Randox insertos.pdf

ALBUMINA (ALB)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Verde de Bromocresol MANUAL RX MONZA

Atención: Patrón PARA SU USO La determinación cuantitativa in vitro de albúmina en suero y plasma. Este producto es adecuado adecuado para su utilización utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.

Cat. No. AB 362 6 x 100 ml

R1. CAL

BCG Concentrado Patrón

6 x 13.5 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO (1) La albúmina es la proteína sérica más abundante representando el 55-65% de las proteinas totales. Se sintetiza en el hígado y tiene una vida media de 2 a 3 semanas. Las principales funciones biológicas de la albúmina son mantener el equilibrio de agua en suero y plasma, transportar y almacenar una amplia variedad de ligandos ej: acidos grasos,calcio,bilirrubina y hormonas como tiroxina. La albúmina también es una fuente endógena de aminoácidos. La hipoalbuminemia está asociada con las siguientes condiciones :analbuminemia; sintesis deteriorada de albúmina albúmina en el higado; enfermedades hepaticas; malnutrición o malabsorción; malabsorción; shock generalizado; quemaduras o dermatitis; enfermedades enfermedades renales e intestinales .La hiperalbuminemia tiene poca relevancia relevancia diagnóstica excepto tal vez en deshidratación.

El material de origen humano del que se deriva este producto ha sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO. Los métodos utilizadon están aprobados por FDA. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar como posibles transmisores de enfermedades infecciosas y eliminar apropiadamente. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si s e desean.

Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION Y PREPARACION DEL REACTIVO Y DEL PATRON R1. Concentrado Concentrado BCG Diluya el contenido contenido de una botella con 87 ml de agua destilada. Estable Estable durante 3 meses si se conserva entre entre +15 y +25 C. 

PRINCIPIO(2) La medición de albúmina en suero se basa en su unión cuantitativa con el indicador 3,3',5,5'-tetrabromo-m 3,3',5,5'-tetrabromo-m cresol sulfontaleina (verde de br omocresol BCG). El El complejo albúmina-verde de bromocresol presenta una absorción una absorción máxima a 578 nm, siendo la absorbancia directamente directamente proporcional a la concentración de albúmina en la muestra.

PREPARACION Y EXTRACCION DE LA MUESTRA Suero, plasma heparinizado o plasma con EDTA. EDTA. Se pueden utilizar los procedimientos normales de recogida y almacenamiento del suero para las muestras que se vayan a analizar con este método. El suero es estable durante 3 días a una temperatura de entre 2 y 8 C, o durante 6 meses a -20 C. 



COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes

R1.

Concentración inicial de las soluciones

CAL. Estandard Contenido listo listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si se si se conserva entre +15 y +25 C. 

MATERIALES SUMINISTRADOS SUMINISTRADOS Concentrado BCG Patron Albumina

MATERIALES NECESARIOS NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Pipetas para dispensar volumenes 10 l y 3,0 ml. Cronómetro y baño de agua o bloque de calentamiento para mantener la temperatura entre 20 - 25ºC. Espectrófotómetro con una capacidad de longitud de onda de 600 a 650 nm Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530 ) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).

Verde de Bromocresol (BCG) concentrado Tampón succinato Verde de bromocresol (BCG) Brij 35 Conservante

CAL Patrón

75 mmol/l, pH 4.2 0.15 mmol/l

Especifico para cada lote

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MANUAL AB 362 PROCEDIMIENTO(2)

CONTROL DE CALIDAD

Utilice H2O de doble destilación para realizar una nueva calibración de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione ALB en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con con el Soporte Técnico Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo S0

Patrón S1

Muestra

H2O de doble destilación 3 μl Patrón Muestra Reactivo 1000 μl

3 μl 1000 μl

3 μl 1000 μl

Mézclelo e incúbelo durante 20 minutos a 20-25 oC o durante 10 minutos a 37 oC. Introdúzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos.

INTERFERENCIA Se analizaron los siguientes analitos hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren:

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda llevar a cabo una calibración diaria mediante el patrón CAL que se proporciona en el kit o mediante el suero de calibración de nivel 3 de Randox.

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Espectrofotómetro: Cubeta: Temperatura de incubación: Medición:

H2O destilada 0,01 ml Patrón (CAL) --Suero o Plasma --Reactivo de BCG (R1) 3,00 ml

500  mol/l mol/l 1,2% 22,75 mmol/l 6 g/l

VALORES DE NORMALIDAD NORMALIDAD EN EL SUERO(2) 578 nm o 623 nm 630 nm (600 - 650 nm) 1 cm de espesor 20 - 25 C Frente al blanco blanco de reactivo

Pipetear en tubos de ensayo: Reactivo

Bilirrubina Intralípido® Triglicéridos Hemoglobina

Patrón Patrón

Muestra

--0,01 ml --3,00 ml

----0,01 ml 3,00 ml

Mezclar e incubar durante 5 min entre +20 y +25 C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al blanco de reactivo

CÁLCULO MANUAL La concentración de albúmina en la muestra puede calcularse utilizando la fórmula siguiente:

Adultos 38 - 44 g/l (3,8 – 4,4 4,4 g/dl) Recién nacidos 38 - 42 - 42 g/l (3.8 - 4.2 g/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar considerar las diferencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica. geográfica.

CARACTERISTICAS CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza Monza a una temperatura de 37 oC.

LINEALIDAD Este método es lineal lineal hasta 7,55 g/dl. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 1 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 2.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de albúmina con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 0,287 g/dl.

Conc. de albúmina (g/l o g/dl) Amuestra =

x Apatrón

Concentración del patrón

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia DA470 de la albúmina (IFCC).

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MANUAL AB 362 PROCEDIMIENTO(2)

CONTROL DE CALIDAD

Utilice H2O de doble destilación para realizar una nueva calibración de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione ALB en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con con el Soporte Técnico Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo S0

Patrón S1

Muestra

H2O de doble destilación 3 μl Patrón Muestra Reactivo 1000 μl

3 μl 1000 μl

3 μl 1000 μl

Mézclelo e incúbelo durante 20 minutos a 20-25 oC o durante 10 minutos a 37 oC. Introdúzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos.

INTERFERENCIA Se analizaron los siguientes analitos hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren:

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda llevar a cabo una calibración diaria mediante el patrón CAL que se proporciona en el kit o mediante el suero de calibración de nivel 3 de Randox.

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Espectrofotómetro: Cubeta: Temperatura de incubación: Medición:

H2O destilada 0,01 ml Patrón (CAL) --Suero o Plasma --Reactivo de BCG (R1) 3,00 ml

500  mol/l mol/l 1,2% 22,75 mmol/l 6 g/l

VALORES DE NORMALIDAD NORMALIDAD EN EL SUERO(2) 578 nm o 623 nm 630 nm (600 - 650 nm) 1 cm de espesor 20 - 25 C Frente al blanco blanco de reactivo

Pipetear en tubos de ensayo: Reactivo

Bilirrubina Intralípido® Triglicéridos Hemoglobina

Patrón Patrón

Muestra

--0,01 ml --3,00 ml

----0,01 ml 3,00 ml

Mezclar e incubar durante 5 min entre +20 y +25 C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al blanco de reactivo

CÁLCULO MANUAL La concentración de albúmina en la muestra puede calcularse utilizando la fórmula siguiente:

Adultos 38 - 44 g/l (3,8 – 4,4 4,4 g/dl) Recién nacidos 38 - 42 - 42 g/l (3.8 - 4.2 g/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar considerar las diferencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica. geográfica.

CARACTERISTICAS CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza Monza a una temperatura de 37 oC.

LINEALIDAD Este método es lineal lineal hasta 7,55 g/dl. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 1 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 2.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de albúmina con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 0,287 g/dl.

Conc. de albúmina (g/l o g/dl) Amuestra =

x Apatrón

Concentración del patrón

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia DA470 de la albúmina (IFCC).

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MANUAL AB 362 PRECISION (Suero) Análisis (Intra) Media (g/dl) DE CV (%) n

Nivel 1 2,86 0,036 1,28 20

Nivel 2 4,36 0,031 0,71 20

Nivel 1 2,86 0,129 4,52 20

Nivel 2 4,36 0,174 3,99 20

Análisis (Inter) Media (g/dl) DE CV (%) n

CORRELACION Se comparó el método método Randox (Y) con un método comercial disponible (X). Se analizaron 51 muestras con valores valores abarcando un rango de 22 a 46 g/l en un analizador Hitachi 747. El análisis de regresión lineal de los datos resultó en la siguiente ecuación: Y = 1,073 X + 0,204 con un coeficiente de correlación r = 0.9910 Se analizaron 40 muestras con valores de entre entre 1,66 y 4,51 g/dl.

REFERENCIAS 1. Grant G.H., et al Amino Amino Acids and Proteins; Proteins; Fundamentals of Clinical Chemistry, Tietz N.W. Editor, Third Th ird Edition, WB Saunders Company Philadelphia USA, 328-329, 328-329, 1987 2. Doumas, B.T., Watson, W.A., Biggs, H.G. H.G.,, Clin. Chim. Acta. 1971; 31: 87.

Revised 10 Sep 10 bm Rev. 001

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FOSFATASA ACIDA (ACP)

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS R1. Bufer Contenios listos para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad si se conserva entre +2 to +8 C.

Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA

Para la Fosfatasa ácida total: R2. Substrato (R2A)

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Fosfatasa Acida en el suero. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

Para la Fosfatasa ácida no prostática: R2. Substrato (R2B)

No. Cat. AC 1011 20 x 3 ml

Disuelva el contenido de 1 botella de sustrato R2 en 3 ml de tampón R1. Estable durante 5 días si se conserva entre +2 y +8 C o 24 horas entre +15 to +25 C, Conservese protegido de la luz.

R1. Tampón R2. Sustrato R3. Tartrato SAM STAB Estabilizador

1 x 70 ml 20 x 3 ml 10 frascos 1 frasco

METODO COLORIMETRICO

Disuelva el contenido de 1 botella de sustrato R2 en 3 ml de tampón R1. A continuación, transfiera el contenido a un vial de tartrato R3. Estable durante 5 días si se conserva entre +2 to +8 C o 24 horas entre +15 y +25 C, Conservese protegido de la luz. 



MATERIALES SUMINISTRADOS

PRINCIPIO(1) fosfatasa ácida

1-naftil-fosfato + H2O

fosfato + 1-naftol

1-naftol+sal de 4-cloro-2-metilfenildiazonio* colorante azo

PREPARACION DE LA MUESTRA Suero. La muestra puede ser estabilizado mediante la adición de 1 gota de ácido acético estabilizador (STAB SAM) a 1 ml de suero. Estable durante 3 días a +2 y +8 C ó 24 horas a +15 y +25 C. Suero. La muestra se estabiliza añadiendo una gota de ácido acético (estabilizador 4) a 1 ml de suero. Es estable durante 3 días entre +2 y +8 C ó 24 horas entre +15 y +25 C.

COMPOSICION DEL REACTIVO

R1 Tampón R2. Sustrato

75 mmol/l, pH 5,2

1-naftilfosfato Sal TR Fast Rojo

10 mmol/l 2,5 mmol/l

Tartrato sódico

135 mmol/l

R3. Tartrato

SAM STAB Estabilizador Acido acético

PRPROCEDIMIENTO FOSFATASA ÁCIDA TOTAL Seleccione ACP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

0,05 ml 0,5 ml

Mézclelo, incúbelo durante exactamente 5 minutos a 37 °C o durante 10 minutos a 20-25 °C y aspírelo en Rx Monza.

Concentraciones en la prueba

Tampón citrato

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).

* = Sal TR Fast Rojo

Componentes

Tampón Sustrato Tartrato Estabilizador

3 mmol/l

FOSFATASA ÁCIDA NO PROSTÁTICA Seleccione NACP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

0,05 ml 0,5 ml

Mézclelo, incúbelo durante exactamente 5 minutos a 37 °C o durante 10 minutos a 20-25 °C y aspírelo en Rx Monza.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio.

Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.

Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.

Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

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MANUAL/ RX MONZA AC 1011 CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA

FOR MANUAL USE Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

Hg 405 nm 1 cm de espesor 30/37 C frente al aire

Pipetear en tubos de ensayo:

Muestra Solución de reactivo R2

Macro

Semi Micro

0,20 ml 2,00 ml

0,10 ml 1,00 ml

Mezclar, verter en la cubeta e incubar durante 5 min a 30/37 C. Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.

CÁLCULO MANUAL Para calcular la actividad de la fosfatasa ácida en la muestra utilizar las fórmulas siguientes:

Fosfatasa ácida total: Fosfatasa prostática:

ΔAsol.2b/min)

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

INTERFERENCIA Sueros hemolíticos e ictéricos (bilirrubina > 3 mg/dl) interfieren en la prueba.

El método es lineal hasta una concentración de 159 U/I. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 4 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de fosfatasa ácida con un nivel aceptable de precisión se determinó en 2,53 U/l.

PRECISION Intraensayo Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 2 15.9 0.717 4.51 20

Nivel 3 43.6 1.90 4.35 20

Media (U/l) DE CV(%) N

Nivel 2 15.9 1.05 6.59 20

Nivel 3 43.6 3.04 6.98 20

CORRELACIÓN Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9723 X + 0.5527 y un coeficiente de correlación de r = 0,9925 se analizaron 42 muestras de pacientes abarcando un rango de 2,5 a 93,9 U/l.

FOSFATASA ÁCIDA NO PROSTÁTICA LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 80,8 U/I. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 4 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de fosfatasa ácida con un nivel aceptable de precisión se determinó en 1,76 U/l.

VALORES NORMALES EN SUERO (2)

Fosfatasa ácida total Hombre Mujer Fosfatasa ácida prostática

FOSFATASA ÁCIDA TOTAL LINEALIDAD

Interensayo

U/l = 743 x ΔAsol.2a/min U/l = 743 x ( ΔAsol.2a/min -

Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza.

30 C

37 C

Hasta 4,2 U/l Hasta 3,0 U/l

Hasta 4,7 U/l Hasta 3,7 U/l

Hasta 1,5 U/l

Hasta 1,6 U/l

PRECISION Intraensayo

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 6.65 0.289 4.34 20

Nivel 2 17.8 0.765 4.30 20

Nivel 1 6.65 0.295 4.43 20

Nivel 2 17.8 0.892 5.01 20

Interensayo Media (U/l) DE CV(%) n

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MANUAL/ RX MONZA AC 1011 CORRELATION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9653 X + 0.1849 y un coeficiente de correlación de r = 0,9971. se analizaron 40 muestras de pacientes abarcando un rango de 2,1 a 80,2 U/l.

REFERENCIAS 1. Hillmann, G.J., Clin. Chem. Clin. Biochem. 1971; 9: 273. 2. Silver, D., et al ., J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21: 519.

Revisado 05 Sep 11 bm Rev. 002

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ALDOLASA (ALS)

PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD R1. Tampón/Sustrato Reconstituir un vial de Tampón/Sustrato 1 con 20 ml

Fructosa-1,6-difosfato aldolasa

e agua bidestilada. Es estable durante 2 semanas si se conserva entre +2 y +8 C.

MANUAL RX MONZA

R2. NADH

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Aldolasa en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma Manual y en el analizador RX monza.

No. Cat. AD 189 5 x 20 ml

R1. Tampón/Sustrato R2. NADH R3. GDH/TIM/LDH

5 x 20 ml 2 x 1 ml 1 vial

PRINCIPIO La aldolasa convierte la fructosa-1,6-difosfato (F-1,6-DP) en gliceraldehído-3-fosfato (GAP) y dihidroxiacetona fosfato (DAP). La adición de triosafosfato isomerasa (TIM), glicerolfosfato deshidrogenada (GDH) y NADH convierte la dihidroxiacetona fosfato en glicerol-1-fosfato. El grado de la reacción de la aldolasa se mide por la disminución de la absorbancia a 340 nm como consecuencia de la conversión de NADH en NAD+. aldolasa

F-1,6-DP

GDH

2Glicerol-1-P + 2 NAD+

MUESTRA

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DEL REACTIVO EN FUNCIONAMIENTO PARA RX MONZA Prepare el reactivo en funcionamiento como se indica en la tabla siguiente:Tampón/Sustrato R1 2.5ml 5.0ml 10.0ml

NADH R2 0.05ml 0.1ml 0.2ml

GDH/TIM/LDH R3 0.01ml 0.02ml 0.04ml

COMPOSICION DEL REACTIVO Concentración en la prueba

R2. NADH R3. GDH/TIM/LDH

GDH TIM LDH Ammonium Sulphate

Calibrador de aldolasa de Randox (No. Cat. AD 5000) Control de Aldolasa Randox Nivel 2 (Cat. No. AD 5001) y Nivel 3 (Cat. No. AD 5002) 0.9% Solución NaCl.

PROCEDIMIENTO

R1. Tampón/Sustrato Tampón colidina Monoyodoacetato F-1,6-DP

Tampón/Sustrato NADH GDH/TIM/LDH

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS

Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma.

Componentes

Componentes listos para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C.


DAP

2DAP + 2NADH + 2H+

R3. GDH/TIM/LDH

Estable durante 8 horas entre +2 y +8ºC.

GAP + DAP

TIM

GAP

Reconstituir un vial de NADH 2 con 1 ml de agua bidestilada. Es estable durante 4 semanas entre +2 y +8 C.

51 mmol/l, pH 7,4 0,27 mmol/l 2,7 mmol/l 0,23 mmol/l ≥ 326 mU/ml ≥ 4,35 U/ml ≥ 616 mU/ml

> 35%

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD

Seleccione ALS en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo:

H2O de doble destilación ALS CAL Muestra Reactivo en funcionamiento

SO*

Patrón S1

Muestra

35µl ----450 µl

--35 µl --450 µl

----35 µl 450 µl

Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a 2025ºC y aspírelo en RX monza.

Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA

Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas.

*blanco de reactivo El uso de solución salina y Randox Aldolasa sérica de calibración se recomienda para la calibración. LA calibración se recomienda a los cambios en el lote del reactivo como se indica en los procedimientos de control de calidad.

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MANUAL/ RX MONZA AD 189 PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

LINEALIDAD 340 nm (Hg 365 nm o Hg 334 nm) 1 cm de espesor 37 C frente a muestra blanco

Muestra Tampón/Sustrato (R1 Solución NaCl 0,9% NADH (R2) GDH/TIM/LDH (R3)

0,2 ml 2,50 ml -

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Aldolasa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 1,73 U/l.

Pipetear en tubos de ensayo: Muestra Blanco

El método es lineal hasta una concentración de 106 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1+4 con una solución de NaCl del 0,9% y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por 5.

Calibrador

Muestra

0,2 ml 2,50 ml 0,05 ml 0.01 ml

0,2 ml 2,50 ml 0,05 ml 0,01 ml

Mezclar la muestra, R1, R2 y R3 y se incuba durante 5 minutos a 37 C y leer la absorbancia A1 contra el blanco de muestra. Dejar reposar a 37 C durante exactamente 20 minutos. después de la primera lectura y entonces medir la absorbancia A2 frente al blanco. * Si A1 es < 0,95 diluir 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir el test. Multiplicar el resultado por 2.

MANUAL DE CÁLCULO Para calcular la actividad aldolase utilizar la siguiente fórmula: (A1 - A2) Muestra x Conc. de calibrador

PRECISION Precisión intraensayo Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 2 6.36 0.295 4.64 20

Nivel 3 19.1 0.854 4.47 20

Nivel 2 6.36 0.402 6.32 20

Nivel 3 19.1 1.35 7.09 20

Precisión interensayo Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELACIÓN El método de Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal:

(A1 - A2) Calibrador

Y = 0,9815 X + 0,183 y un coeficiente de correlación r = 0,9917.

CONTROL DE CALIDAD

Se analizaron 42 muestras con valores de entre 2,46 y 89,86 U/l.

Los controles de Aldolasa Randox Niveles 2 y 3 se recomiendand para el control de calidad diario. Se deberían procesar 2 niveles de control al menos una vez por día. Los valores que se obtengan deberían entrar dentro de un rango específico. Si los valores no estan dentro de este rango, y la repetición excluye el error, se deberían lleva a cabo los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

REFERENCIA 1. Feissli, S., et al ., (1966). Klin. Wschr. 44: 390.

INTERFERENCIA La hemólisis interfiere en la prueba.

VALORES DE REFERENCIA(1) Suero:

Hasta 7,6 U/l (37 C)


CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICAS Se obtuvieron las siguientes características de rendimiento mediante un analizador RX monza y un modo de célula de flujo a 37ºC.

Revisado el 15 de Sep 2010 bm Rev. 001

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ALT

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio.

Alanina Aminotransferasa IFCC MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Alanina Aminotransferasa en el suero y plasma. Este pr oducto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

No. Cat. AL 1200 20 x 2 ml

AL 1205 10 x 10 ml

AL 1268 5 x 20 ml

AL 2360 5 x 100 ml

R1a. R1b.

R1a. R1b.

R1a. R1b.

R1a. R1b.

Tampón/Substrato Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato

1 x 70 ml 20 x 2 ml


1 x105 ml 10 x 10 ml


1 x 105 ml


5 x 100 ml

5 x 20 ml

5 x 100 ml

METODO UV

La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se desechen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las su perficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles

Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD R1a. Tampón/Substrato Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y+8 C

R1b. Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato

Este es un método estandard optimizado de acuerdo con las concentraciones recomendadas por la IFCC.

PRINCIPIO ALT

-oxoglutarato

La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

+ L-alanina

L-glutamato + piruvato LD

piruvato + NADH + H +

L-lactato + NAD+

Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato R1b con el volumen apropiado de Tampón/Substrato R1a: 2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AL 1200) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AL 1205) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (AL 1268) Estable durante 14 días entre +2 y+8 C e ó 24 horas entre+15 y +25 C.

MUESTRA

Cat. No. AL 2360 5 x 100 ml

Suero, plasma heparinizada o plasma EDTA.

Reconstituir un vial of Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato R1b con una parte de Tampón/Substrato R1a y después transferir todo el contenido a la botella R1a, enjuagando la botella R1b varias veces. Estable durante 14 días entre +2 y+8 C e ó 24 horas entre+15 y +25 C.

COMPOSICION DEL REACTIVO Componentes

Concentración en la Prueba

R1a. Tampón/Substrato Tampón Tris L-alanina

100 mmol/l, pH 7,5 0,6 mol/l

R1b. Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato -oxoglutarato

15 mmol/l

LD NADH

≥1,2 U/ml

0,18 mmol/l

R1 = Bufer/Substrato/Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato R2 = Ninguno MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Substrato Enzima/Coenzima/-oxoglutarato

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) Salino RX series (Cat. No. SA 3854)

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MANUAL AL 1200 PROCEDIMIENTO

INTERFERENCIA

Aspire H 2O de doble destilación y realice una nueva calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo. Seleccione ALT en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

Evitar la hemólisis ya que interfiere con el an álisis.

VALORES DE NORMALIDAD EN SUERO(1) 25 C

30 C

hasta 22 U/l hasta 17 U/l

hasta 29 U/l hasta 22 U/l

Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

Hombres Mujeres

0,05 ml 0,5 ml

Mézclelo y aspírelo en Rx Monza.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.

PARA USO MANUAL

37 C hasta 40 U/l hasta 31 U/l


CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37 ºC.

SENSIBILIDAD Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm (Hg 334 nm o Hg 365 nm) 1 cm de espesor 30/37 C frente al aire

Pipetear en la Cubeta:

Muestra R1. Enzima/Coenzima/-oxoglutarato

Macro

Micro

0,2 ml 2,0 ml

0,1 ml 1,0 ml

Mezclar. Leer la absorbancia inicial después de 1 minuto. Leer de nuevo tras 1, 2 y 3 minutos. Observa r si el cambio de absorbancia por minuto está entre 0,11 y 0,16 a 340 nm/Hg 334 nm 0,06 y 0,08 a Hg 365 nm usar sólo los valores para los 2 primeros minutos del cálculo.

CÁLCULO MANUAL

La concentración detectable mínima de ALT con un nivel aceptable de precisión se determinó en 7,99 U/l.

LINEALIDAD Este método es lineal hasta 500 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + x con u na solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplique el resultado por x + 1.

PRECISION Análisis (Intra) Media (U/l) DE CV(%) n

A A A

340 nm/min Hg 334 nm/min Hg 365 nm/min

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia JSCC TS01 de ALT.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Nivel 3 134 1.59 1.19 20

Nivel 2 38.9 1.78 4.58 20

Nivel 3 134 5.22 3.90 20

Análisis (Inter)

Para calcular la actividad de la ALT utilizar la siguiente fórmula: U/l = 1746 x U/l = 1780 x U/l = 3235 x

Nivel 2 38.9 1.79 4.61 20


CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0,99 X + 17,2 y un coeficiente de correlación r = 0,9935 Se analizaron 47 muestras de pacientes con valores de entre 18 y 522 U/l.

REFERENCIAS 1.

International Federation of Clinical Chemistry, Scientific Committee. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1980; 18: 521-534.

Revisado el 04 Apr 11, bm Rev. 004

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AMONIACO (NH3)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Método Enzimático - UV MANUAL PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Amoníaco en plasma. Este producto es adecuado para su utilización en Manual.

No. Cat. AM 1054 20 x 3 ml

R1a. R1b. R2. CAL.

Reactivo Tampón GLDH Patrón

20 x 3 ml 70 ml 1,0 ml 5,5 ml

RELEVANCIA CLÍNICA La mayor fuente de amoniaco en circulación es el tracto gastrointestinal. En condiciones normales, el amoniaco se metaboliza a la urea por las enzimas hepáticas. Muchas enfermedades, tanto heredadas como adquiridas, causan un incremento en los niveles de amoniaco (hiperamonemia). Las deficiencias heredadas de las enzimas del ciclo de la urea son la mayor causa de hiperamonemia en niños. La hiperamonemia adquirida está provocadas por una enfermedad hepática, insuficiencia renal o el síndrome de Reye. Un nivel de amoniaco elevado resulta tóxico para el sistema nervioso central.

PRINCIPIO(1)

Las soluciones R1b, R2 y CAL contienen azida sódica. Evitar su ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se desheche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si s e desean. Por favor, desechar todos los materials Biológicos y Químicos de acuerdo a las pautas locales.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio ba jo condiciones apropiadas de laboratorio

GLDH

-oxoglutarato + NH 3 + NADH

glutamato + NAD +

El amoníaco se combina con -oxoglutar ato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa ( GLDH) para + formar glutamato y NAD . La correspondiente disminución de la absorbancia a 340 nm es proporcion al a la (1) concentración de amoníaco en plasma.

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Reactivo Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1a con 3 ml de Tampón R1b. Es estable 24 horas entre +15 y +25 C ó 2 días entre +2 y +8 C.

R1b. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8 C.

MUESTRA(2) Plasma heparinizado o EDTA plasma. Se obtiene sangre venosa sin estancar y se conserva en un baño de hielo. El plasma se separa dentro de 30 mi n. El ensayo de amoníaco debería llevarse a cabo inmediatamente. El plasma puede conservarse durante 2 horas a +4 C.


R1a. Reactivo NADH -oxoglutarato

0,16 mmol/l 2 mmol/l

R1b. Tampón Trietanolamina

R2. GLDH CAL. Patrón

GLDH Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8 C.

CAL. Patrón


R2.

0,15 mol/l, pH 8,6 1200 U/ml See lot specific insert

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad especificada cuando se conserva entre +2 y +8 C.

R1 = Reactivo/Tampón R2 = GLDH MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Tampón GLDH Patrón

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS Controles Randox de Amonio Etanol: NIvel 1 (Cat. No. EA 1366) Nivel 2 (Cat. No. EA 1367) Nivel 3 (Cat. No. EA 1368)

MANUAL - AMONIACO - AM 1054

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PROCEDIMIENTO

CÁLCULOS

Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 25/30/37 C Frente al aire

Ablanco

= Blanco A1 - Blanco A 2

Amuestra

= Muestra A1 - Muestra A2

Utilizando un patrón:

Procedimiento Macro

Amuestra - Ablanco Conc. de Amoníaco =

Pipetear en la cubeta: Blanco de Reactivo

Patrón

--0,2 ml --3,0 ml

----0,2 ml 3,0 ml

Muestra Agua destilada Patrón Reactivo (R1)

Muestra

x Patrón de conc. Apatrón

-

Ablanco

INTERFERENCIA La hemólisis interfiere con el análisis.

0,2 ml ----3,0 ml

En muestras normales se observa un pequeño cambio de absorbancia. Esto puede ser aumentado añadiendo 0,3 ml de muestra en vez de 0,2 ml. para el procedimiento macro y 0,15 ml de muestra en vez de 0,1 ml para el procedimiento semi micro.

Mezclar, dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la muestra y del blanco (A 1).

Para utilizar un método completamente automatizado de amoníaco recomendamos No. Cat. AM 1015.

GLDH (R2)

VALORES NORMALES (2)

0,02 ml

0,02 ml

0,02 ml

Amoníaco en plasma:

10 - 47  mol/l 0,17 -0,80  g/ml

Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y del blanco (A 2).

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

Procedimiento Semi Micro Pipetear en la cubeta:

Muestra Agua destilada Patrón Reactivo (R1)

LINEALIDAD

Blanco de Reactivo

Patrón

--0,1 ml --1,5 ml

----0,1 ml 1,5 ml

Muestra

El método es lineal hasta 1180 µmol/l (20 µg/ml).

REFERENCIAS 0,1 ml ----1,5 ml

1. 2.

Dewan J.G., Biochem J., 1938; 32: 1378. Mondzac A., Ehrlich G.E., Seegmiller J.E., J Lab Clin. Med., 1965; 66: 526.

Mezclar, y dejar reposar durante 5 min. Leer la absorbancia inicial de la muestra y del blanco (A 1). GLDH (R2)

0,01 ml

0,01 ml

0,01 ml

Mezclar e incubar durante 5 min. Leer la absorbancia final de la muestra y del blanco (A 2).

CONTROL DE CALIDAD Los controles Randox de Amonio Etanol Nivel 1, Nivel 2 y Nivel 3 se recomiendan para el control diario de calidad Deberían utilizarse como mínimo dos niveles de controles una vez al día. Los valores obtenidos deberían entrar dentro de un rango determinado. Si estos valores se salen de ese rango aun habiéndolo repetido, se deben seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar los ajustes del instrumento y el foco de luz. 2. Comprobar la limpieza de todo el equipo. 3. Comprobar el agua y la presencia del algún posible agente contaminante que pueda interferir en los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y los componentes del mismo. 6. Contactar con el Servicio Técnico de Laboratorios Randox. Irlanda del Norte (028) 94422413.

Revisado el 26 Abril 2010 bm Rev. 001

ANTITROMBINA III (AT III)

RECOGIDA DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN (4)

SEMIAUTOMÁTICO INDICACIONES

Determinación cuantitativa in vitro de la antitrombina III (AT III) en plasma humano mediante el método cromogénico. El producto es adecuado para uso con métodos manuales o semiautomáticos.

Núm. cat. ANT 2754 26 ml

R1a. Reactivo de trombina R1b. Tampón R2. Sustrato

4 x 2 ml 1 x 10 ml 4 x 2 ml

RELEVANCIA CLÍNICA La antitrombina III es un inhibidor de las proteasas plasmáticas del tipo serina. Una función importante de la antitrombina III es inhibir la actividad de la trombina. Por lo general, la velocidad de inhibición de la trombina causada por la antitrombina III es lenta (actividad antitrombina progresiva). Sin embargo, dicha velocidad puede aumentar miles de veces en presencia de heparina (actividad cofactor de la heparina). Tolefsen y Blank (1) han descubierto otro inhibidor rápido de la trombina que depende de la heparina, el cofactor II de la heparina, en el plasma humano. Esta proteína puede interferir en las mediciones de antitrombina III, especialmente a concentraciones de heparina elevadas (2 unidades/ml USP).

PRINCIPIO En este método de dos fases(2) se añade trombina a la solución diluida de plasma que contiene antitrombina III en presencia de exceso de heparina. Tras un período de incubación inicial (fase 1) la actividad residual de la trombina se determina con un sustrato cromogénico específico de la trombina (fase 2). La actividad residual de la trombina es inversamente proporcional a la concentración de antitrombina III. Con el fin de conferir especificidad para la antitrombina III, este sistema de ensayo utiliza un concentración final de heparina más baja, en la cual la inactivación de la trombina aumentada por heparina, debida al cofactor II de la heparina, es desdeñable. Además, el cofactor II de la heparina humana reacciona más fácilmente con la trombina humana que con la bovina(3). Así, este sistema de ensayo presenta mayor especificidad para la antitrombina III al utilizar trombina bovina.

MUESTRA Plasma citrado. Plasma diluido 1+40 en NaCl al 0,9%.

Mezcle nueve partes de sangre recién extraída con una parte de citrato trisódico al 3,2% (0,109 mol/l). Evite la hemólisis y la contaminación de la muestra sanguínea con fluidos corporales. Se deben rechazar las muestras que contengan menos del 90% del volumen previsto de llenado. Centrifugue la sangre durante 15 minutos a 1500 g. Realice el análisis en un lapso de 4 horas, si las muestras se conservan entre 20 y 25°C. Si la prueba no se realiza antes de las 4 horas, el plasma puede mantenerse congelado a -20°C hasta 2 semanas, o a -70°C durante un máximo de 6 meses. Para obtener más detalles sobre la recogida de muestras consulte el documento NCCLS H21-A3. No postergue el mezclado de la sangre con el anticoagulante. Evite la formación de espuma en la muestra. Utilice exclusivamente recipientes de plástico o de vidrio siliconado. Las muestras turbias, ictéricas, lipémicas y hemolizadas pueden generar resultados erróneos. La congelación y consiguiente descongelación de muestras de plasma que contengan células residuales podría generar membranas celulares dañadas que pueden afectar a los resultados. El las muestras de plasma con un hematocrito fuera del intervalo del 20 al 55% puede que la concentración de anticoagulante errónea, por lo que debe ajustarse el anticoagulante según proceda. 

 







COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Contenido


R1a. Reactivo de trombina Trombina bovina liofilizada

8 UI/ml

R1b. Tampón Tampón tris

90 mmol/l, pH 8,2

R2. Sustrato Tosyl-Gly-Pro-Arg-4-nitranilida acetato

2,5 mmol/l

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD Solo para uso diagnóstico in vitro. No pipetee con la boca. Aplique las precauciones habituales necesarias para la manipulación de reactivos de laboratorio. El reactivo tampón de la antitrombina III (R1b) contiene acida sódica. Evite la ingestión o el contacto con la piel o las mucosas. En caso de contacto con la piel, lave el área afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, busque atención médica de inmediato. La acida sódica reacciona con las tuberías de plomo y cobre, con el consiguiente riesgo de generación de acidas explosivas. Al eliminar estos reactivos, hágalo con gran cantidad de agua para evitar la acumulación de acidas. Las superficies expuestas de metal deben limpiase con hidróxido sódico al 10%. Están disponibles, previa petición, las fichas técnicas de salud y seguridad.

Los reactivos deben utilizarse solo para la finalidad prevista y por personal de laboratorio adecuadamente cualificado, en unas condiciones de laboratorio apropiadas. PÁGINA 1 DE 3

MANUAL ANT 2754

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Reactivo de trombina

CÁLCULO DE LOS RESULTADOS

Reconstituya un vial de reactivo de trombina (R1a) con 2 ml de tampón (R1b). Estable durante 2 días entre +15 y +25°C; 14 días entre +2 y +8°C; 30 días a -20°C.

R1b. Tampón

Trace el gráfico de la ∆Abs/min obtenida con cada calibrador de antitrombina III frente al % de antitrombina III correspondiente en papel de escala lineal. La antitrombina III en las muestras de plasma del paciente se puede determinar mediante la interpolación de la curva de calibración.

CONTROL DE CALIDAD

Contenido listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se almacena a una temperatura entre +2 y +8°C.

R2. Sustrato Reconstituya un vial de sustrato (R2) con 2 ml de agua desionizada. Estable durante 8 días entre +15 y +25°C; 14 días entre +2 y +8°C; 90 días a -20°C.

Precaliente las partes alícuotas de reactivo de trombina (R1a) y sustrato (R2) a +37°C antes de utilizarlas. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo de trombina Tampón Sustrato


Se recomiendan los controles de coagulación Randox de nivel 1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Deben analizarse tres niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deben situarse dentro de un intervalo determinado. Si estos valores están fuera del intervalo y la repetición excluye un posible error, debe procederse como sigue: 1. Comprobar los parámetros del instrumento. 2. Comprobar que todo el equipo utilizado esté limpio. 3. Comprobar los contaminantes, como un crecimiento bacteriano, que pueden contribuir a la obtención de resultados imprecisos. 4. Comprobar la temperatura de la reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y su contenido. 6. Póngase en contacto con el servicio técnico de atención al cliente de Randox Laboratories, llamando al teléfono +44 (0) 28 9442 2413 (Irlanda del Norte).

Calibrador de coagulación Randox (N.º cat. CG5037) Controles de coagulación Randox de nivel 1, 2 y 3 (N.º cat. CG5021, CG5022 y CG 5023) Micropipetas Micropuntas Analizador de coagulación foto-óptico Temporizador

VALORES PREVISTOS

PROCEDIMIENTO

INTERFERENCIA

Pipetear en una cubeta Muestra diluida/control/calibrador Reactivo de trombina (R1)

100 µl 100 µl

Mezclar bien e incubar a +37°C durante 3 minutos, añadir sustrato (R2)

100 µl

Mezclar bien y tras 5 segundos leer la absorbancia inicial a 405 nm. Volver a leer la absorbancia transcurridos 30 segundos. Determinar la velocidad de cambio de absorbancia (∆Abs/min)

Siga las instrucciones del fabricante del instrumento para realizar la prueba. CALIBRACIÓN Para la calibración se recomienda el calibrador de coagulación Randox (valor específico de lote). Use salino como calibrador del 0%, con el calibrador de coagulación Randox como 50% y 100%. Se recomienda calibrar cambiando el lote de reactivo o tal como indican los procedimientos de control de calidad.

Los valores normales con el reactivo Randox AT III están comprendidos dentro del 75 y 125%. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia, ya que pueden existir diferencias entre instrumentos, laboratorios y poblaciones locales.

Evite utilizar muestras fuertemente hemolizadas y lipémicas, ya que pueden interferir con el ensayo. Se comprobaron los siguientes analitos, hasta los niveles que se indican, sin encontrar interferencias: Bilirrubina conjugada Bilirrubina libre Intralípidos Triglicéridos Hemoglobina

12 mg/dl 12 mg/dl 300 mg/dl 320 mg/dl 140 mg/dl

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Se han obtenido los siguientes datos de rendimiento mediante un coagulómetro semiautomático a +37ºC.

SENSIBILIDAD La actividad mínima detectable de la antitrombina III se determina como 30,0%.

LINEALIDAD Este método es lineal hasta un 130% de actividad de la antitrombina III. Si la muestra excede este valor, diluya las muestras previamente diluidas (1+40) de plasma aún más 1+1 con salino al 0,9% y repita el análisis. Multiplique el resultado por 2.

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MANUAL ANT 2754

PRECISIÓN Intraensayo Media (%) DE CV (%) n

Normal 102 1.89 1.86 20

Patológica 65,5 2,35 3,59 20

Normal 85.0 1.86 2.19 20

Patológica 59.4 2.24 3.77 20

Interensayo Media (%) DE CV (%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se ha comparado con otro método disponible en el mercado (X) y se ha obtenido la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1,00X + 0,22 y un coeficiente de correlación de 1,00 Se analizaron 40 muestras de pacientes que abarcaron un rango del 38,3 al 113,7%

REFERENCIAS 1. Tolefsen DM and Blank MK, J. Clin. Invest. 68: 589-596, 1981. 2. Odegard OR, Lie M and Abildgaard U: Thromb Res. 6: 287-294, 1975. 3. Friberger P, Egberg N, Holmer E, Hellgren M and Blomback M, Thromb. Res. 25: 433-436, 1982. 4. Rosemary Biggs, Human blood Coagulation, Haemostasis and Thrombosis, Blackwell Scientific Publications, Oxford, England, 1972.

Revisado 25 may 12 rw Rev. 002

PÁGINA 3 DE 3

ALP

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón

Fosfatasa Alcalina MANUAL RX MONZA

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C.

PARA SU USO

R1b. Substrato

Para el análisis cuantitativo in vitro de la Fosfatasa Alcalina (ALP) en suero yl plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

No. Cat. AP 542 20 x 3 ml

R1a. Tampón R1b. Substrato

1 x 70 ml 20 x 3 ml

AP 307 10 x 10 ml


1 x 105 ml 10 x 10 ml

METODO COLORIMETRICO (1) Este es una método estándar optimizado de acuerdo a las recomendaciones del Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie.

PRINCIPIO

Reconstituir un frasco de Substrato R1b con el volumen apropiado de Tampón R1a:3 ml para el kit de 20 x 3 ml (AP 542) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AP 307) Estable durante 30 días entre +2 y +8 C ó 3 días entre +15 y +25 C.

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Substrato

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351). Salino  (Cat. No. SA 3854)

ALP

p-nitrofenilfosfato + H 2O

fosfato + p-nitrofenol

MUESTRA(2) Suero o plasma heparinizado. Las muestras son estables durante 5 días cuan do se conservan entre +2 y +8 C.

R1a.

R1b.

Concentraciones en la Prueba

Tampón Tampón Dietanolamina MgCl2

Substrato

p-nitrofenilfosfato

Aspire H2O de doble destilación y realice una nueva calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo. Seleccione ALP en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo:


PROCEDIMIENTO

1 mol/l, pH 9,8 0,5 mmol/l 10 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. La Solución R1a contiene dietanolamina que puede dañar seriamente los ojos y que es dañino si se traga. Evitar la ingestión y llevar protección adecuada para los ojos. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.


Muestra Reactivo

0,01 ml 0,5 ml



Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición: Pipetear en la cubeta:

Muestra Reactivo (25 C, 30 C, 37 C)

Hg 405 nm 1 cm de espesor 25 C, 30 C, 37 C frente al aire Macro

SemiMicro

Micro

0,05 ml 3,00 ml

0,02 ml 1,00 ml

0,01 ml 0,50 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 minutos.

MANUAL / RX MONZA - ALP - FOSFATASA ALCALINA - AP542 / AP 307 MANUAL CALCULO

PRECISION

Utilizar la siguiente formula para calcular la actividad de ALP: U/l = 3300 x U/l = 2760 x U/l = 2760 x

Análisis Intra

A 405 nm/min MACRO A 405 nm/min SEMI-MICRO A 405 nm/min MICRO


CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte (028) 94422413 .

INTERFERENCIA Evitar la hemólisis ya que interfiere con el aná lisis. Los siguientes analitos se analizaron hasta los sigu ientes niveles y se encontró que no interfieren: Bilirrubina Intralípidos® Triglicéridos Hemoglobina

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300 mol/l (17 mg/dl) 2% 22,75 mmol/l (2010 mg/dl) 1 g/l (100 mg/dl)

Nivel 2 262 8.11 3.10 20

Nivel 3 486 9.49 1.95 20

Nivel 2 262 11.59 4.43 20

Nivel 3 486 17.01 3.50 20

Análisis Inter Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELATION Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.076X - 14.5 y un coeficiente de correlación de r = 0.9975

se hicieron análisis a 43 pacientes abarcando un rango de 52 a 965 U/l.

REFERENCIAS 1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1972; 10: 182. 2. Englehardt A., et al , Aerztl Labor 1970 16 42.

VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO 25 C Hombres/Mujeres 60-170 U/l

30 C

37 C

73-207 U/l

98-279 U/l


CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Los siguientes datos de rendimiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de ALP con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 49,9 U/l

LINEALIDAD El método es lineal hasta 1609 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 9 con una solución del 0,9% de NaCI y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplicar el resultado por 10. Revisado el 10 Sep 2010 bm Rev. 001

AST

EXTRACCION Y PREPARACION DE MUESTRAS (5) Suero:Plasma:-

Aspartato Aminotransferasa IFCC MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de aspartato aminotransferasa (AST) en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador R x Monza.

Cat. No. AS 1202 20 x 2 ml

R1a. R1b.

AS 1204 10 x 10 ml

R1a R1b

Tampón/Sustrato Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato

1 x 70 ml 20 x 2 ml


1 x 105 ml 10 x 10 ml

AS 1267 5 x 20 ml

R1a R1b


1 x 105 ml 5 x 20 ml

AS 2359 5 x 100 ml

R1a R1b


5 x 100 ml 5 x 100 ml

METODO UV Este es un método estándar optimizado segú n las concentraciones recomendadas por la IFCC.

SIGNIFICADO CLINICO(1,2,3,4) Las aminotransferasas son un grupo de enzimas que catalizan las inter conversiones de aminoácidos y -oxoácidos por medio de la transferencia de grupos amino. La GOT (aspartato aminotransferasa o transaminasa de oxaloacetato glutamato) se ha encontrado en el citoplasma y mitocondrias de las células estudiadas. En caso de un ligero daño del tejido como por ej. el hígado, la forma predominante de la GOT en suero es la del citoplasma, con una cantidad más pequeña proviniente de las mitocondrias. Un daño más severo del tejido d ará como resultado una mayor liberación de enzima mitocondrial. L os niveles elevados de AST pueden ser una señal de infarto de miocardio, enfermedad hepática, distrofia muscular y daño de órganos. Los músculos del corazón son los que muestran más actividad de ésta enzima, sin embargo también se ha encontrado en el cerebro, hígado, mucosa gástrica, tejido adiposo y riñones humanos. La IFCC recomienda actualmente (1980) procedimientos estandarizados para los análisis de GOT incluyendo:1. optimización de las concentraciones de substrato. 2. Empleo de tampones Tris (en lugar de fosfato, el cual se ha demostrado que inhibe la recombinación de la apoenzima con el fosfato piridoxal). 3. Preincubación de suero y tampón combinado para permitir que tengan lugar posibles reacciones con NADH. 4. Substrato de inicio (-oxoglutarato) 5. Activación de fosfato piridoxal opcional. Este es un método estándar optimizado de acuerdo a las recomendaciones de la IFCC.

PRINCIPIO El -oxoglutarato reacciona con la L-aspartato en presencia de GOT para formar L-glutamato mas oxaloacetato. La reacción indicadora utiliza el oxaloacetato para la determinación cinética del consumo de NADH. AST

-oxoglutarato

+ L-aspartato

L-glutamato + oxaloacetato MDH

oxaloacetato + NADH + H +

L-malato + NAD +

Use serum free from hemolysis. Se puede utilizar EDTA o heparina como anticoagulante. El plasma se degerá separar de las células durante la hora siguiente a su extracción. Las muestras se deberán refrigerar si no se utilizan inmediatamente:Las muestras que se almacenen durante más de 3 días se deberán congelar a -20 C.


R1a. R1b.


Tampón/Sustrato Tampón Tris L-aspartato

Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato -oxoglutarato

MDH LD NADH

80 mmol/l, pH 7,5 240 mmol/l 12 mmol/l ≥ 420 U/l ≥ 600 U/l 0,18 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La Azida Sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas explosivas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359 ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón/Sustrato Listo para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8 C.

R1b. Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato Reconstituir un vial de Enzima/Coenzima/ -oxoglutarato 2 con el volumen adecuado de Tampón/Sustrato 1: 2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AS1202) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (AS1204) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (AS1267) Es estable durante 14 días conservado entre +2 y +8 C ó 24 horas entre +15 y +25 C

Cat. No. AS 2359 5 x 100 ml

Disolver el contenido de una botella de Enzima/ Coenzima/-oxoglutarato 2 con un pequeño volumen de Tampón/Sustrato 1 y luego transferir el contenido a la botella 1, enjuagando varias veces la botella 2. Es estable durante 14 días cuando se conserva entre +2 y +8 oC ó 24 horas entre +15 y +25 oC.

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Sustrato Enzima/Coenzima/-oxoglutarato

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) Salino  (Cat. No. SA 3854)

PROCEDIMIENTO Aspire H 2O de doble destilación y realice una nueva calibración de la ganancia en el modo de célula de flujo. S eleccione AST en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

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MANUAL CALCULOS Para calcular la actividad de la GOT utilizar las fórmulas siguientes: U/l = 1746 x U/l = 1780 x U/l = 3235 x

A

340 nm/min Hg 334 nm/min A Hg 365 nm/min A

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia JSCC TS01 de AST.


ESPECIFICIDAD/INTERFERENCIA(6,7) La hemólisis bruta producirá falsos resultados elevados. Se deberá tomar en consideración los efectos de varios fármacos en la actividad de La GOT en los casos de pacientes que estén recibiendo grandes dosis de fármacos. Los siguientes analitos se analizaron hasta los sigu ientes niveles y se encontró que no interfieren: Hemoglobina Bilirrubina libre Bilirrubina conjugada Triglicéridos Intralipid®

0.05 ml 0.5 ml

Mix and aspirate into the Rx Monza.

250 mg/dl 25 mg/dl) 25 mg/dl) 1000 mg/dl) 200 mg/dl

Se recomienda el uso de suero fisiológico y suero de calibración de nivel 3 de Randox para la calibración. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.

Young et cols y Friedman et cols dan una lista de sustancias y condiciones que se conoce que afectan a la actividad in vivo de La GOT . La integridad de esta lista y la exactitud de la información que en ella se suministra no representa necesariamente la opinión de Randox Laboratories, Ltd.

PARA USO MANUAL

VALORES NORMALES EN SUERO(8,9)



340 nm (Hg 334 nm ó Hg 365 nm) 1 cm de espesor 25/30/37 C Frente al aire

Pipetear en cubeta:

Macro

Micro

Muestra Enzima/Coenzima/-oxoglutarato 2

0,2 ml 2,0 ml

0,1 ml 1,0 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial al cabo de 1 min. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min. Observar si la variación de la absorbancia por minuto se sitúa entre 0,11 y 0,16 a 340/Hg 334 nm 0,06 y 0,08 a Hg 365 nm para el cálculo usar sólo los valores obtenidos durante los 2 primeros minutos.

25 C Hombre: Mujer :

Hasta 18 U/l Hasta 15 U/l

30 C

37 C




CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37 oC.

MANUAL/RX MONZA - AST - AS 1202/ AS 1204/ AS 1267/ AS 2359

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LINEALIDAD Este método es lineal hasta una concentración de 562 U/l. Si la concentración sobrepasa este valor, la muestra se debe diluir 1 + 9 con una solución de NaC l del 0,9% y debe someterse a ensayo de nuevo. Multiplicar el resultado por 10.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de AST con un nivel aceptable de precisión se determinó en 9,3 U/l.


Nivel 2 35.6 1.66 4.65 20

Nivel 3 153 1.47 4.63 20

Nivel 2 35.6 1.77 4.86 20

Nivel 3 153 7.10 4.63 20

Análisis (Inter) Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELATION Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuació n de regresión lineal: Y = 1.07X + 4.9 y un coeficiente de correlación de r = 0.9975 se hicieron análisis a 43 pacientes abarcando un rango de 28 a 559 U/l.

REFERENCIAS 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

Wroblewski F, La Due J.S: Ann Intern Med. 1956; 45: 801. Wroblewski F, La Due J.S: Proc Soc Exp Biol Med 1956; 91: 569. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al : Clin Chem 1977; 23: 887. Bergmeyer HU, Bowers GN Jr, et al : J.Clin Chem Clin Biochem 1980; 18: 521-534. Tietz N W: Fundamentals of Clinical Chemistry ed 3. Philadelphia, WB Saunders Co. 1987, pg 372. Young D S, et al : Clin Chem 1975, 21; No5. Friedman RB, et al : Clin Chem 1980, 26; No4. Wallnofer H, Schmidt.E, Schmidt FW, eds: Synopsis der Leberkrankheiten Stuttgart, Georg Thieme Verlag, 1974. Thefeld W, et al : Dtsch Med Wschr 1974; 99: 343.


AMILASA (AMY)


Etilideno Bloqueado-pNPG7 MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de la Amilasa en el suero y orina. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.

No. Cat. AY 2751 20 x 2 ml


1 x 50 ml 20 x 2 ml

AY 1580 20 x 5 ml


1 x 105 ml 20 x 5 ml

AY 1582 9 x 20 ml


2 x 105 ml 9 x 20 ml

METODO COLORIMETRICO (1,2) El método utiliza etilideno bloqueado p-nitrofenil-maltoeptaosida como substrato. También se utiliza en este método el indicador enzima glucosidasa, utilizado para liberar el p-nitrofenol. La glucosa terminal del sustrato se bloquea químicamente, previniendo la división por el enzima indicador. -amilasa

etilideno-G7 pNP

etilideno -Gx + Gx-pNP

La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles.

Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO Reconstituir el contenido de un frasco de Substrato R1b con el volumen apropiado de Tampón R1a:2 ml para el kit de 20 x 2 ml (AY 2751) 5 ml para el kit de 20 x 5 ml (AY 1580) 20 ml para el kit de 9 x 20 ml (AY 1582) Estable durante 21 días entre +2 y + 8oC.


-glucosidase

Gx-pNP

La Solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

glucosa + pNP-glucosido

Tampón Substrato

- glucosidasa

pNP-glucosido G pNP x

glucosa + pNP

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS

= glucosa = paranitrofenol = 2 to 5

Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Suero de Calibración Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351).

MUESTRA

NOTA

Suero, plasma heparinizado u orina. Diluir la orina 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 3.

Evitar la hemólisis ya que puede disminuir los resultados. Evitar la contaminación del reactivo, muestras y material de cristal por medio de la saliva o sudor, dado que poseen altos contenidos de amilasa. No pipetear con la boca.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO

PROCEDIMIENTO Componentes

Concentración Inicial de los Reactivos

R1a. Tampón Tampón Pipes Cloruro de Calcio Cloruro Sódico

R1b. Substrato

Tampón Pipes etilideno-G7 pNP -glucosidasa

50 mmol/l, pH 7.0 5.0 mmol/l 50 mmol/l 12.5 mmol/l, pH 7.0 1.0 mmol/l

Seleccione AMY en la pantalla de prueba de funcionamiento y lleve a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetee en un tubo de ensayo: Muestra Reactivo

0.01 ml 0.5 ml

Mezclar y aspirar en el Monza RX

≥12 U/ml

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de Calibración Randox nivel 3 para la calibración. Se recomienda calibrar cada cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.

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MANUAL/ RX MONZA AY 2751 PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

SENSIBILIDAD 405 nm (400-420 nm) 1 cm de espesor 37 C frente al aire 

La concentración mínima detectable de la amilasa con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada en 17.9 U/l.

PRECISION Intraensayo

Pipetee en una cubeta: Muestra Reactivo

0.02 ml 1.0 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial después de 60 segundos y al mismo tiempo iniciar el temporizador. Leer de nuevo pasados 1, 2 y 3 minutos.

CÁLCULO MANUAL Para calcular la actividad de la amilasa utilizar la siguiente fórmula: U/l = 4712 x A 405 nm/min

NORMALIZACIÓN El suero de Calibración Randox nivel 3 es trazable a los materiales de referencia amilasa IFCC456 y BCR476.

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Media (U/l) DE CV (%) n

Nivel 2 72.1 3.17 4.39 20

Nivel 3 251 7.35 2.93 20

Nivel 2 72.1 3.97 5.50 20

Nivel 3 251 8.81 3.51 20

Interensayo Media (U/l) DE CV (%) n

CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.077 X - 8.548 con un coeficiente de correlación r = 0.9963 se analizaron 49 muestras de pacientes abarcando un rango de 28 - 838 U/l.

REFERENCIAS 1. 2.

Ranscher, E. et al (1986) Fresenius Z. Analyt. Chem. 324: 304. Kruse - Jarres, J.D. et al (1989). J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 27: 103.

VALORES NORMALES Suero: Orina:

hasta 95 U / l (37°C) Aleatorias hasta 490 U / l (37°C) 24 horas de orina hasta 450 U/24 horas (37°C)

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar las diferencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica.

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de Rx Monza en el modo de flujo de células a 37 C.

LINEARIDAD El método es lineal hasta una concentración de 880 U / l. Diluir las muestras con mayor concentración en 1 + 9 con 0,9% de Solución NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 10. Revised 14 Sep 10 bm Rev. 001

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CALCIO (Ca)

PREPARACION DE LOS REACTIVOS DE TRABAJO Y ESTABILIDAD

Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA

Mezclar volúmenes iguales de las soluciones R1 y R2 en cantidad suficiente para el número de muestras que se vayan a ensayar. Estable durante 7 días cuando se conserve entre +2 y +8°C ó 3 días entre +15 y +25°C.

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Calcio en el suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza.

No. Cat. CA 590 200 ml

CAL. R1. R2. R3.

Patrón Tampón Cromógeno EDTA

5.5 ml 1 x 100 ml 1 x 100 ml 10 ml

METODO COLORIMETRICO (1)

MATERIALES SUMINISTRADOS Patrón Tampón Cromógeno EDTA

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

O-cresolftaleína complexona sin desproteinización.

PROCEDIMIENTO DE NOTA

PRINCIPIO

Si la muestra tiene un color fuerte intrínseca (hemoglobina: > 200 mg/dl, bilirrubina> 20 mg/dl, o lipemia marcada), un blanco de muestra se debe ejecutar. (Ver abajo)

Los iones calcio forman un complejo violeta con la o-cresolftaleína complexona en medio alcalino.

Suero, plasma heparinizado u orina. Diluir la orina 1 + 1 en NaCl 0,9%. Multiplicar el resultado por 2.

Esta prueba es muy sensible, por lo tanto el uso de material desechable es aconsejable. Recipientes de vidrio deberán lavarse con ácido clorhídrico diluido y luego enjuagar con agua destilada antes de su uso.


PROCEDIMIENTO

MUESTRA

Componentes

Concentraciones iniciales de las soluciones

Pipetear en la cubeta:

CAL. Patrón R1. R2.

R3.

Calcio

Tampón

Seleccione Calcio CPC en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

Vedi inserto lotto-specifico

2-amino-2-metilpropan-1-ol

Cromógeno

o-Cresolftaleína complexona 8-hidroxiquinolina Acido clorhídrico

EDTA

3.5 mol/l, pH 10,7 0,16 mmol/l 6,89 mmol/l 60 mmol/l 150 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.


ddH20 Muestra Patrón Reactivo

Blanco de reactivo S0

Patrón S1

Muestra

12.5 µl 500 µl

12.5 µl 500 µl

12.5 µl 500 µl

Mezclar, incubar por 5 min a +25, +30 o +37 C Inserte la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse Leer. 

Para ejecutar un blanco de muestra: Después de medir la absorbancia de la muestra de acuerdo con el procedimiento de ensayo, añadir una gota de solución R3 (EDTA) a la muestra y la solución del reactivo. Cuando las muestras han convertido incoloro (después de aproximadamente 10 segundos) insertar la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse leer. Este resultado debe ser manualmente resta de la muestra para obtener el valor corregido de calcio.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendó el uso de CAL Patrón p roporcionado en el kit. La calibración se recomienda con un cambio en la cantidad de reactivo o como se indica por procudures de control de calidad.

PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD Todas las soluciones están listas para su uso. Mantener las botellas cerradas después de utilizarlas. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C.

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MANUAL/ RX MONZA CA 590 CONTROL DE CALIDAD

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Espectrofotómetro: Cubeta: Medición:

Hg 578 nm (550-590 nm) 570 nm 1 cm de espesor frente a blanco de reactivo sólo se requiere un blanco por serie +20 y +25°C/+37°C

Temperatura:

1. Para ensayos individuales Pipetear en tubos de ensayo:

Muestra Agua destilada CAL Solución R1 Solución R2

Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

--25 µl --0,5 ml 0,5 ml

----25 µl 0,5 ml 0,5 ml

25 µl ----0,5 ml 0,5 ml

Mezclar, leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco al cabo de 5 a 50 min.

2. Para ensayos en serie

Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

--25 µl --1,0 ml

----25 µl 1,0 ml

25 µl ----1,0 ml

Para ejecutar un blanco de muestra: Después de medir la absorbancia de la muestra de acuerdo con el procedimiento de ensayo, añadir una gota de solución R3 (EDTA) a la muestra y la solución del reactivo. Cuando las muestras han convertido incoloro (después de aproximadamente 10 segundos) insertar la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse leer. Este resultado debe ser manualmente resta de la muestra para obtener el valor corregido de calcio.

Bilirrubina Intralipid® Triglicérido Hemoglobina

500  mol/l (29 mg/dl) 2% 22,75 mmol/l (2010 mg/dl) 6 g/l (600 mg/dl)

Gadodiamida (OMNISCAN: se utiliza en la RM) interfiere con el calcio sérico causando que los niveles bajos (3). 2,02 -2,60 mmol/l (8,10-10,4 mg/dl) 2,5 -6,2 mmol/24hrs (100 - 249 mg/24 hrs)


CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza en el modo de cubeta a +37ºC.

SUERO LINEALIDAD El método es lineal hasta 5,67 mmol / l (22,7 mg/dl). Las muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 +1 con el 0,9% de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado por 2.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de calcio con un nivel aceptable de precisión se determinó como 1,16 mg/dl (0,290 mmol/l).

PRECISION Intra Assay

CALCULOS Amuestra Apatrón

x Concentración del patrón (mmol/l)

Mean (mg/dl) SD CV(%) n

x Concentración del patrón (mg/dl)

Inter Assay

Amuestra Concentración = (mg/dl)

Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren:

Suero: Orina:

Mezclar, leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco al cabo de 5 a 50 min. Aunque la absorbancia se puede leer durante los 5 a 50 minutos siguientes, el tiempo de intervalo desde la adición de la muestra a la lectura deberá ser exactamente el mismo para el Patrón/Control y Muestra.

Concentración = (mmol/l)

INTERFERENCIA/LIMITACIONES

VALORES NORMALES(2)


Muestra Agua destilada Patrón Reactivo de trabajo

Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

Apatrón

STANDARDISATION Randox Calibration Serum Level 3 is traceable to Calcium reference material NIST 909b and NIST 956b.

Mean (mg/dl) SD CV(%) n

Nivel 1 9.02 0.220 2.44 20

Nivel 2 12.4 0.249 2.01 20

Nivel 1 9.02 0.352 3.91 20

Nivel 2 12.4 0.317 2.56 20

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MANUAL/ RX MONZA CA 590 CORRELACION Este método (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y=0.9914 X -0.089 con un coeficiente de correlación r = 0.9931 Se analizaron 42 muestras con valores de entre 4,1 y 16,5 mg/dl.

ORINA LINEALIDAD El método es lineal hasta 7,13 mmol / l (28,6 mg / dl). Las muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 +1 con el 0,9% de NaCl y volver a ensayar, multiplicar el resultado por 2.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de calcio con un nivel aceptable de precisión se determinó como 1,29 mg/dl (0,321 mmol/l).

REFERENCIAS 1. Ray Sarkar,B.C., and U.P.S. Chauhan., Anal Biochem. 1967; 20: 155. 2. Barnett, R.N., et al . (1973) Amer. J. Clin. Path. 59: 836. 3. Prince et al , Radiology 2003; 227: 639-646

Revisado 17 nov 11 rw Rev. 002

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CALCIO (Ca)


ARSENAZO III Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA


PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Calcio en suero, plasma u orina. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza.

No. Cat. CA 2390

R1. Reactivo Arsenazo

6 x 100 ml

Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS

SIGNIFICADO CLINICO (1) El calcio es el quinto elemento más abundante en el cuerpo. La mayor parte del calcio en el adulto humano es extracelular y el 99% existe como hidroxiapatita cristalina en los huesos y los dientes donde confiere rigidez. El calcio en el suero existe en tres formas: unido a proteínas (45%); ionizado (45%) y un 10% forma un complejo con pequeños ligantes difusibles tales como citrato, lactato, fosfato y bicarbonato. El calcio juega un papel importante en los mecanismos de transmisión del impulso nervioso, la contracción muscular y la coagulación sanguínea. El calcio también participa en la regulación de la actividad de la adenilato ciclasa y fosfodiesterasa a través de la combinación reversible con la calmodulina. La secreción de las glándulas paratiroides, células tiroideas C y las células p ancreáticas B está controlada por la concentración de calcio ion izado extracelular en la superficie celular. Los niveles elevados de calcio en suero se encuentran en los casos de hiperparatiroidismo, los carcinomas, sobredosis de vitamina D y son de valor diagnóstico en la detección de la enfermedad renal crónica y enfermedad pancreática aguda. Los bajos niveles de calcio sérico se asocian con h ipoparatiroidismo, deficiencia de vitamina D y la insuficiencia ren al.

PRINCIPIO Arsenazo III se une específicamente al calcio f ormando un complejo coloreado que puede medirse a 650 nm. Ca++ + Arsenazo III

Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautes locales.

Complejo Coloreado

Reactivo listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25 C. 

MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Arsenazo

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Pipetear el dispositivo para suministrar 5 µl y 1 ml. Sincronizar el dispositivo y el lavado de agua o el bloque calefactor para mantener la temperatura a 25, 30 ó 37 C. Espectrofotómetro con capacidad de longitud de onda de 640 a 660 nm. 

Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Suero de Calibración Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351).

PROCEDIMIENTO Seleccione Ca en la pantalla Ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo/ S0

Patrón S1

Muestra

7.5  l 500  l

7.5  l 500  l

7.5  l 500  l

ddH2O Muestra Calibrador Reactivo

La cantidad de calcio presente en la muestra es directamente proporcional a la intensidad del complejo coloreado.

Mezclar, incubar por 5 min a 25ºC, 30ºC o 37ºC. Inserte la cubeta en el soporte de la célula de flujo del Rx Monza y pulse Leer.

MUESTRA(4)

PARA USO MANUAL

Suero/Plasma: (Lithium heparinzed)

NO USAR oxalato sódico, EDTA fluoruro sódico como anticoagulantes, ya que interfieren. El suero es estable durante 8 horas a temperatura ambiente o 24 horas cuando se conservan entre +2 y +8 C Se recomienda realizar un ensayo sobre la orina dentro de las dos horas posteriores a la recolección. 

Orina:


Concentración Inicial de las soluciones

R1. Reactivo Arsenazo III Acetato Sódico Arsenazo Estabilizadores No reactivos

54.2 mmol/l, pH 5.9 approx. 250  mol/l

Longitud de onda: Cubeta: Temperatura Medición:

650 nm (640 nm - 660 nm) 1 cm light path 25/30/37 C against air 

Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo Agua destilada Muestra Calibrador Reactivo 1

15  l 1.0 ml

Calibrador

Muestra

15  l 1.0 ml

15  l 1.0 ml

Mezclar y leer la absorbencia de la muestra (Amuestra) y calibrador (Acalibrador) contra el blanco de reactivo después de 5 minutos.

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MANUAL/ RX MONZA CA 2390 CÁLCULO MANUAL

PRECISION Precisión Dentro del Análisis

Amuestra Concentración =

──────

x calibrador de valor

Acalibrador

CALIBRACIÓN Se recomienda el uso de solución salina y Suero de Calibración Randox Nivel 3 para la calibración. La calibración calibración se recomienda en los cambios de lote del reactivo o como como se indica en los procedimientos de control de calidad.

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3. Se deberá de analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación programación del instrumento instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación contaminación ej. el crecimiento crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los r esultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto contacto con el Soporte Técnico Técn ico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte Nor te +00 44 28 28 94422413. (5) INTERFERENCIAS / LIMITACIONES (5)

Gadodiamida (OMNISCAN: usado en el RM i magin) interfiere con el calcio sérico causando niveles bajos.

VALORES NORMALES(3) Suero: Orina:

2.02 - 2.60 mmol/l ( 8.10 - 10.4 mg/dl ) 2.5 - 6.2 mmol/24 hrs (100 - 249 mg/24 hrs)

Se recomienda que cada laboratorio establezca establezc a su propio rango de referencia para considerar las diferencias e n edad, sexo, dieta y localización geográfica.

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador Rx Monza funcionando a una temperatura de 37ºC.

Muestra Media (mg/dl) DE CV (%) n

Nivel 2 10.1 0.337 3.34 20

Nivel 3 12.8 0.392 3.07 20

Nivel 2 10.1 0.424 4.20 20

Nivel 3 12.8 0.371 2.90 20

Precisión Total Muestra Media (mg/dl) DE CV (%) n

METHOD COMPARISON El método Randox (Y) se comparó con un método alternativo disponible comercialmente (X). Cuarenta muestras de los pacientes con valores que abarca el rango de 1,7 a 12.1mg/dl se pusieron a prueba. El análisis de regresión lineal resultó en la siguiente ecuación: Y = 0.961 X + 0.4 con un coeficiente de correlación r = 0.9929

ORINA LINEARIDAD Este método es lineal line al hasta 14,5 mg / dl. Diluir las muestras por encima de esta concentración conc entración a 1+1 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique Multi plique el resultado por 2.

SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable dete ctable de calcio con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada de terminada como 0,78 mg / dl.

REFERENCIAS 1. Tietz, N.W., Fundamentals Fundamentals of Clinical Chemistry 2 nd Edition W.B. Saunders Co., Co., Philadelphia (1976) 2. Michaylova, V., and IIIkova, P., Anal Chem Acta, 53: 194 (1971). 3. Barnett, R.N., et al . (1973) Amer. J. Clin. Path. 59: 836. 4. Young, D. Pestaner L., Clin Chem. 21: 5 (1975). 5. Prince et al , Radiology 2003; 227: 639-646.

SUERO LINEALIDAD Este método es lineal hasta 14,4 mg / dl. Diluir las muestras por encima de esta concentración a 1 +1 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 2.

SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable de calcio con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada como 0,54 mg / dl.

Revised 17 Nov 11 bm Rev. 002

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CO2 TOTAL (CO2)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Y CONSEJOS Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para la manipulación de reactivos de laboratorio.

340 nm Manual

PARA SU USO Determinación cuantitativa in vitro de dióxido de carbono en suero y plasma. Este producto es adecuado adecuado para su utilización en Manual.

La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua durante 10 minutos. En caso de contacto contacto con los ojos ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

No. Cat. CD 127 10 x 10 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo CO2 CAL. Standard

1 x 105 ml 10 x 10 ml 1 x 5.5 ml

CD 129 10 x 50 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo CO2 CAL. Standard

10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLÍNICO (1) El incremento de CO2 sanguíneo (hipercapnia) provoca una acidosis respiratoria. El CO2 aumenta cuando la ventilación alveolar está disminuida en patologías pulmonares o bronquiales, o también al respirar aire con niveles elevados de CO 2. La depresión de la capacidad pulmonar total provocada por algunos medicamentos puede conllevar una retención de retención de CO2.

La azida sódica reacciona con el plomo y el cobre de las cañerías, formando azidas potencialmente explosivas. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de azidas. Las superfcies metálicas expuestas deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas sanitarias y de seguridad disponibles previa solicitud.

Los reactivos deben ser utilizados solamente para su propósito por personal de laboratorio cualificado y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE REACTIVOS R1a. Tampón Tampón Listo para para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad caducidad cuando se se conserva entre +2 y +8oC.

PRINCIPIO(2,3) PEPC

Fosfoenolpiruvato + HCO3-

oxaloacetato oxaloacetato + H2P04MDH

oxaloacetato + NADH + H+

malato malato + NAD+

La disminución de la absorbancia a 340 nm provocada provocada por la oxidación del NADH es directamente proporcional propor cional a la concentración de bicarbonato en la muestra.

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS MUESTRAS(4) Suero o plasma heparinizado. No deben usarse como an ticoagulantes EDTA, oxalato ó citrato, ya que podrían afectar a los resultados. Sumergir la muestra en hielo y analizarla en la hora qu e sigue. Las muestras se deberán conservar cerradas herméticamente, ya que el CO2 se difunde de la muestra, causando valores erróneos (hasta 6 mmol/hr)

COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS Contents

Concentration in the Test

R1a. Tampón Tampón Tris

25 mmol/l, pH 6.5

R1b. Reactivo CO2 Fosfoenolpiruvato (PEP) 6.3 mmol/l NADH 0.45 mmol/l Fosfoenolpiruvato Carboxilasa (PEPC) 200 U/l Malato Deshidrogenasa (MDH) 600 U/l Mg2+ 8.0 mmol/l CAL. Patrón Vedi inserto lotto-specifico

R1b.

Reactivo Reactivo CO2 CD 127 Reconstituir 1 vial de CO2 R1b con 10 ml de tampón Reconstituir R1a. Estable Estable durante 15 días entre +2 y +8 C, en su frasco original original sellado, 70 horas entre +2 y +8 C o 25 horas entre entre +15 y +25 C expuesto a la atmósfera cuando se se almacena en el recipiente original o en un recipiente recipient e con un cuello estrecho. Véase la nota 4. 





CD 129 Reconstituir el contenido de un vial de CO2 R1b con Reconstituir una parte parte de tampón R1a. Transferir todo el contenido de la botella de tampón 1, enjuagando el vial 2 varias veces. Estable durante 15 días entre +2 y +8 C, en su frasco original sellado, 70 horas entre +2 y +8 C o 25 horas entre +15 y +25 C expuesto a la atmósfera cuando está en su envase original o en en un recipiente con un cuello estrecho. Véase la nota 4. 





NOTA: No agitar el reactivo cuando se reconstituya, ya que esto puede causar una absorción de CO2 excesiva. Es suficiente con invertir el frasco con cuidado una vez.

CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8oC.

MATERIAL SUMINISTRADO Tampón Reactivo CO2 Patrón

MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO Randox Assayed Multisera, Nivel 2, No. Cat. HN1530 y Nivel 3, No. Cat. HE1532.

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MANUAL CD 127 NOTAS DE PROCEDIMIENTO

SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN(4)

1. Para permitir que el reactivo para alcanzar el equilibrio, se recomienda que se reconstituye preferiblemente la noche antes, pero por lo menos 4 horas antes de su uso. El reactivo es entonces estable durante 15 días entre +2 y +8 C en su vial original sellado o 70 horas entre +2 y +8 C expuesto a la atmósfera. 2. No exponer el reactivo al aire más más de lo necesario y almacenarlo cerrado herméticamente. 3. No pipetear con la boca. 4. No agitar el reactivo vigorosamente ya que se podría producir una absorción excesiva de CO2 .

La mayor interferencia en este ensayo la constituye el CO2 del aire o del aliento aliento del analista. Existen otros medicamentos y sustancias que modifican los niveles de CO2 sanguíneo. La hemoglobina no afecta en el ensayo hasta una concentración de 2 g/l.





VALORES NORMALES EN SUERO(5) Adultos : Arterial Venoso

Arterial

Recién nacidos Niños pequeños

21 - 28 mmol/l 22 -29 mmol/l 17,2 -23,6 mmol/l 19,0 -23,9 mmol/l

PROCEDIMIENTO Longitud de onda: Cuveta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 37 C frente a agua destilada 


Muestra Agua bidestilada Patrón Reactivo

Test

Blanco

Patrón

5  l --1000  l

-5  l -1000 1000  l

--5  l 1000  l

Incubar durante 5 min. a 37oC y medir la absorbancia absorbancia del patrón (Apatrón), de la muestra (A muestra), y del reactivo reactivo blanco (Ablanco).

CACULO  Amuestra = Ablanco - Amuestra  Amuestra CO2 Total = ──── x conc. de patrón (mmol/l)  Apatrón

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para referirse a la edad, el sexo, la dieta y la situación geográfica de la población.

LINEALIDAD Este método es lineal lineal hasta una concentración de 50 mmol/l. Las muestras con concentraciones superiores deberán diluirse 1+1 con solución NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 2.

SENSIBILIDAD Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango se sensibilidad, ya que que está limitada por el espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones condiciones del análisis, un cambio de la absorbancia de 0,001 0,001 unidades es equivalente a 0,8 mmol/l.

REFERENCIAS 1. Tietz, N. N., et al "Textbook "Textbook of Clinical Chemistry" W. B. Saunders Co., 1986; 1986; 1172-1253. 2. Jacobs, N., et al "Laboratory "Laboratory Test Handbook" 2nd. ed., Williams and Wilkins Wilkins 1990. 3. Forrester, R.L., Wataji, L.J., Silverman, D.A., Pierre K.J., Clin, Chem. 1976; 22/2 22/2: 243-245. 4. Young D.S., Effects Effects of Drugs on Chemical Laboratory Tests, 3rd ed., AACC Press Pr ess 1990. 5. Norris, K.A., Atk inson, inson, A.R., Smith, Smith, W.G., Clin. Chem. 1975; 21/8: 1093 - 1101. 1101.

CALIBRACIÓN Se recomienda para la calibración el patrón CO2 Randox suministrado con el kit. El patrón está preparado gravimétricamente utilizando bicarbonato sódico grado A.C.S. Se recomienda recalibrar para cada serie de muestras analizadas.

CONTROL DE CALIDAD Se aconseja Randox Assayed Multisera, Nivel 2 y Nivel 3 para un control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos distintos de control como mínimo una vez al día. Los valores obtenidos ob tenidos deben deb en encontrarse dentro de un rango específico. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye el error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar los parámetros parámetros del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo todo el material esté limpio. limpio. 3. Comprobar el agua y la contaminación (el crecimiento crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados). 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y de de sus componentes. componentes. 6. Ponerse en contacto contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. Revised 01 Feb 11 bm Rev. 002

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COLESTEROL (CHOL)

RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS(5) Suero: Puede ser utilizado. Plasma: Tratado con EDTA (1 mg/ml) o heparina (up to 75 U/ml) No utilizar citrato, oxalato o fluor. Las muestras de Plasma y Suero pueden almacenarse durante 4 días +4°C.

Método Enzimático de Punto Final MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Colesterol en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.


R1.

Cat. No. CH 200 6 x 30 ml

R1. CAL.

Reactivo Patrón

6 x 30 ml 1 x 5.5 ml

CH 201 6 x 100 ml

R1. CAL.

Reactivo Patrón

6 x 100 ml 1 x 5.5 ml

CH 202 8 x 250 ml

R1. CAL.

Reactivo Patrón

8 x 250 ml 1 x 5.5 ml

CAL.

UTILIDAD

CLÍNICA(1,2,3)

El análisis de Colesterol és utilizado para el diagnóstico y tratamiento de dislipemias y desórdenes metabólicos. Los lípidos representan un importante papel en el cuerpo humano: ya sea cómo homonas o precursores hormonales, ayuda a la digestión, fuente o almacén de recursos energéticos, componentes estructurales y funcionales de membranas biológicas, o funcionando como aislantes para prevenir pérdidas de calor y permitir la conducción nerviosa En Química Clínica, los lípidos han sido asociado durante la última década con el metabolismo de las lipoproteínas y la ateriosclerosis El método descrito por Abell y cols (1952) se refiere a la extracción del colesterol con disolventes orgánicos y una posterior hidrólisis alcalina de los ésteres de colesterol. La reacción és altamente específica, pero la metodología es laboriosa y requiere reactivos corrosivos, siendo por tanto impracticable en la rutina diaria del laboratorio Richmond (1973) describió el método de la colesterol oxidasa, trás la saponificación de la muestra. Este método fué el primer paso hacia un procedimiento totalmente enzimático. Allain y cols junto con Roeschaw y cols publicaron en 1974 el primer procedimiento completamente enzimático para determinar colesterol, reemplazando así la saponificación química por la saponificación enzimática.

PRINCIPIO(4) El colesterol se determina tras una hidrólisis enzimática y una oxidación. El indicador quinoneimina se forma a partir de peróxido de hidrógeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa. colesterol

Ester de colesterol + H2O

colesterol + Acidos grasos

Reactivo 4-aminoantipirina Fenol Peroxidasa Colesterol esterasa Colesterol oxidasa Tampón Pipes

Patrón

0,30 mmol/l 6 mmol/l ≥0,5ml ≥0,15 U/ml ≥0,1 U/ml 80 mmol/l;pH 6,8 Vedi inserto lotto-specifico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1 contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS (R1) Reactivo Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C en ausencia de contaminación y protegido de la luz.

(CAL.) Patrón Listo para su uso. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C.

esterasa


Colesten-3-ona + H2O2

Reactivo Patrón

colesterol

Colesterol + O2

Concentración inicial de la solución

oxidasa


peroxidasa

2H2O2+fenol+4-aminoantipirina

quinoneimina + H2O

Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351).

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MANUAL/ RX MONZA CH 200 PROCEDIMIENTO

CONTROL DE CALIDAD

Utilice H2O de doble destilación para realizar una nueva calibración de la ganancia en el modo cubeta. Seleccione CHOL en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

Pipetear en tubos de ensayo: Blanco de reactivo S0

Patrón S1

Muestra

5  l 500  l

5  l 500  l

5  l 0.5 ml

ddH2O Patrón Muestra Reactivo

Mézclelo e incúbelo durante 10 minutos a 20-25 C o durante 5 minutos a 37 C. Introdúzcalo en el soporte de la celda de flujo de RX Monza y pulse Read (Leer) en un plazo de 60 minutos.

INTERFERENCIA


VALORES NORMALES EN SUERO/PLASMA(6)





Recomendó el uso de CAL estándar en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3. La calibración se recomienda con un cambio en la cantidad de reactivo o como se indica por los procedimientos de control de calidad.

Valores de hemoglobina hasta 200 mg/dl y de bilirrubina h asta 5 mg/dl y de triglicérido hasta 4,64 mmol/l, no interfieren en la prueba.

Niveles de riesgo Valor

Interpretación

< 5,17 mmol/l (200 mg/dl) 5,17 - 6,18 mmol/l (200-239 mg/dl)

PARA USO MANUAL Longitud de onda Cubeta Temperatura Medición

500 nm, Hg 546 nm 1 cm de espesor 20-25°C, 37°C frente a reactivo blanco

≥ 6,20

mmol/l (240 mg/dl)

Colesterol en sangre deseado Colesterol en sangre límite-alto Colesterol en sangre alto


Pipetear en la cubeta: Reactivo Blanco ( l) Agua Destilada Patrón Muestra Reactivo

Patrón ( l)

Muestra ( l)

--10 --1000

----10 1000

10 ----1000

Mezclar, incubar durante 10 min. a 20-25°C ó 5 min. a 37°C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) frente al blanco antes de 60 min.

CÁLCULO MANUAL 1. Utilizando un patrón:

Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 25oC.

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de colesterol de 656 mmol/l (17.0 mg/dl). Las muestras con concentraciones de colesterol superiores a ésta, deben ser diluidas 1+2 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 3.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Colesterol con un nivel aceptable de precisión se determinó en 13,7 mg/dl (0,354 mmol/l).

Amuestra

Conc. de colesterol = en la muestra Apatrón

CARACTERÍSTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO

x Conc. de patrón

Análisis (Intra)

2. Utilizando un factor: Longitud de onda

mmol/l

Hg 546 nm 500 nm

21,7 x A 14,3 x A

PRECISION

mg/dl 840 x A 553 x A

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia NIST 909b and NIST 1952a de la Colesterol.

Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 3.65 0.100 2.74 20

Nivel 3 7.18 0.088 1.23 20

Nivel 2 3.65 0.143 3.92 20

Nivel 3 7.18 0.333 4.64 20

Análisis (Inter) Media (mg/dl) DE CV(%) n

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MANUAL/ RX MONZA CH 200 CORRELACION Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.963 X - 0.157 y un coeficiente de correlación r = 0,9943 Se analizaron 44 muestras de pacientes con valores de entre 0,42 y 15,85 mmol/l.

REFERENCIAS 1. Abell, L.L, Levey, B.B., Brodie B.B., et al , J. Biol Chem 195 : 357, 1952 2. Richmond, N., Clin Chem 19 : 1350 - 1356, 1973 3. Roeschlau, P., Bernt, E. and Gruber, J.W., Clin Chem Clin Biochem. 12 : 403, 1974 4. Trinder, P., Ann clin Biochem 6 : 24, 1969. 5. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st Edition (1998) p169; Lothar Thomas ed. TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany 6. Third Report of the National Cholesterol Education Programme (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation and treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III). JAMA Publication, Vol 285, No. 19, P2486 - 2497; 2001.


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CK-NAC-activada

METODO UV(1) Este es un método estándar optimizado según las recomendaciones de la Deutschen Gesellschaft für Klinische Chemie.

Creatina Quinasa MANUAL RX MONZA

PRINCIPIO PARA SU USO

CK

Para la determinación cuantitativa in vitro de Creatina Quinasa en suero y plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza.

Fosfato de creatina + ADP

Creatina + ATP

HK

Glucosa + ATP

Glucosa-6-P + ADP G-6-PDH

No. Cat. CK 110 20 x 2,5 ml

Glucosa-6-P + NADP+ R1a. Tampón/Glucosa R1b. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato

1 x 70 ml 20 x 2,5 ml

R1a. Tampón/Glucosa R1b. Enzimas/Coenzimas/ Sustrato

1 x 70 ml 20 x 3,0 ml

CK 522 10 x 10 ml


1 x 105 ml 10 x 10 ml

CK 113 6 x 30 ml


2 x 100 ml 6 x 30 ml

CK 335 20 x 3,0 ml

Gluconato-6-P + NADPH + H+

MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma.


SIGNIFICADO CLINICO (3) La Creatina Quinasa (CK) se encuentra principalmente en el músculo estriado, el cerebro y los tejidos musculares. El análisis de la actividad de la CK en plasma o su ero, provee un marcardor sensible para la detección de enfermedades del tejido muscular esesquelético. Por ej. En la distrofia muscular del tipo Duchenne se pueden encontrar niveles de CK hasta 50 veces superior al límite de normalidad establecido. En el caso de la distrofia muscular progresiva la actividad máxima de ésta enzima se observa en niños y lactantes La actividad de la CK es también útil en el diagnóstico del infarto de miocardio y acidentes cerebrovasculares. La determinación de la CK utilizando creatina fosfato y adenosin5’-difosfato (ADP) como substratos en lugar de creatina y adenosin-5’-trifosfato (ATP), tiene varias ventajas en el funcionamiento del test ya que permite un valor de reacción más rápido resultando en una sensibilidad mayor. Se utilizan cantidades de muestra pequeñas y no se necesitan los b lancos de muestra. Debido a la oxidación de los grupos sulfidril en la zona activa de la creatina quinasa, la enzima es muy inestable. Sin embargo, el enzima se reactiva añadiendo compuestos tiol. Por este motivo se incluye N-acetil-L-cisteina (NAC) en el test. También se incluyen en el sistema del test adenosin-5'monofosfato (AMP) y diadenosin pentafosfato, para inhibir la actividad mioquinasa la cual interfiere. En este sistema de test no existen sulfatos ya que alteran la reacción ,


R1a. Tampón/Glucosa Tampón Imidazol Glucosa Mg-Acetato EDTA

0,10 mol/l, pH 6,7 20 mmol/l 10 mmol/l 2,0 mmol/l

R1b. Enzimas/Coenzimas/Sustrato ADP AMP Pentafosfato de diadenosina NADP HK G-6-PDH N-Acetilcisteina Fosfato de creatina

2,0 mmol/l 5,0 mmol/l 10  mol/l 2,0 mmol/l ≥ 2,5 U/ml ≥ 1,5 U/ml 20 mmol/l 30 mmol/l

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10% Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.


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ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón/Glucosa Listo para usar. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8 C.

CALCULOS Para calcular la actividad de la CK utilizar las fórmulas siguientes: 25/30 C



37 C



R1b. Enzimas/Coenzimas/Sustrato Reconstituir un vial de Enzimas/Coenzimas/Sustrato R1b con el volumen adecuado de Tampón/Glucosa R1a: 2,5 ml para el kit de 20 x 2,5 ml (CK 110) 3,0 ml para el kit de 20 x 3,0 ml (CK 335) 10 ml para el kit de 10 x 10 ml (CK 522) 30 ml para el kit de 6 x 30 ml (CK 113) Estables durante 3 semanas entre +2 y +8 C ó 3 días entre +15 y +25 C. 



MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Glucosa Enzimas/Coenzimas/Sustrato

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Randox Calibration Serum Level 3 (Cat. No. CAL 2351).

PROCEDIMIENTO PARA RX MONZA Aspirar ddH2O fresco y realizar una nueva calibración de ganancia en el modo de flujo de células. Seleccione la NAC en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones



U/l = 4127 x ∆A340 nm/min U/l = 4207 x ∆A Hg 334 nm/min U/l = 7429 x ∆A Hg 365 nm/min

NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia AD455 (IFCC) de la CK-NAC.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los r esultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

INTERFERENCIA


Evitar la hemólisis ya que interfiere con el ensayo.

Muestra Reactivo

10 µl 500 µl

VALORES NORMALES EN SUERO(2,3) 25 C 

Mezclar y aspirar a la RX monza .


MANUAL PROCEDURE Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm, Hg 365 nm o Hg 334 nm 1 cm de espesor 25 C/30 C/37 C Frente al aire 





25/30 C

10 - 80 U/l 10 - 70 U/l



15 - 130 U/l 15 - 110 U/l

37 C 

24 - 195 U/l 24 - 170 U/l


CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza en el modo de flujo de células a 37 C. 

Este método es lineal hasta 2804 U / l. Si la concentración de la muestra supera este valor, diluir la muestra 1 +9 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 9 +1.

37 C



Mezclar, incubar durante:

Hombre Mujer

30 C

LINEARIDAD


Macro Enzimas/Coenzimas/ Sustrato 2,5 ml Muestra 0,1 ml

U/l = 8095 x ∆A340 nm/min U/l = 8252 x ∆A Hg 334 nm/min U/l = 14571 x ∆A Hg 365 nm/min



Semi Micro

Macro

Semi Micro

1,0 ml 0,04 ml

2,5 ml 0,05 ml

1,0 ml 0,02 ml

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de la Creatina Quinasa con un nivel aceptable de precisión se determinó como 21,7 U/l.

3 min a 25 C 2 min a 30 C 1 min a 37 C Leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar el tiempo simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.   

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Nivel 1 215 4.97 2.31 20

Nivel 2 549 8.51 1.55 20

Nivel 1 215 8.41 3.91 20

Nivel 2 549 18.4 3.35 20

Análisis (Inter) Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9538 X + 7.5746 con un coeficiente de correlación r = 0.9988 Se analizaron 47 muestras con valores de entre 37 y 2755 U/l.

REFERENCIAS 1. Rec. GSCC (DGKC); J. Clin. Chem. Clin. Biochem 1977; 15: 255. 2. Stein, W. (1985), Med. Welt 36: 572. 3. Szasz, G., et al . Clin. Chem 1976; 22: 650.


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CK-MB (NAC-act.)


Método UV MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de CK-MB en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza .

No. Cat. CK 1296 R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 70 ml 19 x 2.5 ml R1b. Enzima/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo 19 x 2.5 ml CONTROL 1 x 2 ml CK 1553 5 x 20 ml

R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa 1 x 105 ml R1b. Enzima/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo 5 x 20 ml CONTROL 2 x 2 ml

SIGNIFICADO CLINICO (1) La Creatina Kinasa (CK) está aceptada internacionalmente como un indicador sensitivo y específico del infarto de miocardio agudo (AMI). Existen 3 tipos de iso-enzimas CK, CK-MM, CK-MB y CK-BB. El CK-BB lo produce el cerebro a partir del tejido del esqueleto y el corazón y el CK-MB se produce a partir del músculo del corazón. En la mayoría de los casos la actividad de CK aumenta durante las 6 horas posteriores a un infarto agudo. Los valores máximos se observan al cabo de unas 20 horas. La actividad de CK normalmente vuelve a su normalidad durante el cuarto o quinto día posterior al infarto.

PRINCIPIO(3) Análisis de Inmunoinhibición: Se incorpora un anticuerpo en el reactivo CK. Este anticuerpo se unirá e inhibirá la actividad de la subunidad M de CK-MB. Esto significa que sólo se mide la actividad de la subunidad B en el suero. Si la actividad se multiplica por el factor 2, nos dará la actividad de la CK-MB en suero.

MUESTRA

La solución R1a contiene Azida Sódicas. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. Las azidas sódicas reaccionan con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido sódico al 10%.

Atención: Suero de Control El material de origen humano del que se deriva este producto ha sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Virus de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar como posibles transmisores de enfermedades infecciosas. Hojas de Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautes locales.

Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por per sonal de laboratorio cualificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C. 

R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo

Suero, plasma heparinizado o EDTA

Reconstituir un frasco de Enzimas/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo R1b con el volumen adecuado de Tampón/Glucosa R1a: 2,5 ml para el kit de 19 x 2,5 ml (CK 1296) 20 ml para el kit de 5 x 20 ml (CK 1553) Estable durante 21 días entre +2 y +8 C y 3 días entre +15 y +25 C.





R1a. CK NAC/CK-MB Tampón/Glucosa Tampón Imidazola Glucosa Mg-acetato EDTA



0.10 mol/l, pH 6.7 20 mmol/l 10 mmol/l 2.0 mmol/l

R1b. Enzima/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo ADP AMP Pentafosfato de Diadenosina NADP HK G-6-PDH N-acetilcisteina Fosfato de Creatina Antibody to CK-M

2.0 mmol/l 5.0 mmol/l 10 μmol/l 2.0 mmol/l ≥ 2.5 U/ml ≥ 1.5 U/ml 20 mmol/l 30 mmol/l

CONTROL Abrir un frasco de suero de control cuidadosamente, evitando la pérdida de material, y reconstituir en exactamente 2 ml de agua doblemente destilada. Cerrar el frasco y dejar reposar dur ante 15 minutos, disolver el contenido completamente agitando o rotando suavemente. La CK-MB es estable en suero durante 5 días entre +2 y + 8 C, 8 horas a +25 C y 4 semanas a -20 C cuando se congela sólo una vez. 





CONTROL

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MANUAL/ RX MONZA CK 1296 MATERIAL SUMINISTRADO

CÁLCULO MANUAL

CK NAC/CK-MB Buffer/Glucose Enzimas/Coenzimas/Substrato/Anticuerpo Suero de control

Long. de onda

CK-B (U/l)

MATERIALES NECESARIO NO SUMINISTRADOS

340 nm Hg 334 nm Hg 365 nm

825 x 841 x 1486 x

Control CKMB Randox No. (Cat. CK 1212) Control Cardíaco de Tres Niveles Randox, No. (Cat. CQ 3100 Nivel y Nivel 3) Randox CK-MB Calibración (Cat. No. CK 2393)

∆A

1651 x 1683 x 2972 x

∆A ∆A

∆A ∆A ∆A

El cambio de absorbancia por minuto (∆A/min) también se puede medir y la media de las 5 mediciones de deberá utilizar en el cálculo.

NOTA DE PROCEDIMIENTO(4) La Macro-CK es una forma atípica de CK y se compone de complejos de Inmunoglobulina de Isonenzimas normales. Esta forma migra entre MM y MB y se observa principalmente en mujeres ancianas. Esto no tiene significación clínica, pero su presencia puede causar resultados falsamente elevados. Si se sospecha la contribución de Macro-CK se deberá confirmar su presencia por medio de electroforésis.

PROCEDIMIENTO Antes de llevar a cabo el análisis para medir la actividad de la CKMB en suero, es necesario medir la actividad de la CK total utilizando el método NAC activado.

PARA RX MONZA Seleccione CK-MB en la pantalla ejecutar prueba y lleve a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo: Blanc Reactivo S0

Patrón S1

Muestra

50 µl 500 µl

50 µl 500 µl

50 µl 500 µl

Salino Patrón Muestra Reactivo

CK-MB (U/l)

Los factores a utilizar entonces serán:Longitud de onda

CK-B (U/l)

CK-MB (U/l)

4127 4207 7429

8254 8414 14858

∆A

340 nm/min ∆A Hg 334 nm/min ∆A Hg 365 nm/min

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda para el control de calidad diario el Control de CKMB Randox o el Control Cardíaco de Tres Niveles Randox. Se deberán analizar dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

INTERFERENCIAS

Mezclar y aspirar en la Rx Monza.

La hemólisis interfiere con el análisis.


RANGO DE REFERENCIA Infarto de Miocardio(MI)

Se recomienda el uso de solución salina y el Calibrador Randox CKMB para calibración.

PARA USO MANUAL

La probabilidad de daño del m iocardio es elevado cuando se presentan los siguientes 3 factores:Temperatura


340 nm, Hg 334 nm o Hg 365 nm 1 cm de espesor 25 C, 30 C y 37 C frente al aire 





30 C 

37 C 



Semi-micro

Macro

1 CKhombres >80 U/l1 CKmujeres >70 U/l1 2 CK-MB >10 U/l1 3 una actividad de CK-MB entre 6 y total

0,04 ml

0,1 ml

*Valores calculados

1,0 ml

2,5 ml

Se puede sospechar un MI aunq ue los valores obtenidos sean inferiores a los límites especificados. Para confirmar si ha ocurrido un infarto reciente, el test se deberá repetir al cabo de 4 horas.


Muestra Enzimas/Coenzimas/ Substrato/Anticuerpo

25 C

Mezclar, y dejar reposar a la temperatura apropiada durante 10 minutos. Después añadir a la cubeta, y leer la absorbancia A1. Leer la absorbancia A2 exactamente 5 minutos más tarde. ∆A = A2 - A1

>130 U/l2 >195 U/l* >110 U/l2 >170 U/l* 2 > 16 U/l > 25 U/l* 25% de la actividad CK

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para reflejar la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

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MANUAL/ RX MONZA CK 1296 CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza.

LINEARIDAD El Anticuerpo inhibe hasta 2000 U/l de CK-MM. Este ensayo es linear hasta 2044 U/l de actividad CKMB.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de CKMB con un nivel de precisión aceptable se determinó como 23,5 U/l.

PRECISION Precisión Dentro del Análisis Mean (U/l) SD CV(%) n

Nivel 1 136 4.89 3.61 20

Nivel 1 161 7.03 4.37 20

Precisión Total Mean (U/l) SD CV(%) n

Nivel 1 136 6.83 5.04 20

Nivel 2 161 6.56 4.08 20

CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.0756 X - 18.799 con un coeficiente de correlación r = 0.9903 Se analizaron 43 muestras con valores de entre 34,4 y 1733 U/l.

REFERENCIAS 1. Stein, W., Med. Weit 1985; 36: 572. 2. Szasz, G., and E. W. Busch. Paper presented at 3rd Eur. Congr. Clin. Chem., Brighton/England, June 1979; 3 - 8 (abstract). 3. Wurburg, U., et al ., Clin. Chem. 1976; 54: 357. 4. Jacobs et al , The Laboratory Test Handbook, 2nd edition

Revisado 29 July 11 bm Rev. 001

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CREATININA (CREA)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Creatinina en suero plasma u orina. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.

Cat. No. CR 510 200 ml

CAL. Patrón R1a. Acido pícrico R1b. Hidróxido sódico

1 x 5.5 ml 1 x 100 ml 1 x 100 ml

CR 524 6 x 500 ml

CAL. Patrón R1a. Acido pícrico R1b. Hidróxido sódico

1 x 30 ml 3 x 500 ml 3 x 500 ml

SIGNIFICADO CLINICO La creatinina se deriva de la creatina y la creatina fosfato en tejido muscular y puede ser definida como un producto de desecho del nitrógeno.La creatinina no es reutilizada pero es excretada por el cuerpo en la orina via renal. La creatinina es producida y excretada con un ratio constante ,el cual es proporcional a la masa muscular del cuerpo.Como consecuencia de la forma en que la creatinina es excretada por el riñon, la determinación de creatinina se utiliza principalmente para diagnosticar el funcionamiento del riñon.La creatinina es considerada como el marcador endógeno más útil en el diagnostico y tratamiento de enfermedades renales. La creatinina se mide principalmente para valorar el funcionamiento del riñon y tiene ciertas venta jas sobre la determinación de urea.Los niveles de creatinina en plasma son relativamente independientes de la ingesta proteica, de agua ,ratio de producción de orina y del ejercicio.Siendo su ratio de producción constante,una elevación de creatinina en plasma es un indicativo de infraexcreción sugiriendo un mal funcionamiento de riñon.Los niveles bajos de creatinina en plasma son raros y no son clinicamente significativos.

METODO COLORIMETRICO (1)

La solución R1a contiene ácido pícrico que es tóxico. La sólucion R1b contiene hidróxido sódico que es cáustico. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +25°C.

R1a. Acido pícrico Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C.

R1b. Hidróxido sódico Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C.

ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO Mezclar volúmenes iguales de Soluciones R1a y R1b. Estable durante 3 días cuando se conserva entre +15 y +25C.

MATERIAL SUMINISTRADO Patrón Acido pícrico Hidróxido sódico

MATERIAL REQUERIDO PERO NO SUMINISTRADO

PRINCIPIO La creatinina en solución alcalina reacciona con ácido pícrico para formar un complejo coloreado. La ca ntidad del complejo formado es directamente proporcional a la concentración de creatinina.

EXTRACCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA Suero, plasma heparinizado o EDTA-plasma. Estable durante 7 días cuando se conserva entre +2 y +8C. Orina: extraer la orina sin aditivos. Diluir 1+49 con agua bidestilada. Estable durante 4 días cuando se conserva entre +2 y +8C.

Pipetas apropiadas para suministrar 50  l, 100  l, 200  l, 1 ml y 2 ml. Material para cronometrar y bloque de calentamiento o baño de agua para mantener temperaturas de 25, 30 ó 37°C. Espectrofotómetro con longitud de onda de 490 - 510 nm. Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sérum de calibration Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

NOTAS El grado de reacción y la absorbancia del producto de la reacción son muy sensibles a la temperatura. La temperatura especificada debe ser por lo tanto mantenida.


CAL. Patrón R1a. Acido pícrico

Concentraciones iniciales de las soluciones Vedi inserto lotto-specifico 35 mmol/l

Surfactante

R1b. Hidróxido sódico

0,32 mol/l

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MANUAL/ RX MONZA CR 510 PROCEDIMIENTO

NORMALIZACIÓN

Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia nueva en el modo de cubeta. Seleccione CREA en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

Randox Nivel de calibración Suero 3 es atribuible a la creatinina materiales de referencia NIST y 909b del NIST 967.

Pipetee en una cubeta: Blanco de reactivo S0 ddH2O Patrón Muestra Reactivo de Trabajo

Patrón S1

Muestra

50  l 500  l

50  l 500  l

50  l 500  l

Mezclar, inserte en el soporte de Rx Monza celda de flujo y oprima Leer.

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

492 (490-510 nm) 1 cm de espesor 25/30/37°C Frente al aire


Reactivo de trabajo Solución Patrón Muestra

Patrón Macro Semi Micro

Muestra Macro Semi Micro

2.0 ml 0.2 ml -

2.0 ml 0.2 ml

1.0 ml 0.1 ml -

1.0 ml 0.1 ml

Mezclar, leer la absorbancia A1 del patrón y de la muestra al cabo de 30 segundos. Exactamente 2 min después leer la absorbancia A2 del patrón y de la muestra.


CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

INTERFERENCIA La hemólisis interfiere en la prueba. No usar sueros lipémicos. El método es susceptible a interferencias por altos niveles de sustancias reductoras. Hervir la orina antes de la prueba puede ayudar a reducir estas interferencias.

VALORES NORMALES(2) Suero:

Hombre Mujer

Orina:

53 - 97  mol/l(0,6 - 1,1 mg/dl) 44 - 80  mol/l (0,5 - 0,9 mg/dl) 8,84 - 13,3 mmol/24 hrs 1 - 1,5 g/24 hrs

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia reflejando edad, sexo, dieta y localización geográfica de la población


Recomendaciones sobre el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando suministrado Standard CAL en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3.

Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37oC.

CÁLCULO MANUAL

LINEALIDAD

A2 - A1 = Amuestra ó Apatrón

Concentración de creatinina en suero o plasma: Amuestra

x 177

=  mol/l

La concentración mínima detectable de Creatinina con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 14.0 mol/l (0.158 mg/dl).

Amuestra

= mg/dl

Apatrón

PRECISION Análisis (Intra)

Concentración de creatinina en orina: Amuestra

x 8,85

= mmol/l

x 100

= mg/dl


Apatrón Amuestra

mg creatinina/dl orina x ml orina 24 hrs. [ml/min] mg creatinina/dl suero x 1440

Nivel 2 1.46 0.040 2.75 20

Nivel 3 4.19 0.068 1.63 20

Nivel 2 1.46 0.042 2.86 20

Nivel 3 4.19 0.122 2.91 20

Análisis (Inter)

Apatrón

Aclaramiento de creatinina =

Si la concentración excede 2168  mol/l (24.5 mg/dl) en suero, diluir suero, plasma u orina diluida 1+4 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 5.

SENSIBILIDAD

Apatrón

x 2

SUERO


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MANUAL/ RX MONZA CR 510

CORRELACION Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.098 X - 0.27 con un coeficiente de correlación r = 0.9995 Se analizaron 47 muestras con valores de entre 0,24 y 1 5,3 mg/dl.

ORINA LINEALIDAD Si la concentración excede 85309 mol / l (963 mg / dl) en la orina, diluir la orina 1 +4 con agua destilada y repetir el ensayo. Multiplicar el resultado por 5.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de Creatinina con un nivel aceptable de precisión se ha determinado en 2221 mol/l (25.1 mg/dl).

REFERENCIAS 1. Bartels, H., Bohmer, M., (1972) Clin. Chem. Acta 37: 193. 2. Schirmeister, J., H. Willmann, and H. Kiefer. (1964). Dtsch. Med. Wschr. 89: 1018.

Revised 15 Sep 10 bm Rev. 001

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MANUAL/ RX MONZA CR 510

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NEFA

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro, no pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Acidos Grasos No Esterificados MANUAL RX MONZA

Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales.

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Acidos Grasos No Esterificados (NEFA) en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza.

Cat. No. FA 115 3 x 10 ml

R1a. R1b. R2a. R2b. R2c. CAL

Tampón Enzima/Coenzimas Diluyente de la Enzima Maleimida Reactivo Enzima Patrón

1 x 70 ml 3 x 10 ml 3 x 20 ml 3 x 20 ml 3 x 20 ml 1 x 5.5 ml


Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C. 

METODO COLORIMETRICO R1b.

PRINCIPIO(3,5,6)

Reconstituir un vial de Enzima/Coenzimas R1b con 10 ml de Tampón R1a. Estable durante 5 días entre +2 y +8 C. No congelar. Proteger de la luz.

Acetil CoA Sintetasa

NEFA+ATP+CoA

Enzima/Coenzimas

Acil CoA+AMP+PPi



Acetil CoA Oxidasa

Acil CoA + O2

2,3 trans-enoil-CoA + H2O2

R2a.

2H2O2 + TOOS + 4-AAP 4-AAP TOOS

Aducto Púrpura + 4H2O

= 4-Aminoantipirina = N-etil-N-(2-hidroxi-3-sulfopropil)-m-toluidina



R2b.

R2c.



Concentración inicial de las Soluciones

0,04 mol/l, pH 6,9 3 mmol/l

R1b. Enzima/Coenzimas Acil Coenzima A Sintetasa Ascorbato oxidasa Coenzima A ATP 4-amino antipirina

≥ 0,3

Fenoxietanol Surfactante

0,3% (w/v)

R2a. Diluyente del Enzima R2b. Maleimida R2c. Enzima reactivo Acil coenzima A oxidasa Peroxidasa TOOS

CAL Patrón

CAL

Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C. 

R1a. Tampón Tampón fosfato Cloruro de magnesio Surfactante

Reactivo Enzima Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo Enzima R2c con una botella de Solución R2b reconstituida. Estable durante 5 días entre +2 y +8 C. No congelar. Proteger de la luz.


Maleimida Reconstituir el contenido de una botella de Maleimida R2b con el contenido entero de una botella de diluyente del Enzima R2a. Asegurarse de que la Maleimida está completamente disuelta. Usar inmediatamente para reconstituir la botella R2c.

MUESTRA(1) Suero, plasma. No usar plasma heparinizado, ya que la heparina interfiere en el análisis. Los anticoagulantes adecuados son los siguientes: EDTA Citrato de Sodio Fluoruro de Sodio Oxalato de Amoníaco

Diluyente del Enzima Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad conservado entre +2 y +8 C.

Peroxidasa

U/ml ≥ 1,5 U/ml 0,9 mmol/l 5,0 mmol/l 1,5 mmol/l

10,6 mmol/l ≥ 10

U/ml 7,5 U/ml 1,2 mmol/l Vedi inserto lotto specifico

R1= Tampón / Enzima/ Coenzimas R2 = Diluyente del Enzima / Maleimida / Enzima Reactivo MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Enzima/Coenzimas Diluyente del Enzima Maleimida Reactivo Enzima Patrón

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532).

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MANUEL FA 115

NOTAS(1,7)

RX MONZA PROCEDURE

1.

Muestras visiblemente lipémicas requieren una muestra blanco.

Seleccione NEFA en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada.

2.

Muestras con niveles de bilirrubina o hemoglobina superiores a los indicados a continuación, requieren una muestra blanco:

Pipetee en un tubo de ensayo: Reactivo

Patrón

Blanc S0 10 µl 200 µl

S1

Muestra

*

Muestra Nivel Máximo permitido para pruebas de exactitud

Efecto sobre el resultado

10 100

Disminuido Aumentado

Bilirrubina Hemoglobina

mg/dl mg/dl

dd H2O Patrón Muestra Reactivo 1

10 µl 200 µl

10 µl 200 µl

Blank 200 µl

Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a +37°C. Estas muestras necesitarán un blanco de muestra* para llevarse a cabo (Ablanco de muestra). En el caso de un procedimiento manual, la concentración de NEFA se calculará de la siguiente manera:Amuestra - Amuestra blanco mmol/l =

x Conc. de patrón

Reactivo 2 Muestra

400 µl -

400 µl -

400 µl -

400 µl 10 µl

Mézclelo, incúbelo durante 5 minutos a +37°C. Introduzca la cubeta en el soporte de la celda de flujo del RX monza y pulse Read (Leer).

Apatrón En el caso del RX monza, la concentración de NEFA se calculará de la siguiente manera: Muestra - Muestra Blanco = Muestra Concentration (mmol/l) 3. Durante la recuperación de los materiales de control de calidad se puede observar al leer monocromático. Para corregir este tomar lecturas adicionales para Amuestra y APatrón a 700 nm, y la resta de las lecturas de longitud de onda principales. 4. La muestra que va a ser analizada no debe heparinizarse, ya que esto estimularía la actividad de la lipoproteín-lipasa, provocando la liberación de NEFA de los triglicéridos asociados a las lipoproteínas sanguíneas. En consecuencia, la sangre extraida de pacientes que están recibiendo tratamiento terapéutico con heparina, o sangre recogida en envases con heparina no es adecuada para esta prueba.

* Consulte

las notes 1 y 2.

MANUAL PROCEDIMIENTO(6) Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

550 nm 1 cm de espesor +37 C Frente al reactivo blanco 


Agua destilada Patrón Muestra Solución R1

React. blanco

Patrón

Muestra

*Muestra blanco

50  l ----1,0 ml

--50  l --1,0 ml

----50  l 1,0 ml

------1,0 ml

Mezclar e incubar a +37 C durante 10 minutos. 

5. Debido a la incorporación de ascorbato oxidasa en el Reactivo Enzima 4, niveles de ácido ascórbico superiores a 20 mg/dl (es decir > 10 veces el valor normal) no interfieren en la prueba. 6. Las determinaciones de NEFA deben llevarse a cabo con suero obtenido de individuos en ayunas, de lo contrario los resultados no pueden ser directamente comparados con los rangos normales de controles en ayunas. 7. Si la muestra de suero permanece a temperatura ambiente durante un tiempo considerable, el nivel de NEFA aumenta debido a la acción enzimática. Por tanto, si el análisis no es inmediato, las muestras de suero pueden congelarse a -20 C durante un máximo de 24 horas.

Solución R2 Muestra

2,0 ml ---

2,0 ml ---

2,0 ml ---

2,0 ml 50  l

Mezclar e incubar a +37 C durante 10 min. Leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente a reactivo blanco a 550 nm. 

* Consulte

las notes 1, 2 y 3.

N.B.: Tiempo de lectura debe ser exactamente 10 min.



8. Si Apatrón - Areactivo blanco es < 0,180 repetir la prueba con reactivo fresco.

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MANUEL FA 115 INTERFERENCIA CALCULOS 1. Utilizando una curva de calibración La curva de calibración debe ser confirmada para cada nuevo lote de reactivos de la forma siguiente:

Si se realiza la técnica de los NEFA de forma automática, el reactivo no debería colocarse en el instrumento tras los triglicéridos


No. de Tubo Nombre

1 Blanco

2 Patrón bajo

3 Patrón normal

4 Patrón elevado

NEFA Patrón Agua Solución R1

--50  l 1,0 ml

25  l 25  l 1,0 ml

50  l --1,0 ml

100  l --1,0 ml

LINEALIDAD

2,0 ml

2,0 ml

SENSIBILIDAD

Mezclar e incubar a +37 C durante 10 min. 

Solución R2

2,0 ml

2,0 ml



0,000

*valores estandares 0,000

(leer)

(leer)

(leer)

valores estandares x 0,250 x 0,500 x 1,000

* Se puede encontrar valores estandares en la insercion especifica del lote, incluido en el kit. Representar absorbancias (A550 nm) frente a concentraciones de NEFA (mmol/l). Debe ser una línea recta, ya que sigue la Ley de Beer y es lineal entre 0.0 y 2.0 mmol/l.

2. Utilizando un patrón La concentración de NEFA en una muestra puede ser determinada por medio de la siguiente ecuación. Amuestra mmol/l =

El método es lineal hasta 2,24 mmol/l. Para muestras con concentraciones superiores, diluir 1+3 con agua bidestilada y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 4.

El nivel mínimo detectable con una precisión aceptable se ha determinado en 0,072 mmol/l

Mezclar e incubar a +37 C durante 10 min. Abs

Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza a una temperatura de +37ºC.

x Concentración de patrón Apatrón

CONTROL DE CALIDAD

Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte + 44 (0) 28 9442 2413.

RANGO NORMAL(2,8) En ayunas: 0,1 - 0,9 mmol/l. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Media (mmol/l) 1.73 DE 0.082 CV(%) 4.74 n 20

Nivel 2 1.20 0.058 4.81 20

Ensayo total Media (mmol/l) DE CV(%) n

Nivel 1 1.73 0.078 4.51 20

Nivel 2 1.20 0.052 4.32 20

CORRELATION This method (Y) was compared with another commercially available method (X) and the following linear regression equation obtained: Y = 1.0372 X + 0.0457 and a correlation coefficient of r = 0.9855 49 patient samples were analysed spanning the range 0.09 to 2.08 mmol/l.

REFERENCIAS 1. DeVries, G.H., Mamunes, P., Miller, C.D. and Hayward, D.M., Analytical Biochem. 1976; 70: 156-166. 2. Henry, R. J., Clinical Chemistry, Principles and Techniques, 2nd Edition, Harper and Row, 1974; p. 1451. 3. Matsubara, C., Neshikawa, Y., Yoshida, Y., and Tateamura, K. Analytical Biochem. 1983; 130: 128-133. 4. Mulder. C. J., Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983; 21: 823-827. 5. Hosaka, K., Kiteucki, T., Mitsukida, N., and Kawagucki, A. J., Biochem. 1981;89: 1799-1803. 6. Shimizu, S., Tani, Y., Yamada, H., Tabata, M., and Murachi, T., Analytical Biochem. 1980; 107: 193-198. 7. Okabe, H., Uji, Y., Nagaehima, K. and Noma, A. Clin, Chem. 1980; 26111: 1540-1543. 8. Duncombe, W.G., Biochem. J. 1963; 88: 7. Revisado 31 oct 12 rw Rev. 005

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GLUCOSA (GLUC-PAP)


GOD/PAP MANUAL RX MONZA

Componentes


R1a. Tampón Tampón fosfato Fenol

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Glucosa en suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

R1b. Reactivo GOD-PAP

Cat. No.

CAL. Patrón

0,1 mol/l, pH 7,0 11 mmol/l

4-Aminofenazona Glucosa oxidasa Peroxidasa

GL 364 10 x 100 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo GOD-PAP CAL. Patrón

10 x 100 ml 10 x 100 ml 1 x 5.5 ml

GL 1021 2 x 500 ml


2 x 500 ml 2 x 500 ml 1 x 5.5 ml

Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

GL 366 6 x 500 ml


6 x 500 ml 6 x 500 ml 1 x 5.5 ml

R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico.

PRINCIPIO La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona, catalizado por la peroxidasa, con f enol y 4-aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina rojo-violeta.

PRINCIPIO DE LA REACCION(1)

Glucosa

0,77 mmol/l ≥ 1,5 kU/l ≥ 1,5 kU/l Ver inserto del lote específico


La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%.

GOD

Glucosa + O2 + H2O

Acido glucónico + H2O2


POD

2H2O2+ 4-aminofenazona + fenol

quinoneimina + 4H2O

RECOGIDA DE MUESTRAS Y ALMACENAMIENTO La glucosa es estable durante 24 horas entre +2 y +8°C si el suero se prepara a los 30 minutos después de la recolección. Mediante la adición de un inhibidor de la glicólisis (NaF, KF), la muestra se pueden almacenar hasta 24 horas entre +15 y +25°C o 3 días entre +2 y +8ºC. Para el almacenamiento a largo plazo las muestras se deben colocar en envases sellados y congelarse a -20°C. Las muestras hemolizadas no deben utilizarse, ya que la hemólisis interfiere con esta prueba. Plasma: se permite el uso de heparina de litio como un anticoagulante. Orina: orina de 24 horas se debe recoger en un frasco oscuro y mantener en hielo. Orina al azar – se debe usar una muestra fresca. La muestra debe ser almacenada entre +2 y +8°C si no se utiliza inmediatamente.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio ba jo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C 

R1b. Reactivo GOD-PAP Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo R1b con un pequeño volumen de Tampón R1a y transferir el contenido entero a la botella R1a, enjuagando varias veces la botella R1b. El reactivo de trabajo es estable durante 3 meses entre +2 y +8 C ó 5 días entre +15 y +25 C. 



CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad entre +2 y +8 C. 

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MANUAL GL 364 MATERIALES SUMINISTRADOS

CONTROL DE CALIDAD

Tampón Reactivo GOD-PAP Patrón

Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

PROCEDIMIENTO Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia en el modo de cubeta. Seleccione GLU en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta:

INTERFERENCIAS

Patrón S1 or Muestra Muestra/Patrón Reactivo 1

Reactivo Blanco S0

5  l 500  l

0  l 500  l

VALORES NORMALES(2)

Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25 C ó 10 min a 37 C. Insertar en el soporte de flujo de célula de Rx Monza y oprima Leer dentro de los 60 minutos. 

Esta prueba no se ve afectada por el ácido úrico, ácido ascórbico, glutatión, anticoagulantes, bilirrubina y creatinina a concentraciones fisiológicas.



CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda el uso de glucosa estándar Randox proporcionado o Suero de calibración Randox Nivel 3. Es aconsejable cambiar el lote del reactivo para la calibración o seguir lo indicado por los procedimientos de control de calidad.

Suero,plasma (en ayuno)

4,2-6,4 mmol/l ó 75-115 mg/dl


CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37 C. 

PARA USO MANUAL

SUERO Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

500 nm, Hg 546 nm 1 cm de espesor 15-25oC ó 37oC frente a reactivo blanco


SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Glucosa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,343 mmol/l (6.18 mg/dl).

LINEALIDAD

Macro

Semi-Micro

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o muestra 20  l Reactivo 2000  l

--2000  l

10  l 1000  l

--1000  l

Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25 C ó 10 min a 37 C y medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y de la muestra (AMuestra) frente al reactivo blanco antes de 60 min. 

Concentración de glucosa (mmol/l) =

PRECISION Análisis (Intra)



CÁLCULO MANUAL AMuestra

El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 32,1 mmol/l (578 mg/dl). Para muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 3.

Patrón conc. x (mmol/l)

Media (mmol/l) DE CV(%) n

Amuestra x

Patrón conc. (mg/dl)

APatrón

Nivel 3 15.0 0.640 4.26 20

Nivel 2 6.53 0.269 4.11 20

Nivel 3 15.0 0.774 5.15 20

Análisis (Inter)

APatrón

(mg/dl) =

Nivel 2 6.53 0.203 3.11 20


NORMALIZACIÓN El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia NIST 917b y NIST 965a de Glucosa.

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MANUAL GL 364 CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9091 X + 0.5645 y un coeficiente de correlación r = 0,9898 Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 0.39 y 21.3 mmol/l.

ORINA LINEALIDAD El ensayo es lineal hasta una concentración de glucosa de 30,6 mmol/l (551 mg/dl). Para muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 3.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Glucosa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,295 mmol/l (5,32 mg/dl).

PRECISION Análisis (Intra) Media (mmol/l) DE CV% n

Nivel 2 2.68 0.073 2.71 20

Nivel 3 15.8 0.723 4.59 20

Nivel 2 2.68 0.068 2.53 20

Nivel 3 15.8 0.738 4.68 20

Análisis (Inter) Media (mmol/l) DE CV% n

REFERENCIAS 1. Barham, D, and Trinder, P. Analyst 1972; 97: 142. 2. Teuscher, A. and Richterich, P. Schweiz Med. Wschr. 1971; 101: 345 and 390. 3. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 246-250


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GLUTAMATO DESHIDROGENASA (GLDH)

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón/Substrato Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C.

R1b. Enzima/Coenzimas No. Cat. GL 441

MANUAL RX MONZA

Reconstituir el contenido de una botella de Enzima/ Coenzima 2 con 6 ml de Tampón/Substrato 1. Estable durante 1 semana entre +2 y +8°C.

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Glutamato Deshidrogenasa (GLDH) en el suero. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza.

No. Cat. GL 442 Reconstituir el contenido de un frasco de Enzima/ Coenzima 2 con una parte de Tampón/Substrato 1 y transferir todo el contenido a la botella 1 enjuagando el frasco 2 varias veces. Estable durante 1 semana entre +2 y +8°C.

No. Cat. GL 441 8 x 6 ml

R1a. R1b. R2.

Tampón/Substrato Enzima/Coenzima -oxoglutarato

1 x 70 ml 8 x 6 ml 2 x 10 ml

GL 442 5 x 100 ml

R1a. R1b. R2.

Tampón/Substrato Enzima/Coenzima -oxoglutarato

5 x 100 ml 5 x 100 ml 2 x 20 ml

Este es un método estándar optimizado de acuerdo a las recomendaciones del Deutsche Gesellschaft für Klinische Chemie. Este procedimiento mide la reacción de arrastre no específica.

PRINCIPIO(1) GLDH

-oxoglutarato

+ NADH + NH 4+

glutamato+NAD++H2O

MUESTRA Suero. Los sueros hemolíticos y lipémicos interfieren con el análisis.



R1a. Tampón/Substrato Tampón Trietanolamina Acetato de Amoniaco EDTA

R1b. Enzima/Coenzima

R2.

ADP NADH LD

-oxoglutarato

50 mmol/l, pH 8,0 100 mmol/l 2,5 mmol/l 1,0 mmol/l 0,2 mmol/l ≥ 2 U/ml

7 mmol/l

R2.

-oxoglutarato

Reconstituir el contenido de un frasco de -oxoglutarato 3 con el volumen apropiado de agua doblemente destilada:10 ml para el kit de 8 x 6 ml (GL 441) 20 ml para el kit de 5 x 100 ml (GL 442) Estable durante 8 semanas entre +2 y +8°C ó 7 días entre +15 y +25°C.

Nota: Si utiliza este ensayo en un sistema automatizado, por favor consulte la hoja de procedimiento de ese sistema, según las instrucciones de reconstitución puede ser diferente.

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón/Substrato Enzima/Coenzima -oxoglutarato

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351) Salino RX series (No. Cat. SA 3854)

PROCEDIMIENTO Seleccione GLDH en la pantalla de ejecución y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.



Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio.

Sample Reactivo R1

Las soluciones R1a y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

Reactivo R2

La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.

0.10 ml 0.50 ml

Mezclar e incubar durante exactamente 5 minutos a 37°C o 10 minutos a 20-25°C 0.02 ml

Mezclar y aspirar en el Monza Rx inmediatamente.

RX MONZA CALIBRACIÓN El uso de solución salina y la calibración Randox Nivel 3 en suero se recomienda para la calibración. La calibración se recomienda a los cambios en el lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.


Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. PAGE 1 OF 2

MANUAL/ RX MONZA GL 441 PARA USO MANUAL Longitud de onda: cubeta: Temperatura: Medición:

LINEALIDAD 340 nm (Hg 334 nm or Hg 365 nm) 1 cm de paso de la luz 25°C contra el aire

Introducir en una cubeta:

Macro

Semi Micro

Enzima/Coenzima (25°C) (R1) Suero

2.5 ml 0.5 ml

1.0 ml 0.2 ml

Mezcle bien y deje reposar a 25 ° C durante 3 minutos, luego medir la absorbancia A1, deje reposar durante exactamente 5 minutos y leer absorbancia A2 (no específica de reacción lenta). -oxoglutarato

(R2)

0.1 ml

0.04 ml

El método es lineal hasta una concentración de 77,3 U/l. Si la concentración de la muestra supera este valor, diluir la muestra 1 +4 con el 0,9% de NaCl y repetir el test. Multiplique el resultado por 5.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Glutamato Deshidrogenasa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 2,90 U/l.

PRECISION Precisión Dentro del Análisis

Mezclar bien y leer la absorbancia A3, deje reposar durante exactamente 5 minutos a 25 ° C y leer la absorbancia A4. (A3-A4) - (A1-A2) = A / 5 minutos


MANUAL DE CÁLCULO

Precisión Entre Análisis

Para calcular la actividad de la GLDH utilizar la siguiente fórmula: U/l (25°C) = 197 x A 340 nm / 5 min. U/l (25°C) = 365 x A Hg365 nm / 5 min. U/l (25°C) = 201 x A Hg334 nm / 5 min.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

INTERFERENCIAS NO ESPECIFICAS Se ha observado una interferencia no específica con la medición de la actividad del glutamato deshidrogenasa en el 60% de los sueros. En una actividad normal del glutamato deshidrogensa equivale a 0,4 U/l por regla general y en ocasiones excede 1 U/l. Para tener en cuenta la interferencia no específica es necesario estimar un blanco de suero con -oxoglutarato.


Nivel 1 13.5 0.562 4.16 20

Nivel 2 28.3 0.985 3.48 20

Nivel 1 13.5 0.764 5.66 20

Nivel 2 28.3 1.56 5.53 20

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9585 X +0.1913 y un coeficiente de correlación r = 0,9944. se analizaron 40 muestras de pacientes abarcando un rango de 3,13 a 58,06 g/l.

REFERENCIAS 1. Schmidt, E. and Schmidt, F.W. In: Method of Enzymatic Analysis, 3rd ed. H.K. Bergmeyer, J. Bergmeyer, and M. Grosse, Eds. Weirheim, Verlag Chemie, 1983, 3: 216-227. 2. In: Clinical Guide to Laboratory Tests 2nd ed. N. W. Tietz, Eds. W.B. Saunders Company. Philadelphia 1990 p.260. 3. Schmidt, E. et al (1992) Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 30 pp 493-502.

VALORES DE NORMALIDAD EN EL SUERO (2,3) 25°C Hombres: Mujeres:

< 4,0 U/l < 3,0 U/l

37°C <7,0 U/l <5,0 U/l


CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza en funcionamiento a 37ºC. Revisado 12 Aug 11 bm Rev. 002

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GLUCOSE

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

GOD/PAP (LIQUIDO) MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Glucosa en el sangre, suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para uso Manual.

Cat. No. GL 2623

R1. CAL.

Glucosa Reactivo Patrón

6 x 100 ml 1 x 5.5 ml

GL 2614

R1. CAL.

Glucosa Reactivo Patrón

2 x 500 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO La medición exacta de la glucosa en suero o plasma es importante en el diagnóstico y el tratamiento de trastornos del metabolismo de hidratos de carbono tales como diabetes mellitus, hipoglucemia neonatal, hipoglucemia idiopática y de carcinoma de células de islotes pancreáticos. La glucosa se mide a menudo en colaboración con diversas pruebas de tolerancia tras la administración de dosis de la leucina, la insulina, el glucagón o glucosa.

PRINCIPIO La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona, catalizado por la peroxidasa, con f enol y 4-aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina rojo-violeta.

GOD

Acido glucónico + H2O2 POD

2H2O2+ 4-aminofenazona + fenol

La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautas locales.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio ba jo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Glucose Reactivo Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad entre +2 y +8°C.

CAL. Patrón

PRINCIPIO DE LA REACCION(1) Glucosa + O2 + H2O

Reactivo contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico.

quinoneimina + 4H2O

RECOGIDA DE MUESTRAS Y ALMACENAMIENTO Suero, plasma de litio y orina. Si es posible, los componentes celulares separados de suero o plasma de inmediato, ya más tardar una hora después de recoger la muestra de sangre. Mediante la adición de un inhibidor de la glicólisis (NaF, KF), las muestras se pueden almacenar hasta 24 horas entre +15 y +25 ° C o hasta 7 días a 4 ° C. La orina: orina de 24 horas se debe recoger en un frasco oscuro y se mantuvieron en hielo. Orina al azar - una muestra fresca debe ser utilizado. La muestra debe ser almacenado entre +2 y +8 ° C si no se utiliza inmediatamente.

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad entre +2 y +8°C.

MATERIALES SUMINISTRADOS Glucosea Reactivo Patrón

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Uranil Acetato 0,16% (Cat. No. DP 647 2 x 500 ml)

NOTAS Es normal que este reactivo sea de un color rosa p álido que se oscurezca con el tiempo. Este hecho no afecta al funcionamiento del mismo.


R1.


Glucosa Reactivo Tampón fosfato Tampón MOPS Fenol 4-Aminofenazona Glucosa oxidasa Peroxidasa

CAL. Patrón

Glucosa

50 mmol/l, pH 7,0 50 mmol/l, pH 7,0 mmol/l 0,77 mmol/l ≥ 1,5 kU/l ≥ 1,5 kU/l Vedi inserto lotto-specifico

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MANUAL GL 2623 PROCEDIMIENTO PARA EL ENSAYO DE GLUCOSA GOD-PAP SIN DESPROTEINIZACION Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

500 nm, Hg 546 nm 1 cm de espesor 15-25°C ó 37°C frente a reactivo blanco

VALORES NORMALES(3,4) Suero,plasma

4.2-6.4 mmol/l (75-115 mg/dl)

Orina al azar

0.1 – 0.8 mmol/l (1 – 15 mg/dl)

Orina de 24 horas

<2.78 mmol/d (<0.5 g/d)


Pipetear en tubos de ensayo: Macro

Semi-Micro

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 22 ,2 mmol/l (400 mg/dl). Para muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con agua destilada y multiplicar el resultado por 3.

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o Muestra

Reactivo Blanco

Patrón o muestra 20  l Reactivo 2000  l

--2000  l

10  l 1000  l

--1000  l

SENSIBILIDAD

Mezclar, incubar durante 25 min a 15-25°C ó 10 min a 37°C y medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y de la muestra (AMuestra) frente al reactivo blanco antes de 60 min. Aunque la absorbancia se puede leer en cualquier momento durante un período de hasta 60 minutos después del tiempo especificado de incubación, el intervalo entre la adición de la muestra y la lectura debe de ser exactamente el mismo que para el Patrón/Control y la Muestra.

REFERENCIAS

CALCULOS AMuestra Concentración de glucosa (mmol/l) =

x Patrón conc. (mmol/l)

APatrón

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de sensibilidad ya que esto está limitado por la sensibilidad del espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones del ensayo un cambio de 0,01 unidades de absorbancia es equivalente a 0,013 mmol/l (0,23 mg/dl). 1. Barham, D, and Trinder, P. Analyst 1972; 97: 142. 2. Clinical Chemistry Principles and Techniques, Second E dition, R.J. Henry, D.C. Cannon and J.W. Winkelman Editors, Harper and Row, Maryland, USA, 1288, 1974. 3. Teuscher, A. and Richterich, P. Schweiz Med. Wschr. 1971; 101: 345 and 390. 4. Tietz, N.W. Clinic al Guide to laboratory tests. 2nd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 246-250.

Amuestra (mg/dl) = APatrón

x Patrón conc. (mmol/l)

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

INTERFERENCIAS Se analizaron los siguientes analitos hasta los niveles indicados y se encontró que no interfieren: Haemoglobin Free Bilirubin Conjugate Bilirubin Triglycerides Intralipid

1000 mg/dl 25 mg/dl 25 mg/dl 1000 mg/dl 400 mg/dl

Revisado 13 Nov 08, bm Rev. 001

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GLUTATION REDUCTASA (GLUT RED) MANUAL RX MONZA



R1a. Tampón Fosfato Potásico EDTA

PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Glutation Reductasa en el suero, el plasma y los eritrocitos. Este producto es a decuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.

250 mmol/l pH 7,3 0,5 mmol/l

R1b. Substrato GSSG

R2.

NADPH

2,2 mmol/l 0,17 mmol/l

No. Cat. GR 2368 5 x 5 ml

R1a. Tampón R1b. Substrato R2. NADPH

1 x 70 ml 5 x 5 ml 5 x 3 ml


SIGNIFICADO CLINICO El análisis de Glutation Reductasa se ha utilizado en la detección de enfermedades hepáticas y malignas, en la valoración de la nutrición (estado de la riboflavina) y la detección de estados de deficiencia determinados genéticamente. Nota: Asegurarse de que los estados aparentes de deficiencia enzimática no son debidos a la reducción de la riboflavina.


Principio del Análisis (1)

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón

El Glutation reductasa cataliza la reducción de glutation (GSSG) en presencia de NADPH, el cual se oxida a NADP+. La disminución en la absorbancia se mide a 340 nm. NADPH +

+ GSSG

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C.

R1b. Substrato

GR

H+

Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio ba jo condiciones apropiadas de laboratorio.

NADP + + 2

GSH

Reconstituir el contenido de un frasco de Substrato 2 con 5 ml de Tampón 1. Estable durante 2 días cuando se conserva entre +2 y +8°C.

(GSH = Glutation Reducido)

PREPARACION DE LA MUESTRA Suero, Plasma o Eritrocitos. Preparación del Eritrocito. Centrifugar 0,5 ml de sangre entera durante 5 min a 2000 rpm. Eliminar el plasma y la capa de color de ante, asegurandose de que no se quiten demasiados eritrocitos, arriesgando así un muestreo de células no representativo. Lavar los eritrocitos tres veces volviendo a suspenderlo en NaCl al 0,9%, y centrifugando durante 5 min a 2000 rpm después de cada lavado. Lisar las células volviendo a suspenderlas en H20 bidestilada fría, guardar hasta 0.5 ml. Dejar reposar durante 10 min entre +2 +8°C. Centrifugar el lisado durante 5 min a 2000 rpm para eliminar el estroma. Diluir 100  l de lisado con 1,9 ml de solución NaCl al 0,9% para el análisis.

R2.

NADPH Reconstituir un frasco de NADPH 3 con 3 ml de H20 bidestilada. Estable durante 2 días cuando se conserva entre +2 y +8°C.

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Substrato NADPH

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Suero de Control de Glutation Reductasa Randox GR 2608

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MANUAL/ RX MONZA GR 2368 PROCEDIMENTO

CONTROL DE CALIDAD

Seleccione GR en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

Se recomiendan los Sueros de Control de Glutation Reductasa para el control de calidad diario. Analizar el control al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.


ddH2O Patrón Muestra R1 Mezclar bien R2

Reagent Blank S0 20 µl 500 µl 100 µl

Patrón S1 20 µl 500 µl

Muestra 20 µl 500 µl

100 µl

100 µl

Mezclar y aspirar en el Monza RX.

ESPECIFICIDAD

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda para la calibración el uso de solución salina y suero de calibración Randox glutatión reductasa. La calibración se recomienda con el cambio de lote o como se indica por los procedimientos de control de calidad.

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

340 nm 1 cm de espesor 37°C. frente al aire

El Glutation Reductasa es altamente específico para Glutation(GSSG).

RANGO DE REFERENCIA(2) Plasma/Suero Eritrocitos

33 - 73 U/l 4,7 – 13,2 U/gHb

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de normalidad, ya que pueden darse variaciones regionales.

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza a una temperatura de 37oC, con el volumen de aspiración fijado en 500 µl.

Pipetear en la cubeta Lisado Diluido Substrato (R1)

40  l 1000  l

Mezclar bien NADPH (R2)

200  l

LINEARIDAD El ensayo es lineal hasta 387 U/. Las muestras mayores que este debe ser diluido con 1 +9 0,9% de solución de NaCl y re-ensayó. Multiplicar el resultado por 10.

Mezclar, y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer la absorbancia inicial al cabo de 1 minuto. Leer de nuevo al cabo de 2, 3, 4 y 5 minutos.

SENSIBILIDAD

CÁLCULO MANUAL

PRECISION

La actividad del Glutation Reductasa se puede calcular a partir de la siguiente fórmula:

Within run precision

a) b)

U/l sangre entera = 4983 x ∆A 340 nm/min x Factor de Dilución (20) Convirtiendo a u/g Hemoglobina

ejemplo Una muestra contiene un nivel de hemoglobina de 16 g/dl ó 160 g/l. Valor de Glutation Reductasa: 1488 U/l. Por lo tanto el valor de la muestra =

1488 ─── 160

Se deberá de considerar como el límite de detección un valor de 9.69 U/l.

Mean (U/l) SD CV (%) n

Level 2 42.0 2.03 4.84 20

Level 3 86.9 2.24 2.58 20

Level 2 42.0 2.75 6.55 20

Level 3 86.9 3.75 4.32 20

Total precision

=

9,3 u/gHb

Mean (U/l) SD CV (%) n

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MANUAL/ RX MONZA GR 2368 CORRELACION El método de Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.017 X + 1.54 con un coeficiente de correlación r = 0.9888. Se analizaron 42 muestras con valores de entre 14 y 309 U/l.

REFERENCIAS 1. Goldberg D.M. & Spooner RJ (1983) in Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyen, H.V. Ed.) 3rd edn. vol 3, pp 258-265, Verlog Chemie, Deerfield Beach, Fl. 2. Melissinos, K.G.,Delidov, A.Z., Varsov, A.G., Begietti, Drivas, G.J., Nephron, 28: 76-79, (1981).

S.S.,

Revisado 15 Sep 10 bm Rev 001

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IgA

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1. Tampón Ensayo

IMMUNOTURBIDIMETRIC ASSAY FOR IgA MANUAL RX MONZA


R2. Reactivo Anticuerpo PARA SU USO


Para el análisis cuantitativo in vitro de IgA en el suero y el plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.


No. Cat.

Tampón Ensayo Reactivo Anticuerpo

IA 2447

R1. Tampón Ensayo R2. Reactivo Anticuerpo

1 x 60 ml 1 x 5 ml

PRINCIPIO


La muestra que contiene IgA humano se diluye adecuadamente y después se reacciona con antisuero específico para formar un precipitante que se mide turbidimétricamente a 340 nm. Se puede determinar la concentración de IgA en la muestra construyendo una curva estándar a partir de las absorbancias de los patrones.

Calibrador de Proteína Específica Valorado Líquido Randox para análisis de muestras diluídas, No. Cat IT 2692 Controles de Proteína Específica Valorados Líquidos Randox Nivel 1 No. Cat. PS 2682 Nivel 2 No. Cat. PS 2683 Nivel 3 No. Cat. PS 2684 Solución de NaCl al 0,9%

EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA

PROCEDIMIENTO (Análisis Manual)

Se puede utilizar el suero, plasma heparinizado o plasma EDTA. El IgA es estable durante 3 días entre +15 y +25°C, 7 días entre +2 y +8°C, o 6 meses a -20°C.

Diluir las muestras 1+20 con solución de NaCl al 0,9%.


Concentraciones Iniciales en la Prueba

R1. Tampón de Ensayo Glicol de Polietileno Tampón Tris/HCl Cloruro Sódico

R2. Reactivo Anticuerpo

máximo 6% 20 mmol/l, pH 7,4 150 mmol/l

Se recomienda que todos los reactivos y muestras de suero se equilibren a temperatura ambiente antes de usar. Se deberá preparar una curva estándar para cada análisis que se realice y se recomienda que las muestras se analicen en duplicado junto con controles apropiados. Experiencia con el kit podría permitir al operador realizar el análisis un cierto número de veces sin recalibración con tal que se utilizen el mismo reactivo de trabajo, espectrofotómetro, cubeta y condiciones del análisis tales como la temperatura. En caso de elegir esta alternativa se deberá prestar especial consideración a los resultados del control.

Anti IgA (humano) Seleccone la IgA en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. Los Reactivos R1 y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.


Pipetear en la Cubeta: S0 Blanco

SO*

S1 S1 Blanco

ddH2O

50  l

50  l

---

Diluido CAL Patrón

---

---

---

---

500 µl

500 µl 500 µl 500 µl

---

Muestra Muestra Blanco

---

---

50  l 50 µl

---

---

---

50 µl

Diluido Muestra Tampón Ensayo (R1)

---

50µl

500 µl 500 µl

Mezclar bien y se incuba a 25ºC fuera del an alizador durante 10 minutos Reactivo Anticuerpo (R2) ---

50 µl ---

50 µl

---

50 µl

Mezclar bien y se incuba a 25˚C fuera del analizador durante 30 minutos. Inserte en el soporte de RX monza celda de flujo y pulse leer. *Blanco de Reactivo

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MANUAL/ RX MONZA IA 2447 PARA USO MANUAL

RANGOS DE NORMALIDAD (1,2) Adultos:


340 nm 1 cm de espesor 25°C frente al aire

Pipetear en la cubeta apropiada:

Recién Nacidos:* (2-8 días)

Patrones

Muestra

100 l de cada 1,0 ml

100 l 1,0 ml

Patrones Diluidos Muestra Diluida Tampón de Ensayo R1

Niños:* (8-10 años)

54 - 268 IU/ml (0,9 – 4,5 g/l) 90 - 450 mg/dl 90 ± 33 IU/ml (1,5 ± 0,5 g/l) 151 ± 55 mg/dl 0,18 ± 0,6 IU/ml (0,003 ± 0,01 g/l) 0.3 ± 1.0 mg/dl

* valor medio ± desviación estándar

Mezclar bien, medir la A1 al cabo de 10 mins.



FACTORES DE CONVERSIÓN

Reactivo Anticuerpo R2 100 l

100 l

Mezclar bien, medir la A2 al cabo de 30 mins.

CÁLCULO MANUAL Calcular el cambio en absorbancia para cada patrón y muestra. ei. A = A2 - A1 Después trazar la media de las concentraciones estándar frente a los valores A correspondientes utilizando papel gráfico. [Utilizar un programa de ordenador apropiado para curva, si está disponible, en una transformación logit/log]. La concentración de la muestra IgA se obtiene leyendo el valor A a partir de la curva de calibración. No intentar extrapolar por encima o debajo del rango de patrones

CALIBRACION Recomendamos el Calibrador de Proteína Específica Valorado Líquido Randox para análisis de muestras diluídas.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Controles de Proteína Específica Valorados Líquidos Randox, Nivel 1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

IU/ml x 1,68 mg/dl x 0,595

= mg/dl = IU/ml

(Relacionado al estándar de inmunoglobulina WHO 67/86)

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los siguientes datos de funcionamiento se obtuvieron mediante el analizador Rx Monza a una temperatura de 37°C.

LINEALIDAD Este ensayo es lineal hasta 785 mg/dl.

SENSIBILIDAD La concentración mí nima detectable de IgA es 45.6 mg/dl.

NOTA: Si el valor de la muestra excede el patrón más alto: Diluir la muestra diluida previamente (1+20) otra vez 1+1 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 2. (P.S.: ver gammopatía a continuación).

Si el valor de la muestra es inferior al patrón más bajo: Diluir la muestra pura 1+10 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 0,52. (P.S.: Ver gamopatía a continuación)

GAMMOPATIA Las muestras que se sospecha tienen gammopatía monoclonal o policlonal deberán de someterse siempre a electrofórosis de la proteína para poder detectar cualquier exceso de antígeno. El exceso de antígeno puede resultar en resultados bajos falsos. También se podría sospechar Hipergammoglobulinemia si al volver a empezar la reacción con 100 l de la muestra diluida no resulta en un incremento significativo en la absorbancia.

ESPECIFICIDAD No existe una reacción cruzada con IgG y IgM bajo las condiciones del análisis. Las muestras extremadamente lipémicas o h emolíticas y los niveles elevados de detergentes iónicos pueden interferir en el análisis.

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MANUAL/ RX MONZA IA 2447 PRECISION Precisión Dentro del Análisis Nivel 1 Media (mg/dl) 192 DE 2.98 CV (%) 1.55 n 20

Nivel 2 291 5.62 1.93 20

Precisión Total Media (mg/dl) DE CV (%) n

Nivel 1 192 13.2 6.86 20

Nivel 2 291 17.8 6.12 20

CORRELACIÓN El método Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9955 X + 0.4802 y un coeficiente de correlación r = 0,9975 Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 49 y 669 U/l.

REFERENCIAS 1. Becker, W.: Laboratoriumblätter 1980; 30: 25. 2. Geiger, H. & Hoffman, P.: Z. Kinderheilk 1970; 109: 22. 3. Whicher, J.J., Price, C.P., Spencer, K., Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1983; 18: 213-216.


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IgG

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Tampón Ensayo

ENSAYO INMUNOTURBIDIMETRICO PARA IgG Análisis Manual RX MONZA


R2. Reactivo Anticuerpo PARA SU USO.


Para el análisis cuantitativo in vitro de la IgG en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador Rx Monza.


Cat. Nos.

Tampón Ensayo Reactivo Anticuerpo

IG 2448

R1. Tampón Ensayo R2. Reactivo Anticuerpo

1 x 60 ml 1 x 5 ml

PRINCIPI


La muestra que contiene IgG h umana se diluye adecuadamente y después se hace reaccionar con antisuero específico para formar un precipitante que se mide turbidimétricamente a 340 nm. Se puede determinar la concentración de IgG en la muestra construyendo una curva estandar a partir de las absorbancias de los patrones.

Solución de NaCl al 0,9% (w/v). Calibrador de Proteína Específica Líquido Randox para análisis de muestras diluídas, (No. Cat IT 2692) Controles de Proteínas Específicas Valorados Líquidos Nivel 1 No. Cat. PS 2682 Nivel 2 No. Cat. PS 2683 Nivel 3 No. Cat. PS 2684

EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA

PROCEDIMIENTO (Análisis Manual)

Se puede utilizar suero, plasma heparinizado o plasma EDTA.La IgG es estable durante 3 días entre +15 y +25°C, 7 días entre +2 y +8°C, o 6 meses a -20°C.

Diluir las muestras 1+20 con solución de NaCl al 0,9%.


Concentraciones Iniciales en la Prueba

R1. Tampón Ensayo Glicol Polietileno Tampón Tris/HCl Cloruro Sódico

R2. Reactivo Anticuerpo

máximo 6% 20 mmol/l, pH 7,4 150 mmol/l

IgG Anti (humana)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. Los Reactivos R1 y R2 contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua p ara evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expue stas, deberán limpiarse con hidróxido sódico al 10%. Hojas de Salud y Seguridad están disponibles si se desean.


Se recomienda que todos los reactivos y muestras de suero se equilibren a temperatura ambiente antes de usar. Se deberá preparar una curva estandar para cada análisis que se realice y se recomienda que las muestras se analicen en duplicado junto con controles apropiados. La frecuencia de recalibración (tras un cierto número de usos) podrá ser establecida a partir de la experiencia en el uso de este kit, siempre y cuando se utilizen el mismo reactivo de trabajo, espetrofotómetro, cubeta y condiciones del análisis tales como la temperatura. En caso de elegir esta alternativa se deberá prestar especial consideración a los resultados del control. Seleccone la IgG en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: S0 Blanco ddH2O Diluido CAL Patrón Diluido Muestra Tampón Ensayo (R1)

SO*

S1 S1 Blanco

10  l

10  l

---

---

---

---

---

---

10  l

10 µl

---

---

---

---

---

---

10 µl

500 µl

500 µl

500 µl 500 µl

Muestra Muestra Blanco

500 µl

10µl 500 µl

Mezclar bien y se incuba a 25C fuera del analizador durante 10 minutos Reactivo Anticuerpo (R2) ---

50 µl

---

50 µl

---

50 µl

Mezclar bien y se incuba a 25C fuera del analizador durante 30 minutos. Inserte en el soporte de RX monza celda de flujo y pulse leer. *Blanco de Reactivo

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MANUAL/ RX MONZA IG 2448 PARA USO MANUAL

ESPECIFICIDAD


340 nm 1 cm de espesor 25 C frente al aire 

Las muestras extremadamente lipémicas o hemolíticas y altos niveles de detergentes iónicos pueden interferir con la prueba.

RANGOS DE NORMALIDAD (1,2)


Patrones diluidos Muestra diluida Tampón ensayo (R1)

No existe ninguna reacción con IgA e IgM bajo las condiciones del análisis.

Patrones

Muestra

20  l de cada 1,0 ml

20  l 1,0 ml

Adultos:

92 - 207 IU/ml (8 - 18 g/l) (800 - 1800 mg/dl)

Niños:* (8-10 años)

122 ± 23,0 IU/ml (10,6 ± 2 g/l) (1055 ± 200 mg/dl)

Neonatos:* (2-8 días)

134 ± 34,7 IU/ml (11,6 ± 3,0 g/l) (1164 ± 301 mg/dl)

Mezclar bien, medir A1 al cabo de 10 minutos. Pipetear en la cubeta apropiada: Reactivo Anticuerpo (R2)

100  l

100  l * valor medio ± desviación estandar

Mezclar bien, medir A2 al cabo de 30 minutos.

CÁLCULO MANUAL Calcular el cambio en absorbancia para cada patrón y muestra. A = A2 - A1

Después trazar la media de las concentraciones del patrón frente a los valores A correspondientes utilizando papel gráfico. [Utilizar un programa de ordenador apropiado para curva, si está disponible, en una transformación logit/log]. La concentración de IgG en la muestra se obtiene leyendo el valor A a partir de la curva de calibración. No intentar extrapolar por encima o debajo del rango de patrones.


FACTORES DE CONVERSIÓN IU/ml x 8,68 mg/dl x 0,1152

= mg/dl = IU/ml

(Relacionado al patrón de inmunoglobulina WHO 67/86)

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO

CALIBRACION

Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de RX monza en el modo de cubeta funcionando a una temperature de 25ºC.

Se recomienda el Calibrador de proteína Específica Líquido Randox para análisis de muestras diluídas.

LINEALIDAD Este ensayo es lineal hasta 5025 mg/dl.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Controles de Proteínas Específicas Valorados Líquidos Randox, Niveles 1, 2 y 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de IgG es 337 mg/dl.

NOTA: Si el valor de la muestra excede el patrón más alto: Diluir la muestra diluida previamente (1+20) otra vez 1+1 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 2. (P.S.: ver gammopatía a continuación).

Si el valor de la muestra es inferior al patrón más bajo: Diluir la muestra pura 1+10 con solución NaCl al 0,9% (w/v). Multiplicar el resultado por 0,52. (P.S.: Ver gamopatía a continuación)

GAMMOPATIA Las muestras que se sospecha tienen gammopatía mononuclear o polinuclear deberán someterse siempre a electroforosis de la proteína para poder detectar cualquier exceso de antígeno. El exceso de antígeno puede resultar en falsos resultados bajos. También se podría sospechar Hipergamaglobulinemia si al volver a empezar la reacción con 100  l de la muestra diluida no resulta en un incremento significativo en la absorbancia.

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MANUAL/ RX MONZA IG 2448 PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 1043 10.3 0.99 20

Nivel 3 1648 19.6 1.19 20

Nivel 2 1043 43.2 4.14 20

Nivel 3 1648 26.4 1.60 20


CORRELACIÓN El método Randox (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9780 X + 18.137 y un coeficiente de correlación r = 0,9980 Se analizaron 49 muestras de pacientes con valores de entre 399 y 4859 mg/dl.

REFERENCIAS 1. Becker, W.: Laboratoriumblätter 1980; 30: 25. 2. Geiger, H. & Hoffman, P.: Z. Kinderheilk 1970; 109: 22. 3. Whicher, J.J., Price, C.P., Spencer, K., Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences, 1983; 18: 213-216.


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L-LACTATO (LAC)


PAP Determinación Enzimática de L-Lactato MANUAL RX MONZA PARA SU USO

Para la determinación cuantitativa in vitro de L-Lactato en plasma y CSF. Este ensayo és específico para la determinación de LLactato. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

Cat No. LC 2389 16 x 6 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo Enzima CAL Patrón

1 x 100 ml 16 x 6 ml 1 x 5.5 ml

METODO COLORIMETRICO La concentración de L-Lactato en la muestra se determina de acuerdo a la siguiente reacción. Lactato Oxidasa

L-Lactato + O2

piruvato + H2O2

H2O2 + 4-aminoantipirina + TOOS

La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranes mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Existen hojas de Salud y Seguridad disponibles


Peroxidasa

Producto púrpura + 4H2O TOOS =

N-etil-N-(2 hidroxi-3-sulfopropil) m-toluidina

El L-Lactato es uno de resultados netos de la gluconeogénesis producida en el músculo esquelético activo. El L_Lactato és metabolizado en el hígado. El NADH és producido en la glucólisis en los tejidos por oxidación aeróbica. Si no hay presencia suficiente de oxígeno para que se produzca esta oxidación, se regenera NAD+ a partir de NADH en la reducción de piruvato a lactato Una concentración incrementada de lactato en la sangre es así un indicador de metabolismo anaeróbico hecho que se da, por ejemplo, si disminuye el flujo de sangre a los tejidos y el suministro de oxígeno es insuficiente. En casos de reducciones de oxígeno severas, podría darse la “Acidosis Láctica”. El LLactato por lo tanto se puede utilizar como un indicador de fallo circulatorio severo.

MUESTRA Plasma (anticoagulantes: litio heparina lodoacetato, fluoruro EDTA, fluoruro oxalato, fluoruro sódico). CSF Utilizar sin modificación. La sangre se toma de una vena libre de estasis y se conserva en un baño de hielo. El plasma se separa por medio de la centrifugación durante los 30 minutos siguientes. La demora en la separación puede llevar a un incremento de los valores de lactato observados. El análisis se deberá llevar a cabo inmediatamente.

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C. 

R1b. Reactivo Enzima Reconstituir el contenido de un frasco de Reactivo Enzima R1b con 6 ml de Tampón R1a. Estable durante 6 semanas entre +2 y +8 C ó 2 semanas entre +15 y +25 C, cuando se conserva protegido de la luz. 



CAL Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C. 

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo Enzima Patrón

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532)

NOTAS Evitar la contaminación del reactivo, muestras y material de cristal por medio de la saliva o el sudor dado qu e tienen contenidos elevados de lactato.


Concentraciones Iniciales

R1a. Tampón Tampón Pipes TOOS Azida Sódica

R1b. Reactivo Enzima 4-aminofenazono Peroxidasa Lactato oxidasa Ascorbato oxidasa

CAL Patrón

100 mmol/l, pH 7,20 2,1 mmol/l 1 g/l 0,4 mmol/l ≥ 1000 U/l ≥ 600 U/l ≥ 10000 U/l Especifico para cada lote

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PROCEDIMIENTO Seleccione LAC en la pantalla de Monza ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua con agua dulce doble destilada (ddH2O) como se indica en las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: Reactivo Blanco S0 Patrón S1 5 µl 5 µl 500 µl 500 µl

dd H2O Patrón Muestra Reactivo


Mezclar e incubar por 5 minutos a 37°C. Inserte la cubeta en el soporte del flujo de célula y oprima leer. Se recomienda la calibración durante el cambio de lote de reactivo, o como se indica en los procedimientos de control de calidad, usando el estándar proporcionado en el Kit.

PARA USO MANUAL

Muestra Patrón Reactivo

mmol/l 0,5 – 2,22

mg/dl 4,5 - 20


CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Las siguientes características de rendimiento se obtuvieron utilizando un Rx Monza en modo cubeta funcionando a 37°C y calibrado en el estándar proporcionado por el Kit.

El test es lineal hasta una concentración de L-Lactato de 19,7 mmol/l (178 mg/dl). Diluir las muestras superiores a esta concentración 1+1 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado por 2.

SENSIBILIDAD 550 nm 1 cm de espesor 20-25 C, 37 C frente al blanco de reactivo 



La concentración detectable mínima de L-lactato con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,165 mmol/l (1,49 mg/dl).

PRECISION

Pipetear en los tubos de ensayo: Blanco del Reactivo ( l) --1000

Plasma

LINEALIDAD

CALIBRACION

Longitud de onda Cubeta Temperatura de Reacción Medición

VALORES DE NORMALIDAD(5)

Patrón ( l) -10 1000

Muestra ( l) 10 -1000

Mezclar, incubar durante 10 minutos entre 20 - 25 C ó 5 minutos a 37 C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y el patrón (Apatrón) frente al blanco del reactivo dentro de los siguientes 30 minutos. 

Precisión Dentro del Análisis Media (mg/dl) DE CV(%) n

Amuestra Concentración de L-Lactato =

x Concentración Apatrón

del patrón (mg/dl)

Amuestra Concentración de L-Lactato =

x Concentración Apatrón

del patrón (mmol/l)

NORMALIZACIÓN El L-Lactato Randox Estándar incluido en este Kit es trazable a L-Lactato método de referencia Gravimétrico.


Nivel 3 53.3 0.458 0.86 20

Nivel 2 13.1 0.749 5.72 20

Nivel 3 53.3 1.93 3.62 20

Precisión Total



CÁLCULO MANUAL

Nivel 2 13.1 0.106 0.81 20


CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó c on otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9382 X + 0.2605 y un coeficiente de correlación r = 0,9980 Se analizaron 49 muestras de pacientes con valores de entre 6.5 y 123 mg/dl.

REFERENCIAS 1. Shimojo N et al , CLIN CHEM 1989; 35(9): 1992 - 1994. 2. Shimojo N, Fujino K et al , CLIN CHEM 1991; 37(11) 1978 - 1980. 3. Lehninger Al: Principles of Biochemistry, Worth Publishers, New York, 1993, p 416. 4. Mascini M et al , CLIN CHEM. 1987; 34(4) 591 - 593. 5. Jacobs DS, Kasten BL, Demott WR and Wolfson WL: Laboratory Test Handbook, LEXI COMP INC, OHIO, 1990, p. 245.


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LIPASA (LPS)


Triacilglicerol Lipasa Método UV MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Lipasa en el suero y plasma. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

No. Cat. LI 188 20 x 2.5 ml

R1a. Tampón R1b. Sustrato CAL. Patrón

1 x 70 ml 20 x 2.5 ml 4 x 3.0 ml

LI 194 4 x 30 ml

R1a. Tampón R1b. Substrate CAL. Patrón

2 x 70 ml 4 x 30 ml 4 x 3.0 ml

SIGNIFICADO CLINICO (1) El sistema de test de la lipasa es un medio para medir la actividad del enzima lipasa en el suero y el plasma. La medición de la lipasa se utiliza en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades del páncreas tales como pancreatitis aguda y obstrucción del conducto pancreático.

METODO TURBIDIMETRICO(3)

monoglicérido + 2 ac. oléico

Se mide la disminución de la turbidez a 340 nm.

MUESTRA Suero o plasma heparinizado. La lipasa es estable en la muestra durante 5 días entre +2 y +8°C ó 24 horas entre +20 y +25°C.

Desoxicolato sódico Cloruro cálcico Trioleína Colipasa CAL. Patrón

PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD R1a. Tampón

Reconstituir el contenido de un vial de Sustrato R1b con el volumen apropiado de Tampón R1a. 2,5 ml para el kit de 20 x 2,5 ml (LI 188) 30 ml para el kit de 4 x 30 ml (LI 194) Estable durante 2 semanas cuando se conserva entre +2 y +8°C ó 5 días entre +15 y +25°C.

CAL. Patrón

Concentración en la prueba


R1a. Tampón R1b. Sustrato


Disolver el contenido de un vial de Patrón 3 en 3,0 ml de agua bidestilada, rotar lentamente durante 30 min antes de utilizar. Estable durante 5 días entre +2 y +8°C.


Tampón Tris


R1b. Sustrato

Lipasa

Componentes

La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%.

Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C.

PRINCIPIO Trioleína + 2H2O

La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico.

26 mmol/l, pH 8,9 16,7 mmol/l 0,04 mmol/l 0,3 mmol/l 4 mg/l Ver valor asignado en el inserto del lote específico

Tampón Sustrato Patrón


NOTAS(2) En raras ocasiones, el suero del paciente puede presentar un aumento de la absorbancia en vez de un descenso. La actividad de la lipasa en estas muestras normalmente se encuentra dentro del rango normal. Actividades extremadamente elevadas de lipasa pueden conducir a un considerable consumo de sustrato, siendo estos casos A1 menor de 0,500. Cuando esto ocurra, diluir la muestra 1+9 con una solución de NaCl 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 10. Es preferible utilizar cubetas desechables. Las cubetas de cristal deben lavarse abundantemente, especialmente después de haber s ido utilizadas para ensayos de triglicéridos o colesterol.

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MANUAL/ RX MONZA LI 188

PROCEDIMIENTO Seleccione LIP en la pantalla ejecutar prueba y lleve a cabo u n blanco de agua según las instrucciones.

INTERFERENCIA

Pipetear en la Cubeta:

VALORES NORMALES(4)

Reactivo Blanco S0 ddH20 Muestra CAL Patrón Reactivo

Patrón S1

20uL 500uL

20uL 500uL

Muestra 20uL 500uL

Mezclar cuidadosamente para evitar la formación de espuma, entonces inserte la cubeta en el soporte de flujo de células de RX monza y oprima leer.

La hemólisis interfiere en la prueba.

Suero: Hasta 190 U/l (37°C) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 37ºC.

LINEALIDAD

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomienda la calibración usando el CAL estándar proporcionado en el Kit. Calibrar en el cambio de lote de reactivo o según se indica en los procedimientos de control de calidad.

Si la actividad de la lipasa excede 940 U/l, diluir la muestra 1+1 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.

PARA USO MANUAL

La concentración detectable mínima de lipasa con un nivel aceptable de precisión se determinó en 24,5 U/l.


340 nm (Hg 365 nm o Hg 334 nm) 1 cm de espesor 37°C frente al aire


Reactivo Muestra Patrón

Patrón Macro Semi Micro

Muestra Macro Semi Micro

2,5 ml --0.1 ml

2,5 ml 0,1 ml ---

1,0 ml --0,04 ml

1,0 ml 0,04 ml ---

Mezclar. Evitar la formación de espuma. Leer la absorbancia A1 del patrón y de la muestra al cabo de 4 min. Después de otros 5 min leer la absorbancia A2 del patrón y de la muestra. A

de la muestra o del patrón = A1 - A2

CÁLCULO MANUAL Calcular el factor de la prueba de la siguiente manera: Factor =

Actividad(patrón) ────── Apatrón

Actividad lipasa en la muestra = Factor x Amuestra

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

SENSIBILIDAD

PRECISION Precisión Dentro del Análisis Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 129 6.05 4.69 20

Nivel 2 403 16.2 4.02 20

Nivel 1 129 6.57 5.09 20

Nivel 2 403 17.8 4.41 20

Precisión Total Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.0495 x -10.67 y un coeficiente de correlación r = 0,9832 Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 43-918U/l.

REFERENCIAS 1. Tietz NW et al . Lipase in serum-the elusive enzyme: An overview. Clin Chem 1993; 39:746-756. 2. Lott, J. A., et al . Clin. Chem. 1986; 32: 1920. 3. Ziegenhorn J., et al . Clin. Chem. 1979; 25: 1067. 4. Weisshaar, H.D., et al . (1981). Dtsch. Med. Wschr. 106: 239.


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MAGNESIO (AZUL DE XILIDIL)


Método Colorimétrico MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Magnesio en el suero, el plasma y la orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza.

No. Cat. MG 531 3 x 100 ml

R1. Reactivo de color CAL. Patrón

3 x 100 ml 1 x 5.5 ml

La solución R1 contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.

SIGNIFICADO CLINICO


El Magnesio es uno de los pr incipales cationes intracelulares en el cuerpo. Su acción está relacionada con la del calcio. La deficiencia de magnesio, hipomagnesemia, puede resultar en varias enfermedades neuromusculares, debilidad, temblores, tetania y convulsiones. Se asocia con hipocalcemia, terapia intravenosa, diabetes mellitus, alcoholismo, diálisis y embarazo.

Los reactivos deben utilizarse solamente para su propósito por personal de laboratorio calificado, y bajo condiciones de laboratorio apropiadas.

Los niveles elevados de magnesio en suero se asocian con deshidratación, acidez diabética grave y Enfermedad de Addison. Las condiciones que interfieren con la filtración glomerular como en el caso de fallo renal resultan en retención de magnesio y por ello aumento de sus niveles en suero.

Los iones de magnesio reaccionan con azul de xilidilo en un medio alcalino para formar un quelato soluble en agua de color morado-rojizo. La intensidad del color es pro porcional a la concentración de magnesio en la muestra. El Calcio se excluye de la reacción por medio de su conjugación c on el EGTA.

EXTRACCION Y CONSERVACION DE LA MUESTRA Suero, Plasma (no plasma tratado con EDTA) u orina. La muestra de orina de 24 horas puede contene r sedimentos que absorben el magnesio. Añadir unas gotas de ácido clorhídrico concentrado (pH 3-4) para disolver el sedimento y diluir con DDH2O 1+4 (resultado x 5).


R1.

Concentración Inicial de los Reactivos

Reactivo de Color Azul de Xilidilo Tampón Tris Carbonato Potásico EGTA

CAL. Patrón

Todos los reactivos están listos para su u so. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +25 C.

MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo de Color de Magnesio Patrón de Magnesio


PRINCIPIO(1-5)

Componentes

PREPARACION Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS

0,1 mmol/l 0,2 mmol/l 77 mmol/l 0,04 mmol/l Ver inserto lote específico

Material de pipeteo para el suministro de 10 l y 1,0 ml. Cronómetro y baño de agua o bloque de calentamiento para mantener una temperatura entre 20 - 25C. Un espectrofotómetro con una longitud de onda de 520 nm. Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532). Multisueros de Precisión Humanos Randox Nivel 2 (No. Cat. UN1557) y Nivel 3 (No. Cat. UE1558).

NOTA Todo el material deberá estar libre de contaminación de Magnesio. Las fluctuaciones en valores de blanco de más de un 10% en una serie, son más probables debido a la contaminación del material con magnesio. Lavar la muestra y los contenedores del reactivo con solución al 10% de Triton X 100, sumergir en ácido clorhídrico o Nítrico diluido de 1 a 2 horas y enjuagar con agua destilada. Invertir y dejar gotear hasta que se seque.

PROCEDIMIENTO Seleccione Mg en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta: Reactivo Blanco S0 Patrón S1 Muestra ddH2O 5  l Muestra 5  l Calibrador 5  l Reactivo 500  l 500  l 500  l Mezclar, incubar durante 5 minutos a 20-25 º C. Inserte la cubeta en el porta-RX monza celda de flujo y pulse Leer.

CALIBRACION Recomendó el uso de CAL estándar suministrado en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3. Calibrar el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.

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MANUAL/ RX MONZA MG 531 VALORES DE NORMALIDAD(6)

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubetas: Temperatura: Medición:

520 nm 1 cm de espesor 20 - 25C frente al blanco de reactivo

Procedimiento Macro

ADULTOS Suero Orina

0.65 – 1.05 mmol/l (1.58 - 2.55 mg/dl) 3.00 – 5.00 mmol/24 hrs (73 - 122 mg/24 hrs)


Pipetear en las cubetas: Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

Reactivo de Color Agua Destilada Patrón Muestra

2,0 ml 20 l -

2,0 ml 20 l -

2,0 ml 20 l

Mezclar bien e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Medir la absorbancia final de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al Blanco de Reactivo. El color resultante es estable durante 3 horas a temperatura ambiente.

Procedimiento Semi Micro Blanco de Reactivo

Patrón

Muestra

Reactivo de Color Agua Destilada Patrón Muestra

1,0 ml 10 l -

1,0 ml 10 l -

Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador de RX monza, en el modo de cubeta, calibrado en Calibración de nivel Randox Suero 3.

SUERO LINEARIDAD El método es lineal hasta 2,34 mmol/l (5,69 mg/dl). Las muestras con concentraciones más elevadas se deberán diluir 1+1 con agua doblemente destilada y repetir el análisis. Multiplicar el resultado por 2.

SENSIBILIDAD 1,0 ml 10 l

Mezclar bien e incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente. Medir la absorbancia final de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al Blanco de Reactivo. El color resultante es estable durante 3 horas a temperatura am biente.

CÁLCULO MANUAL Amuestra Concentración de Magnesio (mmol/l) = Apatrón Estándar (mmol/l) Amuestra Concentración de Magnesio (mg/dl) = Apatrón Estándar (mg/dl)

CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO

El nivel mínimo detectable se ha determinado como 0,036 mmol/l (0,088 mgl/dl).

PRECISION Intra assay Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 2.43 0.017 0.70 20

Nivel 3 4.50 0.020 0.44 20

Nivel 2 2.43 0.066 2.71 20

Nivel 3 4.50 0.081 1.79 20

Inter assay x Conc.

x Conc.

NORMALIZACIÓN Standard Randox magnesio incluido en el kit se puede rastrear al magnesio de materiales de referencia NIST 909b.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los r esultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

INTERFERENCIA Se analizaron los siguientes analitos hasta los niveles indicados y se encontró que no producen interferencias: Hemoglobina <1000 mg/dl (10 g/l) Bilirrubina <25 mg/dl (427 mol/l) Triglicéridos <1000 mg/dl (11 mmol/l)


MÉTODO DE COMPARACIÓN El método Randox (Y) se comparó con otro equipo de prueba disponible en el mercado (X). Cuarenta muestras de pacientes con valores que abarca el intervalo 1,75 a 5,58 mg / dl se ensayaron. El análisis de regresión lineal de los datos como resultado la siguiente ecuación. Y = 0.997 X - 0.0004 con un coeficiente de correlación, r = 0,9989

ORINA LINEARIDAD Este método es lineal to12.6 mmol/l (30,6 mg/dl).

SENSIBILIDAD El nivel mínimo detectable se ha determinado como 0,618 mmol/l (1,50 mg/dl).

REFERENCIAS 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Mann, C.K., Yoe, J.H., Anal. Chem. (1956), 28: 202-205. Mann, C.K., Yoe, J.H., Anal. Chim. Acta (1957), 16: 155-160. Ogata, H., Hiroi, L., Anal. Chem. (1959), 8: 21. Bohuon, C., Clin. Chim. Acta. (1962), 7: 811-817. Rice E.N., Lapara, C.Z., Clin. Chim. Acta. (1964) 10: 369. Teitz N.W. Clinical Guide to Laboratory Tests. W.B. Saunders Co (1983). Revisado 15 Sep 10 bm Rev. 001

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SODIO (Na)

CALIBRACIÓN Se recomienda el uso de la Calibración Randox Nivel 3 (CAL 2351), utiliza el blanco como S2 y lo diluye 4+1 como S1 (4 partes Cal Nivel 3 + 1 parte de agua) con agua doblemente destilada. Se recomienda realizar una calibración diaria de 2 puntos como se indica en el procedimiento de control de calidad.

Prueba Colorimétrica Enzimática RX Series 1

USO DEL REACTIVO La cuantificación in vitro de Sodio se determina en suero y plasma. Este producto es apto para utilizarse en los Analizadores de la RX Series.

No. Cat. NA7167

4 x 45 ml 4 x 45 ml

R1a. Solución Tampón R1b. Enzima R2a. Diluyente R2b. Sustrato

2 x 39 2 x 39

ml ml

MUESTRA Suero, plasma tratada con heparina o litio.

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1.Solución Tampón/Enzimas Transferir el contenido de un frasco de solución tampón R1 al frasco de Enzima R1b y disolver agitando suavemente, asegurando que el contenido

quede disuelto completamente. Transferir el contendido de la solución tampón R1a enjuagando el vial R1b varias veces. Evite la formación de espuma. Estable por 2 semanas de +2 hasta +8 C o 5 días de +15 hasta +25 C. Diluyente/Sustrato Transferir el contendio del frasco de Diluyente R2a en el frasco de Sustrato R2b y disolver agitando suavemente, asegurando que el contenido quede dusuelto completamente en el diluyente. Transferir el contendio en el diluyente R2b varias veces. Evite la formación de espuma. Estable por 2 semanas de +2 hasta +8°C o 5 días de +15 hasta +25°C. °

°

R2.

1. Verificar la configuración del analizador 2. Verificar la limpieza del analizador 3. Verificar la calidad del agua 4. Verificar la temperatura de reacción 5. Verificar la fecha de caducidad del reactivo 6. Contactar a Soporte Técnico de Randox Los requerimientos de control de calidad deberían ser determinados en concordancia con las regulaciones gubernamentales o con los requerimientos acreditativos correspondientes. CARACTERÍSTICAS ESPECÍFICAS DEL DESEMPEÑO Se obtuvieron las siguientes características específicas de

funcionamiento al utilizar un analizador de la Rx Series. LINEALIDAD Este método es lineal hasta la concentración de Sodio de 182 mmol/l. Muestras por debajo de esta concentración deberen diluirse 1+1 con agua doblemente destilada (no usar solución salina 0.9% ) y repetir el ensayo. Multiplar el resultado por 2. SENSITIVITY La concentración mínima detectable para Sodio con un nivel de precisión adecuado se determinó como 57.8 mmol/l.

MATERIALES PROPORCIONADOS Solución Tampón Enzima Diluyente Sustrato

PRECISIÓN

MATERIALES REQUERIDOS PERO NO SUMINISTRADOS Multi-suero de ensayo Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532). Calibrador Randox Nivel 3 (No. Cat. CAL 2351). NOTAS DE PROCEDIMIENTO Cuando el Sodio y Potasio se solicitan en conjunto, el Sodio debe determinarse inmediatamente antes de analizar el Potasio. PROCEDIMIENTO Seleccionar NA en la pantalla "Run Test" y realice un blanco de agua.

Pipetear en la cubeta: ddH2O Estándar Muestra R1

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda utilizar el Multi-suero de ensayo Randox Nivel 2 y Nivel 3 para realizar el control de calidad diario. Deben evaluarse al menos dos niveles de calidad una vez al día. Los valores obtenidos del control de calidad deben caer dentro del rango de valores específicos. Si los valores caen fuera del rango, deberá repetir y excluir los errores siguiendo los siguientes pasos:

Blanco de Reactivo S0 Estándar S1 Muestra 20 µl 20 µl 20 µl 500 µl 500µl 500 µl

Precisión dentro de la Corrida


Level 2 139 3.82 2.75 20

Level 3 159 4.94 3.11 20

Level 2 139 3.78 2.72 20

Level 3 159 5.66 3.56 20

Precisión entre Corridas


CORRELACIÓN Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9955 X + 1.2358 y un coeficiente de correlación de r = 0.9813

Mezclar e incubar por 5 minutos a 37ºC. Posteriormente adicionar : R2

200 µl

200 µl

200 µl

Mezclar adecuadamente, inserte la cubeta en el espacio del RX Monza para la celda de flujo y presione "Read".

Se analizaron 41 muestras de pacientes abarcando un rango de 87.85 hasta 188.51 mmol/l.

Revisado 08 Mar 11 lm

ESTADO DE LOS ANTIOXIDANTES TOTALES (TAS)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.

MANUAL PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro del Estado de los Antioxidantes Totales en suero, plasma, vino, cerveza o zumos de fruta. Este producto es adecuado para su utilización en Manual.

Cat No. NX 2332 5 x 10 ml 5 x 10 t

R1. Tampón R2. Cromógeno R3. Sustrato CAL Patrón

1 x 100 ml 5 x 10 ml 2 x 5 ml 5 x 1 ml


Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C.

PRINCIPIO DEL ANALISIS ABTS® (2,2'-Azino-di-[3-etilbenzotiazolín sulfonato]) se incuba con peroxidasa (metamioglobina) y H2O2 para generar el radical catión ABTS®*+. Este radical presenta una coloración verdeazulada relativamente estable, que se mide a 600 nm. La presencia de antioxidantes en la muestra produce una supresión de esta coloración, siendo esta supresión, proporcional a la concentración de antioxidantes presentes en la muestra. HX-FeIII + H2O2

.X

ABTS® + .X - [FeIV = 0]

- [FeIV = 0] + H2O ABTS®*+ + HX - FeIII

R2.

Cromógeno Reconstituir un vial de cromógeno R2 con 10 ml de Tampón R1. Estable 2 días cuando se conserva entre +2 y +8 C u 8 horas entre +15 y +25°C. °

R3.

Sustrato

Diluir 1 ml de sustrato R3 con 1.5 ml de Tampón R1. Estable 24 horas cuando se conserva entre +2 y 8°C. En la forma no diluida es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C

HX-FeIII = Metamioglobina .X - [FeIV = 0] = Ferrilmioglobina ABTS®= 2,2'-Azino-di-[3-etilbenzotiazolín sulfonato] ABTS® es marca registrada de Boehringer Mannheim.

CAL Patrón

MUESTRA(2)

Nota: Si este análisis se utiliza en un sistema automatizado, por favor, referirse a la hoja de procedimiento para ese sistema, ya que las instrucciones de reconstitución podrían diferir.

Reconstituir un vial de Patrón con 1 ml de agua doblemente desionizada. Estable durante 2 días cuando se conserva entre +2 y +8°C ó 1 mes a -20°C.

Suero fresco o plasma heparinizado. Evitar muestras hemolizadas. La muestra puede ser conservada hasta 36 Hs entre +2 y +8 C. El plasma/suero puede ser congelado durante un máximo de 14 días. Evitar ciclos repetidos de congelación-descongelación. Para el vino tinto diluya 1 + 3. Los zumos de frutas pueden ser analizados también, pero deben filtrarse con un filtro de 0.45 µl. °


R1.


Tampón Tampón Fosfato Salino

R2.

Cromógeno Metamioglobina ABTS®

R3.

80 mmol/l, pH 7,4 6,1  mol/l 610  mol/l

Sustrato Peróxido de h idrógeno (forma estabilizada)

250  mol/l

CAL Patrón 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromán -2-ácido carboxílico

Específico por lotes

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Cromógeno Sustrato Patrón

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Control Randox de Antioxidantes Totales Cat.No. NX 2331 0,9% de NaCl de la solución (Na Sin azida)

NOTAS 1. Es muy importante controlar exactamente el tiempo de reacción. Los resultados se verán afectados si se cambian los volúmenes, los tiempos de incubación y las temperaturas. El kit del Estado Antioxidante Total sόlo se puede utilizar con un espectrofotόmetro atemperado. 2. Azida de sodio interfiere en el ensayo y no debe ser añadió a la solución 0,9% de NaCl que puede ser utilizado para diluir las muestras que exceden la linealidad del ensayo.

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MANUAL NX 2332

MANUAL NX 2332 PROCEDIMIENTO

LINEALIDAD

Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medida:


Pipetear en cubeta:

Agua Bidestilada Patrón Muestra Cromógeno (R2)

Reactivo Blanco

Patrón

20  l 1 ml

20  l 1 ml

Muestra

20  l 1 ml

Mezclar bien, incubar hasta alcanzar la temperatura y leer absorbancia inicial (A 1) Añadir: Sustrato (R3)

200  l

200  l

Muestras que presentan concentraciones superiores a 2,5 mmol/l deberían ser diluidas con NaCl al 0,9% y analizadas otra vez. Se recomienda diluir las muestras únicamente cuando sea necesario ya que una dilución lleva consigo un aumento de hasta 20% en los valores. La mayor parte de las muestras no necesitarán ser diluidas porque los resultados serán más bajos de 2,5 mmol/l.

PATENTES Este producto está sujeto a Patente UK 2250819 y Patentes y Aplicaciones derivadas de PCT Aplicación de Patente PCT/GB91/02228.

REFERENCIAS 1.

2.

Miller, N.J., Rice-Evans, C., Davies, M.J., Gopinathan, V. and Milner, A., Clinical Science (1993) 84, 407-412. Data on file at Randox.

200  l

Mezclar y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer la absorbancia (A2) al cabo de exactamente 3 minutos. A2 - A1 = A de muestra/patrón/blanco

CALCULO Estado de los Antioxidantes Totales: conc del patrón ───────────────── ─ Factor = (A blanco - A patrón) mmol/l = Factor x (A Blanco- A Muestra)

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan Control Randox de Antioxidantes Totales para el control de calidad diario. Este control deberí a procesarse como mínimo una vez al día Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores s e encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación, por ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

VALORES DE REFERENCIA Rango: 1,30 - 1,77 mmol/l Plasma Este rango fue determinado en población activa Europea. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.

Revisado 13 Nov 09 ck Rev. 001

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GLUCOSA-6-FOSFATO DESHIDROGENASA (G-6-PDH) MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Glucosa-6-Fosfato Deshidrogenasa en eritrocitos. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza.

Cat. No. PD 410 100 ml

R1. Tampón R2. NADP R3. Sustrato R4. Digitonina

1 x 100 ml 1 x 2 ml 1 x 2 ml 1 x 20 ml

METODO UV La actividad del enzima se determina midiendo la variación de la absorbancia a 340 nm que se produce por la reducción del NADP+. G-6-PDH

G-6-P +

gluconato-6-P + NADPH + H +

MUESTRA Eritrocitos.

La solución R1, R2, R3 y R4 contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.

Lavar 0,2 ml de sangre con 2 ml alícuotos de solución de NaCl al 0,9%. Centrifugar después de cada lavado a 3000 rpm durante 10 minutos. Repetir 3 veces. Repetir 3 veces. Suspender el centrifugado de eritrocitos en 0,5 ml de solución 4, dejar durante 15 min a +4 C y centrifugar de nuevo. Use el sobrenadante en el ensayo en un plazo de 2 horas. 


ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Tampón

R2. NADP Reconstituir el contenido de la botella 2 con 2 ml de agua bidestilada. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8°C.

R3. Sustrato Reconstituir el contenido de la botella 3 con 2 ml de agua bidestilada. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8°C.

R4. Digitonina


R1. Tampón Tampón trietanolamina EDTA

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio ba jo condiciones apropiadas de laboratorio.


PREPARACION DE LA MUESTRA

R2. NADP R3. Sustrato R4. Digitonina



PRINCIPIO(1)

NADP+


31,7 mmol/l, pH 7,6 3,2 mmol/l 0,34 mmol/l 0,58 mmol/l


MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón NADP Sustrato Digitonina

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Control para G-6-PDH Randox Deficiente Normal Agua bi destilada

No. Cat. PD 2617 No. Cat. PD 2618

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MANUAL/ RX MONZA PD 410 PROCEDIMIENTO Determinar el número de eritrocitos/ml de sangre.

1. RX MONZA Seleccione G6PD en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

La actividad G-6-PDH se expresa como eritrocitos mU/109 o como hemoglobina mU / g . Para el cálculo de actividad G-6PDH como eritrocitos mU/109 para la comparación con el valor normal, se divide la actividad calculada (mU / ml de sangre por los eritrocitos) con el recuento de los glóbulos rojos por ml. eg.


Conteo de RBC por ml

= 5.3 x 109

mU/eritrocitos per ml

= 695

Mestra Haemolysate Reagent R1 Reagent R2

695 mU/109

7.5  l 500  l 15  l

La siguiente ecuación se utiliza. mU.eritrocitos por ml x 100 G-6-PDH mU/gHb

Mezclar bien y aspirar en el RX monza.

340 nm (Hg 334 nm o Hg 365 nm) 1 cm de espesor 37°C frente al aire

Pipetear en tubos de ensayo: Macro 3.00 ml 0.10 ml 0.05 ml

= Hb (g/dl)

2. PARA USO MANUAL

R1 R2 Haemolysate

= 131

Para el cálculo de actividad G-6-PDH como hemoglobina mU/g.

7.5  l


= 5.3

Mezclar, incubar durante 5 min a 37°C y añadir: Reagent R3

eritrocitos

Semi Micro 1.00 ml 0.03 ml 0.015 ml

eg.

100

=

Factor para convertir de ml a dl

Hb(g/dl)

=

Concentración de hemoglobina determinó para cada muestra

mU/ ml por eritrocitos

= 695

Hb(g/dl)

= 15.0 695 x 100

G-6-PDH mU/gHb

= 15.0 = 4633

Mezclar, incubar durante 5 min a 37°C y añadir: R3

0.05 ml

Corrección de la Temperature 0.015 ml

Mezclar, leer la absorbancia inicial y empezar a cronometrar simultáneamente. Leer de nuevo al cabo de 1, 2 y 3 min.

CÁLCULO MANUAL Para calcular la actividad de la G-6-PDH utilizar las siguientes fórmulas: Macro mU/erythrocytes per ml sangre* = 30476 x A 340 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 54857 x A Hg 365 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 31068 x A Hg 334 nm/min

Semi Micro mU/erythrocytes per ml sangre* = 33650 x A 340 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 60571 x A Hg 365 nm/min mU/erythrocytes per ml sangre* = 34304 x A Hg 334 nm/min

Tenga en cuenta que la corrección de la temperatura por debajo solo puede ser utilizada para las muestras de pacientes. Cuando la temperatura es de 37 ° C, no se requiere ningún factor de corrección de temperatura (TCF). Si los resultados de muestras de los pacientes se presentan a u na temperatura que no sea 37 ° C, se debe utilizar un TCF. Cubeta de Temperatura (°C)

TCF

25 30

2.076 1.515

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Control para G-6-PDH Randox , Deficiente y Normal para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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MANUAL/ RX MONZA PD 410 INTERFERENCIAS

REFERENCIAS

Los reticulocitos tienen un nivel de G6-PDH más elevado que el de los hematies maduros. No se recomienda por tanto que se realice este análisis trás una crisis hemolitica severa, ya que esto puede ofrecer resultados falsaments elevados. El análisis puede resultar util una vez que los hematies hayan vuelto a su nivel normal.

1. Kornberg, A. et al ., Methods in Enzymology 1, Academic Press, New York, 1955; p.323. 2. Makarem, A., Clinical Chemistry-Principles and Techniques. 2nd Ed. R.F. Henry, D. C. Cannon, J.W. Winkelman, Editors. Harper and Row, Hagerstown [MD], 1974; 1128-1135. 3. Lohr GW, Waller HD: Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase. Methods of Enzymatic Analysis, 3rd Edition - Varlag Chemie, Wehnheim: 1974; p. 636.

VALORES NORMALES(3) En eritrocitos: 245 - 299 mU/109 eritrocitos (37°C) 6.97 - 20.5

U/g Hb (37°C) Hemoglobina en sangre (g/dl)

Hombres Adultos Mujeres Adultos Recién nacidos

13 - 18 11 - 16 14 - 23


CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador RX monza en funcionamiento a 37ºC.

LINEALIDAD Este método es lineal hasta una concentración de 4303 U / l. Diluir las muestras con concentraciones mayores con 0,2 ml de hemolizado con 1,8 ml de solución de NaCl al 0,9% y repita la prueba. Multiplicar el resultado por 10.

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de G6PDH en los eritrocitos con un nivel aceptable de precisión ha sido determinada como 154 U/l.

PRECISION Análisis (Intra) Media (U/l) DE CV (%) n

Nivel 1 784 33.2 4.24 20

Nivel 2 1533 71.3 4.65 20

Nivel 1 784 50.5 6.45 20

Nivel 2 1533 78.3 5.11 20

Análisis (Inter) Media (U/l) DE CV (%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 1.0069 x + 47.644 y un coeficiente de correlación r = 0,9903 Se analizaron 50 muestras de pacientes con valores de entre 162 y 1200U/l.

Revised 17 Nov 11 ml Rev.002

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FOSFORO INORGÁNICO (PHOS) Método UV MANUAL RX MONZA

Las soluciones R1a y R1b contienen ácido sulfúrico. Evite la digestión de estos productos y su contacto con la piel o las membranas.

USO PREVISTO Para la determinación cuantitativa in vitro del fósforo inorgánico en suero y orina. Este producto es adecuado para uso manual y para el analizador Rx Monza. N.° de cat. PH 1016 300 ml

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DE SEGURIDAD Sólo para uso diagnóstico in vitro. No pipetee con la boca. Aplique las precauciones habituales necesarias para la manipulación de reactivos de laboratorio.

R1a. Blanco de reactivo 1 x 210 ml R1b. Reactivo de molibdato 1 x 90 ml CAL. Patrón 1 x 5,5 ml

RELEVANCIA CLÍNICA El cuerpo humano contiene aproximadamente 1 kg de fósforo. Las sales calcificadas del fosfato que constituye la sustancia inorgánica del hueso suponen aproximadamente el 80% del total de fósforo. El resto está distribuido por las restantes células del cuerpo, principalmente como fósforo orgánico en fosfolípidos y fosfoproteínas. En el suero, la mayor parte del fósforo inorgánico se encuentra en forma libre, estando ligado el 15% aproximadamente a proteínas. Cuando aparecen niveles anómalos de fosfato sérico, suelen acompañar a enfermedades del riñón, óseas y paratiroideas. El fosfato se suele medir junto con el calcio sérico, ya que cada una de las mediciones resulta de utilidad para interpretar la otra. PRINCIPIO DEL ENSAYO (1) El fósforo inorgánico reacciona con el molibdato armónico en presencia de ácido sulfúrico para formar un complejo de fósfomolibdato que se mide a 340 nm. RECOGIDA DE LA MUESTRA Y PREPARACIÓN (2) El suero es la muestra recomendada. El suero es estable durante 5 días si se almacena a +2-8 ºC. Es estable durante 3 meses si se almacena congelado a -20 C. Evite las muestras hemolíticas ya que la hemolisis interfiere en la prueba. Orina: La orina de 24 horas se debe recolectar en una botella lavada con ácido y libre de detergentes. Tras la recolección de la muestra, acidifíquela hasta alcanzar un pH <3,0. Diluir la orina 1+19 con solución de 0,9% NaCl. Multiplicar el resultado por 20.

El CAL contiene azida sódica. Evite la digestión de estos productos y su contacto con la piel o las membranas. En caso de contacto con la piel, lave la zona afectada con gran cantidad de agua. En caso de contacto con los ojos o, si se produce digestión, acuda de inmediato al médico. La azida sódica reacciona con las tuberías de cobre y de plomo y forma azidas metálicas explosivas en potencia. Al desechar reactivos de este tipo, lave con gran cantidad de agua para evitar que se acumulen azidas. Las superficies metálicas expuestas a estos reactivos se deben limpiar con hidróxido sódico al 10%. Están disponibles previa petición las fichas técnicas de salud y seguridad.

Los reactivos deben utilizarse sólo para la finalidad prevista y por per sonal de laboratorio adecuadamente cualificado, en unas condiciones de laboratorio apropiadas. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos están listos para usar. Estable hasta la fecha de caducidad si se almacena a una temperatura de +15 C a +25 C. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO Mezcle un envase de Blanco de reactivo R1a con un envase de Reactivo de molibdato R1b (300 ml de reactivo de trabajo). Cuando se trata de volúmenes menores, prepare el reactivo de trabajo conforme a lo que indica la tabla siguiente: Blanco de reactivo (R1a) Reactivo de molibdato (R1B) 7,0 ml 14,0 ml 28,0 ml

3,0 ml 6,0 ml 12,0 ml


Estable durante 8 semanas a una temperatura de +15 a +25 C.

Contenido

MATERIALES SUMINISTRADOS Blanco de reactivo Reactivo de molibdato Patrón


R1a. Blanco de reactivo Ácido sulfúrico 0,36 mol/l Cloruro de sodio 154 mmol/l Detergente R1b. Reactivo de molibdato Molibdato armónico 3,5 mmol/l Ácido sulfúrico 0,36 mol/l Cloruro de sodio 154 mmol/l CAL. Patrón Fosfato potásico Consulte el prospecto de cada lote

MATERIALES NECESARIOS QUE NO SE SUMINISTRAN Dispositivos de etiquetado capaces de entregar 10  l y 1 ml. Temporizador y baño de agua o bloque calefactor para mantener la temperatura a +20-+25 C o +37 C. Espectro fotómetro que pueda medir a 340 nm. Multisueros analizados de nivel 2 de Randox (Nº de cat. HN 1530) y nivel 3 (Nº de cat. HE 1532). Suero de calibración de nivel 3 de Randox Nivel (Nº de cat. CAL 2351).

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MANUAL/ RX MONZA PH 1016 PROCEDIMIENTO Realice una nueva calibración de ganancia [Gain Calibration] con una cubeta que contenga ddH2O recién preparada. Seleccione el programa PHOS en la pantalla Run Test [ejecución de prueba] y realice un blanco de agua la ley como se indica. Pipetee en la cubeta: Blanco de reactivo S0 Agua destilada Muestra Patrón Reactivo de trabajo

5  l ----0,5 ml

Patrón S1

Muestra

----5  l 0,5 ml

--5  l --0,5 ml

Mezcle, cubre durante 10 minutos a +20 - +25 C antes de realizar la lectura, tal y como se indica en la pantalla.

CONTROL DE CALIDAD Se recomienda utilizar los Multisueros analizados de Randox de nivel 2 y 3 para el control de calidad diario. Deben analizarse dos niveles de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deben situarse dentro de un rango determinado. Si estos valores están fuera del rango y la repetición excluye un posible error, deben realizarse los pasos siguientes: 1. Comprobar los ajustes del instrumento y la fuente de luz. 2. Comprobar que todo el equipo utilizado esté limpio. 3. Comprobar el agua; los contaminantes, como un crecimiento bacteriano, pueden contribuir a la obtención de resultados imprecisos. 4. Comprobar la temperatura de la reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y su contenido. 6. Contactar con el servicio técnico de atención al cliente de Randox Laboratories llamando al teléfono +44 (0) 28 9442 2413 (Irlanda del Norte).

INTERFERENCIA Los analitos indicados más abajo se sometieron a prueba hasta CALIBRACIÓN PARA RX MONZA alcanzar los niveles siguientes y se determinó que no interferían: Se recomienda utilizar el patrón de calibrado CAL se proporciona en Bilirrubina 500 mol/l el kit o bien el Suero de calibración de nivel 3 de Randox para Intralipid® 0,4% muestras de suero. Triglicéridos 4,05 mmol/l Se recomienda utilizar el patrón de calibración CAL proporciona Hemoglobina 7 g/l en el kit para muestras de orina. Calibre cuando cambie de lote VALORES NORMALES (2, 3) de reactivo o bien cuando indiquen los procedimientos de control de calidad. Suero: 0,87 - 1,45 mmol/l (2,7 - 4,5 mg/dl) PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

Orina de 24 horas: 340 nm Recorrido luminoso de 1 cm +20- +25 C/+37 C frente a blanco de reactivo

Pipetee en la cubeta:

Agua destilada Muestra Patrón Reactivo de trabajo

Blanco

Patrón

Muestra

10 l ----1 ml

----10 l 1 ml

--10 l --1 ml

Mezcle, incube durante 10 minutos a +20- +25 C o a 5 min a 37 C. Mida la absorbancia de la muestra ( muestra A) y del patrón (patrón A) frente al blanco de reactivo.

NOTA Las muestras ictéricas y ligeramente lipémicas exigen realizar un blanco de muestra. Utilizando el mismo esquema de pipeteo, mezcle en 10 l de muestra con 1000 l de blanco de reactivo. En el Rx Monza, la Concentración de la muestra (mmol/l) = Muestra (mmol/l) – Blanco de muestra (mmol/l). En el caso de los usuarios que realizan el método manual, a continuación la absorbancia del blanco de muestra ( blanco de muestra A) se resta de la absorbancia de la muestra (muestra A). ESTANDARIZACIÓN El Suero de calibración de nivel 3 de Randox es trazable conforme a lo que indican los materiales de referencia para fósforo inorgánico NIST 186lg.

12,9 - 42,0 mmol/d (0,4 - 1,3 g/d) Dieta libre

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de referencia para reflejar la edad, sexo, dieta y ubicación geográfica de la población.

CARACTERÍSTICAS DE EFICACIA ESPECÍFICAS Los siguientes datos de rendimiento se han obtenido utilizando un analizador Rx Monza, calibrado con el Suero de suero de calibración de nivel 3 de Randox, a +37oC. SUERO SENSIBILIDAD Se ha determinado que el nivel mínimo detectable era de 0,307 mmol/l (0,953 mg/dl). LINEALIDAD El método es lineal hasta 7,77 mmol/l (24,1 mg/dl). Las muestras que presenten una concentración más elevada se deben diluir 1 + 4 con una solución 0,9% (p/v) NaCl y someterse a nuevo ensayo, multiplicando el resultado por 5. PRECISIÓN Intraensayo Nivel 2 Nivel 3 Promedio (mg/dl) 4,60 6,77 DT 0,040 0,141 CV(%) 0,88 2,08 n 20 20 Interensayos Nivel 2 Nivel 3 Promedio (mg/dl) 4,60 6,77 DT 0,199 0,197 CV(%) 4,32 2,91 n 20 20

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MANUAL/ RX MONZA PH 1016 COMPARACIÓN CON OTROS MÉTODOS El método de Randox (Y) se sometió comparación con otro kit de prueba comercial (X). Se sometieron a prueba muestras de 71 pacientes, que presentaban un rango de 1,57 a 15,1 mg/dl. El análisis de regresión lineal de los datos ha producido la siguiente ecuación: Y = 0,91 X - 0,6897 con un coeficiente de correlación r = 0,9990 ORINA SENSIBILIDAD Se ha determinado que el nivel mínimo detectable era de 1,12 mmol/l (3,48 mg/dl). LINEALIDAD El método es lineal hasta 57,7 mmol/l (179 mg/dl). Las muestras que presenten una concentración más elevada se deben diluir 1 + 4 con una solución 0,9% (p/v) NaCl y someterse a nuevo ensayo, multiplicando el resultado por 5. PRECISIÓN Intraensayo Promedio (mg/dl) DT CV(%) n

Interensayos Promedio (mg/dl) DT CV(%) n

Nivel 2 29,5 1,06 3,60 20

Nivel 3 89,2 4,16 4,66 20

Nivel 2 29,5 1,08 3,68 20

Nivel 3 89,2 3,86 4,33 20

REFERENCIAS 1. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and Techniques, 2nd Edition, Harper and Row, p. 525, 1974. 2. Tietz, N., Clinical Guide to Laboratory Tests, W.B. Saunders Company, Philadelphia 1983; 5: 384. 3. Tietz, N.W. Clinical Guide to laboratory tests. 2nd edition. Philadelphia, Pa: WB Saunders Co.; 1990: 444-446.

Revisado: 02 May 12 bm Rev. 002

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MANUAL/ RX MONZA PH 1016

PÁGINA DEJADA EN BLANCO INTENCIONADAMENTE

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MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Precipitante Na-Tetrafenilboron NaOH Patrón

POTASIO (K) MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Potasio en el suero y plasma. Este producto es adecuado para uso M anual. Cat. No. PT 1600 100 ml

R1. R2a. R2b. CAL

Reactivo Precipitante Na-Tetrafenilboron NaOH Patrón


1 x 100 ml 1 x 50 ml 1 x 50 ml 1 x 5.5 ml

PRINCIPIO El tetrafenilboron sódico reacciona con los iones de potasio en un medio alcalino libre de proteínas para producir una suspensión túrbida de tetrafenilboron potásico. La cantidad de turbidez producida es proporcional a la concentración de potasio. MUESTRA Suero o plasma litio-heparin.


R1. R2a. R2b. CAL

PROCEDIMIENTO 1. Precipitación Pipetear en tubos de centrifugación:

Muestra Reactivo Precipitante (R1)

Las elevaciones en los niveles de potasio en suero / plasma puede ocurrir debido a los posibles efectos de la ma nipulación de la muestra. Por esta razón las muestras de san gre debe mantenerse a temperatura ambiente y el retraso en la cen trifugación debe ser evitado. Recentrifugación no es recomendable.

Componentes

NOTAS PROCEDIMIENTO Se recomienda utilizar material de plástico desechable durante el análisis, ya que el material de cristal contaminado puede dar lugar a grandes errores. Evitar la contaminación con detergentes.

Concentración Inicial de las Soluciones

Reactivo Precipitante Acido Tricloro Acético Tetrafenilboron Sódico Hidróxido Sódico Patrón

Macro

Micro

100  l 1000  l

50  l 500  l

Mezclar y centrifugar durante 8 minutos a 12000 rpm. 2. Análisis de Potasio Longitud de onda: Cubeta: Medición: Temperatura:

578 nm, Hg 578 nm 1 cm de espesor frente al reactivo blanco +20 - +25 C 

Pipetear en tubos de ensayo: 0,3 mol/l 0,2 mol/l 2,0 mol/l Vedi inserto lotto-specifico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si s e desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado c ualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD Utilizar todas las soluciones sin diluir. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +15 y +25 C.

Macro Patrón Muestra Reactivo de Trabajo (R2) 2000  l Patrón (CAL) 200  l Sobrenadante --

2000  l -200  l

Micro Patrón Muestra 1000  l 100  l --

1000  l -100  l

El patrón y el sobrenadante claro se deberán añadir en el medio de la superficie del reactivo de trabajo para producir una turbidez homogénea. Mezclar cuidadosamente y dejar reposar durante al menos 5 minutos. Medir la absorbancia del patrón y la muestra frente al reactivo blanco ( A). CALCULO Concentración de Potasio Amuestra mmol/l =

x Patrón conc. Apatrón



PREPARACION DE LOS REACTIVOS Y ESTABILIDAD DE TRABAJO (R2) Mezclar partes iguales de las soluciones R2a y R2b para formar reactivo suficiente para el número de muestras a analizar. Estable durante 30 días entre +15 y +25 C y 60 días entre +2 y+8 C. 



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MANUAL PT 1600

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los r esultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413. INTERFERENCIA La hemólisis interfiere con el análisis debido al alto contenido de potasio en las células sanguíneas rojas, por lo tanto las muestras se deberán separar del coágulo lo antes posible. VALORES NORMALES(4) 3,5 – 5,1 mmol/l (13,7 – 19,9 mg/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración d e Potasio de 10 mmol/l. Para muestras con concentraciones superiores diluir 1+2 con NaCl al 0,9% y multiplicar el resultado po r 3. REFERENCIAS 1. Hillmann, G., Beyer, G., J. Clin. Chem. and Clin. Biochem., 1967; 5: 93. 2. Henry, R. J., Clin. Chem., Harper and Row, New York, Sec. Edit., 1974; 646. 3. Teitz, N. W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Saunders, Philadelphia, Sec. Edit., 1976; 876. 4. Teitz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry. W.B. Saunders Company, Philadelphia, 1986; 1842.

Revisado 25 Jan 10 ck Rev. 001

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RANSEL

COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS ADICIONALES

Glutation Peroxidasa SOLO PARA INVESTIGACION MANUAL RX MONZA

Componentes

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Glutation Peroxidasa en sangre entera. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

Cat. No. RS 504 8 x 6,5 ml 8 x 6 t Semi micro 8 x 2 t Macro

RS 505 8 x 10 ml 8 x 10 t Semi micro 8 x 4 t Macro

R1a. Reactivo R1b. Tampón R2. Hidroperóxido de cumeno R3. Diluyente

8 x 6,5 ml 1 x 70 ml 1 x 1 ml 2 x 200 ml

R1a. Reactivo R1b. Tampón R2. Hidroperóxido de cumeno R3. Diluyente

8 x 10 ml 1 x 100 ml 1 x 1 ml 2 x 200 ml

Complementario del lote: HG 1539

Hemoglobina Reactivo

5 x 100 ml

METODO UV(1) Este método está basado en el trabajo de Plagia and Valentine. La Glutation Peroxidasa (GPX) cataliza la oxidación del Glutation (GSH) por el hidroperóxido de cumeno. El Glutation oxidado (GSSG) en presencia de Glutation Reductasa (GR) Y NADPH es inmediatamente convertido en su forma reducida con una oxidación concomitante de NADPH en NADP+. Se mide la disminución de la absorbancia a 340 nm.

PRINCIPIO DE LA REACCION GPX

2GSH + ROOH

Fosfato Potásico Ferricianida Potásica Cianida Potásica Surfactante

10,3 mmol/l 6.08 mmol/l 7,68 mmol/l 0.1% v/v

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. La solución R1b contiene azida sódica. Evitar su ingestión o contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y el plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. La solución R2 es nociva, si se traga o inhala, causa irritación y es combustible. La solución R2 es Hidroperóxido de cumeno que es cáustico. La solución de Drabkin contiene cianuro por lo que puede ser fatal si se ingiere. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad es tán disponibles si se desean.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio

ROH + GSSG + H2O GR

GSSG + NADPH + H+

Concentraciόn inicial de las Soluciones

NADP+ + 2GSH

MUESTRA Utilizar sangre entera heparinizada. Si la muestra proviene de oveja o cabra, diluir 0,05 ml con 3 ml de diluyente. Para ganado vacuno, caballos y otras especies diluir 0,05 ml de muestra con 2 ml de diluyente. Para muestras humanas ver NOTA.



R1a. Reactivo Glutation Glutation Reductasa NADPH

4 mmol/l ≥ 0,5 U/l 0,34 mmol/l

R1b. Tampón Tampón fosfato EDTA

R2. R3.

Hidroperóxido de cumeno Diluyente

0,05 mol/l, pH 7,2 4,3 mmol/l 0,18 mmol/l

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MANUAL/ RX MONZA RS 504

MANUAL/ RX MONZA RS 504 ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Reactivo Reconstituir un vial de Reactivo R1a con el volumen apropiado de Tampón R1b: (RS 504) 6,5 ml para el kit de 8 x 6,5 ml 10 ml para el kit de 8 x 10 ml (RS 505) Estable durante 48 horas entre +4 y +8 C u 8 horas entre +15 y +25 C. °

°

PROCEDIMIENTO Seleccione GPx en la pantalla de Ejecución de Prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo: Muestra Reactivo R1 Cumeno R2

10 µl 500 µl 40 µl

R1b. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C.


Hidroperóxido de cumeno Diluir 10  l R2 con 10 ml de agua bidestilada y mezclar

Se recomienda diariamente o como se indica en los procedimientos de control de calidad, usando Control Randox Ransel

°

R2.

bien, agitando vigorosamente, ya que el cumeno es difícil de disolver. Debe utilizarse solución fresca preparada en el día. Concentrado es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8 C. Para medir el volumen de hidroperóxido de cumeno se deberá utilizar una pipeta con acción de desplazamiento positiva, y capilares de cristal.

CALIBRACIÓN DE RX MONZA

PARA USO MANUAL

°

R3.

Diluyente Reconstituir el contenido de un vial de Diluyente R3 con 200 ml de agua bidestilada. Estable durante 4 semanas cuando se conserva entre +2 y +8 C ó 3 días entre +15 y +25 C.


Macro

°

Semi-Micro

Muestra Blanco de diluida Reactivo

MATERIALES SUMINISTRADOS Muestra diluida H2O destilada Reactivo R1 Cumeno R2


°

Pipette into cuvette:

°

Reactivo Tampón Hidroperóxido de cumeno Reactivo para diluir

340 nm 1 cm de espesor 37 C frente al aire

0.05 ml --2.50 ml 0.10 ml

--0.05 ml 2.50 ml 0.10 ml

Muestra diluida

Blanco de Reactivo

0.02 ml --1.00 ml 0.04 ml

--0.02 ml 1.00 ml 0.04 ml

Control de Ransel (Cat. No. SC 692) Agua bidestilada Reactivo Hemoglobina (Cat. No. HG 1539) Diluyente Ransel (RS 2318)

Mezclar la muestra, R1 y R2. Leer la absorbancia inicial de la muestra y blanco de reactivo después de un minuto y al mismo tiempo iniciar el temporizador. Leer otra vez pasados 1 y 2 minutos. Restar el valor del blanco de reactivo al de la muestra.

NOTAS(2,3)

MANUAL CALCULOS

Cuando se utiliza sangre entera heparinizada humana, se recomienda el uso de reactivo de Hemoglobina para la dilución. Esto es debido a que la presencia de peroxidasas en sangre humana puede conducir a falsos resultados (más e levados). La adición de cianuro, sirve para inhibir esta interferencia positiva. De todas formas, antes de añadir el reactivo de Hemoglobina, es necesaria la dilución de la sangre con la solución de diluyente 4, para convertir la glutation en su forma reducida. La forma oxidada sería rápidamente inhibida por el cianuro. Se recomienda el siguiente método utilizando reactivo de Hemoglobina.

Preparación : Diluir el contenido de un vial de reactivo de Drabkin con 480 ml de agua bidestilada. Conservar protegido de la luz. Estable durante 6 meses o hasta la fecha de caducidad, según sea más corto, cuando se conserva entre +15 y +25 C. °

Diluir 0,05 ml de sangre entera heparinizada en 1 ml de solución de diluyente (R3); incubar durante 5 min. y añadir 1 ml de reactivo de Hemoglobina. Mezclar bien y ensayar en la forma normal. Se recomienda que las muestras sean analizadas en los 20 min después de la adición del reactivo de Hemoglobina.

La concentración de Glutation Peroxidasa puede calcularse a partir de la siguiente fórmula: U/l de hemolisado = 8412 x A 340 nm/minuto (Ver instrucciones técnicas)

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan un control de Ransel para el control de calidad diario. Este control debería procesarse como mínimo una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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MANUAL/ RX MONZA RS 504

MANUAL/ RX MONZA RS 504 VALORES NORMALES 27,5 - 73,6 U/g Hb 4171 - 10881 U/l Este rango se tomó de una población trabajadora Europea. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal.

CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Los siguientes datos se obtuvieron usando un analizador RX Monza en el modo de flujo de células a 37°C con un volumen de aspiración de 450 µl.

LINEALIDAD El método es lineal hasta una c oncentración de 925 U/l. Diluir las muestras con una concentration mayor con el agente diluyendo y multiplicar el resultado por el factor de dilución

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de la peroxidasa de glutación con un nivel aceptable de precisión ha sido determinado como 75 U/l

PRECISION Precisión Dentro del Análisis Media (U/l) DE CV(%) n

Nivel 1 240 11.7 4.86 20

Nivel 2 456 14.6 3.20 20

Nivel 1 240 17.5 7.30 20

Nivel 2 456 19.9 4.37 20

Precisión Total Media (U/l) DE CV(%) n

CORRELACION Este método Randox (Y) se comparó con otro método disponible en el mercado (X). Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 102 y 650 U/l. Se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y= 1.0155 X +8.637 con un coeficiente de correlación r = 0,9829

REFERENCIAS

1. Paglia, D.E. and Valentine, W.N., J. Lab. Clin. Med., 1967; 70: 158. 2. Kraus, R.J. & Ganther, H. E. Biochem. & Biophys. Res. Comm 1980; 96: 1116. 3. Prohaska, J.R., Oh, S.H., Hoekstra, W.G. & Ganther, H.E. Biochem. & Biophys. Res. Comm. 1977; 74: 64.


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RANSOD


Superoxido Dismutasa MANUAL RX MONZA

Componentes

R1a. Sustrato mixto Xantina I.N.T.

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Superoxido Dismutasa en sangre entera. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

No. Cat. SD 125 5 x 20 ml

R1a. R1b. R2. CAL

Sustrato Mixto Tampón Xantin Oxidasa Patrón

5 x 20 ml 1 x 105 ml 3 x 10 ml 5 x 10 ml

PRINCIPIO La función de la superóxido dismutasa (SOD) es acelerar la dismutación de un radical tóxico, el radical superóxido (O2 ), producido durante un proceso oxidativo enérgico, en peróxido de hidrógeno y oxígeno molecular. Este método emplea Xantina y Xantin oxidasa (XOD) para formar radicales superóxido, los cuales reaccionan con cloruro de 2-(4-yodofenil)-3-(4-nitrofenol)-5-fenil tetrazolio (I.N.T) para formar un colorante formazán rojo. Se mide la actividad de la superóxido dismutasa por el grado de inhibición de esta reacción. Una unidad de SOD es la que causa un 50% de inhibición del valor de reducción de INT bajo las condiciones del análisis. •.

Acido úrico + O2-.

O2

CAPS EDTA

R2. Xantín Oxidasa CAL Patrón

Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Sustrato Mixto Reconstituir un vial de Sustrato Mixto R1a con 20 ml de Tampón R1b. Es estable durante 10 días cuando se conserva entre +2 y +8°C.

R1b.

R2. SOD

O2 + O2 + 2H+ •.

•

O2 + H2O2

PREPARACION DE LA MUESTRA Utilizar muestras de sangre entera heparinizada o con EDTA. Se recomienda lavar los eritrocitos 4 veces con una s olución de NaCl al 0,9%. Centrifugar 0,5 ml de sangre entera durante 10 min a 3000 rpm. Después aspirar el plasma. Después lavar los eritrocitos 4 veces con 3 ml de solución de NaCl al 0,9 %, centrifugando durante 10 min a 3000 rpm después de cada lavado.

Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8°C.

colorante formazán

O

40 mmol/l, pH 10,2 0,94 mmol/l 80 U/l Vedi inserto lotto specifico


•.

I.N.T

0,05 mmol/l 0,025 mmol/l

R1b. Tampón

XOD

Xantina

Concentraciones iniciales de las Soluciones

Xantín Oxidasa Reconstituir el contenido de un vial de Xantín Oxidasa R2 con 10 ml de agua bidestilada. Estable durante 2 semanas cuando se conserva entre +2 y +8°C.

CAL Patrones Reconstituir el contenido de un vial de Patrón (CAL) con 10 ml de agua bidestilada. Posteriormente las diluciones de este patrón deben ser preparadas con muestra diluyente Ransod. Se recomienda hacer las siguientes diluciones del patrón CAL (o S6) para construir la curva patrón:

R1 = Sustrato Mixto R2 = Xantin Oxidasa

El centrifugado lavado de eritrocitos deberá completarse con 2,0 ml de agua bidestilada fría. Mezclar y dejar reposar durante 15 min a 4 C. El lisado se diluye con 0,01 mol/l de Tampón Fosfato pH 7,0, de forma que el porcentaje de inhibición caiga entre el 30 y el 60%.

Es recomendable que todos los reactivos y muestras estén equilibrados a temperatura ambiente antes de su uso.

Para muestras humanas se recomienda 25 partes de dilución de lisado (Factor de dilución final = 100) y para muestras de bovinos 50 partes (Factor de dilución final = 200).

Sustrato mixto Tampón Xantín Oxidasa Patrones




MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Diluyente Ransod (No. Cat. SD 124) (0,01 mol/l Tampón Fosfato, pH 7,0). Control de RANSOD No. Cat. SD 126.

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MANUAL SD 125 PROCEDIMIENTO

CALCULOS

Seleccionar SOD en la pantalla Run Test (Realizar análisis), y llevar a cabo un blanco de agu a de la forma indicada.

A2 - A1 = A/min de patrón o de muestra 3

Pipetear en la Cubeta: Patrón S1

Patrón S2 TO S6

Diluente Prueba Ransod 15 µl Patrón Diluir la prueba Diluir el control 500 µl Sustrato Mixto (R1)

15 µl 500 µl

Pruebas Control

15 µl 500 µl

15 µl 500 µl

Indice de muestra diluyente (Indice S1) =Indice de reacción sin inhibir = 100% Todos los indices tanto de los patrones como de las muestras diluidas deben ser convertidos en porcentajes del indice del diluyente de muestra y sustraidos del 100% para obtener un porcentaje de inhibición: (Apatrón/min x 100) 100 -

Mezclar bien y añadir

= % inhibición (AS1/min)

Xantin Oxidasa (R2)

75 µl

75 µl

75 µl

75 µl

(Amuestra/min x 100)

Mezclar bien, introducir la cubeta en el soporto de la celda de la Rx Monza y pulsar Read (leer).

100 -

CALIBRACIÓN

Representar el porcentaje de inhibición para cada patrón frente a Log10 (concentración de patrón en unidades SOD/ml).

Calibrar esta prueba usando el patrón proporcionado con el Kit. Se recomienda que las siguientes diluciones estén realizadas con el patrón Cal (ó S6) para producir un a curva estándar:Patrón

S6 S5 S4 S3 S2

Volumen de solución patrón

Diluente Prueba

Patrón no diluido 5 ml of S6 5 ml of S5 5 ml of S4 3 ml of S3

5 ml 5 ml 5 ml 6 ml

Utilizar el porcentaje de inhibición de la muestra para obtener las unidades de SOD de la curva patrón. Unidades de SOD/ml de sangre entera = Unidades de SOD en la curva patrón/ml x factor de dilución

Conversión a unidades de SOD/g de Hemoglobina Unid.SOD/ml = Unidades de SOD/g de Hemoglobina g Hemoglobina/ml

S1= Diluente Prueba (0,01 mol fosfato tampón pH 7,0) Todos los patrones diluidos se mantienen estables durante dos semanas entre +2 y +8°C. Se requiere una nueva calibración para cada análisis.

PARA USO MANUAL

ILUSTRACION (a) Una muestra de bovino diluida 1 en 300 veces con diluyente de muestra Ransod produjo una inhibición del 33%. Desde la curva patrón: No de unidades SOD en la muestra = 0,575



(b) Conversión en unidades de SOD/ml de sangre entera 0,575 x 300 = 172,5 un idades de SOD/ml

(c) Conversión en unidades de SOD/g hemoglobina

Pipetear en la cubeta: Muestra Diluyente Muestra diluida Patrón Diluyente de Muestra Ransod Sustrato Mixto (R1)

= % inhibición (AS1/min)

Patrones S2 - S6

Muestra diluida

-----

--0,05 ml

0,05 ml ---

0,05 ml 1,7 ml

--1,7 ml

--1,7 ml

0,25 ml

0,25 ml

0,25 ml

Valor de muestra de hemoglobina = 0,118 g/ml 172,5 (Unid. SOD/ml)/(g hemoglobina/ml) =

= 1461,9 0,118

Mezclar bien Xantina Oxidasa (R2)

Mezclar y leer la absorbancia inicial A1 al cabo de 30 segundos y empezar a cronometrar el tiempo simultaneamente. Leer la absorbancia final A2 al cabo de 3 minutos.

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MANUAL SD 125 CONTROL DE CALIDAD

REFERENCIAS

Se recomiendan un control Ransod, para el control de calidad diario. Analizar el control al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción. 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

1. Woolliams JA, Wiener G, Anderson PH, McMurray CH Research in Veterinary Science 1983, 34: 253-256. 2. Suttle NF, The Veterinary Record 1986, 119: 519-522. 3. Suttle NF, McMurray CH Research in Veterinary Science 1983; 35: 47-52. 4. Arthur JR, Boyne R Life Sciences 1985 36: 1569-1575.

VALORES NORMALES 1102 - 1601 U/g Hb 164 - 240 U/ml Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.


LINEALIDAD Las muestras deben ser diluidas para conseguir una inhibición entre el 30% y el 60% del porcentaje del diluyente de la muestra (por ej. la reacción no inhibida).

SENSIBILIDAD La concentración mínima detectable de SOD inferior a la estándar debe ser relatada como
PRECISION Precisión Dentro del Análisis Media DE CV(%) n

Nivel 1 101.0 4.88 4.64 20

Nivel 2 131.5 4.30 3.58 20

Nivel 1 101.0 6.27 5.96 20

Nivel 2 131.5 8.50 7.07 20

Precisión Entre Análisis Media DE CV(%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9417 X + 0.1004 y un coeficiente de correlación r = 0,965 Se analizaron 41 muestras de pacientes con valores de entre 23 318U/ml. Revisado 15 Sep 10 bm Rev. 001

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HIERRO SERICO (Fe)


Método colorimétrico MANUAL RX MONZA PARA SU USO

La determinación cuantitativa in vitro de hierro en suero. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

No. Cat. SI 257 2 x 100 ml

R1. R2. R3. CAL

Cromógeno Reductor Tampón Patrón

1 x 10 ml 1 x 15 ml 2 x 100 ml 1 x 10 ml

ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R2. Reductor Disolver el contenido de un vial de Reductor R2 con 15 ml de agua desionizada libre de hierro. Estab le durante 4 semanas entre +4 y +8 oC. El resto de los componentes están listos para usar. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25oC.

SIGNIFICADO CLINICO


Medidas de hierro (no hemo) se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades como la anemia por deficiencia de hierro, hemocromatosis (una enfermedad asociada con el depósito generalizado en los tejidos de dos pigmentos que contienen hierro, de hemosiderina y de hemofuscin, y se caracteriza por la pigmentación de la piel), y la enfermedad renal crónica.

Cromógeno Reductor Tampón Patrón

PRINCIPIO(1,2,3)

Multisueros Valorados Humanos Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532). Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

El ion férrico se disocia de su proteína transportadora, transferrina, en medio ácido y se reduce simultá-neamente a su forma ferrosa. Este ion ferroso forma un complejo con el cromógeno, el cual es un indicador sensible a l hierro, para formar un cromóforo azul con un máximo de absorción a 595 nm.


NOTAS SOBRE EL PROCEDIMIENTO Es esencial que todos los aparatos utilizados en la recogida de las muestras y en la prueba estén libres de contaminación con trazas de hierro.

MUESTRA Suero. No utilizar plasma en este ensayo.


R1. R2. R3.


PROCEDIMIENTO

Cromógeno Ferene

22.2 mmol/l

Reductor Acido ascórbico

1.3 mol/l

Tampón

Tampón acetato Dimetil sulfóxido Surfactante

CAL Patrón

Para que los recipientes de cristal queden libres de hierro deben lavarse con ácido clorhídrico diluido (aproximadamente 0,1 N) y enjuagarse abundantemente con agua desionizada libre de hierro. No usar plasma en este análisis.

0.087 mol/l, pH 4.65

Usando fresco ddH 2O realizar una nueva calibración de ganancia en el modo de cubeta. Seleccione Fe en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la Cubeta:

Vedi inserto lotto-specifico

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. El Tampón R3 contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. La Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. El Tampón contiene también dimetil sulfóxido que es nocivo. Evitar el contacto con la piel y los ojos. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.

Reactivo Blanco / S0

Patrón S1

Muestra

 l  l  l -

500  l 25  l 125  l -

500  l 25  l 125  l

Puffer Reductor Agua libre de hierro Patrón Muestra

500 25 125

Mezclar, insertar la cubeta en el soporte de flujo de célula del RX Monza cuando se le pida para muestra en blanco y oprima Leer. Cromógeno

25  l

25  l

25  l

Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25 º C. Inserte la cubeta en el soporte de flujo de célula RX Monza cuando se le solicite para la muestra y presione leer.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendado en un cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando el CAL estándar proporcionado en el kit o Suero de calibración Randox Nivel 3.

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MANUAL SI 257 PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medición:

595 nm (590 nm - 610 nm) 1 cm de espesor 20-25oC frente a reactivo blanco

PROCEDIMIENTO MACRO Pipetear en la cubeta:

Tampón Reductor Agua libre de hierro Patrón Muestra

Reactivo Blanco

Muestra

Patrón

2,0 ml 0,1 ml 0,5 ml -

2,0 ml 0,1 ml 0,5 ml

2,0 ml 0,1 ml 0,5 ml -

Mezclar, leer la absorbancia inicial de la muestra y del patrón frente a reactivo blanco. Cromógeno

0,1 ml

0,1 ml

0,1 ml

Mezclar, incubar durante 5 min entre 20-25 oC. Leer la absorbancia final frente a reactivo blanco. Restar la absorbancia inicial de la absorbancia final para obtener el ∆A del patrón y de la muestra.

PROCEDIMIENTO SEMI-MICRO

Reactivo Blanco

Muestra

Patrón

1,00 ml 0,05 ml 0,25 ml -

1,00 ml 0,05 ml 0,25 ml

1,00 ml 0,05 ml 0,25 ml -

Mezclar, leer la absorbancia inicial de la mues tra y del patrón frente a reactivo blanco. Cromógeno

0,05 ml

0,05 ml

0,05 ml

Mezclar, incubar durante 15 min entre 20-25 oC. Lea la absorbancia final contra el blanco de reactivo.

 A = Absorbancia Final - Absorbancia Inicial

6.6 - 26  mol/l (37 - 145  g/dl)

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia para considerar las differencias en edad, sexo, dieta y localización geográfica.

CARACTERÍSITCAS ESPECÍFICAS DE FUNCIONAMIENTO DE LA TÉCNICA Se obtuvieron los siguientes datos de rendimiento mediante un analizador Rx Monza en funcionamiento a 25oC.

LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 152 µmol/l (854 µg/dl). Las muestras con concentraciones superiores se deberán diluir 1+2 con agua desionizada, y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 3.

SENSITIVITY The minimum detectable concentration of Serum Iron with an acceptable level of precision was determined as 0.964 µmol/l (5.39  g/dl).

PRECISION

Media ( g/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 104 1.77 1.70 20

Nivel 3 196 3.96 2.02 20

Nivel 2 104 3.49 3.35 20

Nivel 3 196 6.26 3.20 20

Análisis (Inter) Media ( g/dl) DE CV(%) n

CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.902 X + 1.92 y un coeficiente de correlación r = 0,9995

CALCULOS Amuestra Concentración =

Mujer:

Análisis (Intra)


Tampón Reductor Agua libre de hierro Patrón Muestra

VALORES NORMALES EN SUERO(4) Adulto Hombre: 10.6 - 28.3  mol/l (59 - 158  g/dl)

x Conc. de patrón

A patrón

NORMALIZACIÓN Suero de Calibración Randox Nivel 3 es trazable al material de de referencia NIST 937 Suero Hierro.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 10.23 y 599.01  g/dl.

REFERENCIAS 1.

2. 3.

4.

Ceriotti, F., and Ceriotti, G., Improved Direct Specific Determination of Serum Iron. Clin. Chem. 26/2, 327-331 (1980). Henry, R.J.: Clinical Chemistry Principles and Techniques, New York, Harper and Row (1968) pg. 386. Young, D.S., Hicks, J.M., Method for automatic determination of serum iron, J. Clin. Pathol. 18: 98 - 102 (1965). Weippl, G. et al . (1973). Blut 27:261.


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SIFILIS RPR (SYP-RPR) TEST RAPIDO DE TARJETA DE REAGINA PLASMATICA MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Sífilis en suero y plasma. Este producto es adecuado para uso Manual. No. Cat. SY 1478 1. Suspensión de Antígeno 100 pruebas de Carbono RPR 1 x 2 ml 2. Control Positivo 1 x 0.5 ml 3. Control Negativo 1 x 0.5 ml 4. Botella dispensadora de plástico 1 5. Aguja Dispensadora calibrada para suministrar 16 µl 1 6. Tarjetas de Pruebas Desechables 10 7. Pipeta Desechable 100 SY 1479 1. Suspensión de Antígeno de Carbono RPR 2 x 5 ml 500 pruebas 2. Control Positivo 1 x 1 ml 3. Control Negativo 1 x 1 ml 4. Botella dispensadora de plástico 1 5. Aguja Dispensadora calibrada para suministr ar 16 µl 1 6. Tarjetas de Pruebas Desechables 50 7. Pipeta Desechable 500 Se pueden solicitar otras variaciones de los formatos arriba indicados. INTRODUCCIÓN La Sífilis es una enfermedad crónica, contagiosa y a menudo venérea congénita producida por el Treponema pallidum. Este organismo pertenece a un grupo de bacterias gram-negativas llamadas Espir oquetas, las cuales se definen por su estructura molecular única. La infección resulta del contacto con superficies húmedas, resultantes de lesiones del tejido epitelial de la piel o las membranas mucosas. Si no se trata, esta enfermedad puede resultar en cambios irreversibles del sistema nervioso y cardiovascular. La sífilis continua siendo una enfermedad de alta incidencia, a pesar de los avances en la terapia antibiótica moderna. PRINCIPIO La prueba de Sífilis RPR es una prueba macroscópica de floculación no treponémica para la detección y titración de reaginas (anticuerpos en circulación producidos como resultado de la lesión del tejido causada por la enfermedad) en el suero o el plasma. El antígeno utilizado en el kit es una modificación del antígeno de VDRL. Consiste en una suspensión coloidal de cardiolipina equilibrada con licitina y colesterol, y mezclada con carbono microparticulado. La aglutinación ocurre en presencia de las reaginas, la cual es visiblemente intensificada por la presencia del carbono microparticulado. MUESTRAS Se puede utilizar plasma, suero calentado o sin calentar. Las muestras hemolizadas o contaminadas no son adecuadas para el test. Las muestras de suero fresco se pueden conservar entre +2 y +8°C durante varios días antes del análisis o a -20°C si se conservan durante más tiempo.

COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Suspensión de Antígeno de RPR 1. Suspensión de cardiolipina, que contiene carbono microparticulado. Contiene timerosal.

2. Suero de Control Positivo (Dispensador Rojo) Control líquido estabilizado, reactivo con antígeno de RPR. 3. Suero de Control Negativo (Dispensador Blanco) Control líquido estabilizado, no reactivo con antígeno de RPR. PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. Los controles contienen Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. El material de origen humano del que se deriva este producto ha sido analizado a nivel de donante para el anticuerpo del Vir us de Inmunodeficiencia Humano (HIV 1, HIV 2), el Antígeno de Superficie de Hepatitis B (HbsAg), y el anticuerpo del Virus de Hepatitis C (HCV) y se ha encontrado que es NO-REACTIVO. Los métodos utilizadon están aprobados por el FDA. Sin embargo, dado que ningún método puede ofrecer una seguridad total de la ausencia de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes se deberán manejar como posibles transmisores de enfermedades infecciosas y eliminar apropiadamente. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS Sacar la caja que contiene la suspensión de antígeno de R.P.R. y los controles séricos y refrigerarla a su llegada. El antígeno de RPR y el control sérico son estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C. No guardar las tarjetas de la prueba en el refrigerador, conservarlas a temperatura ambiente. No tocar los círculos de la prueba con los dedos ya que esto podría dejar restos aceitosos en el area de reacción aumentando la probabilidad de resultados del test inválidos.

MANUAL - SIFILIS (RPR) - SY 1478

MANUAL - SIFILIS (RPR) - SY 1478

MATERIAL SUMINISTRADO Suspensión de Antígeno de Carbono RPR Control Positivo Control Negativo Botella Dispensadora de Plástico Aguja Dispensadora Calibrada para suministrar 16  l Tarjetas de Test Desechables Pipeta Desechable MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1. Rotor mecánico con etapa horizontal, operando a 100 r.p.m. 2. Pipeta automática calibrada para suministrar 50 µl. Es necesaria para la prueba cuantitativa. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos están listos para su uso después de alcanzar una temperatura ambiente (NOTA 1). Agitar la suspensión de antígeno para obtener una suspensión homogénea y transferir el contenido a la botella dispensadora de plástico suministrada. Para ello, quitar la tapa de la botella de plástico y colocar la aguja dispensadora en el tapón de cierre-luer. Con cuidado apretar la botella de plástico e insertar la punta de la aguja en la suspensión de antígeno. Dejar que la botella se expanda lentamente para que la suspensión de antígeno entre en la botella (NOTA 2). PROCEDIMIENTO A. PRUEBA CUALITATIVA 1. Utilizando una pipeta desechable, dispensar una gota ( 50 µl) de suero o plasma en el círculo de la tarjeta de la prueba. 2. Con la parte plana de una pipeta desechable, extender la muestra por toda el área del círculo de la prueba. 3. Repetir los pasos 1 y 2 para cada muestra utilizando una pipeta nueva. 4. Agitar el ensamblaje de la botella dispensadora, invertir y golpear suavemente la aguja para sacar las burbujas. 5. Poner la aguja en posición perpendicular a la tarjeta de test y dejar que caiga una gota de antígeno en cada muestra de la prueba. 6. Rotar la tarjeta de test a 100 r.p.m. durante 8 minutos en un rotor mecánico. Tras la rotación mecánica es necesario rotar e inclinar la tarjeta brevemente a mano (de un lado para otro), para ayudar a diferenciar entre los resultados reactivos y los no reactivos. 7. Después leer inmediatamente los resultados en el macroscopio con buena luz. ≈

LECTURA E INTERPRETACIÓN Las lecturas se puntuan según el criterio siguiente: PATRÓN OBSERVADO Agregados grandes en el centro periferia del area del test Agregados más pequeños en los ejes del area del test o Sin agregados, apariencia gris suave

INTERPRETACIÓN REACTIVO REACTIVO DEBIL

B. PRUEBA CUANTITATIVA 1. Utilizando una pipeta automática dispensar 50 µl de salino fisiológico en los círculos del 1 al 5 de la tarjeta de la prueba. No extender. 2. Utilizando una pipeta dispensar 50 µl de la muestra (suero o plasma) que se va a valorar en el salino del primer círculo. (Ver Figura. 1) 3. Utilizando el mismo final de la pipeta mezclar el salino y la muestra moviendo la mezcla hacia arriba y abajo 5 o 6 veces y transferir 50 µl al salino en el segundo círculo. 4. Realizar de la misma manera diluciones en serie hasta el ultimo círculo. Quitar 50 µl del círculo final. (Ver Figura 2) 5. Utilizando el extremo plano de una pipeta desechable limpia para cada muestra, extender las muestras diluídas por toda el area de cada círculo de la prueba empezando por la dilución más alta. (No. de Círculo 5). 6. Proceder como en la prueba cualitativa a partir del paso 4 en adelante. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS El último paso de dilución que contiene agregados macroscópicos indica el titre de la muestra. Si la última dilución da un resultado positivo, entonces las series de dilución se deberán extender. Cada grupo de resultados se deberá realizar con los controles positivos y negativos suministrados para validar de la prueba. LIMITACIONES DE LA PRUEBA Al igual que todos los test no treponémicos, el test de sífilis RPR puede dar resultados positivos falsos. Tales reacciones han sido producidas por enfermedades tales como lepra, mononucleosis infecciosa y enfermedades autoinmunes. Por lo tanto, es importante que todas las muestras reactivas sean confirmadas por otro test serológico, preferiblemente un test específico del treponema tal como FTA-ABS o TPHA. El diagnóstico final se deberá basar en una correlación de los resultados del test con el historial clínico del paciente. La prueba se puede utilizar también para observar la terapia.

NOTAS 1. La sensibilidad puede verse reducida a temperaturas bajas. Los mejores resultados se obtienen entre 23-29°C. 2. La estabilidad a largo plazo del producto se ve reducida cuando el antígeno se conserva en la botella dispensadora de plástico. Por lo tanto, se recomienda que el antígeno restante se devuelva a la botella de cristal original después del análisis del día. La botella de plástico y el ensamblaje de la aguja se deberán aclarar muy bien con agua destilada y secar al aire antes de usar. 3. No volver a utilizar las tarjetas de test. Las tarjetas se pueden secar al aire y archivar como documentos de los resultados permanentes.

NO REACTIVO

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3

REFERENCIAS 1. McGrew, B.E. et al ., Amer. J. Clin. Path., 1968; 50: 52. 2. Portnoy, J. et al ., U.S. Publ. Health Report, 1962; 77: 645. 3. Stevens, R.W. & Stroebel, E., Amer. J. Clin. Path., 1970; 53: 32. 4. Manual of Tests for Syphilis PHS Publications, No. 411, U.S. Govt. Printing Office. Figura. 1

Diluciones

Revisado 31 Julio 06 ne Rev. 001

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3

PROTEINAS TOTALES (TP)

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1. Reactivo Biuret Diluir el contenido de una botella R1 con 400 ml de agua bidestilada, enjuagando la botella a fondo. Es estable un año cuando se conserva herméticamente cerrado entre +2 y +25 C.

Método Biuret MANUAL RX MONZA



R2.

PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Proteinas Totales en suero y plasma. Este producto es adecuado para su utilización de forma manual y en el analizador RX monza.



No. Cat. TP 245 2 x 500 ml

Reactivo Blanco

Diluir el contenido de una botella R2 con 400 ml de agua bidestilada, enjuagando la botella a fondo. Es estable un año cuando se conserva herméticamente cerrado entre +2 y +25 C.

R1. Reactivo Biuret R2. Reactivo blanco CAL. Patrón

2 x 100 ml 1 x 100 ml 1 x 5.5 ml

CAL. Patrón Listo para usar. Es estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +25 C. 

PRINCIPIO En medio alcalino, los iones cúpricos, interaccionan con los enlaces peptídicos de las proteinas formando un complejo coloreado.

MUESTRA Suero, plasma heparinizado, EDTA plasma.

R1.

R2.

Concentraciones de las soluciones

Reactivo Biuret Hidróxido sódico Tartrato Na-K Yoduro potásico Sulfato cúprico

100 mmol/l 16 mmol/l 15 mmol/l 6 mmol/l

Hidróxido sódico Tartrato Na-K

100 mmol/l 16 mmol/l

Reactivo blanco

CAL. Patrón

Proteína

Reactivo Biuret Reactivo Blanco Patrón




Especifico para cada lote

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Las soluciones R1 y R2 contienen hidróxido sódico que es caústico. En caso de contacto accidental, lavar inmediatamente el area afectada con agua abundante y buscar inmediatamente atención médica.

Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

NOTAS Si la lectura no puede llevarse a cabo a Hg 546 nm, debe utilizarse un patrón para calcular la concentración de proteinas totales en la muestra. La muestra blanco para sueros claros o incoloros corresponde aproximadamente a 0,2 g de proteinas totales/dl, y puede ser ignorada. Cuando se analicen sueros ictéricos (5 mg bilirrubina/dl), hemolíticos o lipémicos debe analizarse una muestra blanco hecha con 0,02 ml de suero o plasma y 1,0 ml de la Reactivo blanco R2. Esta debe medirse frente al agua y la absorbancia obtenida debe restarse de la absorbancia de la muestra.

PROCEDIMIENTO Realice una calibración de ganancia nuevo con una cubeta que contiene ddH2O fresco. Seleccione el programa de TP en la pantalla de ejecución de la prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en la cubeta:

CAL contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si s e desean.


Reactivo blanco S0 Agua destilada Patrón (CAL) Suero R1 R2

0.01 ml --0.5 ml --

Patrón S1

Muestra

Muestra en blanco

-0.01 ml -0.5 ml --

--0.01 ml 0.5 ml --

--0.01 ml -0.5 ml

Mezclar, incubar durante 30 minutos a +20 a +25 C, antes de leer las instrucciones en la pantalla 

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendaciones sobre el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad, utilizando CAL estándar proporcionado en el kit de calibración o Nivel Randox Suero 3.

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MANUAL/ RX MONZA TP 245 PARA USO MANUAL

VALORES NORMALES EN SUERO(2)


Hg 546 nm (530 - 570 nm) 1 cm light path 20 to 25 C against reagent blank 


Agua destilada Patrón (CAL) Suero o plasma R1

Reactivo Blanco

Patrón

Muestra

0,02 ml ----1,0 ml

--0,02 ml --1,0 ml

----0,02 ml 1,0 ml

Adultos

g/dl

g/l

6,4 - 8,3

64 - 83



LINEALIDAD

Mezclar, incubar durante 30 min entre +20 y +25 C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (A patrón) frente al reactivo blanco.

El método es lineal hasta una concentración de 13,0 g/dl (130 g/l). Si la absorbancia de la muestra excede 0,7, diluir 1+1 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 2.

CÁLCULO MANUAL

SENSIBILIDAD

1. Cuando la medición se lleva a cabo a Hg 546 nm, la concentración de proteínas totales puede ser calculada de la siguiente manera:

La concentración detectable mínima de Proteinas Totales con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,476 g/dl (4,76 g/l).



Conc. de Prot. Tot (g/l)

=

190 x Amuestra

Conc. de Prot. Tot (g/dl)

=

19 x Amuestra

PRECISION Análisis (Intra) Media (g/dl) DE CV(%) n

2. Utilizando un patrón: Amuestra Conc. de Prot. Tot. =

x Conc. Patrón

Nivel 1 6.04 0.034 0.57 20

Nivel 2 4.48 0.024 0.53 20

Nivel 1 6.04 0.251 4.15 20

Nivel 2 4.48 0.135 3.01 20

Análisis (Inter)

Apatrón

El suero de calibración de nivel 3 de Randox sigue lo indicado en el material de referencia NIST 927d de Proteinas Totales.

Media (g/dl) DE CV(%) n

CONTROL DE CALIDAD

CORRELACIÓN

Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal:

NORMALIZACIÓN

Y = 0.9665 X - 0.0589 y un coeficiente de correlación r = 0,9850 Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 4,29 y 10,40 g/dl.

REFERENCIAS 1. Weichselbaum, T.E., Amer. J. Clin. Path., 16: 40. 2. Tietz NW. Clinical Guide to Laboratory Tests. 3rd Edition. WB Saunders Company. Philadelphia. PA pp 518-519 (1995)

INTERFERENCIA Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren: Bilirrubina Intralipid® Triglicérido Hemoglobina

500  mol/l (29 mg/dl) 2% 22,75 mmol/l (20,0 mg/dl) 10 g/l


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TRIGLICERIDOS


PARA SU USO

La reactivo R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico.


Método GPO-PAP MANUAL RX MONZA

Para el análisis cuantitativo in vitro de Trigliceridos en suero y plasma. Este producto es adecuado para un u so manual o en el analizador RX monza.

Cat. No. TR 210 6 x 15 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo enzima CAL. Patrón

1 x 100 ml 6 x 15 ml 1 x 5.5 ml

TR 213 10 x 50 ml


10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

TR 212 5 x 100 ml


5 x 100 ml 5 x 100 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO Las medidas de Triglicéridos se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades relacionadas con el metabolismo lipídico (Hiperlipoproteinemias), diversos desordenes endocrinos (neprosis diabetes mellitus) y obstrucción he pática (obstrucción biliar extrahepática).

METODO COLORIMETRICO (1) Los triglicéridos se determinan tras hidrólisis enzimática con lipasas. El indicador es una quinoneimina form ada a partir de peróxido de hidrógeno, 4-amino-fenazona y 4-clorofenol bajo la influencia catalítica de la p eroxidasa.

PRINCIPIO(2,3,4)

Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8 C. 

R1b. Reactivo enzima Cat. No. TR 210 Reconstituir un vial de Reactivo enzima R1b con 15 ml de Tampón R1a. Estable durante 21 días entre +2 y +8 C ó 3 días entre +15 y + 25 C conservar protegido de la luz. 

lipasas

Triglicéridos + H 2O

La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se deseche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%.

glicerol + ácidos grasos



GK

Glicerol + ATP

glicerol-3-fosfato + ADP

Glicerol-3-fosfato + O2

GPO

Cat. Nos. TR 213 y TR 212

dihidroxiacetona f osfato + H2O2 POD

2H2O2 + 4-aminofenazona + 4-clorofenol

quinoneimina + HCl + 4H 2O

Se puede utilizar el suero, plasma heparinizado o con EDTA. Tomar la muestras después de 12 a 14 horas en ayunas. Tras la separación las muestras son estables hasta 7 días cuando se conservan entre +2 y +8 C o 3 meses a -20 C. Se deberán evitar los tubos recubiertos con Glicerol cerrado al vacío, así como el proceso repetido de congelación y descongelación. 



R1a. Tampón Tampón Pipes 4-clorofenol Magnesio-iones

R1b. Reactivo enzima 4-aminofenazona ATP Lipasas Glicerol-kinasa Glicerol-3-fosfato oxidasa Peroxidasa

CAL. Patrón





PREPARACION DE LA MUESTRA(1)



Reconstituir un vial de Reactivo enzima R1b con un pequeño volumen de Tampón R1a y después transferir todo el contenido al frasco R1a, enjuagando el vial R1b varias veces. Estable durante 21 días entre +2 y +8 C ó 3 días entre +15 y +25 C. Conservar protegido de la luz.

40 mmol/l, pH 7,6 5,5 mmol/l 17,5 mmol/l 0,5 mmol/l 1,0 mmol/l ≥ 150 U/ml ≥ 0,4 U/ml ≥ 1,5 U/ml ≥ 0,5 U/ml Vedi inserto lotto-specifico

CAL. Patrón Listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad, cuando se conserva entre +2 y +8 C. 

R1 = Reactivo enzima R2 = Ninguno MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo enzima Patrón

MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

NOTA DE PROCEDIMIENTO Para corregir para libre de glicerol, restar 0,11 mmol/l (1 0 mg/dl) al valor calculado de triglicérido.

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MANUAL/ RX MONZA TR 210 PROCEDIMIENTO

NORMALIZACIÓN

Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia nueva en el modo de cubeta. Seleccione el TRI en la pantalla de Ejecución de prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

Calibración Randox suero Nivel 3 es atribuible a hacer referencia a ID-GC/MS método.

Pipetear en la Cubeta: Reactivo Blanco S0

Patrón S1

Muestra

500  l

5  l 500  l

5  l 0.50 ml

ddH2O Patrón Muestra Reagent R1

Mezclar, incubar durante 10 min a 20-25oC o 5 min a 37 º C. Inserte en el soporte de RX Monza celda de f lujo y oprima Leer dentro de los 60 minutos.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Recomendado con el cambio de l ote de reactivos o como inidicated por los procedimientos de control de calidad, utilizando CAL estándar proporcionado en el kit de calibración o de suero Randox Nivel 3.

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medida:

500 nm; Hg 546 nm 1 cm 20-25 C ó 37 C frente a reactivo blanco sólo es necesario un reactivo blanco por serie 



Pipetear en tubos de ensayo: Reactivo Blanco  l

Patrón  l

Muestra  l

1000

10 1000

10 1000

Muestra Patrón (CAL) Reactivo (R1)

Mezclar, incubar durante 10 minutos a 20-25 C ó 5 minutos a 37 C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y el patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco en los 60 minu tos siguientes. 



CÁLCULO MANUAL 1. Utilizando patrón: Amuestra Concentración triglicéridos =

x 2,29 = mmol/l Apatrón

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +44 (0) 28 9442 2413.

INTERFERENCIAS El método no se ve influenciado por concentraciones de hemoglobina de hasta 6 g/l (600 mg/dl) o por concentraciones de bilirrubina de hasta 500  mol/l (29 mg/dl).

VALORES DE REFERENCIA(5) Se recomiendan los siguientes límites superiores para la determinación del factor de riesgo de hipertrigliceridemia: Sospecha de hipertrigliceridemia a partir de: 1,71 mmol/l (150 mg/dl) Hipertrigliceridemia incrementada a partir de: 2,29 mmol/l (200 mg/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población.


LINEALIDAD El análisis es lineal hasta una concentración de triglicéridos de 1172 mg/dl. Las muestras que presenten una concentración superior, deben ser diluidas 1 + 4 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 5.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Trigliceridos con un nivel aceptable de precisión se determinó en 22.9 mg/dl.

Amuestra x 200 = mg/dl Apatrón

2. Utilizando factor: Longitud de onda Hg 546 nm 500 nm

Concentración Triglicéridos mmol/l mg/dl 11,95 8,47

1048 743

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MANUAL/ RX MONZA TR 210 PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 110 3.19 2.90 20

Nivel 3 259 6.42 2.48 20

Nivel 2 110 5.85 5.32 20

Nivel 3 259 9.89 3.82 20


CORRELACIÓN Este método (Y) se comparó con otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.902 X + 16.1 y un coeficiente de correlación r = 0,9965 Se analizaron 42 muestras de pacientes con valores de entre 45 y 417 mg/dl.

REFERENCIAS 1. Tietz N.W., Clinical Guide to Laboratory Tests, Second Edition W.B. Saunders Company, Philadelphia, USA 554-556, 1990. 2. Jacobs N J, VanDemark, P.J., Arch Biochem Biophys 1960; 88: 250-255. 3. Koditschek L K, Umbreit, W W., J Bacteriol 1969; 98: 1063-1068. 4. Trinder P., Ann Clin Biochem 1969; 6: 24-27. 5. Study Group, European Atherosclerosis Society. Strategies for the prevention of coronary heart disease: A policy statement of the European Athersclerosis Society. (1987). Eur. Heart. J. 8 : 77.


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ACIDO URICO (UA)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, qu e se requieren al manejar reactivos de laboratorio.

Método Colorimétrico Enzimático MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Acido Urico en el suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

Cat. No. UA 230 6 x 15 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo Enzima CAL. Patrón

1 x 100 ml 6 x 15 ml 1 x 5.5 ml

UA 233 10 x 50 ml

R1a. Tampón R1b. Reactivo Enzima CAL Patrón

10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

METODO COLORIMETRICO (1) El ácido úrico se convierte, catalizado por la uricasa, en alantoina y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado, catalizado por la peroxidasa, oxida el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la 4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina rojo-violeta.

PRINCIPIO uricasa

Ac. úrico + O2 + 2H2O

Alantoina + CO2 + H2O2

2H2O2 + Ac. 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico + 4-Amino-fenazona peroxidasa

N-(4-antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinoneimina

MUESTRA Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina. Diluir la orina 1+10 con agua destilada.



R1a. Tampón Tampón HEPES 3,5 DCHBS

50 mmol/l, pH 7,0 4 mmol/l

R1b. Reactivo Enzima 4-Aminofenazona Peroxidasa Uricasa

CAL Patrón

0,25 mmol/l ≥ 1000 U/l ≥ 200 U/l Especifico para cada lote

La solución R1a contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean.

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO R1a. Tampón Listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si se conserva entre +2 to +8oC.

R1b. Reactivo Enzima UA 230 Reconstituir un vial de R1b Reactivo enzimático con 15 ml de Buffer R1a. Estable 21 días entre +2 y +8°C o 5 días entre +15 y +25°C si se almacena protegido de la luz

UA 233 Reconstituir el contenido de un vial de R1b Reactivo enzimático con una porción de Buffer R1a y luego transferir todo el contenido a la botella R1a, enjuagando el frasco R1b varias veces. Estable por 21 días entre +2 y +8°C o 5 días entre +15 y +25°C si se almacena protegido de la luz.

CAL. Patrón Listo para su uso. Etable hasta la fecha de caducidad si se conserva entre +2 to +8°C.

MATERIALES SUMINISTRADOS Tampón Reactivo Enzima Patrón

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MANUAL/ RX MONZA UA 230 MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS

CALCULO MANUAL

Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) Sueros de Calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

El uso de un patrón

Suero o plama

PROCEDIMIENTO

Amuestra

Usando ddH2O realizar una nueva Calibración de Ganancia en el modo de cubeta. Seleccione UA en la pantalla Ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones.

Conc. Acido Urico =

patrón conc.

Reactivo Blanco S0

Patrón S1

Muestra

 500 l

10  l  500 l

10  l 500  l


( mol/l) Apatrón Amuestra

Conc. Acido Urico =


x

patrón conc.

x

(mg/dl) Apatrón

Orina Amuestra Conc. Acido Urico =

patrón conc.

x

patrón conc.

x

( mol/l) Apatrón Amuestra

Mezclar, incubar durante 15 min a 20-25°C ó 5 min a 37ºC. Insertar en el soporte de flujo de célula de RX monza y oprima Leer dentro de los 30 minutos.

Conc. Acido Urico =


Utilización de un factor:

(mg/dl) Apatrón

Conc. Acido Urico

Recomendado con el cambio de lote de reactivos o como se indica en el procedimiento de control de calidad, utilizando el CAL estándar proporcionado en el kit o suero de calibración Randox Nivel 3.

Longitud de onda:

Suero/ Plasma

Orina

Suero/ Plasma

Orina

PARA USO MANUAL

520 nm Hg 546 nm

2029 3112

22306 34202

34.1 52.3

375 575

Longitud de onda: Cubeta: Temperatura de reacción: Medición:

520 nm; Hg 546 nm 1 cm de espesor 20-25°C / 37°C frente a reactivo blanco sólo se requiere un reactivo blanco por serie


Muestra Patrón (CAL) Reactivo (R1)

Reactivo Blanco ( l)

Muestra ( l)

Patrón ( l)

1000

20 1000

20 1000

Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25oC o durante exactamente 5 min a 37oC. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco durante los 30 minutos siguientes.

( mol/l)

(mg/dl)

NORMALIZACIÓN El suero de Calibración nivel 3 tiene trazabilidad con el material de referencia ID-GC/MS.

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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MANUAL/ RX MONZA UA 230 INTERFERENCIA

CORRELACIÓN

Hemoglobina hasta 100 mg / dl y bilirrubina hasta 20 mg / dl no afectan la determinación. Si las mediciones no puede llevarse a cabo a 520 nm o Hg 546 nm se debe utilizar la norma prevista.

Este método (Y) se comparó c on otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.933 X + 0.16 y un coeficiente de correlación r = 0,9808

VALORES NORMALES Suero2:

Hombre

Mujer

Orina3:

202 - 416 3.4 - 7.0

 mol/l

142 - 339 2.4 - 5.7

 mol/l

1.5 - 4.5 250 - 750

mmol/24 horas mg/24 horas

mg/dl

mg/dl



SUERO SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Acido Urico con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,599 mg/dl.

LINEALIDAD El método es lineal para una concentración de 24,5 mg/dl. Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1 con solución de NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.

ORINA SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de Acido Urico con un nivel aceptable de precisión se determinó en 2.06 mg/dl.

LINEALIDAD El método es lineal para una concentración de 26,7 mg/dl. Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1 con agua destilada y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.

PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Nivel 2 14.1 0.250 1.77 20

Nivel 3 23.8 0.362 1.52 20

Nivel 2 14.1 0.557 3.95 20

Nivel 3 23.8 0.912 3.83 20


CORRELACIÓN

PRECISION Análisis (Intra) Media (mg/dl) DE CV(%) n

Se analizaron 40 muestras de pacientes con valores de entre 1.05 y 15.16 mg/dl.

Nivel 2 5.81 0.022 0.38 20

Nivel 3 8.97 0.049 0.55 20

Nivel 2 5.81 0.328 5.64 20

Nivel 3 8.97 0.371 4.14 20

Este método (Y) se comparó c on otro método comercial disponible (X) y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0,9853 X + 0,669 y un coeficiente de correlación r = 0,9879 Se analizaron 45 muestras de pacientes con valores de entre 3,28 y 21,58 mg/dl.


REFERENCIAS 1. 2. 3.

Fossati, P., Prencipe, L., and Berti, G., Clin. Chem. (1980) 26/2, 227-231 . Thefeld, W. et al . Dtsch. Med. Wschr. (1973) 98, 380. Krieg, M. et al . J. Clin. Chem. Clin. Biochem.(1986) 24, 863. Revisado 16 Sep 10 ck Rev. 001

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ACIDO URICO (UA)

ESTABILIDAD Y PREPARACION DEL REACTIVO El reactivo enzima y el patrón están listos para usar. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +2 y +8°C, protegidos de la luz.

Reactivo Líquido Método Colorimétrico Enzimático MANUAL PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de Acido Urico en el suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para su utilización en Manual. No. Cat. UA 1613 4 x 100 ml

R1. Reactivo Enzima CAL Patrón

4 x 100 ml 1 x 5.5 ml

METODO COLORIMETRICO El ácido úrico se convierte, catalizado por la uricasa, en alantoina y peróxido de hidrógeno. El peróxido de hidrógeno formado, catalizado por la peroxidasa, oxida el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico y la 4-aminofenazona para dar un compuesto de quinoneimina rojo-violeta.

MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo Enzima Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Multisuero Valorado Randox Nivel 2 (No. Cat. HN1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) PROCEDIMIENTO

Longitud de onda: Cubeta: Temperatura de reacción: Medición:

520 nm; Hg 546 nm 1 cm de espesor 20-25oC ó 37oC frente a reactivo blanco sólo se requiere un reactivo blanco por serie

PRINCIPIO(1,2) uricasa

Ac. úrico + O2 + 2H2O

alantoina + CO2 + H2O2


2H2O2 + Ac. 3,5-dicloro-2-hidroxibencenosulfónico + 4-Amino-fenazona peroxidasa

N-(4-antipiril)-3-cloro-5-sulfonato-p-benzoquinoneimina MUESTRA Suero, plasma heparinizado o plasma EDTA, orina. Diluir la orina 1+10 con agua destilada. COMPOSICION DEL REACTIVO

Componentes Reactivo Enzima Tampón HEPES 4-Aminofenazona 3,5 DCHBS Uricasa Peroxidasa CAL Patrón


R1.

200 mmol/l, pH 7,55 0,25 mmol/l 4,0 mmol/l ≥ 200 U/l ≥ 1000 U/l Especifico para cada lote

Reactivo Blanco  l

Muestra  l

Patrón  l

1000

20 1000

20 1000

Muestra Patrón (CAL) Reactivo 1

Mezclar, incubar durante 15 minutos a 20-25oC o durante exactamente 5 min a 37oC. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco durante los 15 minutos siguientes. Aunque la absorbancia se puede leer en cualquier momento durante un período de hasta 15 minutos después del tiempo especificado de incubación, el intervalo entre la adición de la muestra y la lectura debe de ser exactamente el mismo que para el Patrón/Control y la Muestra. CALCULO DE LA CONCENTRACION DE ACIDO URICO Suero o plama


El R1 reactivo contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico.

Amuestra Conc. Acido Urico =

x conc. del patrón Apatrón

Orina

Amuestra Conc. Acido Urico =

x conc. del patrón x 11 Apatrón

La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado c ualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio.

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MANUAL UA 1613

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Ensayados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Se deberá de analizar dos niveles distintos de controles cada día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. INTERFERENCIA Haemoglobin up to 100 mg/dl and Bilirubin up to 20 mg/dl do not affect the determination. VALORES NORMALES(3,4) Suero: Hombre

Mujer Orina:

202 - 416  mol/l 3,4 - 7,0 mg/dl 142 - 339  mol/l 2.4 - 5.7 mg /dl 1,5 - 4,5 mmol/24 hrs. 250 - 750 mg/24 hrs.

Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. LINEALIDAD El método es lineal para una concentración de 1189 µmol/l ó 20 mg/dl. Para la muestras con concentraciones superiores diluir 1+1 con solución de NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2. SENSIBILIDAD Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio intervalo de sensibilidad ya que esto está limitado por la sensibilidad del espectrofotómetro utilizado. Bajo las condiciones del ensayo un cambio de 0,004 unidades de absorbancia es equivalente a 0,98 mmol / l. REFERENCIAS 1. Barham, D., and Trinder, P., Analyst 97, 142-145 (1972). 2. Fossati, P., Prencipe, L., and Berti, G., Clin. Chem. 26/2, 227-231 (1980). 3. Thefeld, W. et al . Dtsch. Med. Wschr. (1973) 98, 380. 4. Krieg, M. et al . J. Clin. Chem. Clin. Biochem.(1986) 24, 863.

Revisado 28 June 10 lm Rev. 001

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PROTEINAS TOTALES (UP) (ORINA) MANUAL RX MONZA PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Proteinas Totales en orina y C.S.F. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador RX monza.

No. Cat. UP 1570 3 x 100 ml

R1. Reactivo colorante CAL. Patrón

3 x 100 ml 1 x 5.5 ml

UP 1571 6 x 100 ml

R1. Reactivo colorante CAL. Patrón

6 x 100 ml 1 x 5.5 ml

SIGNIFICADO CLINICO (1) El análisis de la Proteína Total en la orina y el líquido cerebro espinal es de gran valor en el diagnóstico de enfermedades renales y del sistema nervioso central. Las elevaciones en la proteína urinaria son muy comunes en las siguientes condiciones: ejercicio enérgico, fiebre e hipotermia, nefrosis y nefropatía diabética e infecciones de las vias urinarias. E l análisis de la proteína total en el líquido cerebro espinal ayuda en el diagnóstico de condiciones tales como meningitis, tumores CNS y hemorragia cerebral.

PRINCIPIO(2)

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. El Patrón (CAL) contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se tire este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%.

Precaución: Estándar El material humano del que se deriva este producto ha sido evaluado a nivel de donante para buscar anticuerpos del virus de inmunodeficiencia humana (VIH 1, VIH 2), antígenos de superficie de hepatitis B (HbsAg) y anticuerpos del virus de hepatitis C (HCV), y resultó ser NO REACTIVO. Se han llevado a cabo los métodos aprobados por la FDA estadounidense para realizar dichas pruebas. No obstante, puesto que ningún método puede garantizar plenamente que está exento de agentes infecciosos, este material y todas las muestras de pacientes deben manipularse teniendo en cuenta su posibilidad de transmisión de enfermedades infecciosas y deben tratarse en consecuencia.

El rojo de pirogalol se acompleja con proteinas en un medio ácido que contiene iones molibdato. El complejo azul resultante presenta una absorción máxima a 600nm. La densidad óptica a 600 nm es directamente proporcional a la concentración de proteinas totales de las muestras.


EXTRACCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA(3,4,10)

Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio ba jo condiciones apropiadas de laboratorio.

Orina : extracción de 24 horas, las muestras de orina se pueden conservan entre +2 y +8C hasta 24 horas o congeladas hasta 3 meses hasta que se analizen. C.S.F.(Líquido cerebro espinal): Se deberán de analizar durante la ½ hora siguiente a su extracción

OBSERVACIONES 1. Aditivos: No es necesario el uso de conservantes. 2. La heparina puede causar interferencias si se utiliza en muestras de LCR.

R1.

ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25 C. 

MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo a color de la proteína urinaria Urinary Protein Standard



Por favor, desechar todos los materiales Biológicos y Químicos según las pautes locales.

Concentración inicial de la Solución

1. Material de pipetaje adecuado para suministrar 10 µl, 50 µl, 1 ml y 3 mls. 2. Cronómetro y bloque de calentamiento o baño de agua para

60  mol/l 40  mol/l 50 mmol/l 1 mmol/l 3 mmol/l

mantener +25C ó +37C. 3. Un espectrofotómetro con una capacidad de longitud de onda de 600 nm. 4. NaCl al 0,9% para la dilución de la muestra (si es necesario). 5. Controles de orina ensayados de Randox de nivel 2, (N.º cat. AU 2352) y nivel 3 (N.º cat. AU 2353) o controles de LCR de Randox de nivel 2 (CF 1500) y nivel 3 (CF 1501).

Reactivo colorante Rojo de pirogalol Molibdato disódico Acido succínico Oxalato sódico Benzoato sódico

CAL. Patrón

Proteína (seroalbúmina humana)

Vedi inserto lotto specifico

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MANUAL/ RX MONZA UP 1570 PROCEDIMIENTO

CALIBRACION

Seleccione UP (Arriba) en la pantalla Run Test (Realizar análisis) y lleve a cabo un blanco de agua de la forma indicada. Pipetee en una cubeta:

Se recomienda el patrón de Proteína Urinaria Randox (1 g/l) suministrado con este kit para la calibración cuando se analizen muestras de orina o CSF. La dilución del patrón antes de su uso no es necesaria. El patrón se prepara gravimétricamente utilizando un grado de reactivo de albúmina de suero humano. Se recomienda la recalibración para cada serie de muestras analizadas.

Blanco de reactivo S0 10 µl 500 µl

Agua redestilada Patrón Muestra Reactivo R1

Patrón S1 10 µl 500 µl


Mézclelo y déjelo incubar durante exactamente 10 minutos a 20-25ºC o 5 minutos a 37ºC. Introduzca la cubeta en el soporte de la celda de flujo del RX Monza y pulse Read (Leer).

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Temperatura: Medición:

600 nm 25/37°C Frente al blanco de reactivo


Método Macro Reactivo blanco Agua bidestilada Patrón Orina o C.S.F Reactivo

50  l ----3000  l

Patrón --50  l --3000  l

Controles de orina ensayados de nivel 2 y nivel 3 o controles de LCR de Randox de nivel 2 y nivel 3. Analice dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y el origen de luz. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento de bacterias puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

Muestra

INTERFERENCIA(9)

----50  l 3000  l

Como en todos los métodos de tinción, la subestimación de proteína puede ocurrir en muestras de orina que contengan cadenas ligeras de inmunoglobulina (p. ej. proteína de Bence Jones). Cuando se sospeche de dichas muestras, se deberían analizar también mediante electroforesis.

Métro Semi-micro

VALORES NORMALES

Reactivo blanco

Patrón

Muestra

20  l ----1000  l

--20  l --1000  l

----20  l 1000  l

Agua bidestilada Patrón Orina o C.S.F Reactivo

CONTROL DE CALIDAD

Normalmente se recomienda que, siempre que sea possible, cada laboratorio establezca su propio rango de valores esperados, o intervalo de referencia para análisis que se lleven a cabo normalmente. Dado que tales valores pueden variar con la edad, sexo, dieta, localidad geográfica o instrumento. Orina C.S.F.

Mezclar, incubar durante exactamente 10 minutos a 25°C ó 5 minutos a 37°C. Medir la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al blanco de reactivo.

CÁLCULO MANUAL Amuestra Concentración de la Proteína (g/l) = Apatrón

x Patrón conc.

Para determinar la Proteína Urinaria de 24 horas, medir el volumen de la orina de 24 horas en ml y analizar el contenido de proteína en la orina (g/l) según el procedimiento. Calcular la Proteína Urinaria de 24h utilizando la siguiente fórmula: Proteína (g/24h) = Proteína Urinaria (g/l) x TV/1000 donde

TV 1000

0.028 0.01 0.15

- 0.141 g/24h (2) - 0.14 g/l (6) - 0.45 g/l (6)

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ESPECÍFICAS Los siguientes datos de ren dimiento se obtuvieron mediante el analizador RX monza en funcionamiento a una temperatura de 37°C.

SENSIBILIDAD La concentración detectable mínima de proteínas totales en orina con un nivel aceptable de precisión se determinó en 0,022 g/l.

LINEARIDAD Este método es lineal hasta una concentración de 2,14 g/l. Las muestras con concentraciones superiores deben diluirse 1 + 4 con una solución del 0,9% (p/v) de NaCl y deben someterse a ensayo de nuevo multiplicando los resultados por 5.

= volumen de orina de 24h en ml = Convierte ml/día en l/día

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MANUAL/ RX MONZA UP 1570 PRECISIÓN Precisión intraensayo Media (g/dl) DE CV (%) n

Nivel 1 0.065 0.002 2.93 20

Nivel 2 0.275 0.002 0.67 20

Nivel 1 0.065 0.003 5.34 20

Nivel 2 0.275 0.013 4.74 20

Interensayo Media (g/dl) DE CV (%) n

CORRELACIÓN Se comparó este método (Y) con otro método comercial disponible y se obtuvo la siguiente ecuación de regresión lineal: Y = 0.9911 X + 0.0029 con un coeficiente de correlación r = 0,9998 Se analizaron 46 muestras de pacientes con valores de entre 0,04 y 1,36 g/l.

REFERENCIAS 1. Pesce, A.J., A.J., Kaplan, L.A.: Methods in Clinical Clinical Chemistry (1987). 2. Watanabe, N., N., Kamei, Kamei, S., Ohkubo, A., Yamanaka, Yamanaka, M., Ohsawa, S., Makino, K., and Tokuda, K., Clin. Chem., 1986; 32/8: 1551. 3. Laboratory Test Handbook, Jacobs et al . ed 2. 4. Orsonneau, J., Dowet, P., Massoubre, C., C., Lustenberger, P., 35/11: 2233. and Bernard, S., Clin. Chem., 1989; 35/11: 5. Henry R.J., R.J., Cannon, D.C., D.C., Winkelman, J.W., J.W., "Clinical Chemistry, Principles & Techniques," Harper Harper & Row, 2nd Ed. 1974. 6. Teitz, N.W., "Fundamentals of Clinical Chemistry", Chemistry", W.B. Saunders Company, 1970 Philadelphia. 7. Young, D.S., et al . Clin. Chem., 21: 5. ID, 1975. 8. Friedman, R.B., et al . Clin. Chem., 26: 4. ID, ID, 1980. 9. Tietz N.W., Textbook of Clinical Clinical Chemistry. 2nd ed. W.B. Saunders Co., 717-723, 1994. 10. Yang J.Y., Chien T.I., Lu J.Y. and Kao J.T. Heparin Interference in the cerebrospinal fluid Protein Assay Measured in the Pyrogallol Red – Molybdate Molybdate Complex. Clin. Chim Acta 2009 Oct; 408 (1-2): 75-78.


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PARA SU USO Para el análisis cuantitativo in vitro de la Urea en suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para uso Manual. No. Cat. UR 107 5 x 100 ml

R1a. R1b. R2. CAL.

Ureasa Tampón Fosfato Hipoclorito Patrón

5 x 1 ml 5 x 100 ml 1 x 100 ml 1 x 5.5 ml


La solución R1a contiene Azida Sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente.

METODO COLORIMETRICO(1,2)

El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%.

PRINCIPIO El método se basa en la siguiente reacción:ureasa

Urea + H2O

2NH3 + CO2

El Salicilato y el hipoclorito en el reactivo reaccionan con los iones de amonio para formar un complejo verde (2.2 dicarboxilindofenol). MUESTRA Suero, EDTA, plasma tratado con citrato o heparinizado. Orina diluída 1+20 en agua destilada. Multiplicar el resultado por 21. COMPOSICION DEL REACTIVO

Componentes

R1a. Ureasa R1b. Tampón Fosfato Salicilato Sódico Nitroprúsido Sódico EDTA R2. Hipoclorito Sódico Hidróxido Sódico CAL. Patrón

Concentraciones Conc entraciones Iniciales de las soluciones U/l 120 mmol/l, pH 7,0 63,4 mmol/l 5,00 mmol/l 1,5 mmol/l 18 mmol/l 750 mmol/l Vedi inserto inserto lotto-specifico ≥ 5000

Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados sólo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS La Ureasa R1a, el Tampón Tampón Fosfato R1b, el Hipoclorito Sódico R2 y el Patrón están listo listo para su uso. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conservan se conservan entre +2 y +8°C. ESTABILIDAD Y PREPARACION Y PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO (R1) Añadir 1 frasco de ureasa ureasa a R1a botella de Tampón Fosfato R1b. Estable durante 1 mes mes entre +2 y +8°C protegido de la luz. MATERIALES SUMINISTRADOS SUMINISTRADOS Ureasa Tampón Fosfato Hipoclorito Sódico Patrón MATERIALES NECESARIOS NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) NOTAS DE PROCEDIMIENTO Utilizar cristal libre de iones de amonio. El Reactivo 2 se puede diluir 1+4 con agua doblemente destilada (estable durante 6 meses entre +2 y +8°C). Después se utiliza 1 ml de Reactivo 2 en la prueba. El volumen final de la reacción será 2 ml y la linealidad 50 mmol/l (3 g/l).

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MANUAL UR 107

PROCEDIMIENTO


600 nm (Hg 578 nm - Hg 623 nm) 1 cm de espesor 25°C, 37°C frente al blanco de reactivo

REFERENCIAS 1. Fawcett, J.K., J.K., Scott, J.E., J. Clin. Path., 1960; 13: 156-159. 2. Patton, C.J., Crouch, S.R., Anal. Chem., 1977; 49: 464-469

Pipetear en los tubos de ensayo:

Patrón Muestra Reactivo de trabajo (R1)

LINEARIDAD El método es lineal hasta 33,3 mmol/l (200 mg/dl) en el suero o plasma, y 700 mmol/l (4195 mg/dl) en la orina. Las muestras con concentraciones más elevadas se diluirán 1 + 1 con NaCl al 0,9% y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 2.

Blanco de Reactivo

Patrón

Muestrea

-

10  l -

10  l

1000  l

1000  l

1000  l

Mezclar. Incubar durante al menos 3 min a 37°C ó 5 min a 2025 C. 

Sodio Hipoclorito (R2)

200  l

200  l

200  l

Mezclar. Incubar durante al menos 5 min a 37 C ó 10 min a 20-25 C. Medir la absorbancia del patrón (Apatrón) y la absorbancia de la muestra (Amuestra) frente al blanco de reactivo durante las siguientes 2 horas. 



CALCULO

Amuestra Conc. de urea =

x

Conc. de de patrón

(mmol/l)

x

Conc. de de patrón

(mg/dl)

Apatrón Amuestra Conc. de urea = Apatrón

CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control control de calidad diario. diario. Analizar dos dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara lámpar a 2. Comprobar que todo todo material está limpio. 3. Comprobar el el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. r esultados. 4. Comprobar la temperatura temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con con el Soporte Soporte Técnico al Cliente Cliente de los los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. VALORES DE NORMALIDAD Suero o plasma: 2,5 – 7,5 7,5 mmol/l (0,15 – 0,45 0,45 g/l) Orina: 338 - 583 mmol/24h (20 - 35 g/24h)


Revisado 30 Jan 09 bm Rev. 001

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UREA

TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA (3,4) Suero/Plasma:

Método Enzimático Cinético MANUAL RX MONZA

Orina (24 h):

PARA SU USO. Para el análisis cuantitativo in vitro de la Urea en suero, plasma y orina. Este producto es adecuado para un uso manual o en el analizador Rx Monza.

No. Cat.

La Heparina se puede utilizar como anticoagulante. No utilizar heparinato de amonio. Recoger la orina sin aditivos: refrigerar tras la toma4 Se recomienda una dilución de 1+20 con NaCl al 0,9%. Multiplicar el resultado por 21.

La Urea es estable en el suero/plasma durante 1 día a +25oC, 3 días a +2 y +8oC, ó 3 meses a -20oC. La Urea es estable en la orina durante 4 días cuando se conserva entre +2 y +8oC3.

UR 220 6 x 15 ml


1 x 100 ml 6 x 15 ml 1 x 5.5 ml

UR 221 10 x 50 ml


10 x 50 ml 10 x 50 ml 1 x 5.5 ml

Componentes

UR 2364 6 x 500 ml


6 x 500 ml 6 x 500 ml 1 x 5.5 ml

R1b. Reactivo Enzima

SIGNIFICADO CLINICO (1,2) La urea se sintetiza en el hígado a partir del amoníaco, como resultado de la desaminación de amino ácidos. Esta biosíntesis es el mecanismo principal de eliminación del exceso de nitrógeno en el organismo. Las mediciones obtenidas en este análisis se utilizan en el diagnóstico de anomalías metabólicas y sobre todo renales. Se debe destruir más del 60% del riñón antes de que los niveles de urea en plasma aumenten significativamente. Este test se utiliza más frecuentemente junto con el de la creatinina sérica para niveles de proteínas elevados (descompensación cardíaca, reducción de agua). En 1913, Marshall1 introdujo un análisis utilizando ureasa para la determinación de urea en la sangre. Se realizaba la valoración del amoníaco liberado a partir de la urea por medición de la ureasa. Desde entonces se han utilizado muchas otras técnicas para medir el amoníaco producido. Schubert2 crearon

En 1965 Talke y un procedimiento enzimático para la determinación de urea, utilizando el sistema enzimático asociado de ureasa - GLDH (Glutamato deshidrogenasa).

METODO UV(1,2) La urea se hidroliza en presencia de agua y ureasa para producir amoníaco y dióxido de carbono. El amoníaco producido en la primera reacción se combina con -oxoglutarato y NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa para producir glutamato y NAD+.

COMPOSICION DEL REACTIVO Concentración Inicial de las Soluciones

R1a. Tampón Tampón Tris

Ureasa GLDH NADH Adenosina-5-difosfato -oxoglutarato

CAL. Patrón

150 mmol/l, pH 7,6 ≥ 10 U/ml ≥ 2 U/ml 0,26 mmol/l 3 mmol/l 14 mmol/l Especifico para cada lote

PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Sólo para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Ejecutar las precauciones normales requeridas para el manejo de reactivos de laboratorio. La solución R1a y el Patrón contienen azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel o las membranas mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar la zona afectada con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o ingestión, buscar atención médica inmediatamente. El Azida Sódica reacciona con el plomo y cobre de las cañerías, formando ácidos potencialmente explosivos. Cuando se eliminen dichos reactivos, limpiar con grandes volúmenes de agua para evitar la formación de ácidos. Las superficies metálicas expuestas, deberán limpiarse con hidróxido de sodio al 10%. Hojas Sanitarias y de Seguridad están disponibles si se desean.


PRINCIPIO ureasa

Urea + H2O

2 NH3 +

CO2 GLDH

2 -oxoglutarato + 2 NH4+ + 2 NADH

2 L- glutamato + 2 NAD+ + 2 H2O

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MANUAL UR 220 ESTABILIDAD Y PREPARACION DE LOS REACTIVOS R1a. Tampón Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8ºC.

R1b. Reactivo Enzima UR 220

Reconstituir un vial de Reactivo Enzima 2 con 15 ml de Tampón 1. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8ºC ó 2 días entre +15 y +25ºC.

PARA USO MANUAL Longitud de onda: Cubeta: Temperatura de reacción: Medición:

340 nm (Hg 334 nm or Hg 365 nm) 1 cm de espesor 37 C Frente al blanco de reactivo 

Pipetear en la cubeta: Reactivo Blanco ( l)

UR 221, UR 2364 Reconstituir el contenido de un vial de Reactivo Enzima 2 con una parte de Tampón 1 y transferir el contenido entero a la botella Tampón 1, enjuagando la botella Reactivo Enzima 2 varias veces. Estable durante 4 semanas entre +2 y +8ºC ó 2 días entre +15 y +25ºC.

CAL. Patrón

Patrón Muestra Reactivo

--1000

Patrón

10 -1000

Muestra ( l)

-10 1000

Mezclar, leer la absorbancia inicial después de 30 segundos y activar el temporizador de forma simultánea. Leer de nuevo después de 1, 2 y 3 minutos.

Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre +2 y +8ºC.


CALIBRACIÓN PARA EL USO MANUAL

Tampón Reactivo Enzima Patrón

Se recomienda para la calibración urea estándar Randox. Por favor, consulte la hoja de lote específico. La recalibración se debe completar para cada serie de muestras analizadas. Consulte el apropiado manual de operador o la hoja de aplicaciones para instrucciones específicas de calibración del analizador. La norma está preparada gravimétricamente utilizando urea pura disponible comercialmente.

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS Dispositivos para pipeteo adecuados para la entrega de 10 µl y 1000 µl. Dispositivo temporizador y bloque calentador o baño de de agua para mantener 37°C. Un espectrofotómetro con capacidad de longitud de onda de 340/334/365 nm. Multisera ensayada Randox Nivel 2 (Cat. N º HN 1530) y Nivel 3 (Cat. Nº HE 1532) Suero de calibración Randox Nivel 3 (Cat. No. CAL 2351)

NOTA Se pueden usar todos los anticoagulantes excepto heparinato de amonio.

PROCEDURE Usando ddH2O realizar una nueva calibración de ganancia en el modo flujo de célula. Seleccione UREA en la pantalla Ejecutar prueba y llevar a cabo un blanco de agua según las instrucciones. Pipetear en tubos de ensayo:


CÁLCULO MANUAL Para calcular la concentracion de urea utilizar la siguiente fórmula: AMuestra Conc de Urea = x Concentración del patrón APatrón (mmol/l or mg/dl) Para convertir las unidades convencionales de SI4 unidades de multiplicar las unidades convencionales por 0.166. mg/dl urea x 0.166 = mmol/l urea eg. 20 mg/dl Urea = 20 x 0.166 = 3.32 mmol/l

NORMALIZACIÓN Suero Calibración Randox Nivel 3 es atribuible a la urea material de referencia NIST 909b.

CONTROL DE CALIDAD

Reactivo Blanco S0

Patrón S1

Muestra

5  l 500  l

5  l 500  l

5  l 500  l

Mezclar y aspirar en la Rx Monza.

CALIBRACIÓN PARA RX MONZA Se recomiendan para calibración urea estándar Randox proporcionado en el kit o suero de Calibración Randox Nivel 3. La norma está preparada gravimétricamente utilizando urea pura disponible comercialmente. Calibrar en el cambio de lote del reactivo o como se indica en los procedimientos de control de calidad.

Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar programación del instrumento y la lámpara 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413.

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Randox insertos.pdf

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