODO COLORIMETRICO(1) PRINCIPIO La creatinina en solución alcalina reacciona con ácido pícrico para formar un complejo coloreado. La cantidad del complejo formado es directamente proporcional a la concentración de creatinina. EXTRACCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA-plasma. Estable durante 7 días cuando se conserva entre +2 y +8C. Orina: extraer la orina sin aditivos. Diluir 1+49 con agua bidestilada. Estable durante 4 días cuando se conserva entre +2 y +8C.

La solución R1a contiene ácido pícrico que es tóxico. La sólucion R1b contiene hidróxido sódico que es cáustico. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +25°C. R1a. Acido pícrico Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C. R1b. Hidróxido sódico Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO Mezclar volúmenes iguales de Soluciones R1a y R1b. Estable durante 3 días cuando se conserva entre +15 y +25C. MATERIAL SUMINISTRADO Patrón Acido pícrico Hidróxido sódico MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO Pipetas apropiadas para suministrar 50 l, 100 l, 200 l, 1 ml y 2 ml. Material para cronometrar y bloque de calentamiento o baño de agua para mantener temperaturas de 25, 30 ó 37°C. Espectrofotómetro con longitud de onda de 490 - 510 nm. Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) NOTAS El grado de reacción y la absorbancia del producto de la reacción son muy sensibles a la temperatura. La temperatura especificada debe ser por lo tanto mantenida.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes CAL. Patrón R1a. Acido pícrico Surfactante R1b. Hidróxido sódico

Concentraciones iniciales de las soluciones Vedi inserto lotto-specifico 35 mmol/l 0,32 mol/l

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MANUAL/ RX MONZA CR 510

PROCEDIMIENTO Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia nueva en el modo de cubeta. Seleccione CREA en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo S0 ddH2O Patrón Muestra Reactivo de Trabajo

Patrón S1

Muestra

50 l 500 l

50 l 500 l

50 l 500 l

Mezclar, inserte en el soporte de Rx Monza celda de flujo y oprima Leer. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

492 (490-510 nm) 1 cm de espesor 25/30/37°C Frente al aire


Reactivo de trabajo Solución Patrón Muestra

Patrón Macro Semi Micro

Muestra Macro Semi Micro

2.0 ml 0.2 ml -

2.0 ml 0.2 ml

1.0 ml 0.1 ml -

1.0 ml 0.1 ml

Mezclar, leer la absorbancia A1 del patrón y de la muestra al cabo de 30 segundos. Exactamente 2 min después leer la absorbancia A2 del patrón y de la muestra. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendaciones sobre el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando suministrado Standard CAL en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3. CÁLCULO MANUAL A2 - A1 = Amuestra ó Apatrón Concentración de creatinina en suero o plasma: Amuestra x 177 = mol/l Apatrón Amuestra Apatrón

x 2

= mg/dl

Apatrón

x 100

Aclaramiento de creatinina =

mg creatinina/dl suero x 1440

INTERFERENCIA La hemólisis interfiere en la prueba. No usar sueros lipémicos. El método es susceptible a interferencias por altos niveles de sustancias reductoras. Hervir la orina antes de la prueba puede ayudar a reducir estas interferencias. VALORES NORMALES(2) Suero: Hombre Mujer Orina:

CARACTERÍSTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37oC. SUERO LINEALIDAD Si la concentración excede 2168 mol/l (24.5 mg/dl) en suero, diluir suero, plasma u orina diluida 1+4 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de Creatinina con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 14.0 mol/l (0.158 mg/dl).

Análisis (Inter)

[ml/min]

53 - 97 mol/l(0,6 - 1,1 mg/dl) 44 - 80 mol/l (0,5 - 0,9 mg/dl) 8,84 - 13,3 mmol/24 hrs 1 - 1,5 g/24 hrs

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia reflejando edad, sexo, dieta y localización geográfica de la población

Media (mg/dl) DE CV(%) n

= mg/dl

mg creatinina/dl orina x ml orina 24 hrs.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

PRECISION Análisis (Intra)

Concentración de creatinina en orina: Amuestra x 8,85 = mmol/l Apatrón Amuestra

NORMALIZACIÓN Randox Nivel de calibración Suero 3 es atribuible a la creatinina materiales de referencia NIST y 909b del NIST 967.


Nivel 2 1.46 0.040 2.75 20

Nivel 3 4.19 0.068 1.63 20

Nivel 2 1.46 0.042 2.86 20

Nivel 3 4.19 0.122 2.91 20

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CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.098 X - 0.27 con un coeficiente de correlación r = 0.9995 Se analizaron 47 muestras con valores de entre 0,24 y 15,3 mg/dl. ORINA LINEALIDAD Si la concentración excede 85309 mol / l (963 mg / dl) en la orina, diluir la orina 1 +4 con agua destilada y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de Creatinina con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 2221 mol/l (25.1 mg/dl). REFERENCIAS 1. Bartels, H., Bohmer, M., (1972) Clin. Chem. Acta 37: 193. 2. Schirmeister, J., H. Willmann, and H. Kiefer. (1964). Dtsch. Med. Wschr. 89: 1018.

Revised 15 Sep 10 bm Rev. 001

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NEFA

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro, no pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Acidos Grasos No Esterificados MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Acidos Grasos No Esterificados (NEFA) en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza. Cat. No. FA 115 3 x 10 ml

R1a. R1b. R2a. R2b. R2c. CAL

Tampón Enzima/Coenzimas Diluyente de la Enzima Maleimida Reactivo Enzima Patrón

1 x 70 ml 3 x 10 ml 3 x 20 ml 3 x 20 ml 3 x 20 ml 1 x 5.5 ml

METODO COLORIMETRICO PRINCIPIO(3,5,6)

Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C. R1b.

Enzima/Coenzimas Reconstituir un vial de Enzima/Coenzimas R1b con 10 ml de Tampón R1a. Estable durante 5 días entre +2 y +8C. No congelar. Proteger de la luz.

R2a.

Diluyente del Enzima Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad conservado entre +2 y +8C.

R2b.

Maleimida Reconstituir el contenido de una botella de Maleimida R2b con el contenido entero de una botella de diluyente del Enzima R2a. Asegurarse de que la Maleimida está completamente disuelta. Usar inmediatamente para reconstituir la botella R2c.

R2c.

Reactivo Enzima Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo Enzima R2c con una botella de Solución R2b reconstituida. Estable durante 5 días entre +2 y +8C. No congelar. Proteger de la luz.

CAL

Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C.

Acetil CoA Sintetasa

NEFA+ATP+CoA

Acil CoA+AMP+PPi

Acetil CoA Oxidasa

Acil CoA + O2

2,3 trans-enoil-CoA + H2O2 Peroxidasa

2H2O2 + TOOS + 4-AAP 4-AAP TOOS

Aducto Púrpura + 4H2O

= 4-Aminoantipirina = N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-m-toluidina

MUESTRA(1) Suero, plasma. No usar plasma heparinizado, ya que la heparina interfiere en el análisis. Los anticoagulantes adecuados son los siguientes: EDTA Citrato de Sodio Fluoruro de Sodio Oxalato de Amoníaco COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

Concentración inicial de las Soluciones

R1a. Tampón Tampón fosfato 0,04 mol/l, pH 6,9 Cloruro de magnesio 3 mmol/l Surfactante R1b. Enzima/Coenzimas Acil Coenzima A Sintetasa ≥ 0,3 U/ml Ascorbato oxidasa ≥ 1,5 U/ml Coenzima A 0,9 mmol/l ATP 5,0 mmol/l 4-amino antipirina 1,5 mmol/l R2a. Diluyente del Enzima Fenoxietanol 0,3% (w/v) Surfactante R2b. Maleimida 10,6 mmol/l R2c. Enzima reactivo Acil coenzima A oxidasa ≥ 10 U/ml Peroxidasa 7,5 U/ml TOOS 1,2 mmol/l CAL Patrón Vedi inserto lotto specifico

R1= Tampón / Enzima/ Coenzimas R2 = Diluyente del Enzima / Maleimida / Enzima Reactivo MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Enzima/Coenzimas Diluyente del Enzima Maleimida Reactivo Enzima Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532).

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MANUEL FA 115

NOTAS(1,7) 1. Muestras visiblemente lipémicas requieren una muestra blanco.

RX MONZA PROCEDURE Seleccione NEFA en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

2.

Pipetee en un tubo de ensayo:

Muestras con niveles de bilirrubina o hemoglobina superiores a los indicados a continuación, requieren una muestra blanco: Nivel Máximo permitido para pruebas de exactitud

Efecto sobre el resultado

10 mg/dl 100 mg/dl

Disminuido Aumentado

Bilirrubina Hemoglobina

Estas muestras necesitarán un blanco de muestra* para llevarse a cabo (Ablanco de muestra). En el caso de un procedimiento manual, la concentración de NEFA se calculará de la siguiente manera:Amuestra - Amuestra blanco mmol/l =

x Conc. de patrón Apatrón

dd H2O Patrón Muestra Reactivo 1

Muestra - Muestra Blanco = Muestra Concentration (mmol/l) 3. Durante la recuperación de los materiales de control de calidad se puede observar al leer monocromático. Para corregir este tomar lecturas adicionales para Amuestra y APatrón a 700 nm, y la resta de las lecturas de longitud de onda principales. 4. La muestra que va a ser analizada no debe heparinizarse, ya que esto estimularía la actividad de la lipoproteín-lipasa, provocando la liberación de NEFA de los triglicéridos asociados a las lipoproteínas sanguíneas. En consecuencia, la sangre extraida de pacientes que están recibiendo tratamiento terapéutico con heparina, o sangre recogida en envases con heparina no es adecuada para esta prueba. 5. Debido a la incorporación de ascorbato oxidasa en el Reactivo Enzima 4, niveles de ácido ascórbico superiores a 20 mg/dl (es decir > 10 veces el valor normal) no interfieren en la prueba. 6. Las determinaciones de NEFA deben llevarse a cabo con suero obtenido de individuos en ayunas, de lo contrario los resultados no pueden ser directamente comparados con los rangos normales de controles en ayunas. 7. Si la muestra de suero permanece a temperatura ambiente durante un tiempo considerable, el nivel de NEFA aumenta debido a la acción enzimática. Por tanto, si el análisis no es inmediato, las muestras de suero pueden congelarse a -20C durante un máximo de 24 horas.

Patrón

Blanc S0 10 µl 200 µl

S1

Muestra

*

10 µl 200 µl

10 µl 200 µl

Blank 200 µl

Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a +37°C. Reactivo 2 Muestra

400 µl -

400 µl -

400 µl -

400 µl 10 µl

Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a +37°C. Introduzca la cubeta en el soporte de la celda de flujo del RX monza y pulse Read (Leer). *

En el caso del RX monza, la concentración de NEFA se calculará de la siguiente manera:

Reactivo Muestra

Consulte las notes 1 y 2.

MANUAL PROCEDIMIENTO(6) Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

550 nm 1 cm de espesor +37C Frente al reactivo blanco


Agua destilada Patrón Muestra Solución R1

React. blanco

Patrón

50 l ----1,0 ml

--50 l --1,0 ml

Muestra *Muestra blanco ----50 l 1,0 ml

------1,0 ml

Mezclar e incubar a +37C durante 10 minutos. Solución R2 Muestra

2,0 ml ---

2,0 ml ---

2,0 ml ---

2,0 ml 50 l

Mezclar e incubar a +37C durante 10 min. Leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente a reactivo blanco a 550 nm. *

Consulte las notes 1, 2 y 3.

N.B.: Tiempo de lectura debe ser exactamente 10 min.

8. Si Apatrón - Areactivo blanco es < 0,180 repetir la prueba con reactivo fresco.

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MANUEL FA 115

CALCULOS 1. Utilizando una curva de calibración La curva de calibración debe ser confirmada para cada nuevo lote de reactivos de la forma siguiente: No. de Tubo Nombre

1 Blanco

2 Patrón bajo

3 Patrón normal

4 Patrón elevado

NEFA Patrón Agua Solución R1

--50 l 1,0 ml

25 l 25 l 1,0 ml

50 l --1,0 ml

100 l --1,0 ml

2,0 ml

2,0 ml

Mezclar e incubar a +37C durante 10 min. Solución R2

2,0 ml

2,0 ml

Mezclar e incubar a +37C durante 10 min. Abs

0,000

*valores estandares 0,000

(leer)

(leer)

(leer)

valores estandares x 0,250 x 0,500 x 1,000

* Se puede encontrar valores estandares en la insercion especifica del lote, incluido en el kit. Representar absorbancias (A550 nm) frente a concentraciones de NEFA (mmol/l). Debe ser una línea recta, ya que sigue la Ley de Beer y es lineal entre 0.0 y 2.0 mmol/l. 2. Utilizando un patrón La concentración de NEFA en una muestra puede ser determinada por medio de la siguiente ecuación. mmol/l =

Amuestra Apatrón

x Concentración de patrón

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte + 44 (0) 28 9442 2413. RANGO NORMAL(2,8) En ayunas: 0,1 - 0,9 mmol/l. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

INTERFERENCIA Si se realiza la técnica de los NEFA de forma automática, el reactivo no debería colocarse en el instrumento tras los triglicéridos CARACTERÍSTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza a una temperatura de +37ºC. LINEALIDAD El método es lineal hasta 2,24 mmol/l. Para muestras con concentraciones superiores, diluir 1+3 con agua bidestilada y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 4. SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable con una precisión aceptable se ha determinado en 0,072 mmol/l PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Media (mmol/l) 1.73 DE 0.082 CV(%) 4.74 n 20

Nivel 2 1.20 0.058 4.81 20

Ensayo total Media (mmol/l) DE CV(%) n

Nivel 1 1.73 0.078 4.51 20

Nivel 2 1.20 0.052 4.32 20

CORRELATION This method (Y) was compared with another commercially available method (X) and the following linear regression equation obtained: Y = 1.0372 X + 0.0457 and a correlation coefficient of r = 0.9855 49 patient samples were analysed spanning the range 0.09 to 2.08 mmol/l. REFERENCIAS 1. DeVries, G.H., Mamunes, P., Miller, C.D. and Hayward, D.M., Analytical Biochem. 1976; 70: 156-166. 2. Henry, R. J., Clinical Chemistry, Principles and Techniques, 2nd Edition, Harper and Row, 1974; p. 1451. 3. Matsubara, C., Neshikawa, Y., Yoshida, Y., and Tateamura, K. Analytical Biochem. 1983; 130: 128-133. 4. Mulder. C. J., Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21: 823-827. 5. Hosaka, K., Kiteucki, T., Mitsukida, N., and Kawagucki, A. J., Biochem. 1981;89: 1799-1803. 6. Shimizu, S., Tani, Y., Yamada, H., Tabata, M., and Murachi, T., Analytical Biochem. 1980; 107: 193-198. 7. Okabe, H., Uji, Y., Nagaehima, K. and Noma, A. Clin, Chem. 1980; 26111: 1540-1543. 8. Duncombe, W.G., Biochem. J. 1963; 88: 7. Revisado 31 oct 12 rw Rev. 005

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GLUCOSA (GLUC-PAP)

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO

GOD/PAP MANUAL RX MONZA

Componentes

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Glucosa en suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. Cat. No. GL 364 10 x 100 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo GOD-PAP CAL. Patrón

10 x 100 ml 10 x 100 ml 1 x 5.5 ml

GL 1021 2 x 500 ml


2 x 500 ml 2 x 500 ml 1 x 5.5 ml

GL 366 6 x 500 ml


6 x 500 ml 6 x 500 ml 1 x 5.5 ml

PRINCIPIO La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona, catalizado por la peroxidasa, con fenol y 4-aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina rojo-violeta. PRINCIPIO DE LA REACCION(1)


R1a. Tampón Tampón fosfato Fenol R1b. Reactivo GOD-PAP 4-Aminofenazona Glucosa oxidasa Peroxidasa CAL. Patrón Glucosa

0,1 mol/l, pH 7,0 11 mmol/l 0,77 mmol/l ≥ 1,5 kU/l ≥ 1,5 kU/l Ver inserto del lote específico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%.

GOD

Glucosa + O2 + H2O

Acido glucónico + H2O2

2H2O2+ 4-aminofenazona + fenol

POD

quinoneimina + 4H2O

RECOGIDA DE MUESTRAS Y ALMACENAMIENTO La glucosa es estable durante 24 horas entre +2 y +8°C si el suero se prepara a los 30 minutos después de la recolección. Mediante la adición de un inhibidor de la glicólisis (NaF, KF), la muestra se pueden almacenar hasta 24 horas entre +15 y +25°C o 3 días entre +2 y +8ºC. Para el almacenamiento a largo plazo las muestras se deben colocar en envases sellados y congelarse a -20°C. Las muestras hemolizadas no deben utilizarse, ya que la hemólisis interfiere con esta prueba. Plasma: se permite el uso de heparina de litio como un anticoagulante. Orina: orina de 24 horas se debe recoger en un frasco oscuro y mantener en hielo. Orina al azar – se debe usar una muestra fresca. La muestra debe ser almacenada entre +2 y +8°C si no se utiliza inmediatamente.

Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C R1b. Reactivo GOD-PAP Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1b con un pequeño volumen de Tampón R1a y transferir el contenido entero a la botella R1a, enjuagando varias veces la botella R1b. El reactivo de trabajo es estable durante 3 meses entre +2 y +8C ó 5 días entre +15 y +25C. CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad entre +2 y +8C.

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MANUAL GL 364

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo GOD-PAP Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) PROCEDIMIENTO Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia en el modo de cubeta. Seleccione GLU en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Pipetear en la Cubeta: Patrón S1 or Muestra Muestra/Patrón Reactivo 1

Reactivo Blanco S0

5 l 500 l

0 l 500 l

Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25C ó 10 min a 37C. Insertar en el soporte de flujo de célula de Rx Monza y oprima Leer dentro de los 60 minutos. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de glucosa estándar Randox proporcionado o Suero de calibración Randox Nivel 3. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.

INTERFERENCIAS Esta prueba no se ve afectada por el ácido úrico, ácido ascórbico, glutatión, anticoagulantes, bilirrubina y creatinina a concentraciones fisiológicas. VALORES NORMALES(2) Suero,plasma (en ayuno) 4,2-6,4 mmol/l ó 75-115 mg/dl Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37C.

PARA USO MANUAL SUERO Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

500 nm, Hg 546 nm 1 cm de espesor 15-25oC ó 37oC frente a reactivo blanco

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Glucosa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,343 mmol/l (6.18 mg/dl).

Pipetear en tubos de ensayo: Macro

Semi-Micro

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o muestra 20 l Reactivo 2000 l

--2000 l

10 l 1000 l

--1000 l

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 32,1 mmol/l (578 mg/dl). Para muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 3. PRECISION Análisis (Intra)

Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25C ó 10 min a 37C y medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y de la muestra (AMuestra) frente al reactivo blanco antes de 60 min. CÁLCULO MANUAL AMuestra Concentración de glucosa (mmol/l) =

x

Patrón conc. (mmol/l)

APatrón Amuestra (mg/dl) =

x

Patrón conc. (mg/dl)

APatrón

Media (mmol/l) DE CV(%) n

Nivel 2 6.53 0.203 3.11 20

Nivel 3 15.0 0.640 4.26 20

Nivel 2 6.53 0.269 4.11 20

Nivel 3 15.0 0.774 5.15 20

Análisis (Inter) Media (mmol/l) DE CV(%) n

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia NIST 917b y NIST 965a de Glucosa.

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MANUAL GL 364

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9091 X + 0.5645 y un coeficiente de correlación r = 0,9898 Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 0.39 y 21.3 mmol/l. ORINA LINEALIDAD El ensayo es lineal hasta una concentración de glucosa de 30,6 mmol/l (551 mg/dl). Para muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 3. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Glucosa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,295 mmol/l (5,32 mg/dl). PRECISION Análisis (Intra) Media (mmol/l) DE CV% n

Nivel 2 2.68 0.073 2.71 20

Nivel 3 15.8 0.723 4.59 20

Nivel 2 2.68 0.068 2.53 20

Nivel 3 15.8 0.738 4.68 20

Análisis (Inter) Media (mmol/l) DE CV% n

REFERENCIAS 1. Barham, D, and Trinder, P. Analyst 1972; 97: 142. 2. Teuscher, A. and Richterich, P. Schweiz Med. Wschr. 1971; 101: 345 and 390. 3. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 246-250


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GLUTAMATO DESHIDROGENASA (GLDH)

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón/Substrato Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C.

MANUAL RX MONZA

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Glutamato Deshidrogenasa (GLDH) en el suero. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza. No. Cat. GL 441 8 x 6 ml GL 442 5 x 100 ml

R1a. R1b. R2.

Tampón/Substrato Enzima/Coenzima -oxoglutarato

1 x 70 ml 8 x 6 ml 2 x 10 ml

R1a. R1b. R2.

Tampón/Substrato Enzima/Coenzima -oxoglutarato

5 x 100 ml 5 x 100 ml 2 x 20 ml

Este es un método estándar optimizado de acuerdo a las recomendaciones del Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie. Este procedimiento mide la reacción de arrastre no específica. PRINCIPIO(1) -oxoglutarato + NADH + NH4+

GLDH

glutamato+NAD++H2O

MUESTRA Suero. Los sueros hemolíticos y lipémicos interfieren con el análisis. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1a. Tampón/Substrato Tampón Trietanolamina Acetato de Amoniaco EDTA R1b. Enzima/Coenzima ADP NADH LD R2. -oxoglutarato

Concentraciones en la Prueba 50 mmol/l, pH 8,0 100 mmol/l 2,5 mmol/l 1,0 mmol/l 0,2 mmol/l ≥ 2 U/ml 7 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. Las soluciones R1a y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.

R1b. Enzima/Coenzimas No. Cat. GL 441 Reconstituir el contenido de una botella de Enzima/ Coenzima 2 con 6 ml de Tampón/Substrato 1. Estable durante 1 semana entre +2 y +8°C. No. Cat. GL 442 Reconstituir el contenido de un frasco de Enzima/ Coenzima 2 con una parte de Tampón/Substrato 1 y transferir todo el contenido a la botella 1 enjuagando el frasco 2 varias veces. Estable durante 1 semana entre +2 y +8°C. R2.

-oxoglutarato Reconstituir el contenido de un frasco de -oxoglutarato 3 con el volumen apropiado de agua doblemente destilada:10 ml para el kit de 8 x 6 ml (GL 441) 20 ml para el kit de 5 x 100 ml (GL 442) Estable durante 8 semanas entre +2 y +8°C ó 7 días entre +15 y +25°C.

Nota: Si utiliza este ensayo en un sistema automatizado, por favor consulte la hoja de procedimiento de ese sistema, según las instrucciones de reconstitución puede ser diferente. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Substrato Enzima/Coenzima -oxoglutarato MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) Salino RX series (No. Cat. SA 3854) PROCEDIMIENTO Seleccione GLDH en la pantalla de ejecución y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo: Sample Reactivo R1

0.10 ml 0.50 ml

Mezclar e incubar durante exactamente 5 minutos a 37°C o 10 minutos a 20-25°C Reactivo R2

0.02 ml

Mezclar y aspirar en el Monza Rx inmediatamente. RX MONZA CALIBRACIÓN El uso de solución salina y la calibración Randox Nivel 3 en suero se recomienda para la calibración. La calibración se recomienda a los cambios en el lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.

Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

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MANUAL/ RX MONZA GL 441

PARA USO MANUAL Longitud de onda: cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm (Hg 334 nm or Hg 365 nm) 1 cm de paso de la luz 25°C contra el aire

Introducir en una cubeta:

Macro

Semi Micro

Enzima/Coenzima (25°C) (R1) Suero

2.5 ml 0.5 ml

1.0 ml 0.2 ml

Mezcle bien y deje reposar a 25 ° C durante 3 minutos, luego medir la absorbancia A1, deje reposar durante exactamente 5 minutos y leer absorbancia A2 (no específica de reacción lenta). -oxoglutarato (R2)

0.1 ml

0.04 ml

Mezclar bien y leer la absorbancia A3, deje reposar durante exactamente 5 minutos a 25 ° C y leer la absorbancia A4. (A3-A4) - (A1-A2) = A / 5 minutos MANUAL DE CÁLCULO Para calcular la actividad de la GLDH utilizar la siguiente fórmula: U/l (25°C) = 197 x A 340 nm / 5 min. U/l (25°C) = 365 x A Hg365 nm / 5 min. U/l (25°C) = 201 x A Hg334 nm / 5 min. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. INTERFERENCIAS NO ESPECIFICAS Se ha observado una interferencia no específica con la medición de la actividad del glutamato deshidrogenasa en el 60% de los sueros. En una actividad normal del glutamato deshidrogensa equivale a 0,4 U/l por regla general y en ocasiones excede 1 U/l. Para tener en cuenta la interferencia no específica es necesario estimar un blanco de suero con -oxoglutarato.

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 77,3 U/l. Si la concentración de la muestra supera este valor, diluir la muestra 1 +4 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Glutamato Deshidrogenasa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 2,90 U/l. PRECISION Precisión Dentro del Análisis Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 13.5 0.562 4.16 20

Nivel 2 28.3 0.985 3.48 20

Nivel 1 13.5 0.764 5.66 20

Nivel 2 28.3 1.56 5.53 20

Precisión Entre Análisis Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9585 X +0.1913 y un coeficiente de correlación r = 0,9944. se analizaron 40 muestras de pacientes abarcando un rango de 3,13 a 58,06 g/l. REFERENCIAS 1. Schmidt, E. and Schmidt, F.W. In: Method of Enzymatic Analysis, 3rd ed. H.K. Bergmeyer, J. Bergmeyer, and M. Grosse, Eds. Weirheim, Verlag Chemie, 1983, 3: 216-227. 2. In: Clinical Guide to Laboratory Tests 2nd ed. N. W. Tietz, Eds. W.B. Saunders Company. Philadelphia 1990 p.260. 3. Schmidt, E. et al (1992) Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 30 pp 493-502.

VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO(2,3) 25°C 37°C Hombres: Mujeres:

< 4,0 U/l < 3,0 U/l

<7,0 U/l <5,0 U/l

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza en funcionamiento a 37ºC. Revisado 12 Aug 11 bm Rev. 002

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GLUCOSE


GOD/PAP (LIQUIDO) MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Glucosa en el sangre, suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para uso Manual. Cat. No. GL 2623 GL 2614

R1. CAL.

Glucosa Reactivo Patrón

6 x 100 ml 1 x 5.5 ml

R1. CAL.

Glucosa Reactivo Patrón

2 x 500 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO La medición exacta de la glucosa en suero o plasma es importante en el diagnóstico y el tratamiento de trastornos del metabolismo de hidratos de carbono tales como diabetes mellitus, hipoglucemia neonatal, hipoglucemia idiopática y de carcinoma de células de islotes pancreáticos. La glucosa se mide a menudo en colaboración con diversas pruebas de tolerancia tras la administración de dosis de la leucina, la insulina, el glucagón o glucosa. PRINCIPIO La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona, catalizado por la peroxidasa, con fenol y 4-aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina rojo-violeta. PRINCIPIO DE LA REACCION(1) GOD

Glucosa + O2 + H2O

Acido glucónico + H2O2 POD

2H2O2+ 4-aminofenazona + fenol

quinoneimina + 4H2O

RECOGIDA DE MUESTRAS Y ALMACENAMIENTO Suero, plasma de litio y orina. Si es posible, los componentes celulares separados de suero o plasma de inmediato, ya más tardar una hora después de recoger la muestra de sangre. Mediante la adición de un inhibidor de la glicólisis (NaF, KF), las muestras se pueden almacenar hasta 24 horas entre +15 y +25 ° C o hasta 7 días a 4 ° C. La orina: orina de 24 horas se debe recoger en un frasco oscuro y se mantuvieron en hielo. Orina al azar - una muestra fresca debe ser utilizado. La muestra debe ser almacenado entre +2 y +8 ° C si no se utiliza inmediatamente.

Reactivo contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Glucose Reactivo Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad entre +2 y +8°C. CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad entre +2 y +8°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Glucosea Reactivo Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Uranil Acetato 0,16% (Cat. No. DP 647 2 x 500 ml) NOTAS Es normal que este reactivo sea de un color rosa pálido que se oscurezca con el tiempo. Este hecho no afecta al funcionamiento del mismo.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes


R1.

Glucosa Reactivo Tampón fosfato Tampón MOPS Fenol 4-Aminofenazona Glucosa oxidasa Peroxidasa CAL. Patrón Glucosa

50 mmol/l, pH 7,0 50 mmol/l, pH 7,0 mmol/l 0,77 mmol/l ≥ 1,5 kU/l ≥ 1,5 kU/l Vedi inserto lotto-specifico

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MANUAL GL 2623

PROCEDIMIENTO PARA EL ENSAYO DE GLUCOSA GOD-PAP SIN DESPROTEINIZACION Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

500 nm, Hg 546 nm 1 cm de espesor 15-25°C ó 37°C frente a reactivo blanco

VALORES NORMALES(3,4) Suero,plasma

4.2-6.4 mmol/l (75-115 mg/dl)

Orina al azar

0.1 – 0.8 mmol/l (1 – 15 mg/dl)

Orina de 24 horas

<2.78 mmol/d (<0.5 g/d)

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

Pipetear en tubos de ensayo: Macro

Semi-Micro

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o muestra 20 l Reactivo 2000 l

--2000 l

10 l 1000 l

--1000 l

Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25°C ó 10 min a 37°C y medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y de la muestra (AMuestra) frente al reactivo blanco antes de 60 min. Aunque la absorbancia se puede leer en cualquier momento durante un período de hasta 60 minutos después del tiempo especificado de incubación, el intervalo entre la adición de la muestra y la lectura debe de ser exactamente el mismo que para el Patrón/Control y la Muestra. CALCULOS Concentración de glucosa (mmol/l) =

(mg/dl) =

AMuestra APatrón Amuestra APatrón

x Patrón conc. (mmol/l)

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 22,2 mmol/l (400 mg/dl). Para muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con agua destilada y multiplicar el resultado por 3. SENSIBILIDAD Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de sensibilidad ya que esto está limitado por la sensibilidad del espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones del ensayo un cambio de 0,01 unidades de absorbancia es equivalente a 0,013 mmol/l (0,23 mg/dl). REFERENCIAS 1. Barham, D, and Trinder, P. Analyst 1972; 97: 142. 2. Clinical Chemistry Principles and Techniques, Second Edition, R.J. Henry, D.C. Cannon and J.W. Winkelman Editors, Harper and Row, Maryland, USA, 1288, 1974. 3. Teuscher, A. and Richterich, P. Schweiz Med. Wschr. 1971; 101: 345 and 390. 4. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 246-250.

x Patrón conc. (mmol/l)

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIAS Se analizaron los siguientes analitos hasta los niveles indicados y se encontró que no interfieren: Haemoglobin Free Bilirubin Conjugate Bilirubin Triglycerides Intralipid

1000 mg/dl 25 mg/dl 25 mg/dl 1000 mg/dl 400 mg/dl

Revisado 13 Nov 08, bm Rev. 001

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GLUTATION REDUCTASA (GLUT RED) MANUAL RX MONZA

Componentes

R1a.

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Glutation Reductasa en el suero, el plasma y los eritrocitos. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza. No. Cat. GR 2368 5 x 5 ml

COMPOSICION DEL REACTIVO

R1a. Tampón R1b. Substrato R2. NADPH

1 x 70 ml 5 x 5 ml 5 x 3 ml

SIGNIFICADO CLINICO El análisis de Glutation Reductasa se ha utilizado en la detección de enfermedades hepáticas y malignas, en la valoración de la nutrición (estado de la riboflavina) y la detección de estados de deficiencia determinados genéticamente. Nota: Asegurarse de que los estados aparentes de deficiencia enzimática no son debidos a la reducción de la riboflavina. Principio del Análisis (1) El Glutation reductasa cataliza la reducción de glutation (GSSG) en presencia de NADPH, el cual se oxida a NADP+. La disminución en la absorbancia se mide a 340 nm. GR

NADPH + H+ + GSSG

R1b. R2.

250 mmol/l pH 7,3 0,5 mmol/l 2,2 mmol/l 0,17 mmol/l

Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. R1b.

Substrato Reconstituir el contenido de un frasco de Substrato 2 con 5 ml de Tampón 1. Estable durante 2 días cuando se conserva entre +2 y +8°C.

R2.

NADPH Reconstituir un frasco de NADPH 3 con 3 ml de H20 bidestilada. Estable durante 2 días cuando se conserva entre +2 y +8°C.

(GSH = Glutation Reducido)

Lisar las células volviendo a suspenderlas en H20 bidestilada fría, guardar hasta 0.5 ml. Dejar reposar durante 10 min entre +2 +8°C. Centrifugar el lisado durante 5 min a 2000 rpm para eliminar el estroma. Diluir 100 l de lisado con 1,9 ml de solución NaCl al 0,9% para el análisis.

Tampón Fosfato Potásico EDTA Substrato GSSG NADPH


NADP+ + 2 GSH

PREPARACION DE LA MUESTRA Suero, Plasma o Eritrocitos. Preparación del Eritrocito. Centrifugar 0,5 ml de sangre entera durante 5 min a 2000 rpm. Eliminar el plasma y la capa de color de ante, asegurandose de que no se quiten demasiados eritrocitos, arriesgando así un muestreo de células no representativo. Lavar los eritrocitos tres veces volviendo a suspenderlo en NaCl al 0,9%, y centrifugando durante 5 min a 2000 rpm después de cada lavado.

Concentraciones en la Prueba

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Substrato NADPH MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Suero de Control de Glutation Reductasa Randox GR 2608

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MANUAL/ RX MONZA GR 2368

PROCEDIMENTO Seleccione GR en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo:

ddH2O Patrón Muestra R1 Mezclar bien R2

Reagent Blank S0 20 µl 500 µl 100 µl

Patrón S1 20 µl 500 µl

Muestra 20 µl 500 µl

100 µl

100 µl

Mezclar y aspirar en el Monza RX. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda para la calibración el uso de solución salina y suero de calibración Randox glutatión reductasa. La calibración se recomienda con el cambio de lote o como se indica por los procedimientos de control de calidad. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 37°C. frente al aire

Pipetear en la cubeta Lisado Diluido Substrato (R1)

40 l 1000 l

Mezclar bien NADPH (R2)

200 l

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Sueros de Control de Glutation Reductasa para el control de calidad diario. Analizar el control al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. ESPECIFICIDAD El Glutation Reductasa es altamente específico para Glutation(GSSG). RANGO DE REFERENCIA(2) Plasma/Suero 33 - 73 U/l Eritrocitos 4,7 –13,2 U/gHb Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de normalidad, ya que pueden darse variaciones regionales. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza a una temperatura de 37oC, con el volumen de aspiración fijado en 500 µl. LINEARIDAD El ensayo es lineal hasta 387 U/. Las muestras mayores que este debe ser diluido con 1 +9 0,9% de solución de NaCl y re-ensayó. Multiplicar el resultado por 10.

Mezclar, y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer la absorbancia inicial al cabo de 1 minuto. Leer de nuevo al cabo de 2, 3, 4 y 5 minutos.

SENSIBILIDAD Se deberá de considerar como el límite de detección un valor de 9.69 U/l.

CÁLCULO MANUAL La actividad del Glutation Reductasa se puede calcular a partir de la siguiente fórmula:

PRECISION

a)

Mean (U/l) SD CV (%) n

b)

U/l sangre entera = 4983 x ∆A 340 nm/min x Factor de Dilución (20) Convirtiendo a u/g Hemoglobina

ejemplo Una muestra contiene un nivel de hemoglobina de 16 g/dl ó 160 g/l. Valor de Glutation Reductasa: 1488 U/l. Por lo tanto el valor de la muestra =

1488 ─── 160

Within run precision Level 2 42.0 2.03 4.84 20

Level 3 86.9 2.24 2.58 20

Level 2 42.0 2.75 6.55 20

Level 3 86.9 3.75 4.32 20

Total precision

=

9,3 u/gHb

Mean (U/l) SD CV (%) n

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MANUAL/ RX MONZA GR 2368

CORRELACION El método de Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.017 X + 1.54 con un coeficiente de correlación r = 0.9888. Se analizaron 42 muestras con valores de entre 14 y 309 U/l. REFERENCIAS 1. Goldberg D.M. & Spooner RJ (1983) in Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyen, H.V. Ed.) 3rd edn. vol 3, pp 258-265, Verlog Chemie, Deerfield Beach, Fl. 2. Melissinos, K.G.,Delidov, A.Z., Varsov, A.G., Begietti, Drivas, G.J., Nephron, 28: 76-79, (1981).

S.S.,

Revisado 15 Sep 10 bm Rev 001

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IgA

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1. Tampón Ensayo Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C.

IMMUNOTURBIDIMETRIC ASSAY FOR IgA MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de IgA en el suero y el plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza. No. Cat. IA 2447

R1. Tampón Ensayo R2. Reactivo Anticuerpo

1 x 60 ml 1 x 5 ml

PRINCIPIO La muestra que contiene IgA humano se diluye adecuadamente y después se reacciona con antisuero específico para formar un precipitante que se mide turbidimétricamente a 340 nm. Se puede determinar la concentración de IgA en la muestra construyendo una curva estándar a partir de las absorbancias de los patrones. EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA Se puede utilizar el suero, plasma heparinizado o plasma EDTA. El IgA es estable durante 3 días entre +15 y +25°C, 7 días entre +2 y +8°C, o 6 meses a -20°C. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1. Tampón de Ensayo Glicol de Polietileno Tampón Tris/HCl Cloruro Sódico R2. Reactivo Anticuerpo Anti IgA (humano)

Concentraciones Iniciales en la Prueba máximo 6% 20 mmol/l, pH 7,4 150 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. Los Reactivos R1 y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

R2. Reactivo Anticuerpo Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Ensayo Reactivo Anticuerpo MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Calibrador de Proteína Específica Valorado Líquido Randox para análisis de muestras diluídas, No. Cat IT 2692 Controles de Proteína Específica Valorados Líquidos Randox Nivel 1 No. Cat. PS 2682 Nivel 2 No. Cat. PS 2683 Nivel 3 No. Cat. PS 2684 Solución de NaCl al 0,9% PROCEDIMIENTO (Análisis Manual) Diluir las muestras 1+20 con solución de NaCl al 0,9%. Se recomienda que todos los reactivos y muestras de suero se equilibren a temperatura ambiente antes de usar. Se deberá preparar una curva estándar para cada análisis que se realice y se recomienda que las muestras se analicen en duplicado junto con controles apropiados. Experiencia con el kit podría permitir al operador realizar el análisis un cierto número de veces sin recalibración con tal que se utilizen el mismo reactivo de trabajo, espectrofotómetro, cubeta y condiciones del análisis tales como la temperatura. En caso de elegir esta alternativa se deberá prestar especial consideración a los resultados del control. Seleccone la IgA en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: S0 Blanco

SO*

S1 S1 Blanco

ddH2O

50 l

50 l

---

Diluido CAL Patrón

---

---

---

---

500 µl

500 µl 500 µl 500 µl

---

Muestra Muestra Blanco

---

---

50 l 50 µl

---

---

---

50 µl

Diluido Muestra Tampón Ensayo (R1)

---

50µl

500 µl 500 µl

Mezclar bien y se incuba a 25ºC fuera del analizador durante 10 minutos Reactivo Anticuerpo (R2) ---

50 µl ---

50 µl

---

50 µl

Mezclar bien y se incuba a 25˚C fuera del analizador durante 30 minutos. Inserte en el soporte de RX monza celda de flujo y pulse leer. *Blanco de Reactivo

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MANUAL/ RX MONZA IA 2447 PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 25°C frente al aire

Pipetear en la cubeta apropiada:

Patrones Diluidos Muestra Diluida Tampón de Ensayo R1

Patrones

Muestra

100 l de cada 1,0 ml

100 l 1,0 ml

RANGOS DE NORMALIDAD (1,2) Adultos: 54 - 268 IU/ml (0,9 – 4,5 g/l) 90 - 450 mg/dl Niños:* 90 ± 33 IU/ml (8-10 años) (1,5 ± 0,5 g/l) 151 ± 55 mg/dl Recién Nacidos:* 0,18 ± 0,6 IU/ml (2-8 días) (0,003 ± 0,01 g/l) 0.3 ± 1.0 mg/dl * valor medio ± desviación estándar

Mezclar bien, medir la A1 al cabo de 10 mins.



FACTORES DE CONVERSIÓN

Reactivo Anticuerpo R2 100 l

100 l

Mezclar bien, medir la A2 al cabo de 30 mins. CÁLCULO MANUAL Calcular el cambio en absorbancia para cada patrón y muestra. ei. A = A2 - A1 Después trazar la media de las concentraciones estándar frente a los valores A correspondientes utilizando papel gráfico. [Utilizar un programa de ordenador apropiado para curva, si está disponible, en una transformación logit/log]. La concentración de la muestra IgA se obtiene leyendo el valor A a partir de la curva de calibración. No intentar extrapolar por encima o debajo del rango de patrones CALIBRACION Recomendamos el Calibrador de Proteína Específica Valorado Líquido Randox para análisis de muestras diluídas. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Controles de Proteína Específica Valorados Líquidos Randox, Nivel 1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

IU/ml x 1,68 mg/dl x 0,595

= mg/dl = IU/ml

(Relacionado al estándar de inmunoglobulina WHO 67/86) CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37°C. LINEALIDAD Este ensayo es lineal hasta 785 mg/dl. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de IgA es 45.6 mg/dl. NOTA: Si el valor de la muestra excede el patrón más alto: Diluir la muestra diluida previamente (1+20) otra vez 1+1 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 2. (P.S.: ver gammopatía a continuación). Si el valor de la muestra es inferior al patrón más bajo: Diluir la muestra pura 1+10 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 0,52. (P.S.: Ver gamopatía a continuación) GAMMOPATIA Las muestras que se sospecha tienen gammopatía monoclonal o policlonal deberán de someterse siempre a electrofórosis de la proteína para poder detectar cualquier exceso de antígeno. El exceso de antígeno puede resultar en resultados bajos falsos. También se podría sospechar Hipergammoglobulinemia si al volver a empezar la reacción con 100 l de la muestra diluida no resulta en un incremento significativo en la absorbancia.

ESPECIFICIDAD No existe una reacción cruzada con IgG y IgM bajo las condiciones del análisis. Las muestras extremadamente lipémicas o hemolíticas y los niveles elevados de detergentes iónicos pueden interferir en el análisis.

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MANUAL/ RX MONZA IA 2447 PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Media (mg/dl) 192 DE 2.98 CV (%) 1.55 n 20

Nivel 2 291 5.62 1.93 20

Precisión Total Media (mg/dl) DE CV (%) n

Nivel 1 192 13.2 6.86 20

Nivel 2 291 17.8 6.12 20

CORRELACIÓN El método Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9955 X + 0.4802 y un coeficiente de correlación r = 0,9975 Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 49 y 669 U/l. REFERENCIAS 1. Becker, W.: Laboratoriumblätter 1980; 30: 25. 2. Geiger, H. & Hoffman, P.: Z. Kinderheilk 1970; 109: 22. 3. Whicher, J.J., Price, C.P., Spencer, K., Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1983; 18: 213-216.


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IgG ENSAYO INMUNOTURBIDIMETRICO PARA IgG Análisis Manual RX MONZA PARA SU USO. Para el análisis cuantitativo in vitro de la IgG en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza. Cat. Nos. IG 2448

R1. Tampón Ensayo R2. Reactivo Anticuerpo

1 x 60 ml 1 x 5 ml

PRINCIPI La muestra que contiene IgG humana se diluye adecuadamente y después se hace reaccionar con antisuero específico para formar un precipitante que se mide turbidimétricamente a 340 nm. Se puede determinar la concentración de IgG en la muestra construyendo una curva estandar a partir de las absorbancias de los patrones. EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA Se puede utilizar suero, plasma heparinizado o plasma EDTA.La IgG es estable durante 3 días entre +15 y +25°C, 7 días entre +2 y +8°C, o 6 meses a -20°C. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

Concentraciones Iniciales en la Prueba

R1. Tampón Ensayo Glicol Polietileno Tampón Tris/HCl Cloruro Sódico R2. Reactivo Anticuerpo IgG Anti (humana)

máximo 6% 20 mmol/l, pH 7,4 150 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. Los Reactivos R1 y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido sódico al 10%. Hojas de Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Tampón Ensayo Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. R2. Reactivo Anticuerpo Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Ensayo Reactivo Anticuerpo MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Solución de NaCl al 0,9% (w/v). Calibrador de Proteína Específica Líquido Randox para análisis de muestras diluídas, (No. Cat IT 2692) Controles de Proteínas Específicas Valorados Líquidos Nivel 1 No. Cat. PS 2682 Nivel 2 No. Cat. PS 2683 Nivel 3 No. Cat. PS 2684 PROCEDIMIENTO (Análisis Manual) Diluir las muestras 1+20 con solución de NaCl al 0,9%. Se recomienda que todos los reactivos y muestras de suero se equilibren a temperatura ambiente antes de usar. Se deberá preparar una curva estandar para cada análisis que se realice y se recomienda que las muestras se analicen en duplicado junto con controles apropiados. La frecuencia de recalibración (tras un cierto número de usos) podrá ser establecida a partir de la experiencia en el uso de este kit, siempre y cuando se utilizen el mismo reactivo de trabajo, espetrofotómetro, cubeta y condiciones del análisis tales como la temperatura. En caso de elegir esta alternativa se deberá prestar especial consideración a los resultados del control. Seleccone la IgG en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: S0 Blanco ddH2O Diluido CAL Patrón Diluido Muestra Tampón Ensayo (R1)

SO*

S1 S1 Blanco

10 l

10 l

---

---

---

---

---

---

10 l

10 µl

---

---

---

---

---

---

10 µl

500 µl

500 µl

500 µl 500 µl

Muestra Muestra Blanco

500 µl

10µl 500 µl

Mezclar bien y se incuba a 25C fuera del analizador durante 10 minutos Reactivo Anticuerpo (R2) ---

50 µl

---

50 µl

---

50 µl

Mezclar bien y se incuba a 25C fuera del analizador durante 30 minutos. Inserte en el soporte de RX monza celda de flujo y pulse leer. *Blanco de Reactivo

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MANUAL/ RX MONZA IG 2448 PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 25C frente al aire


Patrones diluidos Muestra diluida Tampón ensayo (R1)

Patrones

Muestra

20 l de cada 1,0 ml

20 l 1,0 ml

ESPECIFICIDAD No existe ninguna reacción con IgA e IgM bajo las condiciones del análisis. Las muestras extremadamente lipémicas o hemolíticas y altos niveles de detergentes iónicos pueden interferir con la prueba. RANGOS DE NORMALIDAD (1,2) Adultos: 92 - 207 IU/ml (8 - 18 g/l) (800 - 1800 mg/dl) Niños:* (8-10 años)

122 ± 23,0 IU/ml (10,6 ± 2 g/l) (1055 ± 200 mg/dl)

Neonatos:* (2-8 días)

134 ± 34,7 IU/ml (11,6 ± 3,0 g/l) (1164 ± 301 mg/dl)

Mezclar bien, medir A1 al cabo de 10 minutos. Pipetear en la cubeta apropiada: Reactivo Anticuerpo (R2)

100 l

100 l * valor medio ± desviación estandar

Mezclar bien, medir A2 al cabo de 30 minutos. CÁLCULO MANUAL Calcular el cambio en absorbancia para cada patrón y muestra. A = A2 - A1 Después trazar la media de las concentraciones del patrón frente a los valores A correspondientes utilizando papel gráfico. [Utilizar un programa de ordenador apropiado para curva, si está disponible, en una transformación logit/log]. La concentración de IgG en la muestra se obtiene leyendo el valor A a partir de la curva de calibración. No intentar extrapolar por encima o debajo del rango de patrones. CALIBRACION Se recomienda el Calibrador de proteína Específica Líquido Randox para análisis de muestras diluídas. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Controles de Proteínas Específicas Valorados Líquidos Randox, Niveles 1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. FACTORES DE CONVERSIÓN IU/ml x 8,68 = mg/dl mg/dl x 0,1152 = IU/ml (Relacionado al patrón de inmunoglobulina WHO 67/86) CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de RX monza en el modo de cubeta funcionando a una temperature de 25ºC. LINEALIDAD Este ensayo es lineal hasta 5025 mg/dl. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de IgG es 337 mg/dl. NOTA: Si el valor de la muestra excede el patrón más alto: Diluir la muestra diluida previamente (1+20) otra vez 1+1 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 2. (P.S.: ver gammopatía a continuación). Si el valor de la muestra es inferior al patrón más bajo: Diluir la muestra pura 1+10 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 0,52. (P.S.: Ver gamopatía a continuación) GAMMOPATIA Las muestras que se sospecha tienen gammopatía mononuclear o polinuclear deberán someterse siempre a electroforosis de la proteína para poder detectar cualquier exceso de antígeno. El exceso de antígeno puede resultar en falsos resultados bajos. También se podría sospechar Hipergamaglobulinemia si al volver a empezar la reacción con 100 l de la muestra diluida no resulta en un incremento significativo en la absorbancia.

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MANUAL/ RX MONZA IG 2448 PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 1043 10.3 0.99 20

Nivel 3 1648 19.6 1.19 20

Nivel 2 1043 43.2 4.14 20

Nivel 3 1648 26.4 1.60 20

Análisis (Inter) Media (mg/dl) DE CV(%) n

CORRELACIÓN El método Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9780 X + 18.137 y un coeficiente de correlación r = 0,9980 Se analizaron 49 muestras de pacientes con valores de entre 399 y 4859 mg/dl. REFERENCIAS 1. Becker, W.: Laboratoriumblätter 1980; 30: 25. 2. Geiger, H. & Hoffman, P.: Z. Kinderheilk 1970; 109: 22. 3. Whicher, J.J., Price, C.P., Spencer, K., Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1983; 18: 213-216.


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L-LACTATO (LAC)


PAP Determinación Enzimática de L-Lactato MANUAL RX MONZA

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de L-Lactato en plasma y CSF. Este ensayo és específico para la determinación de LLactato. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. Cat No. LC 2389 16 x 6 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo Enzima CAL Patrón

1 x 100 ml 16 x 6 ml 1 x 5.5 ml

METODO COLORIMETRICO La concentración de L-Lactato en la muestra se determina de acuerdo a la siguiente reacción. L-Lactato + O2

Lactato Oxidasa

piruvato + H2O2

H2O2 + 4-aminoantipirina + TOOS Peroxidasa

TOOS =

Producto púrpura + 4H2O N-etil-N-(2 hidroxi-3-sulfopropil) m-toluidina

El L-Lactato es uno de resultados netos de la gluconeogénesis producida en el músculo esquelético activo. El L_Lactato és metabolizado en el hígado. El NADH és producido en la glucólisis en los tejidos por oxidación aeróbica. Si no hay presencia suficiente de oxígeno para que se produzca esta oxidación, se regenera NAD+ a partir de NADH en la reducción de piruvato a lactato Una concentración incrementada de lactato en la sangre es así un indicador de metabolismo anaeróbico hecho que se da, por ejemplo, si disminuye el flujo de sangre a los tejidos y el suministro de oxígeno es insuficiente. En casos de reducciones de oxígeno severas, podría darse la “Acidosis Láctica”. El LLactato por lo tanto se puede utilizar como un indicador de fallo circulatorio severo. MUESTRA Plasma (anticoagulantes: litio heparina lodoacetato, fluoruro EDTA, fluoruro oxalato, fluoruro sódico). CSF Utilizar sin modificación. La sangre se toma de una vena libre de estasis y se conserva en un baño de hielo. El plasma se separa por medio de la centrifugación durante los 30 minutos siguientes. La demora en la separación puede llevar a un incremento de los valores de lactato observados. El análisis se deberá llevar a cabo inmediatamente.

La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C. R1b. Reactivo Enzima Reconstituir el contenido de un frasco de Reactivo Enzima R1b con 6 ml de Tampón R1a. Estable durante 6 semanas entre +2 y +8C ó 2 semanas entre +15 y +25C, cuando se conserva protegido de la luz. CAL Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo Enzima Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) NOTAS Evitar la contaminación del reactivo, muestras y material de cristal por medio de la saliva o el sudor dado que tienen contenidos elevados de lactato.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes R1a. Tampón Tampón Pipes TOOS Azida Sódica R1b. Reactivo Enzima 4-aminofenazono Peroxidasa Lactato oxidasa Ascorbato oxidasa CAL Patrón

Concentraciones Iniciales 100 mmol/l, pH 7,20 2,1 mmol/l 1 g/l 0,4 mmol/l ≥ 1000 U/l ≥ 600 U/l ≥ 10000 U/l Especifico para cada lote

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PROCEDIMIENTO Seleccione LAC en la pantalla de Monza ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua con agua dulce doble destilada (ddH2O) como se indica en las instrucciones.

VALORES DE NORMALIDAD(5) mmol/l Plasma 0,5 – 2,22

Pipetear en la Cubeta:

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

dd H2O Patrón Muestra Reactivo

Reactivo Blanco S0 5 µl 500 µl

Patrón S1 5 µl 500 µl

Muestra 5 µl 500 µl

Mezclar e incubar por 5 minutos a 37°C. Inserte la cubeta en el soporte del flujo de célula y oprima leer. CALIBRACION Se recomienda la calibración durante el cambio de lote de reactivo, o como se indica en los procedimientos de control de calidad, usando el estándar proporcionado en el Kit. PARA USO MANUAL Longitud de onda Cubeta Temperatura de Reacción Medición

550 nm 1 cm de espesor 20-25C, 37C frente al blanco de reactivo

Muestra Patrón Reactivo

Patrón (l) -10 1000

Muestra (l) 10 -1000

Mezclar, incubar durante 10 minutos entre 20 - 25C ó 5 minutos a 37C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y el patrón (Apatrón) frente al blanco del reactivo dentro de los siguientes 30 minutos. CÁLCULO MANUAL Concentración de L-Lactato =

Concentración de L-Lactato =

CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Las siguientes características de rendimiento se obtuvieron utilizando un Rx Monza en modo cubeta funcionando a 37°C y calibrado en el estándar proporcionado por el Kit. LINEALIDAD El test es lineal hasta una concentración de L-Lactato de 19,7 mmol/l (178 mg/dl). Diluir las muestras superiores a esta concentración 1+1 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de L-lactato con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,165 mmol/l (1,49 mg/dl). PRECISION

Pipetear en los tubos de ensayo: Blanco del Reactivo (l) --1000

mg/dl 4,5 - 20

Amuestra Apatrón Amuestra Apatrón

x Concentración del patrón (mg/dl)

x Concentración

del patrón (mmol/l)

NORMALIZACIÓN El L-Lactato Randox Estándar incluido en este Kit es trazable a L-Lactato método de referencia Gravimétrico. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Precisión Dentro del Análisis Nivel 2 Media (mg/dl) 13.1 DE 0.106 CV(%) 0.81 n 20

Nivel 3 53.3 0.458 0.86 20

Precisión Total Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 13.1 0.749 5.72 20

Nivel 3 53.3 1.93 3.62 20

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9382 X + 0.2605 y un coeficiente de correlación r = 0,9980 Se analizaron 49 muestras de pacientes con valores de entre 6.5 y 123 mg/dl. REFERENCIAS 1. Shimojo N et al, CLIN CHEM 1989; 35(9): 1992 - 1994. 2. Shimojo N, Fujino K et al, CLIN CHEM 1991; 37(11) 1978 - 1980. 3. Lehninger Al: Principles of Biochemistry, Worth Publishers, New York, 1993, p 416. 4. Mascini M et al, CLIN CHEM. 1987; 34(4) 591 - 593. 5. Jacobs DS, Kasten BL, Demott WR and Wolfson WL: Laboratory Test Handbook, LEXI COMP INC, OHIO, 1990, p. 245. Revisado 15 Sep 10 bm Rev. 001

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LIPASA (LPS)


Triacilglicerol Lipasa Método UV MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Lipasa en el suero y plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. No. Cat. LI 188 20 x 2.5 ml LI 194 4 x 30 ml

R1a. Tampón R1b. Sustrato CAL. Patrón

1 x 70 ml 20 x 2.5 ml 4 x 3.0 ml

R1a. Tampón R1b. Substrate CAL. Patrón

2 x 70 ml 4 x 30 ml 4 x 3.0 ml

SIGNIFICADO CLINICO(1) El sistema de test de la lipasa es un medio para medir la actividad del enzima lipasa en el suero y el plasma. La medición de la lipasa se utiliza en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades del páncreas tales como pancreatitis aguda y obstrucción del conducto pancreático. METODO TURBIDIMETRICO(3) PRINCIPIO Lipasa

Trioleína + 2H2O

monoglicérido + 2 ac. oléico

Se mide la disminución de la turbidez a 340 nm. MUESTRA Suero o plasma heparinizado. La lipasa es estable en la muestra durante 5 días entre +2 y +8°C ó 24 horas entre +20 y +25°C. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1a. Tampón Tampón Tris R1b. Sustrato Desoxicolato sódico Cloruro cálcico Trioleína Colipasa CAL. Patrón

Concentración en la prueba 26 mmol/l, pH 8,9 16,7 mmol/l 0,04 mmol/l 0,3 mmol/l 4 mg/l Ver valor asignado en el inserto del lote específico

La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C. R1b. Sustrato Reconstituir el contenido de un vial de Sustrato R1b con el volumen apropiado de Tampón R1a. 2,5 ml para el kit de 20 x 2,5 ml (LI 188) 30 ml para el kit de 4 x 30 ml (LI 194) Estable durante 2 semanas cuando se conserva entre +2 y +8°C ó 5 días entre +15 y +25°C. CAL. Patrón Disolver el contenido de un vial de Patrón 3 en 3,0 ml de agua bidestilada, rotar lentamente durante 30 min antes de utilizar. Estable durante 5 días entre +2 y +8°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Sustrato Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) NOTAS(2) En raras ocasiones, el suero del paciente puede presentar un aumento de la absorbancia en vez de un descenso. La actividad de la lipasa en estas muestras normalmente se encuentra dentro del rango normal. Actividades extremadamente elevadas de lipasa pueden conducir a un considerable consumo de sustrato, siendo estos casos A1 menor de 0,500. Cuando esto ocurra, diluir la muestra 1+9 con una solución de NaCl 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 10. Es preferible utilizar cubetas desechables. Las cubetas de cristal deben lavarse abundantemente, especialmente después de haber sido utilizadas para ensayos de triglicéridos o colesterol.

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MANUAL/ RX MONZA LI 188

PROCEDIMIENTO Seleccione LIP en la pantalla ejecutar prueba y lleve a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: Reactivo Blanco S0 ddH20 Muestra CAL Patrón Reactivo

Patrón S1

20uL 500uL

20uL 500uL

Muestra 20uL 500uL

Mezclar cuidadosamente para evitar la formación de espuma, entonces inserte la cubeta en el soporte de flujo de células de RX monza y oprima leer. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda la calibración usando el CAL estándar proporcionado en el Kit. Calibrar en el cambio de lote de reactivo o según se indica en los procedimientos de control de calidad. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm (Hg 365 nm o Hg 334 nm) 1 cm de espesor 37°C frente al aire


Reactivo Muestra Patrón

Patrón Macro Semi Micro

Muestra Macro Semi Micro

2,5 ml --0.1 ml

2,5 ml 0,1 ml ---

1,0 ml --0,04 ml

1,0 ml 0,04 ml ---

Mezclar. Evitar la formación de espuma. Leer la absorbancia A1 del patrón y de la muestra al cabo de 4 min. Después de otros 5 min leer la absorbancia A2 del patrón y de la muestra. A de la muestra o del patrón = A1 - A2 CÁLCULO MANUAL Calcular el factor de la prueba de la siguiente manera: Factor =

Actividad(patrón) ────── Apatrón

Actividad lipasa en la muestra = Factor x Amuestra CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

INTERFERENCIA La hemólisis interfiere en la prueba. VALORES NORMALES(4) Suero: Hasta 190 U/l (37°C) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC. LINEALIDAD Si la actividad de la lipasa excede 940 U/l, diluir la muestra 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de lipasa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 24,5 U/l. PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Media (U/l) 129 DE 6.05 CV(%) 4.69 n 20 Precisión Total Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 129 6.57 5.09 20

Nivel 2 403 16.2 4.02 20 Nivel 2 403 17.8 4.41 20

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.0495 x -10.67 y un coeficiente de correlación r = 0,9832 Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 43-918U/l. REFERENCIAS 1. Tietz NW et al. Lipase in serum-the elusive enzyme: An overview. Clin Chem 1993; 39:746-756. 2. Lott, J. A., et al. Clin. Chem. 1986; 32: 1920. 3. Ziegenhorn J., et al. Clin. Chem. 1979; 25: 1067. 4. Weisshaar, H.D., et al. (1981). Dtsch. Med. Wschr. 106: 239.


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MAGNESIO (AZUL DE XILIDIL)


Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Magnesio en el suero, el plasma y la orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza. No. Cat. MG 531 3 x 100 ml

R1. Reactivo de color CAL. Patrón

3 x 100 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO El Magnesio es uno de los principales cationes intracelulares en el cuerpo. Su acción está relacionada con la del calcio. La deficiencia de magnesio, hipomagnesemia, puede resultar en varias enfermedades neuromusculares, debilidad, temblores, tetania y convulsiones. Se asocia con hipocalcemia, terapia intravenosa, diabetes mellitus, alcoholismo, diálisis y embarazo. Los niveles elevados de magnesio en suero se asocian con deshidratación, acidez diabética grave y Enfermedad de Addison. Las condiciones que interfieren con la filtración glomerular como en el caso de fallo renal resultan en retención de magnesio y por ello aumento de sus niveles en suero. PRINCIPIO(1-5) Los iones de magnesio reaccionan con azul de xilidilo en un medio alcalino para formar un quelato soluble en agua de color morado-rojizo. La intensidad del color es proporcional a la concentración de magnesio en la muestra. El Calcio se excluye de la reacción por medio de su conjugación con el EGTA. EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA Suero, Plasma (no plasma tratado con EDTA) u orina. La muestra de orina de 24 horas puede contener sedimentos que absorben el magnesio. Añadir unas gotas de ácido clorhídrico concentrado (pH 3-4) para disolver el sedimento y diluir con DDH2O 1+4 (resultado x 5). COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes

Concentración Inicial de los Reactivos

R1.

Reactivo de Color Azul de Xilidilo Tampón Tris Carbonato Potásico EGTA CAL. Patrón

0,1 mmol/l 0,2 mmol/l 77 mmol/l 0,04 mmol/l Ver inserto lote específico

La solución R1 contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio calificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. PREPARACION Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos están listos para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo de Color de Magnesio Patrón de Magnesio MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Material de pipeteo para el suministro de 10 l y 1,0 ml. Cronómetro y baño de agua o bloque de calentamiento para mantener una temperatura entre 20 - 25C. Un espectrofotómetro con una longitud de onda de 520 nm. Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532). Multisueros de Precisión Humanos Randox Nivel 2 (No. Cat. UN1557) y Nivel 3 (No. Cat. UE1558). NOTA Todo el material deberá estar libre de contaminación de Magnesio. Las fluctuaciones en valores de blanco de más de un 10% en una serie, son más probables debido a la contaminación del material con magnesio. Lavar la muestra y los contenedores del reactivo con solución al 10% de Triton X 100, sumergir en ácido clorhídrico o Nítrico diluido de 1 a 2 horas y enjuagar con agua destilada. Invertir y dejar gotear hasta que se seque. PROCEDIMIENTO Seleccione Mg en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: Reactivo Blanco S0 Patrón S1 Muestra ddH2O 5 l Muestra 5 l Calibrador 5 l Reactivo 500 l 500 l 500 l Mezclar, incubar durante 5 minutos a 20-25 º C. Inserte la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse Leer. CALIBRACION Recomendó el uso de CAL estándar suministrado en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3. Calibrar el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.

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MANUAL/ RX MONZA MG 531 VALORES DE NORMALIDAD(6)

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubetas: Temperatura: Medición:

520 nm 1 cm de espesor 20 - 25C frente al blanco de reactivo

Procedimiento Macro

ADULTOS Suero Orina

0.65 – 1.05 mmol/l (1.58 - 2.55 mg/dl) 3.00 – 5.00 mmol/24 hrs (73 - 122 mg/24 hrs)


Pipetear en las cubetas: Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

Reactivo de Color Agua Destilada Patrón Muestra

2,0 ml 20 l -

2,0 ml 20 l -

2,0 ml 20 l

Mezclar bien e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Medir la absorbancia final de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al Blanco de Reactivo. El color resultante es estable durante 3 horas a temperatura ambiente. Procedimiento Semi Micro Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

Reactivo de Color Agua Destilada Patrón Muestra

1,0 ml 10 l -

1,0 ml 10 l -

1,0 ml 10 l

Mezclar bien e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Medir la absorbancia final de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al Blanco de Reactivo. El color resultante es estable durante 3 horas a temperatura ambiente. CÁLCULO MANUAL Amuestra Concentración de Magnesio (mmol/l) = Apatrón Estándar (mmol/l) Amuestra Concentración de Magnesio (mg/dl) = Apatrón Estándar (mg/dl)

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de RX monza, en el modo de cubeta, calibrado en Calibración de nivel Randox Suero 3. SUERO LINEARIDAD El método es lineal hasta 2,34 mmol/l (5,69 mg/dl). Las muestras con concentraciones más elevadas se deberán diluir 1+1 con agua doblemente destilada y repetir el análisis. Multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable se ha determinado como 0,036 mmol/l (0,088 mgl/dl). PRECISION Intra assay Media (mg/dl) DE CV(%) n Inter assay

x Conc.

x Conc.

NORMALIZACIÓN Standard Randox magnesio incluido en el kit se puede rastrear al magnesio de materiales de referencia NIST 909b. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. INTERFERENCIA Se analizaron los siguientes analitos hasta los niveles indicados y se encontró que no producen interferencias: Hemoglobina <1000 mg/dl (10 g/l) Bilirrubina <25 mg/dl (427 mol/l) Triglicéridos <1000 mg/dl (11 mmol/l)


Nivel 2 2.43 0.017 0.70 20

Nivel 3 4.50 0.020 0.44 20

Nivel 2 2.43 0.066 2.71 20

Nivel 3 4.50 0.081 1.79 20

MÉTODO DE COMPARACIÓN El método Randox (Y) se comparó con otro equipo de prueba disponible en el mercado (X). Cuarenta muestras de pacientes con valores que abarca el intervalo 1,75 a 5,58 mg / dl se ensayaron. El análisis de regresión lineal de los datos como resultado la siguiente ecuación. Y = 0.997 X - 0.0004 con un coeficiente de correlación, r = 0,9989 ORINA LINEARIDAD Este método es lineal to12.6 mmol/l (30,6 mg/dl). SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable se ha determinado como 0,618 mmol/l (1,50 mg/dl). REFERENCIAS 1. Mann, C.K., Yoe, J.H., Anal. Chem. (1956), 28: 202-205. 2. Mann, C.K., Yoe, J.H., Anal. Chim. Acta (1957), 16: 155-160. 3. Ogata, H., Hiroi, L., Anal. Chem. (1959), 8: 21. 4. Bohuon, C., Clin. Chim. Acta. (1962), 7: 811-817. 5. Rice E.N., Lapara, C.Z., Clin. Chim. Acta. (1964) 10: 369. 6. Teitz N.W. Clinical Guide to Laboratory Tests. W.B. Saunders Co (1983). Revisado 15 Sep 10 bm Rev. 001 PAGE 2 OF 2

SODIO (Na) Prueba Colorimétrica Enzimática RX Series 1

USO DEL REACTIVO La cuantificación in vitro de Sodio se determina en suero y plasma. Este producto es apto para utilizarse en los Analizadores de la RX Series. No. Cat. NA7167

R1a. R1b. R2a. R2b.

4 x 45 ml 4 x 45 ml 2 x 39 ml 2 x 39 ml

Solución Tampón Enzima Diluyente Sustrato

MUESTRA Suero, plasma tratada con heparina o litio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1.Solución Tampón/Enzimas Transferir el contenido de un frasco de solución tampón R1 al frasco de Enzima R1b y disolver agitando suavemente, asegurando que el contenido

R2.

quede disuelto completamente. Transferir el contendido de la solución tampón R1a enjuagando el vial R1b varias veces. Evite la formación de espuma. Estable por 2 semanas de +2 hasta +8°C o 5 días de +15 hasta +25°C. Diluyente/Sustrato Transferir el contendio del frasco de Diluyente R2a en el frasco de Sustrato R2b y disolver agitando suavemente, asegurando que el contenido quede dusuelto completamente en el diluyente. Transferir el contendio en el diluyente R2b varias veces. Evite la formación de espuma. Estable por 2 semanas de +2 hasta +8°C o 5 días de +15 hasta +25°C.

PROCEDIMIENTO Seleccionar NA en la pantalla "Run Test" y realice un blanco de agua. Pipetear en la cubeta: Blanco de Reactivo S0 Estándar S1 Muestra ddH2O 20 µl Estándar 20 µl Muestra 20 µl R1 500 µl 500µl 500 µl Mezclar e incubar por 5 minutos a 37ºC. Posteriormente adicionar: 200 µl

1. Verificar la configuración del analizador 2. Verificar la limpieza del analizador 3. Verificar la calidad del agua 4. Verificar la temperatura de reacción 5. Verificar la fecha de caducidad del reactivo 6. Contactar a Soporte Técnico de Randox Los requerimientos de control de calidad deberían ser determinados en concordancia con las regulaciones gubernamentales o con los requerimientos acreditativos correspondientes. CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DEL DESEMPEÑO Se obtuvieron las siguientes características específicas de funcionamiento al utilizar un analizador de la Rx Series. LINEALIDAD Este método es lineal hasta la concentración de Sodio de 182 mmol/l. Muestras por debajo de esta concentración deberen diluirse 1+1 con agua doblemente destilada (no usar solución salina 0.9% ) y repetir el ensayo. Multiplar el resultado por 2.

PRECISIÓN

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS Multi-suero de ensayo Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532). Calibrador Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351). NOTAS DE PROCEDIMIENTO Cuando el Sodio y Potasio se solicitan en conjunto, el Sodio debe determinarse inmediatamente antes de analizar el Potasio.

200 µl

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda utilizar el Multi-suero de ensayo Randox Nivel 2 y Nivel 3 para realizar el control de calidad diario. Deben evaluarse al menos dos niveles de calidad una vez al día. Los valores obtenidos del control de calidad deben caer dentro del rango de valores específicos. Si los valores caen fuera del rango, deberá repetir y excluir los errores siguiendo los siguientes pasos:

SENSITIVITY La concentración mínima detectable para Sodio con un nivel de precisión adecuado se determinó como 57.8 mmol/l.

MATERIALES PROPORCIONADOS Solución Tampón Enzima Diluyente Sustrato

R2

CALIBRACIÓN Se recomienda el uso de la Calibración Randox Nivel 3 (CAL 2351), utiliza el blanco como S2 y lo diluye 4+1 como S1 (4 partes Cal Nivel 3 + 1 parte de agua) con agua doblemente destilada. Se recomienda realizar una calibración diaria de 2 puntos como se indica en el procedimiento de control de calidad.

200 µl

Mezclar adecuadamente, inserte la cubeta en el espacio del RX Monza para la celda de flujo y presione "Read".

Precisión dentro de la Corrida Media (mmol/l) DE CV(%) n

Level 2 139 3.82 2.75 20

Level 3 159 4.94 3.11 20

Level 2 139 3.78 2.72 20

Level 3 159 5.66 3.56 20

Precisión entre Corridas Media (mmol/l) DE CV(%) n

CORRELACIÓN Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9955 X + 1.2358 y un coeficiente de correlación de r = 0.9813 Se analizaron 41 muestras de pacientes abarcando un rango de 87.85 hasta 188.51 mmol/l. Revisado 08 Mar 11 lm

ESTADO DE LOS ANTIOXIDANTES TOTALES (TAS)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.

MANUAL PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro del Estado de los Antioxidantes Totales en suero, plasma, vino, cerveza o zumos de fruta. Este producto es adecuado para su utilización en Manual. Cat No. NX 2332 5 x 10 ml 5 x 10 t

R1. R2. R3. CAL

Tampón Cromógeno Sustrato Patrón

1 x 100 ml 5 x 10 ml 2 x 5 ml 5 x 1 ml

PRINCIPIO DEL ANALISIS ABTS® (2,2'-Azino-di-[3-etilbenzotiazolín sulfonato]) se incuba con peroxidasa (metamioglobina) y H2O2 para generar el radical catión ABTS®*+. Este radical presenta una coloración verdeazulada relativamente estable, que se mide a 600 nm. La presencia de antioxidantes en la muestra produce una supresión de esta coloración, siendo esta supresión, proporcional a la concentración de antioxidantes presentes en la muestra. HX-FeIII + H2O2 ABTS® + .X - [FeIV = 0]

.X

- [FeIV = 0] + H2O ABTS®*+ + HX - FeIII

Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. R2.

Cromógeno Reconstituir un vial de cromógeno R2 con 10 ml de Tampón R1. Estable 2 días cuando se conserva entre +2 y +8°C u 8 horas entre +15 y +25°C.

R3.

Sustrato Diluir 1 ml de sustrato R3 con 1.5 ml de Tampón R1. Estable 24 horas cuando se conserva entre +2 y 8°C. En la forma no diluida es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C

HX-FeIII = Metamioglobina .X - [FeIV = 0] = Ferrilmioglobina ABTS®= 2,2'-Azino-di-[3-etilbenzotiazolín sulfonato] ABTS® es marca registrada de Boehringer Mannheim.

CAL Patrón Reconstituir un vial de Patrón con 1 ml de agua doblemente desionizada. Estable durante 2 días cuando se conserva entre +2 y +8°C ó 1 mes a -20°C.

MUESTRA(2) Suero fresco o plasma heparinizado. Evitar muestras hemolizadas. La muestra puede ser conservada hasta 36 Hs entre +2 y +8°C. El plasma/suero puede ser congelado durante un máximo de 14 días. Evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación. Para el vino tinto diluya 1 + 3. Los zumos de frutas pueden ser analizados también, pero deben filtrarse con un filtro de 0.45 µl.

Nota: Si este análisis se utiliza en un sistema automatizado, por favor, referirse a la hoja de procedimiento para ese sistema, ya que las instrucciones de reconstitución podrían diferir.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes R1.


Tampón Tampón Fosfato Salino R2. Cromógeno Metamioglobina ABTS® R3. Sustrato Peróxido de hidrógeno (forma estabilizada) CAL Patrón 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromán -2-ácido carboxílico

80 mmol/l, pH 7,4 6,1 Hmol/l 610 Hmol/l 250 Hmol/l Específico por lotes

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Cromógeno Sustrato Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Control Randox de Antioxidantes Totales Cat.No. NX 2331 0,9% de NaCl de la solución (Na Sin azida) NOTAS 1. Es muy importante controlar exactamente el tiempo de reacción. Los resultados se verán afectados si se cambian los volúmenes, los tiempos de incubación y las temperaturas. El kit del Estado Antioxidante Total sόlo se puede utilizar con un espectrofotόmetro atemperado. 2. Azida de sodio interfiere en el ensayo y no debe ser añadió a la solución 0,9% de NaCl que puede ser utilizado para diluir las muestras que exceden la linealidad del ensayo.

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MANUAL NX 2332

PROCEDIMIENTO Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medida:


Pipetear en cubeta:

Agua Bidestilada Patrón Muestra Cromógeno (R2)

Reactivo Blanco

Patrón

Muestra

20 Hl 1 ml

20 Hl 1 ml

20 Hl 1 ml

Mezclar bien, incubar hasta alcanzar la temperatura y leer absorbancia inicial (A1) Añadir: Sustrato (R3)

200 Hl

200 Hl

LINEALIDAD Muestras que presentan concentraciones superiores a 2,5 mmol/l deberían ser diluidas con NaCl al 0,9% y analizadas otra vez. Se recomienda diluir las muestras únicamente cuando sea necesario ya que una dilución lleva consigo un aumento de hasta 20% en los valores. La mayor parte de las muestras no necesitarán ser diluidas porque los resultados serán más bajos de 2,5 mmol/l. PATENTES Este producto está sujeto a Patente UK 2250819 y Patentes y Aplicaciones derivadas de PCT Aplicación de Patente PCT/GB91/02228. REFERENCIAS 1. Miller, N.J., Rice-Evans, C., Davies, M.J., Gopinathan, V. and Milner, A., Clinical Science (1993) 84, 407-412. 2. Data on file at Randox.

200 Hl

Mezclar y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer la absorbancia (A2) al cabo de exactamente 3 minutos. A2 - A1 = A de muestra/patrón/blanco CALCULO Estado de los Antioxidantes Totales: conc del patrón Factor = ────────────────── (A blanco - A patrón) mmol/l = Factor x (A Blanco- A Muestra) CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan Control Randox de Antioxidantes Totales para el control de calidad diario. Este control debería procesarse como mínimo una vez al día Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación, por ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. VALORES DE REFERENCIA Rango: 1,30 - 1,77 mmol/l Plasma Este rango fue determinado en población activa Europea. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

Revisado 13 Nov 09 ck Rev. 001

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GLUCOSA-6-FOSFATO DESHIDROGENASA (G-6-PDH) MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Glucosa-6-Fosfato Deshidrogenasa en eritrocitos. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza. Cat. No. PD 410 100 ml

R1. Tampón R2. NADP R3. Sustrato R4. Digitonina

1 x 100 ml 1 x 2 ml 1 x 2 ml 1 x 20 ml

METODO UV

La solución R1, R2, R3 y R4 contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales.

PRINCIPIO(1) La actividad del enzima se determina midiendo la variación de la absorbancia a 340 nm que se produce por la reducción del NADP+. G-6-PDH

G-6-P + NADP+


Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

gluconato-6-P + NADPH + H+ ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C.

MUESTRA Eritrocitos. PREPARACION DE LA MUESTRA Lavar 0,2 ml de sangre con 2 ml alícuotos de solución de NaCl al 0,9%. Centrifugar después de cada lavado a 3000 rpm durante 10 minutos. Repetir 3 veces. Repetir 3 veces. Suspender el centrifugado de eritrocitos en 0,5 ml de solución 4, dejar durante 15 min a +4C y centrifugar de nuevo. Use el sobrenadante en el ensayo en un plazo de 2 horas. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes R1. Tampón Tampón trietanolamina EDTA R2. NADP R3. Sustrato R4. Digitonina

Concentraciones en la prueba 31,7 mmol/l, pH 7,6 3,2 mmol/l 0,34 mmol/l 0,58 mmol/l

R2. NADP Reconstituir el contenido de la botella 2 con 2 ml de agua bidestilada. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8°C. R3. Sustrato Reconstituir el contenido de la botella 3 con 2 ml de agua bidestilada. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8°C. R4. Digitonina Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón NADP Sustrato Digitonina MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Control para G-6-PDH Randox Deficiente No. Cat. PD 2617 Normal No. Cat. PD 2618 Agua bi destilada

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MANUAL/ RX MONZA PD 410

PROCEDIMIENTO Determinar el número de eritrocitos/ml de sangre. 1. RX MONZA Seleccione G6PD en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

La actividad G-6-PDH se expresa como eritrocitos mU/109 o como hemoglobina mU / g . Para el cálculo de actividad G-6PDH como eritrocitos mU/109 para la comparación con el valor normal, se divide la actividad calculada (mU / ml de sangre por los eritrocitos) con el recuento de los glóbulos rojos por ml. eg.


Conteo de RBC por ml

= 5.3 x 109

mU/eritrocitos per ml

= 695

mU/109 eritrocitos

=

Mestra Haemolysate Reagent R1 Reagent R2

7.5 l 500 l 15 l

7.5 l

Mezclar bien y aspirar en el RX monza.

340 nm (Hg 334 nm o Hg 365 nm) 1 cm de espesor 37°C frente al aire

Pipetear en tubos de ensayo: Macro 3.00 ml 0.10 ml 0.05 ml

R1 R2 Haemolysate

Semi Micro 1.00 ml 0.03 ml 0.015 ml

Mezclar, incubar durante 5 min a 37°C y añadir: R3

0.05 ml

0.015 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. CÁLCULO MANUAL Para calcular la actividad de la G-6-PDH utilizar las siguientes fórmulas: Macro

mU/erythrocytes per ml sangre* = 30476 x A 340 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 54857 x A Hg 365 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 31068 x A Hg 334 nm/min

Semi Micro

= 131

mU/erythrocytes per ml sangre* = 33650 x A 340 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 60571 x A Hg 365 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 34304 x A Hg 334 nm/min

mU.eritrocitos por ml x 100

G-6-PDH mU/gHb

=

100

=

Factor para convertir de ml a dl

Hb(g/dl)

=

Concentración de hemoglobina determinó para cada muestra

2. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

5.3

Para el cálculo de actividad G-6-PDH como hemoglobina mU/g. La siguiente ecuación se utiliza.

Mezclar, incubar durante 5 min a 37°C y añadir: Reagent R3

695

eg.

Hb (g/dl)

mU/ ml por eritrocitos

= 695

Hb(g/dl)

= 15.0

G-6-PDH mU/gHb

=

695 x 100 15.0

= 4633 Corrección de la Temperature Tenga en cuenta que la corrección de la temperatura por debajo solo puede ser utilizada para las muestras de pacientes. Cuando la temperatura es de 37 ° C, no se requiere ningún factor de corrección de temperatura (TCF). Si los resultados de muestras de los pacientes se presentan a una temperatura que no sea 37 ° C, se debe utilizar un TCF. Cubeta de Temperatura (°C)

TCF

25 30

2.076 1.515

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Control para G-6-PDH Randox , Deficiente y Normal para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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MANUAL/ RX MONZA PD 410

INTERFERENCIAS Los reticulocitos tienen un nivel de G6-PDH más elevado que el de los hematies maduros. No se recomienda por tanto que se realice este análisis trás una crisis hemolitica severa, ya que esto puede ofrecer resultados falsaments elevados. El análisis puede resultar util una vez que los hematies hayan vuelto a su nivel normal. VALORES NORMALES(3) En eritrocitos: 245 - 299 mU/109 eritrocitos (37°C) 6.97 - 20.5

REFERENCIAS 1. Kornberg, A. et al., Methods in Enzymology 1, Academic Press, New York, 1955; p.323. 2. Makarem, A., Clinical Chemistry-Principles and Techniques. 2nd Ed. R.F. Henry, D. C. Cannon, J.W. Winkelman, Editors. Harper and Row, Hagerstown [MD], 1974; 1128-1135. 3. Lohr GW, Waller HD: Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase. Methods of Enzymatic Analysis, 3rd Edition - Varlag Chemie, Wehnheim: 1974; p. 636.

U/g Hb (37°C) Hemoglobina en sangre (g/dl)

Hombres Adultos Mujeres Adultos Recién nacidos

13 - 18 11 - 16 14 - 23

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza en funcionamiento a 37ºC. LINEALIDAD Este método es lineal hasta una concentración de 4303 U / l. Diluir las muestras con concentraciones mayores con 0,2 ml de hemolizado con 1,8 ml de solución de NaCl al 0,9% y repita la prueba. Multiplicar el resultado por 10. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de G6PDH en los eritrocitos con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada como 154 U/l. PRECISION Análisis (Intra) Media (U/l) DE CV (%) n

Nivel 1 784 33.2 4.24 20

Nivel 2 1533 71.3 4.65 20

Nivel 1 784 50.5 6.45 20

Nivel 2 1533 78.3 5.11 20

Análisis (Inter) Media (U/l) DE CV (%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.0069 x + 47.644 y un coeficiente de correlación r = 0,9903 Se analizaron 50 muestras de pacientes con valores de entre 162 y 1200U/l.

Revised 17 Nov 11 ml Rev.002

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FOSFORO INORGÁNICO (PHOS) Método UV MANUAL RX MONZA

Las soluciones R1a y R1b contienen ácido sulfúrico. Evite la digestión de estos productos y su contacto con la piel o las membranas.

USO PREVISTO Para la determinación cuantitativa in vitro del fósforo inorgánico en suero y orina. Este producto es adecuado para uso manual y para el analizador Rx Monza. N.° de cat. PH 1016 300 ml

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD Sólo para uso diagnóstico in vitro. No pipetee con la boca. Aplique las precauciones habituales necesarias para la manipulación de reactivos de laboratorio.

R1a. Blanco de reactivo 1 x 210 ml R1b. Reactivo de molibdato 1 x 90 ml CAL. Patrón 1 x 5,5 ml

RELEVANCIA CLÍNICA El cuerpo humano contiene aproximadamente 1 kg de fósforo. Las sales calcificadas del fosfato que constituye la sustancia inorgánica del hueso suponen aproximadamente el 80% del total de fósforo. El resto está distribuido por las restantes células del cuerpo, principalmente como fósforo orgánico en fosfolípidos y fosfoproteínas. En el suero, la mayor parte del fósforo inorgánico se encuentra en forma libre, estando ligado el 15% aproximadamente a proteínas. Cuando aparecen niveles anómalos de fosfato sérico, suelen acompañar a enfermedades del riñón, óseas y paratiroideas. El fosfato se suele medir junto con el calcio sérico, ya que cada una de las mediciones resulta de utilidad para interpretar la otra. PRINCIPIO DEL ENSAYO (1) El fósforo inorgánico reacciona con el molibdato armónico en presencia de ácido sulfúrico para formar un complejo de fósfomolibdato que se mide a 340 nm. RECOGIDA DE LA MUESTRA Y PREPARACIÓN (2) El suero es la muestra recomendada. El suero es estable durante 5 días si se almacena a +2-8 ºC. Es estable durante 3 meses si se almacena congelado a -20C. Evite las muestras hemolíticas ya que la hemolisis interfiere en la prueba. Orina: La orina de 24 horas se debe recolectar en una botella lavada con ácido y libre de detergentes. Tras la recolección de la muestra, acidifíquela hasta alcanzar un pH <3,0. Diluir la orina 1+19 con solución de 0,9% NaCl. Multiplicar el resultado por 20.

El CAL contiene azida sódica. Evite la digestión de estos productos y su contacto con la piel o las membranas. En caso de contacto con la piel, lave la zona afectada con gran cantidad de agua. En caso de contacto con los ojos o, si se produce digestión, acuda de inmediato al médico. La azida sódica reacciona con las tuberías de cobre y de plomo y forma azidas metálicas explosivas en potencia. Al desechar reactivos de este tipo, lave con gran cantidad de agua para evitar que se acumulen azidas. Las superficies metálicas expuestas a estos reactivos se deben limpiar con hidróxido sódico al 10%. Están disponibles previa petición las fichas técnicas de salud y seguridad. Los reactivos deben utilizarse sólo para la finalidad prevista y por personal de laboratorio adecuadamente cualificado, en unas condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos están listos para usar. Estable hasta la fecha de caducidad si se almacena a una temperatura de +15 C a +25C. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO Mezcle un envase de Blanco de reactivo R1a con un envase de Reactivo de molibdato R1b (300 ml de reactivo de trabajo). Cuando se trata de volúmenes menores, prepare el reactivo de trabajo conforme a lo que indica la tabla siguiente: Blanco de reactivo (R1a) Reactivo de molibdato (R1B) 7,0 ml 14,0 ml 28,0 ml

3,0 ml 6,0 ml 12,0 ml


Estable durante 8 semanas a una temperatura de +15 a +25C.

Contenido

MATERIALES SUMINISTRADOS Blanco de reactivo Reactivo de molibdato Patrón


R1a. Blanco de reactivo Ácido sulfúrico 0,36 mol/l Cloruro de sodio 154 mmol/l Detergente R1b. Reactivo de molibdato Molibdato armónico 3,5 mmol/l Ácido sulfúrico 0,36 mol/l Cloruro de sodio 154 mmol/l CAL. Patrón Fosfato potásico Consulte el prospecto de cada lote

MATERIALES NECESARIOS QUE NO SE SUMINISTRAN Dispositivos de etiquetado capaces de entregar 10 l y 1 ml. Temporizador y baño de agua o bloque calefactor para mantener la temperatura a +20-+25C o +37C. Espectro fotómetro que pueda medir a 340 nm. Multisueros analizados de nivel 2 de Randox (Nº de cat. HN 1530) y nivel 3 (Nº de cat. HE 1532). Suero de calibración de nivel 3 de Randox Nivel (Nº de cat. CAL 2351).

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MANUAL/ RX MONZA PH 1016

PROCEDIMIENTO Realice una nueva calibración de ganancia [Gain Calibration] con una cubeta que contenga ddH2O recién preparada. Seleccione el programa PHOS en la pantalla Run Test [ejecución de prueba] y realice un blanco de agua la ley como se indica. Pipetee en la cubeta: Blanco de reactivo S0 Agua destilada Muestra Patrón Reactivo de trabajo

5 l ----0,5 ml

Patrón S1

Muestra

----5 l 0,5 ml

--5 l --0,5 ml

Mezcle, cubre durante 10 minutos a +20 - +25C antes de realizar la lectura, tal y como se indica en la pantalla.

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda utilizar los Multisueros analizados de Randox de nivel 2 y 3 para el control de calidad diario. Deben analizarse dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deben situarse dentro de un rango determinado. Si estos valores están fuera del rango y la repetición excluye un posible error, deben realizarse los pasos siguientes: 1. Comprobar los ajustes del instrumento y la fuente de luz. 2. Comprobar que todo el equipo utilizado esté limpio. 3. Comprobar el agua; los contaminantes, como un crecimiento bacteriano, pueden contribuir a la obtención de resultados imprecisos. 4. Comprobar la temperatura de la reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y su contenido. 6. Contactar con el servicio técnico de atención al cliente de Randox Laboratories llamando al teléfono +44 (0) 28 9442 2413 (Irlanda del Norte).

INTERFERENCIA Los analitos indicados más abajo se sometieron a prueba hasta CALIBRACIÓN PARA RX MONZA alcanzar los niveles siguientes y se determinó que no interferían: Se recomienda utilizar el patrón de calibrado CAL se proporciona en Bilirrubina 500 mol/l el kit o bien el Suero de calibración de nivel 3 de Randox para Intralipid® 0,4% muestras de suero. Triglicéridos 4,05 mmol/l Se recomienda utilizar el patrón de calibración CAL proporciona Hemoglobina 7 g/l en el kit para muestras de orina. Calibre cuando cambie de lote VALORES NORMALES (2, 3) de reactivo o bien cuando indiquen los procedimientos de control de calidad. Suero: 0,87 - 1,45 mmol/l (2,7 - 4,5 mg/dl) PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

Orina de 24 horas: 340 nm Recorrido luminoso de 1 cm +20- +25C/+37C frente a blanco de reactivo

Pipetee en la cubeta:

Agua destilada Muestra Patrón Reactivo de trabajo

Blanco

Patrón

Muestra

10 l ----1 ml

----10 l 1 ml

--10 l --1 ml

Mezcle, incube durante 10 minutos a +20- +25C o a 5 min a 37C. Mida la absorbancia de la muestra (muestra A) y del patrón (patrón A) frente al blanco de reactivo. NOTA Las muestras ictéricas y ligeramente lipémicas exigen realizar un blanco de muestra. Utilizando el mismo esquema de pipeteo, mezcle en 10 l de muestra con 1000 l de blanco de reactivo. En el Rx Monza, la Concentración de la muestra (mmol/l) = Muestra (mmol/l) – Blanco de muestra (mmol/l). En el caso de los usuarios que realizan el método manual, a continuación la absorbancia del blanco de muestra (blanco de muestra A) se resta de la absorbancia de la muestra (muestra A). ESTANDARIZACIÓN El Suero de calibración de nivel 3 de Randox es trazable conforme a lo que indican los materiales de referencia para fósforo inorgánico NIST 186lg.

12,9 - 42,0 mmol/d (0,4 - 1,3 g/d) Dieta libre

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia para reflejar la edad, sexo, dieta y ubicación geográfica de la población. CARACTERÍSTICAS DE EFICACIA ESPECÍFICAS Los siguientes datos de rendimiento se han obtenido utilizando un analizador Rx Monza, calibrado con el Suero de suero de calibración de nivel 3 de Randox, a +37oC. SUERO SENSIBILIDAD Se ha determinado que el nivel mínimo detectable era de 0,307 mmol/l (0,953 mg/dl). LINEALIDAD El método es lineal hasta 7,77 mmol/l (24,1 mg/dl). Las muestras que presenten una concentración más elevada se deben diluir 1 + 4 con una solución 0,9% (p/v) NaCl y someterse a nuevo ensayo, multiplicando el resultado por 5. PRECISIÓN Intraensayo Promedio (mg/dl) DT CV(%) n Interensayos Promedio (mg/dl) DT CV(%) n

Nivel 2 4,60 0,040 0,88 20

Nivel 3 6,77 0,141 2,08 20

Nivel 2 4,60 0,199 4,32 20

Nivel 3 6,77 0,197 2,91 20

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COMPARACIÓN CON OTROS MÉTODOS El método de Randox (Y) se sometió comparación con otro kit de prueba comercial (X). Se sometieron a prueba muestras de 71 pacientes, que presentaban un rango de 1,57 a 15,1 mg/dl. El análisis de regresión lineal de los datos ha producido la siguiente ecuación: Y = 0,91 X - 0,6897 con un coeficiente de correlación r = 0,9990 ORINA SENSIBILIDAD Se ha determinado que el nivel mínimo detectable era de 1,12 mmol/l (3,48 mg/dl). LINEALIDAD El método es lineal hasta 57,7 mmol/l (179 mg/dl). Las muestras que presenten una concentración más elevada se deben diluir 1 + 4 con una solución 0,9% (p/v) NaCl y someterse a nuevo ensayo, multiplicando el resultado por 5. PRECISIÓN Intraensayo Promedio (mg/dl) DT CV(%) n Interensayos Promedio (mg/dl) DT CV(%) n

Nivel 2 29,5 1,06 3,60 20

Nivel 3 89,2 4,16 4,66 20

Nivel 2 29,5 1,08 3,68 20

Nivel 3 89,2 3,86 4,33 20

REFERENCIAS 1. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Techniques, 2nd Edition, Harper and Row, p. 525, 1974. 2. Tietz, N., Clinical Guide to Laboratory Tests, W.B. Saunders Company, Philadelphia 1983; 5: 384. 3. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 444-446.

Revisado: 02 May 12 bm Rev. 002

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PÁGINA DEJADA EN BLANCO INTENCIONADAMENTE

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POTASIO (K) MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Potasio en el suero y plasma. Este producto es adecuado para uso Manual. Cat. No. PT 1600 100 ml

R1. R2a. R2b. CAL

Reactivo Precipitante Na-Tetrafenilboron NaOH Patrón

1 x 100 ml 1 x 50 ml 1 x 50 ml 1 x 5.5 ml

PRINCIPIO El tetrafenilboron sódico reacciona con los iones de potasio en un medio alcalino libre de proteínas para producir una suspensión túrbida de tetrafenilboron potásico. La cantidad de turbidez producida es proporcional a la concentración de potasio. MUESTRA Suero o plasma litio-heparin.

COMPOSICION DEL REACTIVO

R1. R2a. R2b. CAL

Concentración Inicial de las Soluciones

Reactivo Precipitante Acido Tricloro Acético Tetrafenilboron Sódico Hidróxido Sódico Patrón

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) NOTAS PROCEDIMIENTO Se recomienda utilizar material de plástico desechable durante el análisis, ya que el material de cristal contaminado puede dar lugar a grandes errores. Evitar la contaminación con detergentes. PROCEDIMIENTO 1. Precipitación Pipetear en tubos de centrifugación:

Muestra Reactivo Precipitante (R1)

Las elevaciones en los niveles de potasio en suero / plasma puede ocurrir debido a los posibles efectos de la manipulación de la muestra. Por esta razón las muestras de sangre debe mantenerse a temperatura ambiente y el retraso en la centrifugación debe ser evitado. Recentrifugación no es recomendable.

Componentes

MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Precipitante Na-Tetrafenilboron NaOH Patrón

0,3 mol/l 0,2 mol/l 2,0 mol/l Vedi inserto lotto-specifico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD Utilizar todas las soluciones sin diluir. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +15 y +25C.

Macro

Micro

100 l 1000 l

50 l 500 l

Mezclar y centrifugar durante 8 minutos a 12000 rpm. 2. Análisis de Potasio Longitud de onda: Cubeta: Medición: Temperatura:

578 nm, Hg 578 nm 1 cm de espesor frente al reactivo blanco +20 - +25C

Pipetear en tubos de ensayo: Macro Patrón Muestra Reactivo de Trabajo (R2) 2000 l Patrón (CAL) 200 l Sobrenadante --

2000 l -200 l

Micro Patrón Muestra 1000 l 100 l --

1000 l -100 l

El patrón y el sobrenadante claro se deberán añadir en el medio de la superficie del reactivo de trabajo para producir una turbidez homogénea. Mezclar cuidadosamente y dejar reposar durante al menos 5 minutos. Medir la absorbancia del patrón y la muestra frente al reactivo blanco (A). CALCULO Concentración de Potasio Amuestra mmol/l =

x Patrón conc. Apatrón

PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD DE TRABAJO (R2) Mezclar partes iguales de las soluciones R2a y R2b para formar reactivo suficiente para el número de muestras a analizar. Estable durante 30 días entre +15 y +25C y 60 días entre +2 y+8C.

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MANUAL PT 1600

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. INTERFERENCIA La hemólisis interfiere con el análisis debido al alto contenido de potasio en las células sanguíneas rojas, por lo tanto las muestras se deberán separar del coágulo lo antes posible. VALORES NORMALES(4) 3,5 – 5,1 mmol/l (13,7 – 19,9 mg/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de Potasio de 10 mmol/l. Para muestras con concentraciones superiores diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 3. REFERENCIAS 1. Hillmann, G., Beyer, G., J. Clin. Chem. and Clin. Biochem., 1967; 5: 93. 2. Henry, R. J., Clin. Chem., Harper and Row, New York, Sec. Edit., 1974; 646. 3. Teitz, N. W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Saunders, Philadelphia, Sec. Edit., 1976; 876. 4. Teitz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry. W.B. Saunders Company, Philadelphia, 1986; 1842.

Revisado 25 Jan 10 ck Rev. 001

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RANSEL

COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS ADICIONALES

Glutation Peroxidasa SOLO PARA INVESTIGACION MANUAL RX MONZA

Componentes

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Glutation Peroxidasa en sangre entera. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. Cat. No. RS 504 8 x 6,5 ml 8 x 6 t Semi micro 8 x 2 t Macro RS 505 8 x 10 ml 8 x 10 t Semi micro 8 x 4 t Macro

R1a. Reactivo R1b. Tampón R2. Hidroperóxido de cumeno R3. Diluyente

8 x 6,5 ml 1 x 70 ml 1 x 1 ml 2 x 200 ml

R1a. Reactivo R1b. Tampón R2. Hidroperóxido de cumeno R3. Diluyente

8 x 10 ml 1 x 100 ml 1 x 1 ml 2 x 200 ml

Complementario del lote: HG 1539 Hemoglobina Reactivo

5 x 100 ml

METODO UV(1) Este método está basado en el trabajo de Plagia and Valentine. La Glutation Peroxidasa (GPX) cataliza la oxidación del Glutation (GSH) por el hidroperóxido de cumeno. El Glutation oxidado (GSSG) en presencia de Glutation Reductasa (GR) Y NADPH es inmediatamente convertido en su forma reducida con una oxidación concomitante de NADPH en NADP+. Se mide la disminución de la absorbancia a 340 nm. PRINCIPIO DE LA REACCION GPX

2GSH + ROOH

Fosfato Potásico Ferricianida Potásica Cianida Potásica Surfactante

10,3 mmol/l 6.08 mmol/l 7,68 mmol/l 0.1% v/v

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1b contiene azida sódica. Evitar su ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. La solución R2 es nociva, si se traga o inhala, causa irritación y es combustible. La solución R2 es Hidroperóxido de cumeno que es cáustico. La solución de Drabkin contiene cianuro por lo que puede ser fatal si se ingiere. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio

ROH + GSSG + H2O GR

GSSG + NADPH + H+

Concentraciόn inicial de las Soluciones

NADP+ + 2GSH

MUESTRA Utilizar sangre entera heparinizada. Si la muestra proviene de oveja o cabra, diluir 0,05 ml con 3 ml de diluyente. Para ganado vacuno, caballos y otras especies diluir 0,05 ml de muestra con 2 ml de diluyente. Para muestras humanas ver NOTA. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes


R1a. Reactivo Glutation Glutation Reductasa NADPH R1b. Tampón Tampón fosfato EDTA R2. Hidroperóxido de cumeno R3. Diluyente

4 mmol/l ≥ 0,5 U/l 0,34 mmol/l 0,05 mol/l, pH 7,2 4,3 mmol/l 0,18 mmol/l

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MANUAL/ RX MONZA RS 504

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Reactivo Reconstituir un vial de Reactivo R1a con el volumen apropiado de Tampón R1b: 6,5 ml para el kit de 8 x 6,5 ml (RS 504) 10 ml para el kit de 8 x 10 ml (RS 505) Estable durante 48 horas entre +4 y +8°C u 8 horas entre +15 y +25°C. R1b. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. R2.

R3.

Hidroperóxido de cumeno Diluir 10 Hl R2 con 10 ml de agua bidestilada y mezclar bien, agitando vigorosamente, ya que el cumeno es difícil de disolver. Debe utilizarse solución fresca preparada en el día. Concentrado es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C. Para medir el volumen de hidroperóxido de cumeno se deberá utilizar una pipeta con acción de desplazamiento positiva, y capilares de cristal. Diluyente Reconstituir el contenido de un vial de Diluyente R3 con 200 ml de agua bidestilada. Estable durante 4 semanas cuando se conserva entre +2 y +8°C ó 3 días entre +15 y +25°C.

MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Tampón Hidroperóxido de cumeno Reactivo para diluir MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Control de Ransel (Cat. No. SC 692) Agua bidestilada Reactivo Hemoglobina (Cat. No. HG 1539) Diluyente Ransel (RS 2318) NOTAS(2,3) Cuando se utiliza sangre entera heparinizada humana, se recomienda el uso de reactivo de Hemoglobina para la dilución. Esto es debido a que la presencia de peroxidasas en sangre humana puede conducir a falsos resultados (más elevados). La adición de cianuro, sirve para inhibir esta interferencia positiva. De todas formas, antes de añadir el reactivo de Hemoglobina, es necesaria la dilución de la sangre con la solución de diluyente 4, para convertir la glutation en su forma reducida. La forma oxidada sería rápidamente inhibida por el cianuro. Se recomienda el siguiente método utilizando reactivo de Hemoglobina. Preparación: Diluir el contenido de un vial de reactivo de Drabkin con 480 ml de agua bidestilada. Conservar protegido de la luz. Estable durante 6 meses o hasta la fecha de caducidad, según sea más corto, cuando se conserva entre +15 y +25°C. Diluir 0,05 ml de sangre entera heparinizada en 1 ml de solución de diluyente (R3); incubar durante 5 min. y añadir 1 ml de reactivo de Hemoglobina. Mezclar bien y ensayar en la forma normal. Se recomienda que las muestras sean analizadas en los 20 min después de la adición del reactivo de Hemoglobina.

PROCEDIMIENTO Seleccione GPx en la pantalla de Ejecución de Prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo: Muestra Reactivo R1 Cumeno R2

10 µl 500 µl 40 µl

Mézclelo y aspírelo en Rx Monza. CALIBRACIÓN DE RX MONZA Se recomienda diariamente o como se indica en los procedimientos de control de calidad, usando Control Randox Ransel PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:


Pipette into cuvette: Macro

Semi-Micro

Muestra Blanco de diluida Reactivo Muestra diluida H2O destilada Reactivo R1 Cumeno R2

0.05 ml --2.50 ml 0.10 ml

--0.05 ml 2.50 ml 0.10 ml

Muestra diluida

Blanco de Reactivo

0.02 ml --1.00 ml 0.04 ml

--0.02 ml 1.00 ml 0.04 ml

Mezclar la muestra, R1 y R2. Leer la absorbancia inicial de la muestra y blanco de reactivo después de un minuto y al mismo tiempo iniciar el temporizador. Leer otra vez pasados 1 y 2 minutos. Restar el valor del blanco de reactivo al de la muestra. MANUAL CALCULOS La concentración de Glutation Peroxidasa puede calcularse a partir de la siguiente fórmula: U/l de hemolisado = 8412 x A 340 nm/minuto (Ver instrucciones técnicas) CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan un control de Ransel para el control de calidad diario. Este control debería procesarse como mínimo una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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MANUAL/ RX MONZA RS 504

VALORES NORMALES 27,5 - 73,6 U/g Hb 4171 - 10881 U/l Este rango se tomó de una población trabajadora Europea. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador RX Monza en el modo de flujo de células a 37°C con un volumen de aspiración de 450 µl. LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 925 U/l. Diluir las muestras con una concentration mayor con el agente diluyendo y multiplicar el resultado por el factor de dilución SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de la peroxidasa de glutación con un nivel aceptable de precisión ha sido determinado como 75 U/l PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Media (U/l) 240 DE 11.7 CV(%) 4.86 n 20 Precisión Total Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 240 17.5 7.30 20

Nivel 2 456 14.6 3.20 20 Nivel 2 456 19.9 4.37 20

CORRELACION Este método Randox (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X). Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 102 y 650 U/l. Se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y= 1.0155 X +8.637 con un coeficiente de correlación r = 0,9829 REFERENCIAS 1. Paglia, D.E. and Valentine, W.N., J. Lab. Clin. Med., 1967; 70: 158. 2. Kraus, R.J. & Ganther, H. E. Biochem. & Biophys. Res. Comm 1980; 96: 1116. 3. Prohaska, J.R., Oh, S.H., Hoekstra, W.G. & Ganther, H.E. Biochem. & Biophys. Res. Comm. 1977; 74: 64.


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RANSOD


Superoxido Dismutasa MANUAL RX MONZA

Componentes

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Superoxido Dismutasa en sangre entera. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. No. Cat. SD 125 5 x 20 ml

R1a. R1b. R2. CAL

Sustrato Mixto Tampón Xantin Oxidasa Patrón

5 x 20 ml 1 x 105 ml 3 x 10 ml 5 x 10 ml

PRINCIPIO La función de la superóxido dismutasa (SOD) es acelerar la dismutación de un radical tóxico, el radical superóxido (O2•.), producido durante un proceso oxidativo enérgico, en peróxido de hidrógeno y oxígeno molecular. Este método emplea Xantina y Xantin oxidasa (XOD) para formar radicales superóxido, los cuales reaccionan con cloruro de 2-(4-yodofenil)-3-(4-nitrofenol)-5-fenil tetrazolio (I.N.T) para formar un colorante formazán rojo. Se mide la actividad de la superóxido dismutasa por el grado de inhibición de esta reacción. Una unidad de SOD es la que causa un 50% de inhibición del valor de reducción de INT bajo las condiciones del análisis. XOD

Xantina

R1a. Sustrato mixto Xantina I.N.T. R1b. Tampón CAPS EDTA R2. Xantín Oxidasa CAL Patrón

0,05 mmol/l 0,025 mmol/l 40 mmol/l, pH 10,2 0,94 mmol/l 80 U/l Vedi inserto lotto specifico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Sustrato Mixto Reconstituir un vial de Sustrato Mixto R1a con 20 ml de Tampón R1b. Es estable durante 10 días cuando se conserva entre +2 y +8°C.

Acido úrico + O2-. R1b.

Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C.

R2.

Xantín Oxidasa Reconstituir el contenido de un vial de Xantín Oxidasa R2 con 10 ml de agua bidestilada. Estable durante 2 semanas cuando se conserva entre +2 y +8°C.

CAL

Patrones Reconstituir el contenido de un vial de Patrón (CAL) con 10 ml de agua bidestilada. Posteriormente las diluciones de este patrón deben ser preparadas con muestra diluyente Ransod. Se recomienda hacer las siguientes diluciones del patrón CAL (o S6) para construir la curva patrón:

O2•. I.N.T

Concentraciones iniciales de las Soluciones

colorante formazán O SOD

O2•. + O2• + 2H+

O2 + H2O2

PREPARACION DE LA MUESTRA Utilizar muestras de sangre entera heparinizada o con EDTA. Se recomienda lavar los eritrocitos 4 veces con una solución de NaCl al 0,9%. Centrifugar 0,5 ml de sangre entera durante 10 min a 3000 rpm. Después aspirar el plasma. Después lavar los eritrocitos 4 veces con 3 ml de solución de NaCl al 0,9 %, centrifugando durante 10 min a 3000 rpm después de cada lavado. El centrifugado lavado de eritrocitos deberá completarse con 2,0 ml de agua bidestilada fría. Mezclar y dejar reposar durante 15 min a 4C. El lisado se diluye con 0,01 mol/l de Tampón Fosfato pH 7,0, de forma que el porcentaje de inhibición caiga entre el 30 y el 60%. Para muestras humanas se recomienda 25 partes de dilución de lisado (Factor de dilución final = 100) y para muestras de bovinos 50 partes (Factor de dilución final = 200).

R1 = Sustrato Mixto R2 = Xantin Oxidasa Es recomendable que todos los reactivos y muestras estén equilibrados a temperatura ambiente antes de su uso. MATERIALES SUMINISTRADOS Sustrato mixto Tampón Xantín Oxidasa Patrones MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Diluyente Ransod (No. Cat. SD 124) (0,01 mol/l Tampón Fosfato, pH 7,0). Control de RANSOD No. Cat. SD 126.

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MANUAL SD 125

PROCEDIMIENTO Seleccionar SOD en la pantalla Run Test (Realizar análisis), y llevar a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

CALCULOS A2 - A1 = A/min de patrón o de muestra 3

Pipetear en la Cubeta: Patrón S1

Patrón S2 TO S6

Diluente Prueba Ransod 15 µl Patrón Diluir la prueba Diluir el control Sustrato Mixto (R1) 500 µl

15 µl 500 µl

Pruebas Control 15 µl 500 µl

15 µl 500 µl

Indice de muestra diluyente (Indice S1) =Indice de reacción sin inhibir = 100% Todos los indices tanto de los patrones como de las muestras diluidas deben ser convertidos en porcentajes del indice del diluyente de muestra y sustraidos del 100% para obtener un porcentaje de inhibición: (Apatrón/min x 100) 100 -

Mezclar bien y añadir

= % inhibición (AS1/min)

Xantin Oxidasa (R2)

75 µl

75 µl

75 µl

75 µl

(Amuestra/min x 100)

Mezclar bien, introducir la cubeta en el soporto de la celda de la Rx Monza y pulsar Read (leer).

100 -

CALIBRACIÓN Calibrar esta prueba usando el patrón proporcionado con el Kit. Se recomienda que las siguientes diluciones estén realizadas con el patrón Cal (ó S6) para producir una curva estándar:-

Representar el porcentaje de inhibición para cada patrón frente a Log10 (concentración de patrón en unidades SOD/ml).

Patrón S6 S5 S4 S3 S2

Volumen de solución patrón

Diluente Prueba

Patrón no diluido 5 ml of S6 5 ml of S5 5 ml of S4 3 ml of S3

5 ml 5 ml 5 ml 6 ml

Utilizar el porcentaje de inhibición de la muestra para obtener las unidades de SOD de la curva patrón. Unidades de SOD/ml de sangre entera = Unidades de SOD en la curva patrón/ml x factor de dilución Conversión a unidades de SOD/g de Hemoglobina Unid.SOD/ml = Unidades de SOD/g de Hemoglobina g Hemoglobina/ml

S1= Diluente Prueba (0,01 mol fosfato tampón pH 7,0) Todos los patrones diluidos se mantienen estables durante dos semanas entre +2 y +8°C. Se requiere una nueva calibración para cada análisis. PARA USO MANUAL

ILUSTRACION (a) Una muestra de bovino diluida 1 en 300 veces con diluyente de muestra Ransod produjo una inhibición del 33%. Desde la curva patrón: No de unidades SOD en la muestra = 0,575



(b) Conversión en unidades de SOD/ml de sangre entera 0,575 x 300 = 172,5 unidades de SOD/ml (c) Conversión en unidades de SOD/g hemoglobina


Muestra diluida Patrón Diluyente de Muestra Ransod Sustrato Mixto (R1)

= % inhibición (AS1/min)

Muestra Diluyente

Patrones S2 - S6

Muestra diluida

-----

--0,05 ml

0,05 ml ---

0,05 ml 1,7 ml

--1,7 ml

--1,7 ml

0,25 ml

0,25 ml

0,25 ml

Valor de muestra de hemoglobina = 0,118 g/ml 172,5 (Unid. SOD/ml)/(g hemoglobina/ml) =

= 1461,9 0,118

Mezclar bien Xantina Oxidasa (R2)

Mezclar y leer la absorbancia inicial A1 al cabo de 30 segundos y empezar a cronometrar el tiempo simultaneamente. Leer la absorbancia final A2 al cabo de 3 minutos.

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MANUAL SD 125

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan un control Ransod, para el control de calidad diario. Analizar el control al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

REFERENCIAS 1. Woolliams JA, Wiener G, Anderson PH, McMurray CH Research in Veterinary Science 1983, 34: 253-256. 2. Suttle NF, The Veterinary Record 1986, 119: 519-522. 3. Suttle NF, McMurray CH Research in Veterinary Science 1983; 35: 47-52. 4. Arthur JR, Boyne R Life Sciences 1985 36: 1569-1575.

VALORES NORMALES 1102 - 1601 U/g Hb 164 - 240 U/ml Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC. LINEALIDAD Las muestras deben ser diluidas para conseguir una inhibición entre el 30% y el 60% del porcentaje del diluyente de la muestra (por ej. la reacción no inhibida). SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de SOD inferior a la estándar debe ser relatada como
Nivel 1 101.0 4.88 4.64 20

Nivel 2 131.5 4.30 3.58 20

Nivel 1 101.0 6.27 5.96 20

Nivel 2 131.5 8.50 7.07 20

Precisión Entre Análisis Media DE CV(%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9417 X + 0.1004 y un coeficiente de correlación r = 0,965 Se analizaron 41 muestras de pacientes con valores de entre 23318U/ml. Revisado 15 Sep 10 bm Rev. 001

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HIERRO SERICO (Fe)

Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

Método colorimétrico MANUAL RX MONZA

PARA SU USO La determinación cuantitativa in vitro de hierro en suero. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. No. Cat. SI 257 2 x 100 ml

R1. R2. R3. CAL

Cromógeno Reductor Tampón Patrón

1 x 10 ml 1 x 15 ml 2 x 100 ml 1 x 10 ml

SIGNIFICADO CLINICO Medidas de hierro (no hemo) se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades como la anemia por deficiencia de hierro, hemocromatosis (una enfermedad asociada con el depósito generalizado en los tejidos de dos pigmentos que contienen hierro, de hemosiderina y de hemofuscin, y se caracteriza por la pigmentación de la piel), y la enfermedad renal crónica. PRINCIPIO(1,2,3) El ion férrico se disocia de su proteína transportadora, transferrina, en medio ácido y se reduce simultá-neamente a su forma ferrosa. Este ion ferroso forma un complejo con el cromógeno, el cual es un indicador sensible al hierro, para formar un cromóforo azul con un máximo de absorción a 595 nm. MUESTRA Suero. No utilizar plasma en este ensayo. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes R1.


Cromógeno Ferene R2. Reductor Acido ascórbico R3. Tampón Tampón acetato Dimetil sulfóxido Surfactante CAL Patrón

22.2 mmol/l 1.3 mol/l 0.087 mol/l, pH 4.65

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R2. Reductor Disolver el contenido de un vial de Reductor R2 con 15 ml de agua desionizada libre de hierro. Estable durante 4 semanas entre +4 y +8oC. El resto de los componentes están listos para usar. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25oC. MATERIALES SUMINISTRADOS Cromógeno Reductor Tampón Patrón MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Humanos Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532). Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO Es esencial que todos los aparatos utilizados en la recogida de las muestras y en la prueba estén libres de contaminación con trazas de hierro. Para que los recipientes de cristal queden libres de hierro deben lavarse con ácido clorhídrico diluido (aproximadamente 0,1 N) y enjuagarse abundantemente con agua desionizada libre de hierro. No usar plasma en este análisis. PROCEDIMIENTO Usando fresco ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia en el modo de cubeta. Seleccione Fe en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: Reactivo Blanco / S0

Vedi inserto lotto-specifico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. El Tampón R3 contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. El Tampón contiene también dimetil sulfóxido que es nocivo. Evitar el contacto con la piel y los ojos. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.

Puffer Reductor Agua libre de hierro Patrón Muestra

500 l 25 l 125 l -

Patrón S1

Muestra

500 l 25 l 125 l -

500 l 25 l 125 l

Mezclar, insertar la cubeta en el soporte de flujo de célula del RX Monza cuando se le pida para muestra en blanco y oprima Leer. Cromógeno

25 l

25 l

25 l

Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25 º C. Inserte la cubeta en el soporte de flujo de célula RX Monza cuando se le solicite para la muestra y presione leer. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendado en un cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando el CAL estándar proporcionado en el kit o Suero de calibración Randox Nivel 3.

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MANUAL SI 257 PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

595 nm (590 nm - 610 nm) 1 cm de espesor 20-25oC frente a reactivo blanco

PROCEDIMIENTO MACRO Pipetear en la cubeta:

Tampón Reductor Agua libre de hierro Patrón Muestra

Reactivo Blanco

Muestra

Patrón

2,0 ml 0,1 ml 0,5 ml -

2,0 ml 0,1 ml 0,5 ml

2,0 ml 0,1 ml 0,5 ml -

Mezclar, leer la absorbancia inicial de la muestra y del patrón frente a reactivo blanco. Cromógeno

0,1 ml

0,1 ml

0,1 ml

Mezclar, incubar durante 5 min entre 20-25oC. Leer la absorbancia final frente a reactivo blanco. Restar la absorbancia inicial de la absorbancia final para obtener el ∆A del patrón y de la muestra. PROCEDIMIENTO SEMI-MICRO

Reactivo Blanco

Muestra

Patrón

1,00 ml 0,05 ml 0,25 ml -

1,00 ml 0,05 ml 0,25 ml

1,00 ml 0,05 ml 0,25 ml -

Mezclar, leer la absorbancia inicial de la muestra y del patrón frente a reactivo blanco. Cromógeno

0,05 ml

0,05 ml

0,05 ml

Mezclar, incubar durante 15 min entre 20-25oC. Lea la absorbancia final contra el blanco de reactivo.  A = Absorbancia Final - Absorbancia Inicial CALCULOS Concentración =

Amuestra A patrón

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar las differencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 25oC. LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 152 µmol/l (854 µg/dl). Las muestras con concentraciones superiores se deberán diluir 1+2 con agua desionizada, y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 3. SENSITIVITY The minimum detectable concentration of Serum Iron with an acceptable level of precision was determined as 0.964 µmol/l (5.39 g/dl). PRECISION Análisis (Intra)


Tampón Reductor Agua libre de hierro Patrón Muestra

VALORES NORMALES EN SUERO(4) Adulto Hombre: 10.6 - 28.3 mol/l (59 - 158 g/dl) Mujer: 6.6 - 26 mol/l (37 - 145 g/dl)

x Conc. de patrón

NORMALIZACIÓN Suero de Calibración Randox Nivel 3 es trazable al material de de referencia NIST 937 Suero Hierro. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Media (g/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 104 1.77 1.70 20

Nivel 3 196 3.96 2.02 20

Nivel 2 104 3.49 3.35 20

Nivel 3 196 6.26 3.20 20

Análisis (Inter) Media (g/dl) DE CV(%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.902 X + 1.92 y un coeficiente de correlación r = 0,9995 Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 10.23 y 599.01 g/dl. REFERENCIAS 1. Ceriotti, F., and Ceriotti, G., Improved Direct Specific Determination of Serum Iron. Clin. Chem. 26/2, 327-331 (1980). 2. Henry, R.J.: Clinical Chemistry Principles and Techniques, New York, Harper and Row (1968) pg. 386. 3. Young, D.S., Hicks, J.M., Method for automatic determination of serum iron, J. Clin. Pathol. 18: 98 - 102 (1965). 4. Weippl, G. et al. (1973). Blut 27:261.


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SIFILIS RPR (SYP-RPR) TEST RAPIDO DE TARJETA DE REAGINA PLASMATICA


MANUAL

Suspensión de Antígeno de RPR 1. Suspensión de cardiolipina, que contiene carbono microparticulado. Contiene timerosal.

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Sífilis en suero y plasma. Este producto es adecuado para uso Manual. No. Cat. SY 1478 1. Suspensión de Antígeno 100 pruebas de Carbono RPR 1 x 2 ml 1 x 0.5 ml 2. Control Positivo 3. Control Negativo 1 x 0.5 ml 4. Botella dispensadora de plástico 1 5. Aguja Dispensadora calibrada para suministrar 16 µl 1 6. Tarjetas de Pruebas Desechables 10 7. Pipeta Desechable 100 SY 1479 1. Suspensión de Antígeno de Carbono RPR 2 x 5 ml 500 pruebas 2. Control Positivo 1 x 1 ml 3. Control Negativo 1 x 1 ml 4. Botella dispensadora de plástico 1 5. Aguja Dispensadora calibrada para suministrar 16 µl 1 50 6. Tarjetas de Pruebas Desechables 7. Pipeta Desechable 500 Se pueden solicitar otras variaciones de los formatos arriba indicados. INTRODUCCIÓN La Sífilis es una enfermedad crónica, contagiosa y a menudo venérea congénita producida por el Treponema pallidum. Este organismo pertenece a un grupo de bacterias gram-negativas llamadas Espiroquetas, las cuales se definen por su estructura molecular única. La infección resulta del contacto con superficies húmedas, resultantes de lesiones del tejido epitelial de la piel o las membranas mucosas. Si no se trata, esta enfermedad puede resultar en cambios irreversibles del sistema nervioso y cardiovascular. La sífilis continua siendo una enfermedad de alta incidencia, a pesar de los avances en la terapia antibiótica moderna. PRINCIPIO La prueba de Sífilis RPR es una prueba macroscópica de floculación no treponémica para la detección y titración de reaginas (anticuerpos en circulación producidos como resultado de la lesión del tejido causada por la enfermedad) en el suero o el plasma. El antígeno utilizado en el kit es una modificación del antígeno de VDRL. Consiste en una suspensión coloidal de cardiolipina equilibrada con licitina y colesterol, y mezclada con carbono microparticulado. La aglutinación ocurre en presencia de las reaginas, la cual es visiblemente intensificada por la presencia del carbono microparticulado. MUESTRAS Se puede utilizar plasma, suero calentado o sin calentar. Las muestras hemolizadas o contaminadas no son adecuadas para el test. Las muestras de suero fresco se pueden conservar entre +2 y +8°C durante varios días antes del análisis o a -20°C si se conservan durante más tiempo.

2. Suero de Control Positivo (Dispensador Rojo) Control líquido estabilizado, reactivo con antígeno de RPR. 3. Suero de Control Negativo (Dispensador Blanco) Control líquido estabilizado, no reactivo con antígeno de RPR. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. Los controles contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. El material de origen humano del que se deriva este producto ha sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO. Los métodos utilizadon están aprobados por el FDA. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar como posibles transmisores de enfermedades infecciosas y eliminar apropiadamente. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS Sacar la caja que contiene la suspensión de antígeno de R.P.R. y los controles séricos y refrigerarla a su llegada. El antígeno de RPR y el control sérico son estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C. No guardar las tarjetas de la prueba en el refrigerador, conservarlas a temperatura ambiente. No tocar los círculos de la prueba con los dedos ya que esto podría dejar restos aceitosos en el area de reacción aumentando la probabilidad de resultados del test inválidos.

MANUAL - SIFILIS (RPR) - SY 1478

MATERIAL SUMINISTRADO Suspensión de Antígeno de Carbono RPR Control Positivo Control Negativo Botella Dispensadora de Plástico Aguja Dispensadora Calibrada para suministrar 16 Hl Tarjetas de Test Desechables Pipeta Desechable MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1. Rotor mecánico con etapa horizontal, operando a 100 r.p.m. 2. Pipeta automática calibrada para suministrar 50 µl. Es necesaria para la prueba cuantitativa. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos están listos para su uso después de alcanzar una temperatura ambiente (NOTA 1). Agitar la suspensión de antígeno para obtener una suspensión homogénea y transferir el contenido a la botella dispensadora de plástico suministrada. Para ello, quitar la tapa de la botella de plástico y colocar la aguja dispensadora en el tapón de cierre-luer. Con cuidado apretar la botella de plástico e insertar la punta de la aguja en la suspensión de antígeno. Dejar que la botella se expanda lentamente para que la suspensión de antígeno entre en la botella (NOTA 2). PROCEDIMIENTO A. PRUEBA CUALITATIVA 1. Utilizando una pipeta desechable, dispensar una gota (≈ 50 µl) de suero o plasma en el círculo de la tarjeta de la prueba. 2. Con la parte plana de una pipeta desechable, extender la muestra por toda el área del círculo de la prueba. 3. Repetir los pasos 1 y 2 para cada muestra utilizando una pipeta nueva. 4. Agitar el ensamblaje de la botella dispensadora, invertir y golpear suavemente la aguja para sacar las burbujas. 5. Poner la aguja en posición perpendicular a la tarjeta de test y dejar que caiga una gota de antígeno en cada muestra de la prueba. 6. Rotar la tarjeta de test a 100 r.p.m. durante 8 minutos en un rotor mecánico. Tras la rotación mecánica es necesario rotar e inclinar la tarjeta brevemente a mano (de un lado para otro), para ayudar a diferenciar entre los resultados reactivos y los no reactivos. 7. Después leer inmediatamente los resultados en el macroscopio con buena luz. LECTURA E INTERPRETACIÓN Las lecturas se puntuan según el criterio siguiente: PATRÓN OBSERVADO Agregados grandes en el centro periferia del area del test Agregados más pequeños en los ejes del area del test o Sin agregados, apariencia gris suave

INTERPRETACIÓN REACTIVO REACTIVO DEBIL

B. PRUEBA CUANTITATIVA 1. Utilizando una pipeta automática dispensar 50 µl de salino fisiológico en los círculos del 1 al 5 de la tarjeta de la prueba. No extender. 2. Utilizando una pipeta dispensar 50 µl de la muestra (suero o plasma) que se va a valorar en el salino del primer círculo. (Ver Figura. 1) 3. Utilizando el mismo final de la pipeta mezclar el salino y la muestra moviendo la mezcla hacia arriba y abajo 5 o 6 veces y transferir 50 µl al salino en el segundo círculo. 4. Realizar de la misma manera diluciones en serie hasta el ultimo círculo. Quitar 50 µl del círculo final. (Ver Figura 2) 5. Utilizando el extremo plano de una pipeta desechable limpia para cada muestra, extender las muestras diluídas por toda el area de cada círculo de la prueba empezando por la dilución más alta. (No. de Círculo 5). 6. Proceder como en la prueba cualitativa a partir del paso 4 en adelante. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS El último paso de dilución que contiene agregados macroscópicos indica el titre de la muestra. Si la última dilución da un resultado positivo, entonces las series de dilución se deberán extender. Cada grupo de resultados se deberá realizar con los controles positivos y negativos suministrados para validar de la prueba. LIMITACIONES DE LA PRUEBA Al igual que todos los test no treponémicos, el test de sífilis RPR puede dar resultados positivos falsos. Tales reacciones han sido producidas por enfermedades tales como lepra, mononucleosis infecciosa y enfermedades autoinmunes. Por lo tanto, es importante que todas las muestras reactivas sean confirmadas por otro test serológico, preferiblemente un test específico del treponema tal como FTA-ABS o TPHA. El diagnóstico final se deberá basar en una correlación de los resultados del test con el historial clínico del paciente. La prueba se puede utilizar también para observar la terapia. NOTAS 1. La sensibilidad puede verse reducida a temperaturas bajas. Los mejores resultados se obtienen entre 23-29°C. 2. La estabilidad a largo plazo del producto se ve reducida cuando el antígeno se conserva en la botella dispensadora de plástico. Por lo tanto, se recomienda que el antígeno restante se devuelva a la botella de cristal original después del análisis del día. La botella de plástico y el ensamblaje de la aguja se deberán aclarar muy bien con agua destilada y secar al aire antes de usar. 3. No volver a utilizar las tarjetas de test. Las tarjetas se pueden secar al aire y archivar como documentos de los resultados permanentes.

NO REACTIVO

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REFERENCIAS 1. McGrew, B.E. et al., Amer. J. Clin. Path., 1968; 50: 52. 2. Portnoy, J. et al., U.S. Publ. Health Report, 1962; 77: 645. 3. Stevens, R.W. & Stroebel, E., Amer. J. Clin. Path., 1970; 53: 32. 4. Manual of Tests for Syphilis PHS Publications, No. 411, U.S. Govt. Printing Office. Figura. 1

Diluciones

Revisado 31 Julio 06 ne Rev. 001

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PROTEINAS TOTALES (TP)

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Reactivo Biuret Diluir el contenido de una botella R1 con 400 ml de agua bidestilada, enjuagando la botella a fondo. Es estable un año cuando se conserva herméticamente cerrado entre +2 y +25C.

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Proteinas Totales en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza.

R2.

Método Biuret MANUAL RX MONZA

No. Cat. TP 245 2 x 500 ml

R1. Reactivo Biuret R2. Reactivo blanco CAL. Patrón

2 x 100 ml 1 x 100 ml 1 x 5.5 ml

PRINCIPIO En medio alcalino, los iones cúpricos, interaccionan con los enlaces peptídicos de las proteinas formando un complejo coloreado. MUESTRA Suero, plasma heparinizado, EDTA plasma. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes R1.

Reactivo Biuret Hidróxido sódico Tartrato Na-K Yoduro potásico Sulfato cúprico R2. Reactivo blanco Hidróxido sódico Tartrato Na-K CAL. Patrón Proteína

Concentraciones de las soluciones 100 mmol/l 16 mmol/l 15 mmol/l 6 mmol/l 100 mmol/l 16 mmol/l Especifico para cada lote

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Las soluciones R1 y R2 contienen hidróxido sódico que es caústico. En caso de contacto accidental, lavar inmediatamente el area afectada con agua abundante y buscar inmediatamente atención médica. CAL contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

Reactivo Blanco Diluir el contenido de una botella R2 con 400 ml de agua bidestilada, enjuagando la botella a fondo. Es estable un año cuando se conserva herméticamente cerrado entre +2 y +25C.

CAL. Patrón Listo para usar. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Biuret Reactivo Blanco Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) NOTAS Si la lectura no puede llevarse a cabo a Hg 546 nm, debe utilizarse un patrón para calcular la concentración de proteinas totales en la muestra. La muestra blanco para sueros claros o incoloros corresponde aproximadamente a 0,2 g de proteinas totales/dl, y puede ser ignorada. Cuando se analicen sueros ictéricos (5 mg bilirrubina/dl), hemolíticos o lipémicos debe analizarse una muestra blanco hecha con 0,02 ml de suero o plasma y 1,0 ml de la Reactivo blanco R2. Esta debe medirse frente al agua y la absorbancia obtenida debe restarse de la absorbancia de la muestra. PROCEDIMIENTO Realice una calibración de ganancia nuevo con una cubeta que contiene ddH2O fresco. Seleccione el programa de TP en la pantalla de ejecución de la prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la cubeta: Reactivo blanco S0 Agua destilada Patrón (CAL) Suero R1 R2

0.01 ml --0.5 ml --

Patrón S1

Muestra

Muestra en blanco

-0.01 ml -0.5 ml --

--0.01 ml 0.5 ml --

--0.01 ml -0.5 ml

Mezclar, incubar durante 30 minutos a +20 a +25C, antes de leer las instrucciones en la pantalla CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendaciones sobre el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando CAL estándar proporcionado en el kit de calibración o Nivel Randox Suero 3.

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MANUAL/ RX MONZA TP 245

PARA USO MANUAL

VALORES NORMALES EN SUERO(2)


Hg 546 nm (530 - 570 nm) 1 cm light path 20 to 25C against reagent blank


Agua destilada Patrón (CAL) Suero o plasma R1

Reactivo Blanco

Patrón

Muestra

0,02 ml ----1,0 ml

--0,02 ml --1,0 ml

----0,02 ml 1,0 ml

Adultos

g/dl

g/l

6,4 - 8,3

64 - 83

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza en funcionamiento a 25ºC.

Mezclar, incubar durante 30 min entre +20 y +25C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco.

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 13,0 g/dl (130 g/l). Si la absorbancia de la muestra excede 0,7, diluir 1+1 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 2.

CÁLCULO MANUAL 1. Cuando la medición se lleva a cabo a Hg 546 nm, la concentración de proteínas totales puede ser calculada de la siguiente manera:

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Proteinas Totales con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,476 g/dl (4,76 g/l).

Conc. de Prot. Tot (g/l)

=

190 x Amuestra

Conc. de Prot. Tot (g/dl)

=

19 x Amuestra

Análisis (Intra)

2. Utilizando un patrón: Amuestra Conc. de Prot. Tot. =

PRECISION

Apatrón

x Conc. Patrón

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia NIST 927d de Proteinas Totales. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

Media (g/dl) DE CV(%) n

Nivel 1 6.04 0.034 0.57 20

Nivel 2 4.48 0.024 0.53 20

Nivel 1 6.04 0.251 4.15 20

Nivel 2 4.48 0.135 3.01 20

Análisis (Inter) Media (g/dl) DE CV(%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9665 X - 0.0589 y un coeficiente de correlación r = 0,9850 Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 4,29 y 10,40 g/dl. REFERENCIAS 1. Weichselbaum, T.E., Amer. J. Clin. Path., 16: 40. 2. Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd Edition. WB Saunders Company. Philadelphia. PA pp 518-519 (1995)

INTERFERENCIA Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren: Bilirrubina Intralipid® Triglicérido Hemoglobina

500 mol/l (29 mg/dl) 2% 22,75 mmol/l (20,0 mg/dl) 10 g/l


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TRIGLICERIDOS


Método GPO-PAP MANUAL RX MONZA

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Trigliceridos en suero y plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza. Cat. No. TR 210 6 x 15 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo enzima CAL. Patrón

1 x 100 ml 6 x 15 ml 1 x 5.5 ml

TR 213 10 x 50 ml


10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

TR 212 5 x 100 ml


5 x 100 ml 5 x 100 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO Las medidas de Triglicéridos se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades relacionadas con el metabolismo lipídico (Hiperlipoproteinemias), diversos desordenes endocrinos (neprosis diabetes mellitus) y obstrucción hepática (obstrucción biliar extrahepática). METODO COLORIMETRICO(1) Los triglicéridos se determinan tras hidrólisis enzimática con lipasas. El indicador es una quinoneimina formada a partir de peróxido de hidrógeno, 4-amino-fenazona y 4-clorofenol bajo la influencia catalítica de la peroxidasa. PRINCIPIO(2,3,4) Triglicéridos + H2O Glicerol + ATP

GK

Glicerol-3-fosfato + O2

lipasas

glicerol + ácidos grasos

glicerol-3-fosfato + ADP GPO

dihidroxiacetona fosfato + H2O2 POD

2H2O2 + 4-aminofenazona + 4-clorofenol

quinoneimina + HCl + 4H2O

PREPARACION DE LA MUESTRA(1) Se puede utilizar el suero, plasma heparinizado o con EDTA. Tomar la muestras después de 12 a 14 horas en ayunas. Tras la separación las muestras son estables hasta 7 días cuando se conservan entre +2 y +8C o 3 meses a -20C. Se deberán evitar los tubos recubiertos con Glicerol cerrado al vacío, así como el proceso repetido de congelación y descongelación. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1a. Tampón Tampón Pipes 4-clorofenol Magnesio-iones R1b. Reactivo enzima 4-aminofenazona ATP Lipasas Glicerol-kinasa Glicerol-3-fosfato oxidasa Peroxidasa CAL. Patrón

Concentraciones en la prueba 40 mmol/l, pH 7,6 5,5 mmol/l 17,5 mmol/l 0,5 mmol/l 1,0 mmol/l ≥ 150 U/ml ≥ 0,4 U/ml ≥ 1,5 U/ml ≥ 0,5 U/ml Vedi inserto lotto-specifico

La reactivo R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8C. R1b. Reactivo enzima Cat. No. TR 210 Reconstituir un vial de Reactivo enzima R1b con 15 ml de Tampón R1a. Estable durante 21 días entre +2 y +8C ó 3 días entre +15 y + 25C conservar protegido de la luz. Cat. Nos. TR 213 y TR 212 Reconstituir un vial de Reactivo enzima R1b con un pequeño volumen de Tampón R1a y después transferir todo el contenido al frasco R1a, enjuagando el vial R1b varias veces. Estable durante 21 días entre +2 y +8C ó 3 días entre +15 y +25C. Conservar protegido de la luz. CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad, cuando se conserva entre +2 y +8C. R1 = Reactivo enzima R2 = Ninguno MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo enzima Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) NOTA DE PROCEDIMIENTO Para corregir para libre de glicerol, restar 0,11 mmol/l (10 mg/dl) al valor calculado de triglicérido.

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MANUAL/ RX MONZA TR 210

PROCEDIMIENTO Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia nueva en el modo de cubeta. Seleccione el TRI en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: Reactivo Blanco S0

Patrón S1

Muestra

500 l

5 l 500 l

5 l 0.50 ml

ddH2O Patrón Muestra Reagent R1

Mezclar, incubar durante 10 min a 20-25oC o 5 min a 37 º C. Inserte en el soporte de RX Monza celda de flujo y oprima Leer dentro de los 60 minutos. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendado con el cambio de lote de reactivos o como inidicated por los procedimientos de control de calidad, utilizando CAL estándar proporcionado en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medida:

500 nm; Hg 546 nm 1 cm 20-25C ó 37C frente a reactivo blanco sólo es necesario un reactivo blanco por serie

Pipetear en tubos de ensayo: Reactivo Blanco l

Patrón l

Muestra l

1000

10 1000

10 1000

Muestra Patrón (CAL) Reactivo (R1)

Mezclar, incubar durante 10 minutos a 20-25C ó 5 minutos a 37C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y el patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco en los 60 minutos siguientes. CÁLCULO MANUAL 1. Utilizando patrón: Amuestra Concentración triglicéridos =

x 2,29 = mmol/l Apatrón Amuestra

NORMALIZACIÓN Calibración Randox suero Nivel 3 es atribuible a hacer referencia a ID-GC/MS método. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. INTERFERENCIAS El método no se ve influenciado por concentraciones de hemoglobina de hasta 6 g/l (600 mg/dl) o por concentraciones de bilirrubina de hasta 500 mol/l (29 mg/dl). VALORES DE REFERENCIA(5) Se recomiendan los siguientes límites superiores para la determinación del factor de riesgo de hipertrigliceridemia: Sospecha de hipertrigliceridemia a partir de: 1,71 mmol/l (150 mg/dl) Hipertrigliceridemia incrementada a partir de: 2,29 mmol/l (200 mg/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza en funcionamiento a 25ºC. LINEALIDAD El análisis es lineal hasta una concentración de triglicéridos de 1172 mg/dl. Las muestras que presenten una concentración superior, deben ser diluidas 1 + 4 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 5. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Trigliceridos con un nivel aceptable de precisión se determinó en 22.9 mg/dl.

x 200 = mg/dl Apatrón 2. Utilizando factor: Longitud de onda Hg 546 nm 500 nm

Concentración Triglicéridos mmol/l mg/dl 11,95 8,47

1048 743

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MANUAL/ RX MONZA TR 210

PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n Análisis (Inter) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 110 3.19 2.90 20

Nivel 3 259 6.42 2.48 20

Nivel 2 110 5.85 5.32 20

Nivel 3 259 9.89 3.82 20

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.902 X + 16.1 y un coeficiente de correlación r = 0,9965 Se analizaron 42 muestras de pacientes con valores de entre 45 y 417 mg/dl. REFERENCIAS 1. Tietz N.W., Clinical Guide to Laboratory Tests, Second Edition W.B. Saunders Company, Philadelphia, USA 554-556, 1990. 2. Jacobs N J, VanDemark, P.J., Arch Biochem Biophys 1960; 88: 250-255. 3. Koditschek L K, Umbreit, W W., J Bacteriol 1969; 98: 1063-1068. 4. Trinder P., Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-27. 5. Study Group, European Atherosclerosis Society. Strategies for the prevention of coronary heart disease: A policy statement of the European Athersclerosis Society. (1987). Eur. Heart. J. 8 : 77.


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ACIDO URICO (UA)


Método Colorimétrico Enzimático MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Acido Urico en el suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. Cat. No. UA 230 6 x 15 ml

UA 233 10 x 50 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo Enzima CAL. Patrón

1 x 100 ml 6 x 15 ml 1 x 5.5 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo Enzima CAL Patrón

10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

METODO COLORIMETRICO(1) El ácido úrico se convierte, catalizado por la uricasa, en alantoina y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado, catalizado por la peroxidasa, oxida el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la 4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina rojo-violeta. PRINCIPIO uricasa

Ac. úrico + O2 + 2H2O

Alantoina + CO2 + H2O2

2H2O2 + Ac. 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico + 4-Amino-fenazona peroxidasa

N-(4-antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinoneimina MUESTRA Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina. Diluir la orina 1+10 con agua destilada. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1a. Tampón Tampón HEPES 3,5 DCHBS R1b. Reactivo Enzima 4-Aminofenazona Peroxidasa Uricasa CAL Patrón


50 mmol/l, pH 7,0 4 mmol/l 0,25 mmol/l ≥ 1000 U/l ≥ 200 U/l Especifico para cada lote

La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO R1a. Tampón Listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si se conserva entre +2 to +8oC. R1b.

Reactivo Enzima UA 230 Reconstituir un vial de R1b Reactivo enzimático con 15 ml de Buffer R1a. Estable 21 días entre +2 y +8°C o 5 días entre +15 y +25°C si se almacena protegido de la luz UA 233 Reconstituir el contenido de un vial de R1b Reactivo enzimático con una porción de Buffer R1a y luego transferir todo el contenido a la botella R1a, enjuagando el frasco R1b varias veces. Estable por 21 días entre +2 y +8°C o 5 días entre +15 y +25°C si se almacena protegido de la luz.

CAL. Patrón Listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si se conserva entre +2 to +8°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo Enzima Patrón

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MANUAL/ RX MONZA UA 230 MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) PROCEDIMIENTO Usando ddH2O realizar una nueva Calibración de Ganancia en el modo de cubeta. Seleccione UA en la pantalla Ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

El uso de un patrón Suero o plama Amuestra Conc. Acido Urico =

Reactivo Blanco S0

Patrón S1

Muestra

500 l

10 l 500 l

10 l 500 l


Mezclar, incubar durante 15 min a 20-25°C ó 5 min a 37ºC. Insertar en el soporte de flujo de célula de RX monza y oprima Leer dentro de los 30 minutos. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendado con el cambio de lote de reactivos o como se indica en el procedimiento de control de calidad, utilizando el CAL estándar proporcionado en el kit o suero de calibración Randox Nivel 3. PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura de reacción: Medición:

520 nm; Hg 546 nm 1 cm de espesor 20-25°C / 37°C frente a reactivo blanco sólo se requiere un reactivo blanco por serie

Pipetear en tubos de ensayo: Reactivo Blanco (l)

Muestra (l)

Patrón (l)

1000

20 1000

20 1000

Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25oC o durante exactamente 5 min a 37oC. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco durante los 30 minutos siguientes.

patrón conc.

x

(mol/l) Apatrón Amuestra

Conc. Acido Urico =


Muestra Patrón (CAL) Reactivo (R1)

CALCULO MANUAL

patrón conc.

x

(mg/dl) Apatrón

Orina Amuestra Conc. Acido Urico =

patrón conc.

x

patrón conc.

x

(mol/l) Apatrón Amuestra

Conc. Acido Urico =

(mg/dl) Apatrón

Utilización de un factor: Conc. Acido Urico Longitud de onda: 520 nm Hg 546 nm

(mol/l) Suero/ Plasma 2029 3112

Orina 22306 34202

Suero/ Plasma 34.1 52.3

(mg/dl) Orina 375 575

NORMALIZACIÓN El suero de Calibración nivel 3 tiene trazabilidad con el material de referencia ID-GC/MS. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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MANUAL/ RX MONZA UA 230 INTERFERENCIA Hemoglobina hasta 100 mg / dl y bilirrubina hasta 20 mg / dl no afectan la determinación. Si las mediciones no puede llevarse a cabo a 520 nm o Hg 546 nm se debe utilizar la norma prevista.

VALORES NORMALES Suero2: Hombre

Mujer

Orina3:

202 - 416 3.4 - 7.0

mol/l mg/dl

142 - 339 2.4 - 5.7

mol/l mg/dl

1.5 - 4.5 250 - 750

mmol/24 horas mg/24 horas

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC. SUERO SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Acido Urico con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,599 mg/dl. LINEALIDAD El método es lineal para una concentración de 24,5 mg/dl. Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1 con solución de NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2. PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 5.81 0.022 0.38 20

Nivel 3 8.97 0.049 0.55 20

Nivel 2 5.81 0.328 5.64 20

Nivel 3 8.97 0.371 4.14 20

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.933 X + 0.16 y un coeficiente de correlación r = 0,9808 Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 1.05 y 15.16 mg/dl. ORINA SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Acido Urico con un nivel aceptable de precisión se determinó en 2.06 mg/dl. LINEALIDAD El método es lineal para una concentración de 26,7 mg/dl. Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1 con agua destilada y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2. PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 14.1 0.250 1.77 20

Nivel 3 23.8 0.362 1.52 20

Nivel 2 14.1 0.557 3.95 20

Nivel 3 23.8 0.912 3.83 20


CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0,9853 X + 0,669 y un coeficiente de correlación r = 0,9879 Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 3,28 y 21,58 mg/dl.


REFERENCIAS 1. Fossati, P., Prencipe, L., and Berti, G., Clin. Chem. (1980) 26/2, 227-231 . 2. Thefeld, W. et al. Dtsch. Med. Wschr. (1973) 98, 380. 3. Krieg, M. et al. J. Clin. Chem. Clin. Biochem.(1986) 24, 863. Revisado 16 Sep 10 ck Rev. 001

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ACIDO URICO (UA)

ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO El reactivo enzima y el patrón están listos para usar. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C, protegidos de la luz.

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Acido Urico en el suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para su utilización en Manual.

MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Enzima Patrón

Reactivo Líquido Método Colorimétrico Enzimático MANUAL

No. Cat. UA 1613 4 x 100 ml

R1. Reactivo Enzima CAL Patrón

4 x 100 ml 1 x 5.5 ml

METODO COLORIMETRICO El ácido úrico se convierte, catalizado por la uricasa, en alantoina y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado, catalizado por la peroxidasa, oxida el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la 4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina rojo-violeta.

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) PROCEDIMIENTO Longitud de onda: Cubeta: Temperatura de reacción: Medición:

520 nm; Hg 546 nm 1 cm de espesor 20-25oC ó 37oC frente a reactivo blanco sólo se requiere un reactivo blanco por serie

PRINCIPIO(1,2) Ac. úrico + O2 + 2H2O

uricasa

alantoina + CO2 + H2O2

2H2O2 + Ac. 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico + 4-Amino-fenazona peroxidasa

N-(4-antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinoneimina MUESTRA Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina. Diluir la orina 1+10 con agua destilada. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1.

Reactivo Enzima Tampón HEPES 4-Aminofenazona 3,5 DCHBS Uricasa Peroxidasa CAL Patrón

Concentraciones en la prueba 200 mmol/l, pH 7,55 0,25 mmol/l 4,0 mmol/l ≥ 200 U/l ≥ 1000 U/l Especifico para cada lote

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. El R1 reactivo contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico.

Pipetear en tubos de ensayo: Reactivo Blanco l

Muestra l

Patrón l

1000

20 1000

20 1000

Muestra Patrón (CAL) Reactivo 1

Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25oC o durante exactamente 5 min a 37oC. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco durante los 15 minutos siguientes. Aunque la absorbancia se puede leer en cualquier momento durante un período de hasta 15 minutos después del tiempo especificado de incubación, el intervalo entre la adición de la muestra y la lectura debe de ser exactamente el mismo que para el Patrón/Control y la Muestra. CALCULO DE LA CONCENTRACION DE ACIDO URICO Suero o plama Amuestra Conc. Acido Urico =

x conc. del patrón Apatrón

Orina Amuestra Conc. Acido Urico =

x conc. del patrón x 11 Apatrón

La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

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MANUAL UA 1613

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIA Haemoglobin up to 100 mg/dl and Bilirubin up to 20 mg/dl do not affect the determination. VALORES NORMALES(3,4) Suero: Hombre Mujer Orina:

202 - 416 mol/l 3,4 - 7,0 mg/dl 142 - 339 mol/l 2.4 - 5.7 mg /dl 1,5 - 4,5 mmol/24 hrs. 250 - 750 mg/24 hrs.

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. LINEALIDAD El método es lineal para una concentración de 1189 µmol/l ó 20 mg/dl. Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1 con solución de NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de sensibilidad ya que esto está limitado por la sensibilidad del espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones del ensayo un cambio de 0,004 unidades de absorbancia es equivalente a 0,98 mmol / l. REFERENCIAS 1. Barham, D., and Trinder, P., Analyst 97, 142-145 (1972). 2. Fossati, P., Prencipe, L., and Berti, G., Clin. Chem. 26/2, 227-231 (1980). 3. Thefeld, W. et al. Dtsch. Med. Wschr. (1973) 98, 380. 4. Krieg, M. et al. J. Clin. Chem. Clin. Biochem.(1986) 24, 863.

Revisado 28 June 10 lm Rev. 001

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PROTEINAS TOTALES (UP) (ORINA) MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Proteinas Totales en orina y C.S.F. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza. No. Cat. UP 1570 3 x 100 ml

R1. Reactivo colorante CAL. Patrón

3 x 100 ml 1 x 5.5 ml

UP 1571 6 x 100 ml

R1. Reactivo colorante CAL. Patrón

6 x 100 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO(1) El análisis de la Proteína Total en la orina y el líquido cerebro espinal es de gran valor en el diagnóstico de enfermedades renales y del sistema nervioso central. Las elevaciones en la proteína urinaria son muy comunes en las siguientes condiciones: ejercicio enérgico, fiebre e hipotermia, nefrosis y nefropatía diabética e infecciones de las vias urinarias. El análisis de la proteína total en el líquido cerebro espinal ayuda en el diagnóstico de condiciones tales como meningitis, tumores CNS y hemorragia cerebral. PRINCIPIO(2) El rojo de pirogalol se acompleja con proteinas en un medio ácido que contiene iones molibdato. El complejo azul resultante presenta una absorción máxima a 600nm. La densidad óptica a 600 nm es directamente proporcional a la concentración de proteinas totales de las muestras. EXTRACCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA(3,4,10) Orina : extracción de 24 horas, las muestras de orina se pueden conservan entre +2 y +8C hasta 24 horas o congeladas hasta 3 meses hasta que se analizen. C.S.F.(Líquido cerebro espinal): Se deberán de analizar durante la ½ hora siguiente a su extracción OBSERVACIONES 1. Aditivos: No es necesario el uso de conservantes. 2. La heparina puede causar interferencias si se utiliza en muestras de LCR. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

Concentración inicial de la Solución

R1.

Reactivo colorante Rojo de pirogalol Molibdato disódico Acido succínico Oxalato sódico Benzoato sódico CAL. Patrón Proteína (seroalbúmina humana)

60 mol/l 40 mol/l 50 mmol/l 1 mmol/l 3 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. El Patrón (CAL) contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Precaución: Estándar El material humano del que se deriva este producto ha sido evaluado a nivel de donante para buscar anticuerpos del virus de inmunodeficiencia humana (VIH 1, VIH 2), antígenos de superficie de hepatitis B (HbsAg) y anticuerpos del virus de hepatitis C (HCV), y resultó ser NO REACTIVO. Se han llevado a cabo los métodos aprobados por la FDA estadounidense para realizar dichas pruebas. No obstante, puesto que ningún método puede garantizar plenamente que está exento de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes deben manipularse teniendo en cuenta su posibilidad de transmisión de enfermedades infecciosas y deben tratarse en consecuencia. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautes locales. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25C. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo a color de la proteína urinaria Urinary Protein Standard MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS 1. Material de pipetaje adecuado para suministrar 10 µl, 50 µl, 1 ml y 3 mls. 2. Cronómetro y bloque de calentamiento o baño de agua para mantener +25C ó +37C. 3. Un espectrofotómetro con una capacidad de longitud de onda de 600 nm. 4. NaCl al 0,9% para la dilución de la muestra (si es necesario). 5. Controles de orina ensayados de Randox de nivel 2, (N.º cat. AU 2352) y nivel 3 (N.º cat. AU 2353) o controles de LCR de Randox de nivel 2 (CF 1500) y nivel 3 (CF 1501).

Vedi inserto lotto specifico

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MANUAL/ RX MONZA UP 1570 PROCEDIMIENTO Seleccione UP (Arriba) en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo S0 Patrón S1 Muestra Agua redestilada 10 µl Patrón 10 µl Muestra 10 µl Reactivo R1 500 µl 500 µl 500 µl Mézclelo y déjelo incubar durante exactamente 10 minutos a 20-25ºC o 5 minutos a 37ºC. Introduzca la cubeta en el soporte de la celda de flujo del RX Monza y pulse Read (Leer). PARA USO MANUAL Longitud de onda: Temperatura: Medición:

600 nm 25/37°C Frente al blanco de reactivo

Pipetear en tubos de ensayo: Método Macro Reactivo blanco

Patrón

Muestra

50 l ----3000 l

--50 l --3000 l

----50 l 3000 l

Agua bidestilada Patrón Orina o C.S.F Reactivo Métro Semi-micro

Reactivo blanco

Patrón

Muestra

20 l ----1000 l

--20 l --1000 l

----20 l 1000 l

Agua bidestilada Patrón Orina o C.S.F Reactivo

Mezclar, incubar durante exactamente 10 minutos a 25°C ó 5 minutos a 37°C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al blanco de reactivo. CÁLCULO MANUAL Amuestra Concentración de la Proteína (g/l) = Apatrón

x Patrón conc.

Para determinar la Proteína Urinaria de 24 horas, medir el volumen de la orina de 24 horas en ml y analizar el contenido de proteína en la orina (g/l) según el procedimiento. Calcular la Proteína Urinaria de 24h utilizando la siguiente fórmula: Proteína (g/24h) = Proteína Urinaria (g/l) x TV/1000 donde

TV 1000

CALIBRACION Se recomienda el patrón de Proteína Urinaria Randox (1 g/l) suministrado con este kit para la calibración cuando se analizen muestras de orina o CSF. La dilución del patrón antes de su uso no es necesaria. El patrón se prepara gravimétricamente utilizando un grado de reactivo de albúmina de suero humano. Se recomienda la recalibración para cada serie de muestras analizadas. CONTROL DE CALIDAD Controles de orina ensayados de nivel 2 y nivel 3 o controles de LCR de Randox de nivel 2 y nivel 3. Analice dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. (9)

INTERFERENCIA Como en todos los métodos de tinción, la subestimación de proteína puede ocurrir en muestras de orina que contengan cadenas ligeras de inmunoglobulina (p. ej. proteína de Bence Jones). Cuando se sospeche de dichas muestras, se deberían analizar también mediante electroforesis. VALORES NORMALES Normalmente se recomienda que, siempre que sea possible, cada laboratorio establezca su propio rango de valores esperados, o intervalo de referencia para análisis que se lleven a cabo normalmente. Dado que tales valores pueden variar con la edad, sexo, dieta, localidad geográfica o instrumento. Orina C.S.F.

0.028 0.01 0.15

- 0.141 g/24h (2) - 0.14 g/l (6) - 0.45 g/l (6)

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICAS Los siguientes datos de rendimiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza en funcionamiento a una temperatura de 37°C. SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de proteínas totales en orina con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,022 g/l. LINEARIDAD Este método es lineal hasta una concentración de 2,14 g/l. Las muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 + 4 con una solución del 0,9% (p/v) de NaCl y deben someterse a ensayo de nuevo multiplicando los resultados por 5.

= volumen de orina de 24h en ml = Convierte ml/día en l/día

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MANUAL/ RX MONZA UP 1570

PRECISIÓN Precisión intraensayo Media (g/dl) DE CV (%) n

Nivel 1 0.065 0.002 2.93 20

Nivel 2 0.275 0.002 0.67 20

Nivel 1 0.065 0.003 5.34 20

Nivel 2 0.275 0.013 4.74 20

Interensayo Media (g/dl) DE CV (%) n

CORRELACIÓN Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9911 X + 0.0029 con un coeficiente de correlación r = 0,9998 Se analizaron 46 muestras de pacientes con valores de entre 0,04 y 1,36 g/l. REFERENCIAS 1. Pesce, A.J., Kaplan, L.A.: Methods in Clinical Chemistry (1987). 2. Watanabe, N., Kamei, S., Ohkubo, A., Yamanaka, M., Ohsawa, S., Makino, K., and Tokuda, K., Clin. Chem., 1986; 32/8: 1551. 3. Laboratory Test Handbook, Jacobs et al. ed 2. 4. Orsonneau, J., Dowet, P., Massoubre, C., Lustenberger, P., and Bernard, S., Clin. Chem., 1989; 35/11: 2233. 5. Henry R.J., Cannon, D.C., Winkelman, J.W., "Clinical Chemistry, Principles & Techniques," Harper & Row, 2nd Ed. 1974. 6. Teitz, N.W., "Fundamentals of Clinical Chemistry", W.B. Saunders Company, 1970 Philadelphia. 7. Young, D.S., et al. Clin. Chem., 21: 5. ID, 1975. 8. Friedman, R.B., et al. Clin. Chem., 26: 4. ID, 1980. 9. Tietz N.W., Textbook of Clinical Chemistry. 2nd ed. W.B. Saunders Co., 717-723, 1994. 10. Yang J.Y., Chien T.I., Lu J.Y. and Kao J.T. Heparin Interference in the cerebrospinal fluid Protein Assay Measured in the Pyrogallol Red – Molybdate Complex. Clin. Chim Acta 2009 Oct; 408 (1-2): 75-78.


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PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de la Urea en suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para uso Manual. No. Cat. UR 107 5 x 100 ml

R1a. R1b. R2. CAL.

Ureasa Tampón Fosfato Hipoclorito Patrón

5 x 1 ml 5 x 100 ml 1 x 100 ml 1 x 5.5 ml

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

METODO COLORIMETRICO(1,2) PRINCIPIO El método se basa en la siguiente reacción:ureasa

Urea + H2O

2NH3 + CO2

El Salicilato y el hipoclorito en el reactivo reaccionan con los iones de amonio para formar un complejo verde (2.2 dicarboxilindofenol). MUESTRA Suero, EDTA, plasma tratado con citrato o heparinizado. Orina diluída 1+20 en agua destilada. Multiplicar el resultado por 21. COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes R1a. Ureasa R1b. Tampón Fosfato Salicilato Sódico Nitroprúsido Sódico EDTA R2. Hipoclorito Sódico Hidróxido Sódico CAL. Patrón

Concentraciones Iniciales de las soluciones ≥ 5000 U/l 120 mmol/l, pH 7,0 63,4 mmol/l 5,00 mmol/l 1,5 mmol/l 18 mmol/l 750 mmol/l Vedi inserto lotto-specifico

El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS La Ureasa R1a, el Tampón Fosfato R1b, el Hipoclorito Sódico R2 y el Patrón están listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO (R1) Añadir 1 frasco de ureasa a R1a botella de Tampón Fosfato R1b. Estable durante 1 mes entre +2 y +8°C protegido de la luz. MATERIALES SUMINISTRADOS Ureasa Tampón Fosfato Hipoclorito Sódico Patrón MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) NOTAS DE PROCEDIMIENTO Utilizar cristal libre de iones de amonio. El Reactivo 2 se puede diluir 1+4 con agua doblemente destilada (estable durante 6 meses entre +2 y +8°C). Después se utiliza 1 ml de Reactivo 2 en la prueba. El volumen final de la reacción será 2 ml y la linealidad 50 mmol/l (3 g/l).

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MANUAL UR 107

PROCEDIMIENTO Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

600 nm (Hg 578 nm - Hg 623 nm) 1 cm de espesor 25°C, 37°C frente al blanco de reactivo

REFERENCIAS 1. Fawcett, J.K., Scott, J.E., J. Clin. Path., 1960; 13: 156-159. 2. Patton, C.J., Crouch, S.R., Anal. Chem., 1977; 49: 464-469

Pipetear en los tubos de ensayo:

Patrón Muestra Reactivo de trabajo (R1)

LINEARIDAD El método es lineal hasta 33,3 mmol/l (200 mg/dl) en el suero o plasma, y 700 mmol/l (4195 mg/dl) en la orina. Las muestras con concentraciones más elevadas se diluirán 1 + 1 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.

Blanco de Reactivo

Patrón

Muestrea

-

10 l -

10 l

1000 l

1000 l

1000 l

Mezclar. Incubar durante al menos 3 min a 37°C ó 5 min a 2025C. Sodio Hipoclorito (R2)

200 l

200 l

200 l

Mezclar. Incubar durante al menos 5 min a 37C ó 10 min a 20-25C. Medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y la absorbancia de la muestra (Amuestra) frente al blanco de reactivo durante las siguientes 2 horas. CALCULO Amuestra Conc. de urea =

x

Conc. de patrón

(mmol/l)

x

Conc. de patrón

(mg/dl)

Apatrón Amuestra Conc. de urea =

Apatrón

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. VALORES DE NORMALIDAD Suero o plasma: 2,5 – 7,5 mmol/l (0,15 – 0,45 g/l) Orina: 338 - 583 mmol/24h (20 - 35 g/24h) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

Revisado 30 Jan 09 bm Rev. 001

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UREA Método Enzimático Cinético MANUAL RX MONZA PARA SU USO. Para el análisis cuantitativo in vitro de la Urea en suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza. No. Cat. UR 220 6 x 15 ml


1 x 100 ml 6 x 15 ml 1 x 5.5 ml

UR 221 10 x 50 ml


10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

UR 2364 6 x 500 ml


6 x 500 ml 6 x 500 ml 1 x 5.5 ml

TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA(3,4) Suero/Plasma: La Heparina se puede utilizar como anticoagulante. No utilizar heparinato de amonio. Orina (24 h): Recoger la orina sin aditivos: refrigerar tras la toma4 Se recomienda una dilución de 1+20 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 21. La Urea es estable en el suero/plasma durante 1 día a +25oC, 3 días a +2 y +8oC, ó 3 meses a -20oC. La Urea es estable en la orina durante 4 días cuando se conserva entre +2 y +8oC3. COMPOSICION DEL REACTIVO

SIGNIFICADO CLINICO(1,2) La urea se sintetiza en el hígado a partir del amoníaco, como resultado de la desaminación de amino ácidos. Esta biosíntesis es el mecanismo principal de eliminación del exceso de nitrógeno en el organismo. Las mediciones obtenidas en este análisis se utilizan en el diagnóstico de anomalías metabólicas y sobre todo renales. Se debe destruir más del 60% del riñón antes de que los niveles de urea en plasma aumenten significativamente. Este test se utiliza más frecuentemente junto con el de la creatinina sérica para niveles de proteínas elevados (descompensación cardíaca, reducción de agua). En 1913, Marshall1 introdujo un análisis utilizando ureasa para la determinación de urea en la sangre. Se realizaba la valoración del amoníaco liberado a partir de la urea por medición de la ureasa. Desde entonces se han utilizado muchas otras técnicas para medir el amoníaco producido. En 1965 Talke y Schubert2 crearon un procedimiento enzimático para la determinación de urea, utilizando el sistema enzimático asociado de ureasa - GLDH (Glutamato deshidrogenasa). METODO UV(1,2) La urea se hidroliza en presencia de agua y ureasa para producir amoníaco y dióxido de carbono. El amoníaco producido en la primera reacción se combina con -oxoglutarato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa para producir glutamato y NAD+.

Componentes

Concentración Inicial de las Soluciones

R1a. Tampón Tampón Tris R1b. Reactivo Enzima Ureasa GLDH NADH Adenosina-5-difosfato -oxoglutarato CAL. Patrón

150 mmol/l, pH 7,6 ≥ 10 U/ml ≥ 2 U/ml 0,26 mmol/l 3 mmol/l 14 mmol/l Especifico para cada lote

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. La solución R1a y el Patrón contienen azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

PRINCIPIO ureasa

Urea + H2O

2 NH3 +

CO2 GLDH

2 -oxoglutarato + 2 NH4+ + 2 NADH

2 L- glutamato + 2 NAD+ + 2 H2O

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MANUAL UR 220

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8ºC. R1b. Reactivo Enzima UR 220 Reconstituir un vial de Reactivo Enzima 2 con 15 ml de Tampón 1. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8ºC ó 2 días entre +15 y +25ºC. UR 221, UR 2364 Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo Enzima 2 con una parte de Tampón 1 y transferir el contenido entero a la botella Tampón 1, enjuagando la botella Reactivo Enzima 2 varias veces. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8ºC ó 2 días entre +15 y +25ºC.

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura de reacción: Medición:

340 nm (Hg 334 nm or Hg 365 nm) 1 cm de espesor 37C Frente al blanco de reactivo

Pipetear en la cubeta: Reactivo Blanco (l) Patrón Muestra Reactivo

Patrón

--1000

Muestra (l)

10 -1000

-10 1000

CAL. Patrón Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8ºC.

Mezclar, leer la absorbancia inicial después de 30 segundos y activar el temporizador de forma simultánea. Leer de nuevo después de 1, 2 y 3 minutos.

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo Enzima Patrón

CALIBRACIÓN PARA EL USO MANUAL Se recomienda para la calibración urea estándar Randox. Por favor, consulte la hoja de lote específico. La recalibración se debe completar para cada serie de muestras analizadas. Consulte el apropiado manual de operador o la hoja de aplicaciones para instrucciones específicas de calibración del analizador. La norma está preparada gravimétricamente utilizando urea pura disponible comercialmente.

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Dispositivos para pipeteo adecuados para la entrega de 10 µl y 1000 µl. Dispositivo temporizador y bloque calentador o baño de de agua para mantener 37°C. Un espectrofotómetro con capacidad de longitud de onda de 340/334/365 nm. Multisera ensayada Randox Nivel 2 (Cat. N º HN 1530) y Nivel 3 (Cat. Nº HE 1532) Suero de calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) NOTA Se pueden usar todos los anticoagulantes excepto heparinato de amonio. PROCEDURE Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia en el modo flujo de célula. Seleccione UREA en la pantalla Ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo:


Reactivo Blanco S0

Patrón S1

Muestra

5 l 500 l

5 l 500 l

5 l 500 l

Mezclar y aspirar en la Rx Monza. CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomiendan para calibración urea estándar Randox proporcionado en el kit o suero de Calibración Randox Nivel 3. La norma está preparada gravimétricamente utilizando urea pura disponible comercialmente. Calibrar en el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.

CÁLCULO MANUAL Para calcular la concentracion de urea utilizar la siguiente fórmula: AMuestra Conc de Urea = x Concentración del patrón (mmol/l or mg/dl) APatrón Para convertir las unidades convencionales de SI4 unidades de multiplicar las unidades convencionales por 0.166. mg/dl urea x 0.166 = mmol/l urea eg. 20 mg/dl Urea = 20 x 0.166 = 3.32 mmol/l NORMALIZACIÓN Suero Calibración Randox Nivel 3 es atribuible a la urea material de referencia NIST 909b. CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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MANUAL UR 220

ESPECIFICIDAD/LIMITACIONES(5,6) Se analizó la posible interferencia de la Bilirrubina hasta 20 mg/dl y se encontró que no interfiere. Las muestras altamente lipémicas pueden causar errores de absorbancia, por lo que la muestra se debe de diluir. Se analizó la posible interferencia de la hemólisis hasta 500 mg/dl y se encontró que no interfiere. Se debe tomar especial cuidado para prevenir la contaminación con amoníaco de las muestras que se vayan a analizar para urea. El amoníaco existente en la atmósfera, en la habitación, en el agua o en el reactivo podría elevar los resultados del análisis.

CORRELATION This method (Y) was compared with another commercially available method (X) and the following linear regression equation obtained: Y = 1.089 X - 0.446 and a correlation coefficient of r = 0.9935 43 patient samples were analyzed spanning the range 4.1 to 49 mmol/l. ORINA

Young et al5 y Friedman et al6 dan una lista de sustancias y condiciones que se sabe afectan a los niveles de urea. Randox no se hace responsable de la integridad o exactitud de la información contenida en estas listas. VALORES DE NORMALIDAD (7) Suero/Plasma 1.7-8.3 mmol/l (10-50 mg/dl) Orina (24 Horas) 333-583 mmol/l (20-35 g/24 h) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar las differencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de rendimiento se obtuvieron usando un analizador Rx Monza funcionando a una temperatura de 37 ° C con el volumen de aspiración fijado en 500 µl. SUERO LINEARIDAD El método es lineal hasta 50.3 mmol/l (302 mg/dl). Para concentraciones superiores diluir la muestra 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.

LINEARIDAD El método es lineal hasta 958 mmol / l (5757mg/dl). Diluir las muestras con una concentración más alta a 1 +1 con 0,9% de solución de NaCl y repetir prueba. Multiplique el resultado por 2. SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de Urea con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 43.2 mmol/l. REFERENCIAS 1. Marshall EK Jr: J Biol Chem 1913; 15:487. 2. Talke H; Schubert GE: Klin Wschr 1965; 43:174. 3. Tietz N. W., Textbook of Clinical Chemistry. W.B. Saunders Co, 1987, 1254-1316. 4. Tietz N.N: Clinical Guide to Laboratory Tests Philadelphia. W.B. Saunders Co, 1983 pg 494. 5. Young D.S., Pestaner, L.C., Gibbermann, V. Clin. Chem, 1975; 21: No.5. 6. Friedmann R.B, et al: Clin Chem 1980; 26 No.4. 7. Kerscher,L; Tieqenhorn,J; “Methods of enzymatic Analysis”, H.U. Bergmeyer Ed., VCH Verlagsgesellschaft, Weinheim, 1985 3rd Ed; Vd VII, p.453.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de Urea con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 2,13 mmol/l. PRECISION Análisis (Intra) Media (mmol/l) DE CV(%) n

Nivel 1 6.87 0.312 4.55 20

Nivel 2 19.5 0.515 2.64 20

Nivel 1 6.87 0.37 5.41 20

Nivel 2 19.5 1.18 6.02 20

Análisis (Inter) Media (mmol/l) DE CV(%) n


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RANDOX Manual Tecs. Química Clínica-2013

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