MATIAS NAVARRETE Biología Profesor Eduardo Cepeda III Medio – Electivo
UN MEDIO DE CULTIVO IDEAL Esterilizado Perfecto
III Medio – Electivo
Biología
Objetivo: Este proyecto lo he realizado para poder lograr distintos objetivos. Uno de ellos y el principal es el determinar el procedimiento más adecuado y efectivo al momento de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias. Otros objetivos, por el cual he realizado este experimento son: lograr una manipulacin adecuada al momento de manejar objetos esterilizados. !ambi"n aprender a mantener un ambiente limpio para trabajar el medio de cultivo y experimentar distintos procedimientos para cultivar bacterias.
Introducción: “Las bacterias son microorganismos constituidos por una sola célula. Es seguro que nadie las ve, las huele o las siente pero están escondidas en todos lados” 1.
En la cita anterior nos podemos dar cuenta de #ue las bacterias son c"lulas invisibles y peligrosas al mismo tiempo. Existen diferentes m"todos con los cuales podemos ver y darnos cuenta de #u" bacterias son las #ue nos rodean. Uno de los m"todos es el cultivo de bacterias. !enemos una variedad de medios de cultivo en donde las podemos cultivar. Una forma casera es hacer una mezcla entre caldo $aggie y gelatina, la cual no fue eficiente, ya #ue se contaminaba el medio de cultivo. Otros medios de cultivo se pueden hacer con reactivos #u%micos como el medio &uria'(ertani )&(* o el medio !errific (roth )!(*. +demás de necesitar un medio de cultivo ideal, las bacterias necesitan caracter%sticas adecuadas para poder desarrollarse. Una de ellas es el ambiente, ya #ue las bacterias con cierta temperatura se desarrollan con mayor facilidad . Existe una variedad de medios #ue sirven para el cultivo de bacterias, y por ese mismo motivo es #ue tuve #ue investigar y encontrar el más adecuado para mi proyecto. El medio de cultivo #ue escog% es el medio &uria'(ertani )&(*, #ue seg-n lo investigado es una sustancia ideal para el cultivo de cepas de E.coli .
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Matías Navarrete Colegio Santa Cruz
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&as cepas de E.coli compone el /0 1 de la flora intestinal, su funcin es de proteger a la flora intestinal de cual#uier bacteria patgena )causante de enfermedades* y participa en la produccin de vitamina 2. &a gran mayor%a de las cepas E.coli son inofensivas pero estas cepas tambi"n tienen algunas #ue pueden ser patgenas, las cuales pueden causar enfermedades en el hombre tales como, gastroenteritis infantil, entero agregativas, enterotoxig"nicas, patgenas extra intestinales, entre otras 3. Este tipo de patolog%as pueden ser transmitidas de muchas maneras tales como, la carne vacuna cruda o insuficientemente cocida, carne contaminada por contacto con materias fecales, frutas y verduras frescas lavadas con agua contaminada, zumos de fruta no pasteurizados, leche cruda y la más com-n y habitual es la de llevarse las manos sucias a la boca. 4ara realizar esta investigacin realic" tres procedimientos con el objetivo de poder lograr un ambiente de cultivo esterilizado. Ocupando diversas estrategias para mantener el lugar de trabajo en perfectas condiciones: limpio y desinfectado. Este informe detalla, analiza y explica los procedimientos usados para lograr los objetivos planteados. El cmo y por #u" se realizaron los cambios y distintos procedimientos para el logro de los objetivos.
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Procedimiento Experimental: 4ara #ue este experimento fuese efectuado de manera correcta, consider": • • • • • • • • • • • •
&a 5apsulas de 4etri Olla a presin 4eptona tr%psica de case%na Extracto de levadura 6a5l &( agar +lcohol 4araflin 4apel craft +gua oxigenada $atraz 7aso de precipitados
&os pasos a seguir son: •
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4ara comenzar tuve #ue tomar ciertas precauciones. 5omo este proyecto está enfocado en un ambiente esterilizado, siempre hay #ue mantener un ambiente limpio y desinfectado. 4ara poder lograrlo necesite alcohol junto con la toalla nova para limpiar la mesa en donde manipul" las cápsulas de 4etri ya esterilizadas. Un detalle muy importante #ue tuve #ue tener en cuenta, es #ue en la mesa de trabajo ten%a #ue haber un mechero, el cuál debe permanecer encendido en todo momento para evitar #ue se generen bacterias en el aire. 6unca olvid" lavarme las manos y siempre tuve la precaucin de no contaminármelas. En una primera accin tuve #ue usar delantal blanco, mesa de trabajo limpia y desinfectada con alcohol y manos esterilizadas. &uego prosegu% con la limpieza de las cápsulas de 4etri. En primer lugar las limpi" con agua y jabn para eliminar las mugres #ue podr%an tener. &uego, con la ayuda de un vaso precipitado con agua oxigenada, enjuague cada una de las placas, para as% eliminar cual#uier resto de suciedad. 5uando las cápsulas estaban limpias las puse en una bandeja con toalla nova y las dej" secar. 5uando ya estaban secas las envolv% todas juntas con papel craft y amarr" este papel con scotch. El tiempo es algo muy importante en este proyecto por ese mismo motivo tuve #ue aprovecharlo y organizarlo muy bien.
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$ientras #ue las cápsulas se estaban secando, empec" a trabajar en el medio de cultivo, para as% ganar tiempo. &a mezcla la realic" en el matraz. 5omo en mi proyecto #uiero hacer tres placas, necesit" 00ml de la mezcla. 5omenc" pesando cada reactivo, para luego ponerlos en el matraz. 6ecesitamos:
6a5l g 4eptona tr%psica de case%na Extracto de levadura 8g &( agar g
g
5uando cada reactivo ya estaba pesado y depositado en el matraz, proced% a colocar 00ml de agua oxigenada y revolv% hasta #ue todo se haya disuelto. 4ara terminar tap" el matraz con un pedazo de papel craft y lo asegur" con lana. •
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5uando tuve la mezcla y las cápsulas listas, las auto'clav". 4rimero colo#u" agua en una olla, pero muy poca, slo la necesaria para generar suficiente vapor. En el interior de la olla colo#u" un pote de plástico y sobre "l puse las placas envueltas en papel, esta forma las placas no tocaron el agua pero recibieron el vapor del agua. !ambi"n puse el matraz sobre el pote con la mezcla. Esto lo dej" por 0 minutos para #ue el auto' clavado fuese exitoso. &legu" al momento más importante, en donde no deb%a cometer ning-n error. 5uando ya pasaron los 0 minutos, proced% a sacar las capsulas y el medio de cultivo de la olla, teniendo siempre la precaucin de lo caliente #ue estaban todos los materiales. $uy importante fue #ue mis manos estuvieses siempre desinfectadas con alcohol. 4rosegu% sacando el papel craft #ue utilic" para envolver las cápsulas y colo#ue cada cápsula junto con el medio de cultivo #ue estaba en el matraz sobre la mesa previamente desinfectada y con el mechero prendido. Esper" a #ue todo se enfriara. 5uando las cápsulas y el matraz estaban a una temperatura manipulable, comenc" a colocar el medio de cultivo al interior de las cápsulas, directamente del matraz. &uego las tap" dejando un pe#ue9o espacio con el objetivo #ue saliera el vapor generado por la mezcla. ej" #ue las sustancias se solidificaran en ese mismo lugar. 5uando el medio de cultivo ya estaba solidificado, cerr" totalmente las placas. &uego us" parafix para sellar las placas. 5ort" tres pedazos de parafix y procede a cerrar las cápsulas. ;iempre tuve en cuenta tener mis bellas manos desinfectadas.
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Una vez #ue las placas estaban listas, las colo#u" en una incubadora a una temperatura de 0 grado. Esta es la temperatura ideal para el desarrollo de bacterias. Esper" 3 horas para observar las placas y ver los resultados.
Registro de Datos: 4rocedimiento 6ro. 8: '!emperatura ambiental: 0 grados aprox. Cápsulas
Control
In%ectada
In%ectada #
Día !emperatura "mbiental
Día # !emperatura "mbiental
;e pueden ver pe#ue9as manchas blancas #ue son bacterias, por la mitad y el contorno ;e ven muchas manchas blancas )bacterias* y tambi"n hongos.
Día $
&impio las placas eliminando el medio de cultivo, inicio un nuevo procedimiento &impio las placas eliminando el medio de cultivo, inicio un nuevo procedimiento &impio las placas eliminando el medio de cultivo, inicio un nuevo procedimiento
Observacin: 5omenc" mi experimento con el objetivo de comparar placas infectadas y placas totalmente esterilizadas, lo #ue no result y me llev a reenfocar mi proyecto, con el objetivo de lograr una esterilizacin perfecta.
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4rocedimiento 6ro. : '!emperatura +mbiental: 80 grados aprox. Cápsulas
Control 'Procedimiento normal(
Control # 'Procedimiento nuevo(
In%ectada
Día !emperatura "mbiental
6o se ve ninguna bacteria en la cápsula. Está limpia 6o se ven se9ales de bacterias en la cápsula
!ampoco se ven manchas lo #ue me lleva a pensar #ue hay otra variable influyendo
Día # !emperatura #& grados
Día $ !emperatura #& grados
=an salido entre > a ? manchas blancas por el entorno de la cápsula +l igual #ue el control 8 se ven manchas alrededor de la cápsula pero no en el centro ;e ven machas blancas y hongos por toda la cápsula en el centro y en el contorno de la capsula
&as manchas blancas se han esparcido en la placa y ya están en todos lados. !ambi"n ha aumentado la cantidad de manchas blancas y salen hongos =an aparecido manchas rojas y la cantidad de hongos y manchas blancas han aumentado
Observacin: En el d%a 8 las tres placas están completamente limpias, incluso la #ue estaba infectada, esto me llevo a deducir #ue la temperatura estaba influyendo en el crecimiento de bacteria por lo #ue tuve #ue poner las cápsulas en una incubadora. En el d%a se ven en el control 8 y manchas blancas en el contorno de la cápsula )teniendo en cuenta de #ue el control tiene un procedimiento distinto*. &o #ue me lleva a concluir #ue el procedimiento no es el errneo sino la manipulacin #ue le estoy dando.
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4rocedimiento 6ro. : '!emperatura ambiental: 80 grados aprox. Capsulas
Control
Control #
Control $
Día !emperatura #& grados
Día # !emperatura #& grados
6o se ven +pareci una manchas blancas, pe#ue9a mancha está limpio en al contorno de la cápsula +l igual #ue en el ;olo se ve una control 8 no hay pe#ue9a mancha bacterias pero en el centro de la cápsula 6o hay se9ales de +l igual #ue las bacterias ni de -ltimas dos hongos cápsulas solo hay una pe#ue9a manchas.
Observaciones: El experimento sale tal como lo esperaba, las placas no se contaminan y he encontrado el procedimiento, los pasos y las precauciones adecuadas para lograr una esterilizacin correcta .
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"nálisis:
En un principio, la primera idea #ue tuve para este proyecto fue comparar dos jabones, uno anti'bacterial y un jabn com-n y corriente. 4ara esto utilic" caldo $aggie y gelatina, para crear un medio de cultivo en donde pude cultivar las bacterias. @ealic" este procedimiento dos veces, los cuales no me resultaron, ya #ue el medio de cultivo no era el indicado, esto fue por#ue los materiales estaban contaminados y además por#ue la manipulacin #ue le estaba dando no era la indicada. Este error me llev a reenfocar mi proyecto, buscando un nuevo objetivo. eterminar el procedimiento más adecuado y efectivo al momento de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias. +s% comenc" a realizar un procedimiento nuevo, para el cual ocupe un nuevo m"todo de cultivo, llamado medio &uria'(ertani )&(* >. En el procedimiento nro. 8, utilic" tres distintas cápsulas: control 8, infectada 8 y infectada )v"ase en registro de datos*. El procedimiento normal constaba de colocar las placas y el medio de cultivo al interior de la olla a presin y auto' clavarlas, para luego sacarlas y colocarlas en una mesa desinfectada e introducir en cada cápsula el medio de cultivo para despu"s trabajarlas seg-n sus caracter%sticas. urante los tres d%as #ue las placas fueron evaluadas. El control 8, cápsula #ue no fue contaminada, se contamin. ;e pod%an ver bacterias tanto como en centro y en el contorno de la cápsula. En la infectada 8 y , las cápsulas se vieron más infectadas #ue el control 8. ;e ve%an hongos y bacterias por todos lados. 4ero esto no era el resultado #ue esperaba, sino #ue el control 8 estuviera completamente limpio. +l analizar el error #ue tuve en el procedimiento, me di cuenta #ue exist%an dos variables #ue pod%an estar influyendo en el resultado de este mismo. &a primera variable podr%a ser el procedimiento #ue utilic", tal vez no era el adecuado o no 3 ttp!""###$td7$cat")itstrea'"a%dle"1,8,-"18,3"$MATERIAL9METODOS$pdf: se5ue%ce;3
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estaba cumpliendo la funcin de auto'clavar. O simplemente la manipulacin #ue le di a las cápsulas no fue la adecuada, no tome las precauciones de limpieza, no me lave las manos o no desinfecte la mesa de una manera correcta. + consecuencia de esto, pens" en un nuevo procedimiento, con la esperanza de lograr mi objetivo, pero al mismo tiempo me enfo#u" en la segunda variable: la manipulacin de las placas. 4ara as% dar origen al procedimiento nro. , en donde utilic" tres placas: control 8 )procedimiento normal*, control )procedimiento nuevo*, infectada 8. El procedimiento #ue ocupe para el control , fue el de alterar los pasos del procedimiento 8. En el procedimiento nuevo colo#ue el medio de cultivo en el control y la colo#ue en el interior de la olla, para #ue al momento de sacarla al exterior no tuviera #ue abrirla y arriesgarme a #ue se contaminara. +l pasar un d%a y revisar cada placa, me di cuenta #ue, tanto como el control 8, control e incluso en la infectada 8, no exist%a ninguna se9al de bacterias. Esto me hizo reflexionar y empec" a analizar #ue pudo causar esto. 5ompare el procedimiento 8 con el procedimiento y descubr% #ue la -nica diferencia era el cambio de temperatura ambiental. En el procedimiento 8 la temperatura era de 0 grados aproximadamente y en el procedimiento la temperatura ambiental cambi a casi 80 grados aproximadamente. 5omo bien sabemos “las bacterias son microorganismos y estos se reproducen mejor y más rápido a temperaturas cerca de los ! grados y si la temperatura llega a disminuir el crecimiento también disminuye.” " Aracias a esta informacin, encontr" el por #u" las bacterias no se desarrollaban, lo #ue me llev a poner cada cápsula en una incubadora, en donde el ambiente se mantendr%a a una temperatura de 0 grados aproximadamente. +l pasar el d%a al interior de la incubadora y ver los resultados, encontr" #ue en la placa infectada 8, las bater%as hab%an crecido notablemente. Esto me llevo a confirmar #ue la temperatura si fue un factor #ue impidi el crecimiento. 4or otro lado, en los controles 8 y , si se encontraron bacterias, pero en esta ocasin eran menos #ue en el procedimiento 8. !anto en el control 8 y la poca cantidad de bacterias )entre > a ?*, solo se encontraban por alrededor y no en el centro de la cápsula. ;i nos enfocamos en el control 8 del procedimiento )procedimiento normal*, solo se encontraron bacterias en el contorno de la placa. ;i analizamos el control del procedimiento )procedimiento nuevo*, las bacterias al igual #ue el control 8 solo se encontraron en el contorno de la placa. ;i analizamos este resultado, podemos darnos cuenta #ue tanto el procedimiento normal y el nuevo, son eficientes y #ue la variable #ue dec%a: Bel procedimiento #ue utilic" no es el adecuadoC, es 6 ttp!""###$profesore%li%ea$cl"Cie%cias"&acteriasDesarrollo$t'
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incorrecta. 4ero si analizamos bien los lugares en donde las bacterias se desarrollaron, podemos ver #ue solo fueron en el contorno de la cápsula y #ue el centro está completamente limpio. ;i volvemos a analizar la segunda variable, Bla manipulacin #ue se le da a las placas no es la adecuadaC y lo relacionamos con el actual resultado, podemos llegar a inferir y confirmar #ue esto es cierto, debido a #ue como ya reiter" en el control 8 y del procedimiento , las bacterias se encuentran en el contorno, sea #ue esa bacteria ingreso por la orilla o los pe#ue9os espacios #ue #uedan al tapar la cápsula, por un tema de manipulacin poco higi"nica. Esto me lleva a replantearme y crear un tercer procedimiento, el procedimiento nro. , en donde utilic" cápsulas, control 8, control y control , todas con el protocolo normal, para as% poder obtener un resultado más exacto. espu"s de analizar cada error #ue encontramos en los resultados del procedimiento 8 y , comenz" che#ueando la temperatura ambiental y en el momento #ue hice el procedimiento era de 80 grados aproximadamente por lo #ue tuve #ue colocar las cápsulas en la incubadora. +demás tuve extrema precaucin con mis manos y con todo lo #ue rodeaba a la cápsula para as% no contaminarlas. +l ver las placas el d%a 8 pude notar #ue tanto en el control 8, y no hab%a se9al de bacterias, pero para poder tener un resultado más exacto espere un d%a más. +l segundo d%a, en cada placa se ve%a un pe#ue9o punto blanco en el contorno de la cápsula, pero en general estaba muy limpia, a pesar de esa pe#ue9a bacteria, todo lo demás estaba libre de contaminacin. Dinalmente el objetivo lo hab%a logrado, encontr" el procedimiento correcto y la forma correcta de manipular cada placa, logrando un resultado perfecto para poder as% tener un ambiente totalmente esterilizado.
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Conclusión: + pesar de todo lo experimentado, los errores y los logros, pude llegar a mi objetivo principal, el cual era determinar el procedimiento más adecuado y efectivo al momento de crear un ambiente esterilizado para cultivar bacterias. 6o fue fácil encontrar el procedimiento, además de tener #ue pasar por una ardua investigacin e invertir tiempo experimentando, tambi"n tuve #ue relacionar y entender distintos factores #ue pudieran estar influenciando mis resultados, tales como la temperatura, los materiales a usar y la higiene. En este proyecto no fue fácil llegar al camino correcto, ya #ue tuve #ue hacer varias investigaciones. $uchas veces uno descubre cosas por ensayo y error y gracias a ellos uno puede corregir lo #ue hizo, para as% lograr el objetivo propuesto con "xito. $e cuesta creer #ue en un comienzo el objetivo de mi proyecto era totalmente distinto al actual y con el transcurso de los resultados y errores, este objetivo se modific. Aracias a esto aprend% una variedad de cosas, ahora s" cmo lograr una manipulacin adecuada frente a objetos esterilizados, s" #ue precauciones hay #ue tomar y lo precavido #ue hay #ue ser. +demás aprend% cmo mantener un ambiente desinfectado y #ue hay cosas tan simples como el fuego y el alcohol #ue pueden mantener un ambiente limpio e higi"nico. !ambi"n pude experimentar con distintos reactivos #u%micos. +prend% de diferentes medios como el medio &uria' (ertani )&(* o el medio !errific (roth )!(* y además pude conocer diferentes procesos de esterilizacin y diferentes procedimientos #ue me llevaron a encontrar el adecuado para mi objetivo. 4rincipalmente mi proyecto estaba enfocado en las bacterias, por lo cual tuve #ue investigar sobre ellas. En un principio no conoc%a lo #ue eran las cepas E.coli, y gracias a todo lo #ue investigu", ahora conozco con claridad lo #ue son. 4ero no simplemente aprend% informacin de conceptos o definiciones, sino #ue tambi"n gan" la experiencia de cultivar la perseverancia frente a un objetivo. Estuve cerca de dos meses en este proyecto, casi durmiendo en el laboratorio, estando ah% todas las ma9anas, incluso postergando mis recreos.
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5ada vez #ue pienso o veo a doctores operando pienso en el trabajo #ue deben realizar para mantener un ambiente limpio. eben tener todas sus manos desinfectadas e incluso el ambiente y sus materiales. !al vez yo no me podr%a llegar a comparar con ellos, pero ahora entiendo y comprendo lo complicado #ue debe ser lograr un ambiente esterilizado, relacionándolo con lo complejo #ue fue mantener mi mesa e implementos desinfectados. ;eguramente mis compa9eros y otras personas, #ue están en los demás electivos, no entienden cmo puedo estar en biolog%a. $uchas veces se preguntan el por #u" elegir el electivo más dif%cil, hasta yo mismo he dudado en cambiarme. 4ero siempre reflexiono #ue cuando algo es fácil de hacer y no me toma mucho trabajo realizarlo, yo no aprendo realmente y no le tomo el real valor #ue deber%a. + veces observo #ue si algo es dif%cil y cuesta llegar a tu objetivo, muchas personas se pierde en el camino, pero siempre están los #ue perseveran y lo logran. +l final del camino uno se da cuenta de todo lo aprendido y toda la experiencia ganada, la cual va a formar una parte muy importante en los distintos proyectos de mi vida. 5omo ya reiter" este proyecto no fue fácil, tuve #ue pasar por muchos desaf%os, invert% mucho tiempo en "l, pero al final de todo me siento contento con el resultado. Aracias al profesor de ciencias, aprend% muchas cosas tericas pero lo más importante es #ue me motiv a conocer y valorar la perseverancia, el cmo organizar mi tiempo, agradecer los desaf%os y me mostr la disponibilidad y voluntad #ue tiene "l para acompa9arnos en nuestros aprendizajes. Este trabajo tambi"n me ha hecho reflexionar sobre mi vocacin, estaba muy motivado con la informática, la ar#uitectura, la mecánica y ahora gracias a este proyecto la biolog%a es parte tambi"n de mis futuras in#uietudes vocacionales. Estoy muy confundido. Aracias profe.
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