OBTENCIÓN DE UN CULTIVO PURO DE BACTERIAS Álvarez Elizabeth; Merca! Mar"a; Meza #e$e%ia; #e$e%ia; Narv&ez Ra'ael; Ra 'ael; Velilla Velilla Merl($ U%iver$ia e $)cre Resumen
En los ambientes ambientes naturales los microorganismos microorganismos se encuentran usualmente como poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos, necesitamos tenerlos como cultivos puros. Un cultivo puro es aquel en el que todos los microorganismos provienen de una sola célula. El modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola célula. Estos cultivos se caracterizan porque las colonias deben ser iguales en forma, tamaño y color y al observase en el microscopio deben tener un aspecto común. Esta práctica se realiz con el propsito de aprender técnicas de siembra de bacterias bacterias como siembra en estr!as estr!as y siembra a partir partir de diluciones, diluciones, con el fin de obtener colonias de bacterias de un cultivo puro. "ara esto tomaron # medios de cultivos de bacterias madre, que se encontraban en liquido $agua% y en solido $agar%, en total se &icieron ' siembras de las cuales # fueron realizadas con la técnica de estr!a en ( y la otra con la técnica de siembra a partir de diluciones. diluciones. )e observ pasadas una #* &rs aprox. la presencia de bacterias lo cual nos indica que el procedimiento procedimiento realiz de manera correcta, correcta, cabe destacar destacar que las técnicas técnicas de asepsia fueron importantes para realizar este ensayo y as! los cultivos no se contaminaran. +a obtencin de un cultivo puro, a partir de una poblacin mixta, se lleva a cabo en dos etapasINTRODUCCION . +a mues muestr tra a debe debe dise disemi mina nars rse e de +os cultivos axénicos son muy extraños manera tal que los diferentes en la naturaleza. En los medios microorganismos queden lo nat natural urales es como como por por eem eempl plo, o, en el sufi sufici cient entem emen ente te sepa separa rado dos s sobre sobre la suel suelo, o, agua, agua, o en el cuerp cuerpo o &uma &umano no super uperfficie icie de un medi medio o de cult cultiv ivo o exis existe ten n culti ultiv vos mixto ixtos, s, en esto estos s sli slido do,, de mane manera ra que que lueg luego o de la existen existen muc&as muc&as y diferentes diferentes especies incu incuba bac cin in ello ellos s form formen en colon olonia ias s de forma conunt unta. )i queremos visibles aisladas. Este proceso se conoce como estudiarlos, caracterizarlos e aislamiento. En esta placa tendremos identi identific ficarl arlos, os, necesi necesitam tamos os tenerlo tenerlos s diferentes tipos de colonias como cultivos puros. *+,corr corres espo pond ndie ient ntes es a los los dife difere rent ntes es Un cult cultiv ivo o puro puro es aque aquell en el que que micr microo oorg rgan anis ismo mos s pres presen ente tes s en la todos los microorgani microorganismos smos provienen provienen poblacin original. de una sola célula. #. +uego de tener las colonias aisladas, éstas debe eben transferirse con el
filamento a un tubo que contenga agar nutritivo estéril para cultivar esa colonia aislada/ este procedimiento se conoce como trasplante. "ara garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia aislada, repetir el proceso de aislamiento antes descrito. )e considerará que se &a obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este proceso, todas las colonias obtenidas presenten las mismas caracter!sticas. El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento dependerá, entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la presencia de microorganismos que, por sus caracter!sticas y0o por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtencin del microorganismo en obeto de aislamiento. En este último caso, se deben utilizar medios de enriquecimiento y medios selectivos que in&iban el desarrollo de gérmenes contaminantes. *.,+a temperatura y otras condiciones de incubacin, variarán según los microorganismos, usualmente la temperatura ptima de los microorganismos patgenos para el &ombre oscila entre '1 y *123. 3uando el microorganismo que se intenta aislar es anaerbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin de eliminar la presencia de ox!geno en el ambiente donde se desarrollará el mismo. 4asándose en el origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles microorganismos que se encuentran presentes en la misma, y ese conocimiento ayudará en la seleccin del medio y las condiciones de cultivo adecuadas. (3)
Objetivos •
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Obtener colonias de bacterias de un cultivo puro mediante la técnica de estriado. Entrenar a los estudiantes en técnicas de trabajo aséptico. Aprender a manipular adecuadamente microrganismos.
Metodología
En esta práctica de laboratorio se realizaron 3 siembras provenientes de cultivos bacterianos madre, 2 con un cultivo líquido ! con un cultivo s"lido. #ara ello se desin$ecto el área de trabajo con alco%ol se utilizaron guantes. #osteriormente a esto se encendi" el mec%ero. #ara la siembra de colonias provenientes del cultivo liquido madre se tomaron 2 cajas de #etri las &uale contenían un medio de cultivo en agar, en para realizar la siembra en estría se marc" una de las cajas de #etri por la parte de a$uera con una ' se dividi" en 3 sectores a, b c. (e tom" un asa, se esteriliz" al $uego se meti" el asa en del cultivo para e)traer una peque*a cantidad de este, la cual se pas" a esparcir en la zona a de caja de $orma %orizontal, luego en la zona b de $orma vertical por +ltimo en la zona en $orma de zigzag. En la otra siembra se us" #ara e)traer el cultivo este se esparci" %aciendo en 2 líneas en zigzag en una caja de #etri. #ara la siembra en estría del cultivo bacteriano madre solido se realiz" el mismo procedimiento realizado anteriormente para la siembra en estría del cultivo bacteriano madre líquido. 'odos estos procedimientos se realizaron
a pocos centímetros del mec%ero, !2cm apro). con el $in de crear un ambiente esterilizado para que el cultivo no se contaminara. &onclusiones •
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Imagen !" obtenci"n de cultivo proveniente de la muestra ambiente, s"lido.
En este e)perimento se logr" la realizaci"n de un cultivo de bacterias puro mediante la técnica de estriado, utilizando muestras en caldo muestras en estado s"lido. 'ambién se conclu" que se adquiri" la destreza para la realizaci"n de técnicas de trabajo aséptico. En esta práctica se aprendi" a manejar adecuadamente los microorganismos para asa obtener las muestras libres de contaminantes.
Imagen # 1: Resultados y análisis
#magen $ %& cultivo proveniente de la muestra
!uestra ambiente
muestra de los cultivos de donde Al dejar las muestras en la se iba a 'acer la incubadora y observarlas al día siembra siguiente, se pudo notar la presencia de colonias de bacterias aisladas para las muestras de medio líquido, en siembra por estría y siembra en zig-zag. . !uestra liquida de suelo agua
La identifcación bacteriana y la caracterización completa solo son posibles con el aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivos puros. Por ello el primer problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de los microorganismos presentes una muestra patológica, de agua, de
suelo, de alimentos, etc.". (na vez que se 'a logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de inter)s en cultivo puro. *l aislamiento se defne como la separación de un microorganismo del resto de microorganismo que le acompa+an. *l m)todo ms usado es la siembra por estrías sobre un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una caja de Petri /. 0ada colonia bacteriana que se obtiene de la siembra de un cultivo puro tiene unas características determinadas en cuanto a su 1orma, borde, elevación, tama+o, consistencia, etc. Los tipos de bacterias presentes en la muestra original son visibles como tipos di1erentes de colonias. A partir de colonias separadas sufcientemente es posible obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la muestra original. *l )2ito del aislamiento, de la separación sobre el medio de cultivo, depende de la superfcie sobre la que se 'a distribuido la muestra. *s muy importante realizar el mayor n3mero de estrías posible. *n las primeras estrías aparecern colonias con4uentes o una masa continua de microorganismos. *n las estrías fnales debern aparecer colonias separadas unas de otras. *l aislamiento requiere un reducido inóculo de partida. 5/ *l m)todo de siembra por estría de ambos medios mostro una buena distribución, di1erenciación y aislamiento de las colonias. *n ninguno de los casos se observó contaminación. *l crecimiento de microorganismos observados
los en
cada caja de Petri se debe al aumento o crecimiento e2plosivo de las bacterias, se produce un gran n3mero de ellas a partir de una 3nica c)lula inicial de 1orma que tras un periodo de incubación en las condiciones ambientales adecuadas se produce una colonia observable a simple vista y 1ormada por individuos iguales. *l desarrollo de la bacteria aislada que se d durante el proceso de incubación se denomina ciclo celular. 6urante este proceso tiene lugar la replicación del material gen)tico, la síntesis de componentes celulares, la elongación de la bacteria para alcanzar un tama+o doble del inicial y su división por bipartición para dar lugar a dos c)lulas 'ijas. La duración del ciclo celular coincide con el tiempo de generación y depende, en general, de los mismos 1actores de los que depende este. Por tanto, el crecimiento de una población resulta de la suma de los ciclos celulares de todos los individuos de dic'a población 7/. La sucesiva disminución del tama+o de la población sobre el asa por descarga sobre el medio de cultivo" al recorrer el medio de cultivo, debe asegurar que fnalmente algunas c)lulas queden sufcientemente separadas aisladas unas de otras" sobre la superfcie. *l aspecto de las colonias, su coloración, tama+o, etc. 8on criterios que se usan para di1erenciar bacterias, aunque son propiedades generales muy in4uenciadas por las condiciones de cultivo. Las colonias pueden ser opacas, translucidas o transparentes. Algunas producen pigmentos 4uorescentes cuando se
iluminan con luz ultravioleta, otras aparecen con superfcie pulverulenta, otras son lisas, o rugosas, o poseen anillos conc)ntricos. *n ocasiones el olor es tambi)n característico 9/.
3UE)(5678956
a U$te tie%e )% c)ltiv! l"/)i! 0i1t! ( e$ea !bte%er c)ltiv! 2)r!- 3C40! 2r!ceer"a5 "ara la separacin de un determinado microorganismo del resto de microorganismos que le acompañan, el método más usual es la siembra por estr!a sobre un medio de cultivo slido adecuado dispuesta en una placa de "etri. "ara ello se toma una pequeña cantidad de muestra con un asa de platino y se reparte sobre la superficie del medio de cultivo. )obre el medio quedan separadas e inmovilizadas las células bacterianas. (ras la incubacin en condiciones adecuadas, cada célula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas divisiones celulares. 3ada colonia bacteriana tiene unas caracter!sticas determinadas en cuanto a su forma, borde, elevacin, tamaño, consistencia, etc. 8 partir de colonias separadas suficientemente es posible obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de bacterias presentes en la muestra original.
b 36)7 e$ )%a c!l!%ia5
Una colonia es una agrupacin de bacterias formada a partir de la reproduccin de una Unidad :ormadora de 3olonia $U:3% sobre un medio slido/ aunque var!a de tamaño generalmente es visible a simple vista. +as colonias bacterianas tienen una medida, forma, textura y en algunos casos color caracter!sticos, que aunque puede variar de acuerdo al medio en que se encuentren, es constante bao condiciones controladas y depende de la especie bacteriana que la forme.
c 3A /)7 $e le e%!0i%a ce2a e% 0icr!bi!l!8"a5 )on microorganismos del tipo fenot!pico que representan una proporcin derivada de un organismo mayor, como una muestra de estudio. +as cepas contienen informacin biolgica que es de interés cient!fico. )on obtenidas por lo general a través del procedimiento de la clonacin.
36)7 e$ )%a ce2a 2)ra5 I%ve$ti8)e i%$tit)ci!%e$ /)e $e e%car8)e% e ve%erla$Una cepa pura es aquella que contiene un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola célula. "roveedores de cepa bacterianasEnviro "rocess 0 3ultibac6frecemos cepas bacterianas en ;acatecas •
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'1 3ol. 9oma 3.". <=11. >éxico. 3ientifica )ennacepas bacterianas en )ur éxico
e M!r'!l48ica0e%te9 3/)7 ti2!$ e c!l!%ia$ bacteria%a$ e1i$te%5 >orfolgicamente la colonia puede ser circular, puntiforme, irregular, rizoide, fusiforme. (ambién se pueden encontrar bordes enteros, ondulados, lobulados y filamentosos.
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36)7 i%'!r0aci4% 2r!2!rci!%a% el e$arr!ll! e bacteria$ e% 0ei!$ l"/)i!$ ( $e0i$4li!$5 El desarrollo de bacterias en estos medios puede brindarnos diferentes informaciones teniendo en cuenta la finalidad con el cual se &aga su preparacin, pero a nivel general la informacin que puede brindarnos el crecimiento de bacterias en estos medios la movilidad de las bacterias, al igual que las condiciones adecuadas del medio permiten la clonacin de las muestras es decir su rápido desarrollo.
#ibliog$a%ía
&ultivos puros 0onsultado :9;<=;:<>7/,. isponible en%ttps-es.scribd.comdoc!!/0/32!1 &ultivoa)enico. !' &ultivos puro de bacterias éase en%ttp-444.unavarra.esgenmicmicro gral'ema52//2.52/&ultivo52/de 52/microorganismos.pd$. 3' 6icrobiología, cultivos puros 0onsultado de:9;<=;:<>7/,.7ecuperado %ttp-tecnicasbacteriologicas.blogspot .com.co2/!8!/obtenciondeun cultivopuro.%tml. 4. ?btención de cultivo puro. 0onsultado :9;<=;:<>7/ *n línea/ 6isponible en& 'ttp&;;@@@.pomi1.com;pages;pra cticas;bacteriologia;aislamiento t'emeBpd1 &'
5. C)cnicas de cultivo. Aislamiento. ?btención de cultivos puros. 0onsultado :9;<=;:<>7/ *n línea/ 6isponible en& 'ttp&;;@@@.pomi1.com;pages;pra cticas;bacteriologia;aislamiento 6.
0ultivo de microorganismos. 0onsultado :9;<=;:<>7/ *n línea/ 6isponible en& 'ttp&;;@@@.unavarra.es;genmic; microgral;CemaD:<<:.D:<0ultivoD:
7. !icrobiología, Pelczar;Eeid;0'an, cuarta
edición, editorial !0.FEAG-H#LL, 0apituloI, Pg. >>9
