[PRÁCTICA NO. 3] 3]
8 de obtubre del 2013
UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA LABORATORIO DE BIOQUÍMICA METABÓLICA Práctica No. 3: Actividad de la succinato deshidrogenasa. Resultados:
Al tubo al que se le añadió ácido tricloroacético (destructor de la enzima) no se observó ningún cambio de coloración. Por otro lado, en el tubo en el que no se añadió el destructor de la enzima, se observó una decoloración del azul de metileno. El azul de metileno puede actuar como indicador porque funcione como un aceptor de protones; por esta razón se reduce y se empieza a decolorar, indicando que se está formando el fumarato, que es el producto de la acción de la succinato deshidrogenasa. Este cambio puede ser explicado mediante la siguiente reacción:
Figura 1. Se puede apreciar el tubo control (izquierda), el cual no presenta decoloración, ya que la succinato deshidrogenasa fue desactivada por el ácido tricloroacetico. Por otra parte está el tubo experimental (derecha), el cual presenta una u na decoloración decolo ración del d el azul de metileno, metilen o, a causa c ausa de la acción de la succinato deshidrogenasa, de shidrogenasa, la cual cataliza la reacción donde el succinato pasa a formar fumarato.
Guillermo Gabriel Garduño González
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[PRÁCTICA NO. 3]
8 de obtubre del 2013
Discusión de los resultados:
La acción de la succinato deshidrogenasa se pudo apreciar comparando con el tubo donde la enzima fue destruida. Esta acción se ve en presencia de un indicador (azul de metileno), el cual en este caso funciona como un aceptor de protones; cuando acepta los protones, el indicador se reduce y por consiguiente se decolora, dando evidencia de que se está formando el fumarato, producto final de la reacción que cataliza la enzima succinato deshidrogenasa, transformando al succinato en furmarato. Esta reacción es una de las tantas que se da durante el ciclo del ácido cítrico; es de gran importancia, ya que no sólo se da el fumarato como producto de la reacción, sino que también se produce NADH+H, que posteriormente entrará a la cadena transportadora de electrones para dar lugar a la formación de ATP. Conclusiones:
Con la realización de la práctica se pudo determinar cómo es que actúa una de las enzimas que participan en las reacciones del ciclo de Krebs; teniéndose un buen resultado, la formación del producto donde la enzima estaba activa y la no formación del producto donde la enzima fue destruida con el ácido tricloroacético. Cuestionario: 1. ¿Por qué se utiliza músculo como material biológico de experimentación?
El músculo contiene la enzima succinato deshidrogenasa, ya que en las células del músculo se lleva a cabo el ciclo de Krebs, en este ciclo participa la enzima que se estudió. 2.
Nombra las enzimas del ciclo de Krebs e indica el tipo de reacción que cataliza cada una. Indica, ¿cuáles actúan como óxido-reductasas y cuál es su cofactor?
Citrato sintasa Aconitasa Isocitrato deshidrogenasa (óxido reductasa) Alfa-cetoglutarato deshidrogenasa (óxido-reductasa) SuccinilCoA sintetasa Succinato deshidrogenasa (óxido reductasa) Fumarasa o fumarato hidratasa Malato deshidrogenasa (óxido-reductasa) 3.
En la reacción en la cual la succinilCoA es convertida a succinato una molécula de GTP es producida. Es sabido que la producción de GTP es equivalente a la de ATP. Cómo puedes explicar esto considerando los siguientes cambios de reacción. GTP + ADP = GDP + ATP
Referencias: • Horton, H. R. (2008). “Principios de bioquímica”. Capítulo 13: El ciclo del ácido cítrico. 4ta edición. •
Editorial Pearson. México. Pág. 401. CICLO DE KREBS, Material elaborado por: J. Monza, S. Doldán y S. Signorelli, http://www.fagro.edu.uy/~bioquimica/docencia/material%20nivelacion/CICLO%20DE%20KREBS.pdf
Guillermo Gabriel Garduño González
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