INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
Bioequivalencia del ácido acetilsalicílico como prueba de intercambiabilidad.
Nombre del laboratorio responsable del medicamento de prueba
Laboratorio de Biofarmacia del Departamento Departamento de Farmacología, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Tercero autorizado que realizó el estudio
Biofarmacia, 8FV1
Investigador principal o analista
Equipo 3
Responsable o coordinador del estudio
Dra. en C. Sandra García Medina
Responsable de aseguramiento de la calidad
QFI Rafael Español Morales
Esparza Yllescas Daniel González Elizalde kateri Martinez Aguilar Ulises Rodríguez García Julio César
Periodo en el que se llevó a cabo el estudio: 10-Abr-13
al 24-Abr-13
Primer periodo: del 11-Abr-13 al 16-Abr-13 Segundo periodo: del 18 -Abr-13 al
23-Abr-13
Fecha de emisión: 21-May-13
RESUMEN GENERAL Objetivo: Determinar la bioequivalencia del ácido acetilsalicílico en 2 productos farmacéuticos (producto de
prueba y producto de referencia) como prueba de intercambiabilidad. Productos evaluados.
Denominación Genérica Denominación Distintiva (marca)
ÁCIDO ACETILSALICÍLICO Referencia: Prueba: Aspirina Ácido acetil salicílico
Diseño del estudio.
Se realizó un estudio cruzado con 12 voluntarios sanos para determinar la bioequivalencia del ácido acetilsalicílico en dos productos farmacéuticos. : Los voluntarios recibieron en días diferentes dos tabletas de Ácido Acetilsalicílico (AAS) de 500 mg (medicamento de referencia y prueba). Tomándose diez muestras de orina por voluntario, posteriores a la administración del medicamento (0.33, 0.83, 1.5, 2.5, 3.5, 5.5, 8, 11, 12.5, y 13.5 horas). El estudio se realizó en dos periodos, de una semana cada uno. Al final de cada periodo se cuantificó la cantidad de ácido acetilsalicílico en las muestras de orina. La cuantificación del fármaco se realizó mediante un análisis espectrofotométrico espectrofotométrico Se cuantificó cada muestra de acuerdo al siguiente procedimiento: a. Preparación del blanco: Mezclar todas las muestras blanco de los seis equipos y cada equipo preparará su propio blanco, si la orina se encuentra muy concentrada hacer una dilución (1:4). b. Preparación de las muestras Dejar que las muestras muestras se descongelen a temperatura ambiente, colocándolas en en un baño de agua a temperatura ambiente. Cada muestra deberá filtrarse antes del análisis químico. Tomar 1 mL de cada una de las muestras por analizar y colocarlo en matraz erlenmeyer de 50 mL, adicionar 5 mL de la solución cloruro férrico, agitar y leer la absorbancia en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 540 nm. Si la muestra está concentrada y el valor de la absorbancia no está dentro del rango de la curva de calibración, diluir diluir esa muestra con con agua y anotar el factor de dilución dilución (1:2 o 1:4). 1:4).
1. Medicamentos evaluados: medicamento de prueba y medicamento de referencia. CARACTERÍSTICA Denominación Internacional Denominación Genérica Denominación Distintiva (marca) Forma Farmacéutica Contenido Dosis
MEDICAMENTO DE MEDICAMENTO DE PRUEBA REFERENCIA Ácido 2-(acetiloxi)-benzoico ÁCIDO ACETILSALICÍLICO Aspirina
Ácido acetil salicílico TABLETA 500mg 1000mg
Número de Lote Fecha de Caducidad Fabricante
X2IILN AGO 14 BAYER
1231955 NOV 14 ALPHARMA
Listado de la secretaria de salud donde indica que es medicamento de referencia: ANEXO 1 Carta cumplimiento de buenas prácticas de manufactura del fabricante, firmada por el responsable sanitario. ANEXO 2 Resultados de valoración y uniformidad de dosis expresada como uniformidad de contenido. La diferencia entre los productos preferentemente no debe ser mayor del 5 % Valoración: 92.55 % Uniformidad de contenido: 92.542 % C.V.= 0.76% 2.- REPORTE CLÍNICO 2.1 Resumen Se realizó el estudio cruzado de bioequivalencia de dos medicamentos de ácido acetilsalicílico, tabletas de 500 mg. 2.1.1 Introducción Actualmente los estudios de bioequivalencia son parte fundamental para el registro de formas farmacéuticas nuevas, la renovación de los ya existentes y la intercambiabilidad de los mismos, nos permiten establecer si el producto de prueba tiene equivalencia terapéutica en la velocidad de absorción y la cantidad de fármaco absorbido en relación con el producto de referencia. Estos estudios comparan la biodisponibilidad de 2 (o más) formulaciones con el mismo ingrediente activo. El propósito del estudio es determinar si la biodisponibilidad de las formulaciones es igual. 2.1.2 Diseño del estudio Se realizó un estudio cruzado en voluntarios, los cualesrecibieron en días diferentes dos tabletas de Ácido Acetilsalicílico (AAS) de 500 mg (medicamento de referencia y prueba). Participaron sujetos sanos con edad entre 18 y 55 años y con un índice de masa corporal entre 18 a 26.9 Kg /m2, sin antecedentes de hipersensibilidad o alergias. Todos los voluntarios participantes leyeron y firmaron el formato de aceptación para participar en la investigación Los sujetos voluntarios declararon no estar tomando medicamento una semana previa al estudio, ni durante este. Tampoco consumieron café, tabaco o bebidas con Xantinas y bebidas alcohólicas al menos 10 h. antes del inicio del estudio, ni durante este. Los medicamentos fueron asignados a una secuencia de tratamiento A-B o B-A en una proporción balanceada de 1:1 (ver Tabla de aleatorización). Se hizo entrega a los voluntarios del formato F03-P06Horarios para administración de tratamientos, toma de muestras e ingesta de alimentos. Los días en que se realizó la toma de muestras, se prosiguió de acuerdo al siguiente protocolo: 1. Permanecer en ayuno a partir de las 22:00 h. del día anterior al estudio. Los participantes guardarán ayuno mínimo de 10 horas antes del inicio del estudio. Permanecerán en ayuno hasta la segunda hora postadministración del medicamento. Posteriormente se le proveerá de una dieta balanceada estandarizada, ver formato F02-P06.
2. Previo a la administración del medicamento, vaciar la vejiga y tirar la orina (ver formato F03-P06). 3. A las 7 A.M. Ingerir 500 mL de agua en ayuno 1 hora antes de la administración del medicamento (ver formato F03-P06). 4. Recolectar una muestra de orina de 50 mL que servirá como blanco. 5. A las 8 A.M. tomar dos tabletas de ácido acetilsalicílico con 250 mL de agua. Anotar el tiempo en el que se administro el medicamento (ver formato F03-P06). 6. Tomar 200 mL de agua cada hora durante las primeras 4 horas después de la administración del medicamento (ver formato F03-P06). 7. Recolectar 10 muestras de orina después de la administración del medicamento a los siguientes tiempos: 20, 50 minutos 1hora 30minutos, 2 horas 30 minutos, 3 horas 30 minutos, 5 horas 30 minutos, 8 horas, 11 horas, 12 horas 30 minutos, 13 horas 30 minutos (ver formato F03-P06). 8. Medir el volumen de cada muestra colectada (en probeta) y almacenar una alícuota de 15 mL en congelación. NOTAS IMPORTANTES: Anotar en cada envase de muestra la fecha, volumen total y tiempo real de muestreo. Durante el tiempo de colecta no deberá perderse ninguna muestra de orina, porque se invalida el estudio. 2.2 Tabla de aleatorización. Instituto Politécnico Nacional Escuela Nacional de Ciencias Biológicas Laboratorio de Biofarmacia Lista de aleatorización Codigo: F01-P06 Semestre:ENE- JUL 2013
Grupo:
Periodo Voluntario
Primero
Segundo
1
B
A
2
A
B
3
A
B
4
A
B
5
A
B
6
A
B
7
A
B
8
B
A A
9
B
10
B
A
11
B
A
12
B
A
2.3 Resultados 2.3.1 Variables demográficas. No. vol. Género Edad (años) Peso (Kg) Talla (m) IMC (Kg/m 2) 1
F
22
62
1.59
24.52
2
F
23
64
1.56
26.29
3
F
22
60
1.54
25.29
4
M
23
84
1.75
27.42
5
F
21
58.5
1.70
20.22
6
M
23
74
1.73
24.72
7
M
22
64
1.74
21.14
8
F
21
53
1.52
22.94
9
M
23
64
1.74
21.14
10
F
23
59
1.62
22.48
11
F
21
55
1.56
22.60
12
M
22
82
1.80
25.3
2.3.1.1 Número de muestras recolectadas. Primer periodo: 10 por voluntario, en total 120 muestras. Segundo periodo : sólo voluntarios 1, 2, 3, 4, y 5, recolectaron 10 muestras cada uno. Los voluntarios 6 y 12 recolectaron 9 cada uno. En total 118 muestras recolectadas. 2.3.2 Desviaciones al protocolo. Día de toma de muestra. Los voluntarios tuvieron la libertad de elegir el día de administración, entre el 11-Abr-13 y 16-Abr-13 para el Primer periodo, y entre el 18 -Abr-13 y 23-Abr-13 para el Segundo periodo. Muestras recolectadas. Los voluntarios 6 y 12 no recolectaron la primer muestra, tiempo0.33 h.
2.3.3 Reacciones adversas. Ningún voluntario informó sobre alguna reacción adversa durante el estudio, tampoco dos semanas después del mismo. 2.3.4 Tratamientos concomitantes. Ningún voluntario reportó consumir otros medicamentos durante el estudio. 2.3.5 Reporte de aseguramiento de calidad. Durante el desarrollo del protocolo no se presentaron anomalías. Los materiales, equipo utilizados por el personal que llevo a cabo el experimento se encontraban calibrados; asi mismo, el personal profesional se encontraba capacitado; por lo que se puede asegurar que las actividades
desarrolladas fueron realizadas de la manera correcta y con ello se asegura la calidad de los resultados. BIBLIOGRAFIA Proyecto de la NOM-177-SSA1-2008 3. REPORTE ANALÍTICO 3.1 Introducción Los métodos que son utilizados en el laboratorio , para la determinación de la bioequivalencia de los medicamentos estudiados, necesitan una validación; esto, para asegurar la fiabilidad y seguridad de que los resultados obtenidos son confiables y reales; para esto se deben realizar las diferentes pruebas que marca el proyecto de la NOM-177-SSA1-2008, entre los cuales tenemos: selectividad, linealidad, límite de cuantificación, exactitud, precisión (repetibilidad y reproducibilidad intralaboratorio), recobro absoluto, y estabilidad de la muestra (condiciones de almacenamiento a corto y largo plazo, ciclos de congelacióndescongelación); los resultados obtenidos en cada una de estas pruebas deben concordar de acuerdo a lo establecido en los criterios de aceptación de dicha NOM. 3.2 Descripción de la muestra biológica La muestra tiene que ser de coloración amarilla clara, con ausencia de partículas extrañas, sedimentos o sangre. 3.3 Descripción del método analítico Se recibieron las muestras de orina y se procedió a filtrarlas con papel Whatman de ahí se tomaron muestras de un 1 mL y se transfirieron a matraces de 50 mL para finalmente adicionar 5 mL de reactivo de Trinder y proceder a leer en un espectrofotómetro UV- visible a una longitud de onda de 540 nm. Se realizó un ajuste del espectrofotómetro a cero con el blanco que se preparó con 1 mL de orina y 5 mL de reactivo de Trinder. 3.4 Resumen de la validación del método Parámetro
Resultado
Criterio
Conclusión
Linealidad del sistema
c.v<15%, r2>0.98 r2>0.98
CUMPLE
Recobro absoluto
c.v= 5.31%, r2=0.9935 r2 de 3 análisis>0.98 c.v 5.46%
c.v <15%
CUMPLE
Límite de cuantificación
D.R ±5%
D.R 32.52
NO CUMPLE
Linealidad del método
CUMPLE
Repetibilidad
C.V 12.41, 6.88, 6.26 % Reproducibilidad c.v 28.7, 23.3, 21.05, D.R 7.9, 10.7, 5.6 Estabilidad de la muestra C.V 3.59, 0.256, D.R 36.7, 22.98 Ciclos de congelación-descongelación C.V 36.08, 36.80 Efecto de la dilución C.V. 1.16, 8.30 %
C.V<15%
CUMPLE
C.V<15%, D.R. ±15%
NO CUMPLE
C.V <15%, D.R ±15%
NO CUMPLE
C.V <15%
NO CUMPLE
C.V <15%
CUMPLE
3.5 Descripción del análisis de las muestras Las muestras fueron analizadas con un espectrofotómetro de UV-Vis a una longitud de onde de 540 nm, realizando el correspondiente ajuste del espectofotómetro a cero con el blanco preparado.
3.6 Seguimiento del método analítico durante el análisis de muestras Curva de calibración 03 de Abril de 2013. CURVA
Absorbancia
CONCENTRACIÓN NOMINAL (mg/mL) 100
200
400
600
800
1000
1
0.129
0.277
0.598
0.879
1.226
1.594
2
0.129
0.278
0.585
0.904
1.231
1.590
3
0.158
0.270
0.600
0.890
1.249
1.594
ECUACIÓN
Y = 0.00161X -0.0446
R
0.9991
R2
0.998
Curva de calibración 10 de Abril del 2013. CURVA
Absorbancia
CONCENTRACIÓN NOMINAL (mg/mL) 100
200
400
600
800
1000
1
0.339
0.453
0.734
1.009
1.375
1.668
2
0.302
0.514
0.730
1.019
1.331
1.720
3
0.293
0.444
0.750
1.015
1.373
1.760
ECUACIÓN
Y= 1.22X10-3 X + 0.0649
R
0.99687
R2
0.99376
Curva de calibración 17 de Abril del 2013 CURVA
Absorbancia
CONCENTRACIÓN NOMINAL (mg/mL) 100
200
400
600
800
1000
1
0.109
0.279
0.493
0.779
0.976
1.231
2
0.141
0.236
0.431
0.736
1.005
1.207
3
0.103
0.267
0.436
0.701
1.038
1.261
ECUACIÓN
Y = 0.0012X -0.0089
R
0.997
R2
0.998
4 Reporte de aseguramiento de calidad. Durante el desarrollo del protocolo no se presentaron anomalías. Los materiales, equipo utilizados por el personal que llevo a cabo el experimento se encontraban calibrados; asi mismo, el personal profesional se encontraba capacitado; por lo que se puede asegurar que las actividades desarrolladas fueron realizadas de la manera correcta y con ello se asegura la calidad de los resultados.
BIBLIOGRAFIA
Proyecto de la NOM-177-SSA1-2008 4. Reporte farmacocinetico estadístico 1. Introducción La biodisponibilidad de un fármaco da idea de su velocidad de absorción y de la cantidad del mismo que llega a la biofase de los receptores tisulares, en los que debe ejercer su acción. Si el valor de su biodisponibilidad oral se acerca a la unidad, el fármaco se absorbe bien y sufre escaso metabolismo (poco efecto de primer paso de la barrera hepática). Por el contrario, si su biodisponibilidad es sólo una fracción pequeña de 1, indica que el fármaco se absorbe peor, o que sufre un metabolismo hepático acusado. El término bioequivalencia se refiere a la velocidad y proporción en que el mismo principio activo de dos medicamentos «iguales» alcanza la circulación sistémica. Por ello, la bioequivalencia se cuantifica mediante la determinación de los niveles plasmáticos del fármaco contenido en los dos medicamentos (biodisponibilidad). El estudio suele ser cruzado y consiste en la administración de una sola dosis de cada formulación a un grupo de voluntarios sanos; a veces, dependiendo de las propiedades farmacocinéticas del principio activo, se requieren múltiples dosis o estudios en el equilibrio estacionario. En la actualidad se acepta que un correcto estudio de bioequivalencia debe incluir entre 12 y 30 voluntarios sanos. Sin embargo, el número preciso de voluntarios necesarios en cada estudio dependerá de la variabilidad intra e interindividual que cabe esperar de cada fármaco, y de la precisión estadística exigida por las indicaciones clínicas del fármaco. Si existiera un riesgo inaceptable para los voluntarios sanos, como ocurre con los fármacos antineoplásicos, el estudio de bioequivalencia debe hacerse en pacientes. El número de sujetos se calcula ateniéndonos al coeficiente de variación de los parámetros que vayamos a medir 2. Descripción de los tratamientos. Participaron 12 voluntarios sanos de entre 18 y 55 años, con un índice de masa corporal entre 18 a 26.9 kg/m2 , los cuales recibieron en días diferentes dos tabletas de ácido acetilsalicílico de 500 mg (medicamento de referencia y prueba). 3. Resultados a) Estadística descriptiva de datos las variables demográficas. VARIABLE Edad (años) Peso (kg)
GENERO HOMBRES MUJERES GLOBAL HOMBRES MUJERES GLOBAL
N 5 7 12 5 7 12
MEDIA 22.6 21.857 22.16 73.6 58.786 64.95
D.E. 0.54 0.9 0.83 9.529 3.806 9.95
ERROR STD. 0.245 0.34 0.2396 4.261 1.439 2.87
MIN. 22 21 21 64 53 53
MEDIANA 23 22 22 74 59 62
MAX 23 23 23 84 64 84
C.V. % 2.42 4.11 3.76 12.94 6.47 15.32
Talla (m) IMC (kg/m2)
HOMBRES MUJERES GLOBAL HOMBRES MUJERES GLOBAL
5 7 12 5 7 12
1.752 1.584 1.65 23.944 23.477 23.67
0.0277 0.605 0.098 2.705 2.039 2.25
0.0184 0.0229 0.028 1.23 0.771 0.64
1.73 1.52 1.52 21.14 20.22 20.22
1.74 1.56 1.62 24.72 24.94 24.52
1.8 1.7 1.8 27.42 26.29 27.42
1.58 38.19 5.96 11.29 8.68 9.51
d) Datos individuales y promedio de concentración en el fluido biológico en función del tiempo de muestreo y formulación. MEDICAMENTO REFERENCIA CONC. URINARIA µg/mL TIEMPO (h)
1
0.33 0.83 1.5 2.5 3.5 5.5 8 11 12.5 13.5
13.64 26.64 38.39 72.09 221.74 545.94 583.64 690.54 806.56 857.48
2 3.83 13.65 39.07 78.93 204.35 370.11 661.16 767.95 825.58
3
4
20.22 65.29 81.96 89.52 114.47 129.64 216.22 261.69 310.16
6.5 13.69 47.37 57.22 136.98 154.71 293.79 568.07 653.5 676.1
5 11.75 17.789 66.959 121.359 153.08 337.57 403.37 495.13
6
7
8
9
10
11
12
PROM
2.27 24.66 81.4 166.46 224.95 334.14 517.78 744.53 799.97 853.16
4.91 44.13 84.51 139.02 217.4 323.47 485.59 583.2 631.48 701.16
8.55 26.76 61.32 123.21 254.39 318.53 427.37 579.36 698.48 732.41
10.88
12.54 45.48 90.83 145.6 237.94 446.35 557.12 600.89 632.7
4.54 11.67 36.35 130.55 221.8 410.56 505.34 571.83 582.75 605.62
38.16 97.07 151.74 334.92 473.74 611.7 622.1
1.87 14.68 31.55 53.82 86.16 146.18 212.74 255.46 284.2
8.94 22.08 49.39 87.86 157.40 266.81 384.93 531.63 594.39 666.35
MEDICAMENTO PRUEBA CONC. URINARIA µg/mL Tiempo (h) 0.33 0.83 1.5 2.5 3.5 5.5 8 11 12.5 13.5
1
2
3
4
5
28.48 65.62 131 193.84 401.91 591.71 635.35 783.81
3.84 14.84 35.26 66.78 91.21 480.81 590.61 682.27 757.36 839.42
5.7 29.95 72.19 114.59 131.79 229.66 301.82 534.19 615.21 668.03
15.11 35.71 78.14 152.97 199.42 303.07 418.31 537.82 588.85 622.99
7.85 19.72 56.38 100.82 147.91 252.18 380.83 522.04 570.36 599.41
6
7
8
9
10
11
12
PROM.
18.05 54.63 97.35 159.35 242.04 375.09 498.87 557.58 583.79
8.2 21.81 57.19 150.09 228.58 282.21 342.38 432.33 462.83 456.3
91.68 196.22 251.63 291.42 303.32 416.42 651.02 995.52 109.6 1241.1
11.96 29.01 56.68 96.99 309.37 466.89 811.59 992.04 1149.6 1243.1
18.16 45.65 106.01 197.58 253.57 382.58 605.1 745.15 811.54 991.66
13.54 28.4 43.79 64.88 93.86 154.85 254.35 392.74 453.77 619.87
12.27 28.87 80.76 94.33 116.24 251.58 409.39 444.91 504.32 549.99
18.83 42.57 76.76 124.45 180.47 304.68 461.87 614.13 601.36 766.63
e) Estadística descriptiva de los parámetros farmacocinéticos Xu infinito (mg/mL) MED. REF. MED. PRUEBA CONC. CONC. voluntario (mg/mL) (mg/mL) 1 857.48 783.81
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 MEDIA D.E. C.V.
825.58 310.16 676.1 495.13 632.7 605.62 853.16 701.16 732.42 622.1 284.2 632.98 190.24 30.05
839.42 668.03 622.99 594.41 583.79 465.3 1241.1 1243.14 991.66 619.87 549.49 766.92 263.08 34.30
F) Resultados de parámetros farmacocinéticos Xu infinito (mg/mL) MED. REF. voluntario 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 MEDIA D.E. C.V.
CONC. (mg/mL) 857.48 825.58 310.16 676.1 495.13 632.7 605.62 853.16 701.16 732.42 622.1 284.2 632.98 190.24 30.05
MED. PRUEBA CONC. (mg/mL) 783.81 839.42 668.03 622.99 594.41 583.79 465.3 1241.1 1243.14 991.66 619.87 549.49 766.92 263.08 34.30
PRUEBAPRUEBA/REF (PRUEBA/REF)*100 REF -73.67 13.84 357.87 -53.11 99.28 -48.91 -140.32 387.94 541.98 259.24 -2.23 265.29 186.98 173.41 92.74
0.91 1.02 2.15 0.92 1.20 0.92 0.77 1.45 1.77 1.35 1.00 1.93 1.28 0.46 35.43
91.41 101.68 215.38 92.14 120.05 92.27 76.83 145.47 177.30 135.39 99.64 193.35 128.41 45.50 35.43
LOG COCIENTE -0.04 0.01 0.33 -0.04 0.08 -0.03 -0.11 0.16 0.25 0.13 0.00 0.29 0.09 0.15 171.27
DIFERENCIA (PRUEBA-REF) 600.00 500.00 400.00 300.00 200.00 100.00 0.00 1
-100.00
2
3
4
5
-200.00
6
7
8
9
10
11
12
11
12
11
12
VOLUNTARIO
COCIENTE (PRUEBA/REF) 2.50 2.00 1.50 1.00 0.50 0.00 1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
VOLUNTARIOS
LOG (PRUEBA/REFERENCIA) 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 -0.05
1
2
3
4
5
6
7
-0.10 -0.15
VOLUNTARIOS
8
9
10
Reporte de aseguramiento de calidad. Durante el desarrollo del protocolo no se presentaron anomalías. Los materiales, equipo utilizados por el personal que llevo a cabo el experimento se encontraban calibrados; asi mismo, el personal profesional se encontraba capacitado; por lo que se puede asegurar que las actividades desarrolladas fueron realizadas de la manera correcta y con ello se asegura la calidad de los resultados. Bibliografía Proyecto de la NOM-177-SSA1-2008 ANEXOS Anexo 1 Copia del listado u oficio emtido por la SSA donde se indique el medicamento de referencia
Anexo 2
México, D.F., a 22 de Mayo de 2013
A QUIEN CORRESPONDA:
Por medio de la presente carta se hace constar que El Laboratorio de Biofarmacia de la ENCB cumple con el conjunto de lineamientos y actividades relacionadas entre si, destinadas a garantizar que los productos farmacéuticos elaborados tienen y mantienen la identidad, pureza, concentración, potencia e inocuidad requeridas para su uso, tal y como lo marca la legislación Mexicana aplicable (NOM-059-SSA-1-2006).
_________________________________ Q.F.I Auditor Calificado por COFEPRIS
ANEXO 3. Resultados de los perfiles de disolución comparativos.
120
PORCENTAJE DISUELTO DE AAS VS TIEMPO
S A100 A E D O 80 T L E U S I 60 D E J A T 40 N E C R O 20 P
MEDICAMENTO PRUEBA MEDICAMENTO REFERENCIA
0 0
10
20
30
40
50
TIEMPO (minutos)
%DISUELTO %DISUELTO TIEMPO
PROMEDIO PROMEDIO
2
(At-Bt)
(At-Bt)
-2.01
4.04
-8.40
70.56
-4.58
20.97
REFERENCIA
PRUEBA
5
25.32
27.33
10
40.75
49.15
20
71.13
75.71
30
86.98
89.02
-2.04
4.16
45
91.57
96.40
-4.83
23.32
f = 64.78
123.0581
Criterios Criterio de la NOM-177 El coeficiente de variación del porcentaje disuelto debe ser menor o igual que e l 20% para el primer tiempo de muestreo y menor o igual que el 10% para los tiempos subsecuentes Si el valor de f es mayor a 50, en los medios de disolución, los perfiles de disolución son similares.
n = Número de tiempos de muestreo Rt= % Disuelto promedio en el tiempo t del medicamento de referencia Pt= % disuelto promedio en el tiempo t del medicamento de prueba
Conclusión Los coeficientes de variación son superiores a los aceptados, por lo cual la prueba no pasa, a pesar de que la f es de 64.78 valor que si cumple la NOM-177
ANEXO 4. Carta del Patrocinador, cumplimiento de la NOM-059-SSA-2006. México, D.F., a 23 de Marzo de 2013.
A QUIEN CORRESPONDA:
Por medio de la presente carta se hace constar que los Laboratorios ALPHARMA, con operaciones en; Central de Adecuación de Medicamentos AvKra 45 (Autop. Norte) No 103 B 35 Bogotá, D.C. Colombia, cumple con el conjunto de lineamientos y actividades relacionadas entre si, destinadas a garantizar que los productos farmacéuticos elaborados tienen y mantienen la identidad, pureza, concentración, potencia e inocuidad requeridas para su uso, tal y como lo marca la legislación Mexicana aplicable (NOM-059-SSA-1-2006).
---------------------------------------------------
---------------------------------------------------
Firma
Firma
Responsable Sanitario en ALPHARMA
Responsable encargado del caso en COFEPRIS
ANEXO 5. Autorización del protocolo.
México, D.F., a 01 de Abril de 2013.
A QUIEN CORRESPONDA:
Por medio de la presente carta se hace constar que el Comité Nacional de Bioética autoriza el protocolo presentado por el Laboratorio de Biofarmacia del Departamento de Farmacología, Escuela Nacional de Ciencias Biológicasya que cumple con el conjunto de lineamientos y actividades relacionadas entre si, destinadas a realizar un Estudio de Bioequivalencia en voluntarios adultos.
--------------------------------------------------Firma Dr. Manuel H Ruiz de Chávez Presidente del Consejo de la Comisión Nacional de B ioética
Anexo 12 Informe de validación del método para cuantificar muestras biológicas. 1) Matriz biológica en la que se validó el método: Orina 2) Criterios de aceptación
3) Recuperación absoluta
CONCENTRACIÓN NOMINAL
ABSORBANCIA EN SOLUCIÓN
ABSORBANCIA EN ORINA
% RECOBRO
MUESTRAS CONTROL BAJO 300
PROMEDIO
0.458
0.470
0.395
0.413
0.494
0.418
0.449
0.433
96.57
MUESTRAS CONTROL MEDIO 500
PROMEDIO
0.779
0.723
0.772
0.722
0.753
0.688
0.768
0.711
92.57
MUESTRAS CONTROL ALTO 700
PROMEDIO
1.057
1.058
1.010
1.074
1.049
1.078
1.039
1.07
103.08
RECOBRO ABSOLUTO PROMEDIO
97.36
C.V. %
5.46
CRITERIO NOM-177 No debe ser necesariamente del 100% pero deberá ser consistente preciso y reproducible en todo el intervalo de la curva de calibración. CONCLUSIÓN: No cumple
Linealidad del sistema
CURVA
CONCENTRACIÓN NOMINAL (mg/mL) 100
200
400
600
800
1000
1
0.154
0.300
0.499
0.844
1.106
1.376
2
0.159
0.316
0.553
0.844
1.141
1.464
3
0.150
0.286
0.551
0.845
1.135
1.535
PROMEDIO
0.154
0.300
0.534
0.843
1.127
1.458
D.E.
0.0045
0.015
0.031
0.00058
0.015
0.079
C.V.%
2.92
4.99
5.73
0.068
1.36
5.46
Absorbancia
LINEALIDAD DEL SISTEMA 1.6 1.4 1.2 A I C N 1 A B 0.8 R O0.6 S B A0.4 0.2 0 0
200
400
600
800
CONCENTRACIÓN (µg/mL)
RESULTADOS
4) Precisión.
Ecuación
Y=-4.35X10-3 + 1.435X10 -3
R2
0.9835
CV
5.3146%
1000
-
Repetibilidad
MUESTRA CONTROL BAJO
CONTROL MEDIO
CONTROL ALTO
ABSORBANCIA CONC. RECUPERADA
ABSORBANCIA CONC. RECUPERADA
ABSORBANCIA CONC. RECUPERADA
1
0.4497
303.7239
0.7871
525.5077
1.1284
749.8551
2
0.5789
388.6512
0.8612
574.2160
1.020
679.9150
3
0.5530
371.6263
0.8425
561.9239
1.1729
779.1064
4
0.4307
291.2346
0.7183
480.2833
1.0395
691.4183
5
0.5003
336.9849
0.7890
526.7567
1.0279
683.7933
PROMEDIO
338.4441
533.7375
716.8176
D.E. %
42.006
36.7654
44.9135
C.V. %
12.41
6.88
6.26
CONC. ADICIONADA
300
500
700
DESV. RELATIVA %
12.81
6.74
2.4
CRITERIO NOM-177: El C.V. ≤15% en métodos cromatográficos e inmunológicos ≤20%. CONCLUSIÓN: Si cumple
-
Reproduciblidad intralaboratorio
ANALIST A
DÍ A
REPLIC A NUMER O
ABSORBANC IA
CONC. RECUPERA DA
ABSORBANC IA
CONC. RECUPERA DA
ABSORBANC IA
CONC. RECUPERA DA
1
1
1
0.488
330.6047
0.745
490.17
1.061
686.37
2
0.47
319.4286
0.805
527.42
1.041
673.96
3
0.482
326.8789
0.783
513.49
0.993
644.15
1
0.396
276.22
0.696
463.54
1.060
691.25
2
0.52
354.43
0.703
468.33
0.998
652.47
3
0.503
343.17
0.687
458.22
1.045
682.47
2
CONTROL BAJO
CONTROL MEDIO
CONTROL ALTO
3
2
1
2
3
1
0.364
256.20
0.65
435.21
1.030
672.14
2
0.388
243.06
0.641
429.87
1.043
681.25
3
0.443
271.21
0.629
422.68
1.040
679.14
1
0.423
302.66
0.693
457.87
1.029
666.21
2
0.416
290.24
0.702
463.11
1.071
692.14
3
0.47
285.90
0.752
494.17
1.08
698.24
1
0.413
322.52
0.723
480.24
1.058
690.21
2
0.418
286.85
0.722
480.39
1.074
700.24
3
0.149
289.86
0.688
458.21
1.078
702.32
1
0.062
289.98
0.265
200.66
1.075
703.35
2
0.191
122.54
0.307
228.47
1.056
699.69
3
0.190
63.96
0.253
192.25
1.044
695.64
PROMEDIO
268.7134
425.9242
699.5847
D.E. %
79.0778
104.2429
10.8547
C.V. %
29.4283
24.4745
10.3569
CONC. ADICIONADA DESV. RELATIVA % CRITERIO NOM-177: El C.V.≤15%. CONCLUSIÓN: No cumple
5) Estabilidad Condiciones de almacenamiento Tie mp o
RE PLI CA
0
CONTROL BAJO
CONTROL ALTO
CONC. RECUP
ABSOR BANCIA
CONC. RECUP
1
ABSO RBAN CIA 0.782
513.148
1.428
919.247
2
0.785
515.010
1.420
909.279
3
7
0.786
515.631
1.430
915.488
Pro me dio D.E .% C.V .% 1
514.546
913.004
1.292
3.285
0.2511
0.354
0.490
335.038
1.080
704.203
2
0.48
329.407
1.075
701.075
3
0.454
312.513
1.080
704.202
PR 325.652 705.160 OM EDI O D.E 11.72 1.805 .% C.V 3.59 0.256 .% CRITERIO NOM-177: Debe cumplir con criterios repetibilidad y exactitud con un C.V.≤15%. CONCLUSIÓN: Si cumple
-
Ciclos de congelación-descongelación
CICLO DE CONGELACIÓN DESCOLGELACION
REPLICA NUMERO
0
1
CONTROL BAJO
CONTROL ALTO
ABSORBANCIA
CONC. RECUPERADA
ABSORBANCIA
CONC. RECUPERADA
1
0.497
336.192
1.113
718.664
2
0.520
350.473
1.079
697.554
3
0.460
313.219
1.110
716.802
PROMEDIO
333.294
711.006
D.E. %
18.795
11.6874
C.V. %
5.639
1.643
1
0.390
272.468
0.955
625.990
2
0.277
201.763
0.625
419.508
3
0.338
239.931
0.791
523.375
PROMEDIO
238.054
522.9576
D.E. %
35.389
103.2416
C.V. %
143.866
19.74
7
1
0.455
372.284
0.352
289.641
2
0.215
179.716
0.464
379.506
3
0.455
372.284
0.728
591.331
PROMEDIO
308.094
420.154
D.E. %
111.179
154.89
C.V. %
36.08
36.80
CRITERIO NOM-177: Debe cumplir con criterios repetibilidad y exactitud con un C.V.≤15%.
CONCLUSIÓN: No cumple
-Efecto de la dilución
Muestra sin diluir
Dilucion 1:2
Dilucion 1:4
Numer o de replica
Concentracio n Nominal (mg/ml)
Absorbanci a
Concentracio n Interpolada
Concentracio n real (f=2)
Absorbanci a
Concentracio n Interpolada
Concentracio n real (f=4)
1
1.4
0.939
612.8512
1225.7024
0.52
353.8099
1415.2396
2
1.4
0.96
629.1195
1258.239
0.451
310.6363
1242.5455
3
1.4
0.958
627.86
1255.72
0.537
364.446
1457.7888
Promedio
1246.5538
Promedio
1371.8573
Desv. Estandar
18.1017
Desv. Estandar
113.9903
C.V.%
1.4521
C.V.%
8.3091
Desv Rel
10.9604
Desv Rel
2.0161
6) Límite de cuantificación REPLICA
ABSORBANCIA
CONCENTRACIÓN RECUPERADA
1
0.173
144.75
2
0.173
144.75
3
0.182
150.11
4
0.163
138.79
5
0.170
142.96
PROMEDIO
144.272
DESVIACIÓN ESTANDAR
4.07
C.V. %
2.82
CONCENTRACIÓN ADICIONADA
100 (µg/mL)
DESVIACION RELATIVA %
44.272 %
CRITERIO NOM-177 : Se considera que el punto tiene validez como limite de cuantificación si su valor promedio cae dentro de ± 20% del valor nominal, con un CV no mayor que 20% para métodos cromatográficos y 25% para métodos inmunológicos. CONCLUSION:
7) Selectividad
EQUIPO ABSORBANCIA % DE RESPUESTA
1
0.187
106.25
2
0.056
31.818
3
0.422
239.77
4
0.268
152.272
5
0.041
23.295
6
0.336
190.909
8) Conclusiones de la validación del método De acuerdo a los datos obtenidos, y basándonos en los criterios de aceptación contenidos en la NOM-1772008, se concluye que este método no cumple con las características necesarias para su validación.
