Nombre: Héctor Roblero González Materia: Microbiología Grado:: 3° grupo: “B” Grado
M/$R0B/010G ro!e"or: #icente Morale" $arba%al
&ema: &odo lo" tema" del "eme"tre'
(ec)a: *+,-.,.*-.
/ndice arcial Bacteria" 1e4adura" Hongo" arcial . Micro"copía rueba" bio5uímica" &inci6n de Gram Medio de culti4o arcial 3 Recuento en placa 7o"olucione"
Glo"ario
arcial -
“&ema: “&ema: B$&8R/9” B$&8R/ 9”
Hi"toria de la bacteriología La existencia de microorganismos microorganismos fue conjeturada a nales de la Edad Media. En el Canon de medicina (1020), A! Al" in #"n$ (A%icenna) (A%icenna) &lanteaa 'ue las secreciones cor&orales estaan contaminadas &or multitud de cuer&os extraos infecciosos antes de 'ue una &ersona caera enferma, &ero no lleg* a identicar a estos cuer&os como la &rimera causa de las enfermedades. enfermedades. Cuando la &este negra (&este u*nica) alcan+* alcan+* al-ndalus en el siglo /, /n atima e /n al3ati al 3ati escriieron 'ue las enfermedades infecciosas eran causadas &or entidades contagiosas 'ue &enetraan en el cuer&o umano.4 5 Estas ideas sore el contagio como causa de algunas enfermedades se %ol%i* mu &o&ular durante el 6enacimiento, 6enacimiento, sore todo a tra%7s de los escritos de 8irolamo 9racastoro.10 Las &rimeras acterias fueron oser%adas &or Anton %an Leeu:enoe; en 1<4= usando un microsco&io de lente sim&le diseado &or 7l mismo.11 mismo.11 /nicialmente las denomin* animal>culos animal>culos &ulic* sus oser%aciones en una serie de cartas 'ue en%i* a la 6oal #ociet.12 1= 1? El nomre de acteria fue introducido m@s tarde, en 1424, &or Erenerg. eri%a del griego BDFGHIJ , acterion a, 'ue signica ast*n &e'ueo. Louis Kasteur demostr* en 145 'ue los &rocesos de fermentaci*n eran causados &or el crecimiento de microorganismos, microorganismos, 'ue dico crecimiento no era deido a la generaci*n es&ont@nea, como se su&on>a asta entonces. (i las le%aduras, ni los moos, ni los ongos, organismos normalmente asociados a estos &rocesos de fermentaci*n, fermentaci*n, son acterias). Kasteur, al igual 'ue su contem&or@neo colega 6oert oc, fue uno de los &rimeros defensores de la teor>a germinal de las enfermedades infecciosas.1< 6oert oc fue &ionero en la microiolog>a m7dica, traajando con diferentes enfermedades infecciosas, como el c*lera, el @ntrax la tuerculosis. oc logr* &roar la teor>a germinal de las enfermedades enfermedades infecciosas tras sus in%estigaciones en tuerculosis, siendo &or ello galardonado con el &remio oel en Medicina 9isiolog>a, en el ao 150.1N Estaleci* lo 'ue se a denominado desde entonces los &ostulados de oc, oc, mediante los cuales se estandari+aan una serie de criterios ex&erimentales ex&erimentales &ara demostrar si un organismo era o no el causante de una determinada enfermedad. enfermedad. Estos &ostulados se siguen utili+ando o en d>a.14
Aun'ue a nales del siglo / a se sa>a 'ue las acterias eran causa de multitud de enfermedades, no exist>an tratamientos antiacterianos &ara comatirlas.15 9ue a en 1510 cuando Kaul Erlic desarroll* el &rimer antii*tico, &or medio de unos colorantes ca&aces de teir matar selecti%amente a las es&iro'uetas de la es&ecie Ore&onema &allidum, la acteria causante de la s>lis. Pn gran a%ance en el estudio de las acterias fue el descurimiento reali+ado reali+ado &or Carl Qoese en 15NN, de 'ue las ar'ueas &resentan una l>nea e%oluti%a diferente a la de las acterias.22 Esta nue%a taxonom>a logen7tica logen7tica se asaa en la secuenciaci*n del A6 rios*mico 1<# di%id>a a los &rocariotas en dos gru&os e%oluti%os diferentes, en un sistema de tres dominiosR Ar'uea, Sacteria Eu;ara. #e recomienda leer Ca+adores de microios &ara informaci*n m@s extensa.
;ué "on la" bacteria"< Las acterias son organismos unicelulares de di%ersas formas. Kueden tener di%ersas caracter>sticas segTn sean de animales o %egetales. Oienen estructuras &oco com&lejas son c7lulas &rocariotas, es decir, s*lo tienen un cromosoma no tienen memrana celular. celular. Las acterias son los organismos m@s aundantes de la Oierra, encontr@ndose en todas &artes, son de %ital im&ortancia &ara la naturale+a el omre.
$6mo "on la" bacteria"< Kueden lle%ar Uagelos, 'ue son *rganos de locomoci*n, sus formas &ueden ser %ariadas. Las de formas esf7ricas se denominan cocos, las de astoncillos se denominan acilos las de forma es&iral se llaman es&irilos. En el caso de las acterias cocos, &uede aer di&lococos (en gru&os de dos), tetracocos (en gru&os de cuatro), estre&tococos (en cadenas) estalococos (en agru&aciones irregulares irregulares o racimos). Las acterias es&irilos &ueden clasicarse en %irios (un &oco cur%ados en forma de coma), es&irilos (forma elicoidal r>gida o tirau+*n) es&iro'uetas (tirau+*n o elicoidal Uexile). Vtras acterias &ueden tener formas cTicas o tetra7dricas. Las formas &ueden determinar la ca&acidad de la acteria de otener nutrientes, unirse a otras estructuras o mo%erse &or est>mulos.
8n donde "e encuentran e"ta" bacteria"<
Las acterias son los organismos m@s aundantes del &laneta. #on uicuas, se encuentran en todos los @itats terrestres acu@ticosW crecen asta en los m@s extremos como en los manantiales de aguas calientes @cidas, en desecos radioacti%os, en las &rofundidades tanto del mar como de la corte+a terrestre. Algunas acterias &ueden incluso sore%i%ir en las condiciones extremas del es&acio exterior. #e estima 'ue se &ueden encontrar en torno a ?0 millones de c7lulas acterianas en un gramo de tierra un mill*n de c7lulas acterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula 'ue a a&roximadamente X10=0 acterias en el mundo. En el cuer&o umano a a&roximadamente a&roximadamente die+ %eces tantas c7lulas acterianas como c7lulas umanas, con una gran cantidad de acterias en la &iel en el tracto digesti%o.
Y9on buena" o mala"< e&endiendo el ti&o de acteria el funcionamiento &uede o no ser daino &ara los seres %i%os &or ejem&loR Bene=cio
Como se dijo anteriormente las acterias se &ueden encontrar en la Uora intestinal de gran &arte de los animales del omre, siendo esenciales &ara un uen funcionamiento interno. El &a&el de las acterias no &at*genas es fundamental. /nter%ienen en el ciclo del nitr*geno del carono, as> como en los metaolismos del a+ufre, del f*sforo del ierro. Las acterias de los suelos del las aguas son indis&ensales &ara el e'uilirio iol*gico. Kor Tltimo, las acterias &ueden ser utili+adas en las industrias alimenticias 'u>micasR inter%ienen en la s>ntesis de %itaminas de antii*ticos. Las acterias tienen, &or lo tanto, un &a&el fundamental en los fen*menos de la %ida, todas las @reas de la iolog>a an &odido ser mejor com&rendidas gracias a su estudio. Male=cio >7a?o"@
Vtras acterias son &ar@sitos 'ue &ueden ser &at*genos o inofensi%os. En el caso de los &at*genos, su &eligrosidad de&ende del estado de la colonia formada. En estado liso &ueden ser m@s %irulentas 'ue en estado rugoso. Mientras m@s %irulentas sean, son menores los nTmeros necesarios &ara &ro%ocar enfermedades.
Zemos %isto el inter7s de su estudio &ara la com&rensi*n com&rensi*n de la siol*gica celular, de la s>ntesis de &rote>nas de la gen7tica. Aun'ue las acterias &at*genas &arecen ser las m@s &reocu&antes, su im&ortancia en la naturale+a es ciertamente menor.
8"tructura de una bacteria' Las acterias son organismos relati%amente relati%amente sencillos. #us dimensiones son mu reducidas, unos 2 [m de anco &or N4 [m de longitud en la forma cil>ndrica (acilo) de tamao medioW aun'ue son mu frecuentes las es&ecies de 0,1, [m. Carecen de un nTcleo delimitado &or una memrana aun'ue &resentan un nucleoide, una estructura elemental 'ue contiene una gran mol7cula circular de A. El cito&lasma carece de org@nulos delimitados &or memranas de las formaciones &roto&lasm@ticas &roto&lasm@ticas &ro&ias de las c7lulas eucariotas. En el cito&lasma se &ueden a&reciar &l@smidos, &e'ueas mol7culas circulares de A 'ue coexisten con el nucleoide, contienen genes son comTnmente comTnmente usados &or las acterias en la conjugaci*n. El cito&lasma tami7n contiene %acuolas (gr@nulos 'ue contienen sustancias de reser%a) riosomas (utili+ados en la s>ntesis de &rote>nas). Pna memrana cito&lasm@tica com&uesta de l>&idos rodea el cito&lasma , al igual 'ue las c7lulas de las &lantas, la maor>a &osee una &ared celular, 'ue en este caso est@ com&uesta &or &e&tidoglicano &e&tidoglicano (mure>na). Algunas acterias, adem@s, &resentan una segunda memrana li&>dica (memrana externa) rodeando a la &ared celular. El es&acio com&rendido entre la memrana cito&lasm@tica la &ared celular (o la memrana externa si esta existe) se denomina es&acio &eri&l@smico. Algunas Algunas acterias &resentan una c@&sula otras son ca&aces de desarrollarse desarrollarse como endos&oras, estados latentes ca&aces de resistir condiciones extremas. Entre las formaciones formaciones exteriores &ro&ias de la c7lula acteriana destacan los Uagelos los &ili.
Estructura de la c7lula acteriana. KiliW B6iosomasW $C@&sulaW 7Kared celularW 89lageloW (Cito&lasmaW GacuolaA HKl@smidoW /ucleoideW Memrana cito&lasm@tica. cito&lasm@tica.
(uncione" de la" parte" p arte" de una bacteria: ared $elular
#e &one de maniesto con la tinci6n de GramR Oinci*n desarrollada Oinci*n desarrollada &or Zans Cristian 8ram (14=15=4). (14=15=4). Kermite Kermi te di%idir a las acterias en dos grandes gru&osR Grampo"iti4o" C Gramnegati4o" Es una estructura com&leja fundamental &ara la acteria formada &or&e&tidoglicanos &or&e&tidoglic anos (mure>na o gluco&e&tido gluco&e&tido), ), cuo com&onentes @sicos sonR El acetilglucosamina acetilglucosamina (A8) El acetilmur@mico (AM). Pn tetra&e&tidoR Com&uesto &or aminoacidos 'ue se alternan en sus conguraciones L . e estos aminoacidos, el glutamato, alanina el acido mesodiamino&imelico mesodiamino&imelico no se encuentran en otra &roteina conocida. El peptidoglicano re&resenta el 20 \ de la com&osicion de la &ared de las acterias 8ramnegati%as el 50 \ en las 8ram&ositi%as.
Com&onentes del Ke&tid Ke&tidoglicano oglicano #u es&esor %aria segun se trate de acterias gram&ositi%as o gramnegati%asR En las acterias gram&ositi%as es una ca&a s*lida de 0100 moleculas de &e&tidoglicanos En las acterias gramnegati%as tiene un es&esor de solo una o dos moleculas. Kor su rigidez le da su !orma peculiar a la acteria La protege de los camios de la &resion osm*tica del medio 'ue la rodea. Es el lugar donde se locali+an numerosos numerosos determinante" antigénico" 'ue &ermiten diferenciar diferenciar a las acterias entre si. La endotoDina de algunos gru&os tamien se encuentra a'u>. La &ared celular se constitue (se ]farica]) mediante una serie de eta&as en+imaticas en las 'ue &artici&an al menos =0 en+imas.
Es el sustrato donde actuan antimicroianos como los eta lact@micos. Kartici&a en la di%ision celular.
M8MBRN $/&019M&/$ $/&019M&/$
Esta formada &or fosfoli&idos &roteinas, a diferencia diferencia de las eucariotas, no contiene esteroles (exce&to el mco&lasma).
Las en+imas del trans&orte electronico se encuentran a'u> (&roduce energia). Com&onentes Com&onentes de la ca&sula la &ared celular son sinteti+ados a'u>. Es una arrera osm*tica, selecti%a acti%aR ActTa como arrera osm*tica &ara la c7lula. Contiene sistemas de trans&orte &ara los solutos regula el trans&orte de &roductos celulares acia el exterior. Las acterias gramnegati%as tienen dos memranasR una interna otra externa, mientras 'ue las gram&ositi%as, solo &oseen una memrana (interna). Es sitio de acci*n de detergentes antii*ticos &oli&e&t>dicos &oli&e&t>dicos como la &olimixina (Kor ejem&loR colistin). o o
$/&019M
9ormado 9ormado 4 \ &or agua. Contiene los riosomas el cromosoma acteriano. R/B090M9
Com&uestos &or A6 riosomico. #u im&ortancia radica en ser el sitio de accion de numerosos antiioticosR Aminoglucosidos, tetraciclinas, cloranfenicol, macrolidos macrolidos lincosamidas. NE$180/78 0 $R0M090M B$&8R/N0
Llamado tamien e'ui%alente nuclear. o &osee memrana nuclear (de alli el termino nucleoide). nucleoide). Esta formado &or un unico lamento de A a&elotonado (su&erenrollado). (su&erenrollado). Conere sus &eculiaridades geneticas a la acteria. 6egula la sintesis &roteica. $9E1
Estructura &olisacarida de en%oltura. 9actor de %irulencia de la acteria. Krotege a la acteria de la fagocitosis facilita la in%asion. Kermite la diferenciacion diferenciacion en ti&os serologicos. (1G8109
Estructuras &roteicas, de maor longitud 'ue los &ili. e estructura elicoidal locomotores (res&onsales de la motilidad acteriana). #egTn la &osicion de los Uagelos tenemos tenemos acteriasR MonotricasR un Uagelo en un extremo o amos.LogotricasR %arios Uagelos en un extremo o amos. KeritricasR Uagelos en toda la su&ercie.
Sacteria sus Uagelos (/MBR/9 0 /1/
#on estructuras cortas &arecidas a &elos. isiles solo al Microsco&io Electronico. Electronico. Carentes de motilidad. Los &oseen fundamentalmente fundamentalmente las 8ramnegati%as. /nter%ienen en la aderencia de las acterias al ues&ed. 9acilitan el intercamio de A durante la conjucion acteriana. Oiene ca&acidad antigenica.
$6mo "e reproducen< En las acterias, el aumento en el tamao de las c7lulas (crecimiento) (crecimiento) la re&roducci*n re&roducci*n &or di%isi*n celular est@n >ntimamente ligados, como en la maor &arte de los organismos unicelulares. unicelulares. Las acterias crecen asta un tamao jo des&u7s se re&roducen re&roducen &or si*n inaria, una forma de re&roducci*n asexual.102 En condiciones a&ro&iadas, una acteria 8ram&ositi%a &uede di%idirse cada 20^=0 minutos una 8ramnegati%a cada 1^20 minutos, en alrededor de 1< oras su nTmero &uede ascender a unos .000 millones (a&roximadamente el nTmero de &ersonas 'ue aitan la Oierra). Sajo condiciones *&timas, algunas acterias &ueden crecer di%idirse mu r@&ido, tanto como cada 5,4 minutos.10= En la di%isi*n celular se &roducen dos c7lulas ijas id7nticas. Algunas acterias, toda%>a re&roduci7ndose re&roduci7ndose asexualmente, forman estructuras re&roducti%as m@s com&lejas 'ue facilitan la dis&ersi*n de las c7lulas ijas reci7n formadas. Ejem&los incluen la formaci*n de cuer&os fruct>feros (es&orangios) en las mixoacterias, la formaci*n de ifas en
#tre&tomces la gemaci*n. En la gemaci*n una c7lula forma una &rotuerancia 'ue a continuaci*n continuaci*n se se&ara &roduce una nue%a c7lula ija. Kor otro lado, cae destacar un ti&o de re&roducci*n re&roducci*n sexual en acterias, denominada &arasexualidad &arasexualidad acteriana. En este caso, las acterias son ca&aces de intercamiar material gen7tico en un &roceso conocido como conjugaci*n acteriana. acteriana. urante el &roceso una acteria donante una acteria rece&tora lle%an a cao un contacto mediante &elos sexuales uecos o &ili, a tra%7s de los cuales se transere una &e'uea cantidad cantidad de A inde&endiente o &l@smido conjugati%o. conjugati%o. El mejor conocido es el &l@smido 9 de E. coli, 'ue adem@s &uede integrarse en el cromosoma acteriano. acteriano. En este caso recie el nomre de e&isoma, en la transferencia arrastra &arte del cromosoma acteriano. acteriano. #e re'uiere 'ue exista s>ntesis de A &ara 'ue se &rodu+ca la conjugaci*n. La re&licaci*n se reali+a al mismo tiem&o 'ue la transferencia.
YC*mo es su crecimiento_ Las acterias necesitan de un a&orte energ7tico &ara desarollarse. ` #e distinguen distintos ti&os nutricionales segTn la fuente de energ>a utili+adaR las acterias 'ue utili+an la lu+ son fot*trofas las 'ue utili+an los &rocesos de oxirreducci*n oxirreducci*n son 'uimi*trofas. 'uimi*trofas. Las acterias &ueden utili+ar un sustrato mineral (lit*trofas) u org@nico (organ*trofas). Las acterias &at*genas 'ue %i%en a ex&ensas de la materia org@nica son 'uimioorgan*trofas. 'uimioorgan*trofas. ` La energ>a en un sustrato org@nico es lierada en la oxidaci*n oxidaci*n del mismo mediante sucesi%as desidrogenaciones. desidrogenaciones. El ace&tor nal del idr*geno &uede ser el ox>genoR se trata entonces de una res&iraci*n. Cuando el ace&tor de idr*geno es una sustancia org@nica (fermentaci*n) o una sustancia inorg@nica, inorg@nica, estamos frente a una anaeroiosis. anaeroiosis. ` Adem@s de los elementos indis&ensales &ara la s>ntesis de sus constituentes de una fuente de energ>a, ciertas acterias &recisan de unas sustancias es&ec>casR los factores de crecimiento. #on 7stos unos elementos indis&ensales &ara el crecimiento de un organismo inca&a+ de lle%ar a cao su s>ntesis. Las acterias 'ue &recisan de factores de crecimiento se llaman ]aut*trofas]. Las 'ue &ueden sinteti+ar todos sus metaolitos se llaman ]&rot*trofas]. ]&rot*trofas]. Ciertos factores son es&ec>cos, tal como la nicotinamida (%itamina S,) en Kroteus. Existen unos ni%eles en la exigencia de las acterias. #egTn Andr7 L:o, se &ueden distinguir %erdaderos factores de crecimiento, asolutamente indis&ensales, indis&ensales, factores de &artida, necesarios al &rinci&io del crecimiento crecimiento factores estimulantes. El crecimiento acteriano es &ro&orcional &ro&orcional a la concentraci*n de los factores de crecimiento. crecimiento. As>, las %itaminas, 'ue constituen factores de crecimiento &ara ciertas acterias, &ueden ser dosicadas &or m7todos microiol*gicos (S12 Lactoacillus lactis oraren).
#e &uede medir el crecimiento de las acterias siguiendo la e%oluci*n a lo largo del tiem&o del nTmero de acterias &or unidad de %olumen. #e utili+an m7todos directos como &ueden ser el contaje de g7rmenes mediante el micro"copio o el conta%e de colonia" &resentes des&u7s de un culti%o de una diluci*n de una muestra dada en un inter%alo de tiem&o determinado. /gualmente se utili+an m7todos indirectos (densidad *&tica m@s 'ue t7cnicas io'u>micas). Existen seis fases en las cur4a" de crecimiento. Las m@s im&ortantes son la fase de latencia ('ue de&ende del estado siol*gico de los g7rmenes estudiados) la fase ex&onencial, ex&onencial, en la 'ue la tasa de crecimiento crecimiento es m@xima. El crecimiento se &ara como consecuencia del agotamiento de uno o %arios alimentos, de la acumulaci*n de sustancias noci%as, o de la e%oluci*n acia un &Z desfa%oraleR se &uede otener una sincroni+aci*n sincroni+aci*n en la di%isi*n de todas las c7lulas de la &olaci*n, lo 'ue &ermite estudiar ciertas &ro&iedades siol*gicas de Las acterias.
Clasicaci*n Clasicaci*n e identicaci*n La clasicaci*n taxon*mica usca descriir diferenciar la am&lia di%ersidad de es&ecies acterianas &oniendo nomres agru&ando organismos segTn sus similitudes. Las acterias &ueden clasicarse con ase en diferentes criterios, como estructura celular, metaolismo o con ase en diferencias diferencias en determinados determinados com&onentes como A, @cidos grasos, &igmentos, ant>genos o 'uinonas. En e%emplo de cla"i=caci6n: La identicaci*n de las acterias es tanto m@s &recisa cuanto maor es el nTmero de criterios utili+ados. Esta identicaci*n se reali+a a ase de modelos, agru&ados en familias es&ecies en la clasicaci*n acteriol*gica. acteriol*gica. Las acterias se reTnen en 11 *rdenesR Las euacteriales, esf7ricas o acilares, 'ue com&renden casi todas las acterias &at*genas las formas fot*trofas. Las &seudomonadales, &seudomonadales, orden di%idido en 10 familias entre las 'ue cae citar las Kseudomonae las #&irillacae. Las es&iro'uetales es&iro'uetales (tre&onemas, le&tos&iras). Las actinomicetales actinomicetales (micoacterias, actinomicetes). Las ric;ettsiales. ric;ettsiales. Las mico&lasmales. mico&lasmales. Las clamidoacteriales. clamidoacteriales. Las ifomicroiales. ifomicroiales.
Las eggiatoales. Las cariofanales. Las mixoacteriales. mixoacteriales. 1a técnica de tinci6n de membrana" de bacteria" de Gram , desarrollada &or Zans Cristian 8ram en 144?,1=N a su&uesto un antes un des&u7s en el cam&o de la medicina, consiste en teir con tintes es&ec>cos di%ersas muestras de acterias en un &ortaojetos &ara saer si se an teido o no con dico tinte.
tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ibSacteriaZistoriadelaacterio tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ibSacteriaZist oriadelaacteriolog.C=.Aa log.C=.Aa tt&Rbb:::.misres&uestas.com tt&Rbb::: .misres&uestas.comb'uesonlasacterias. b'uesonlasacterias.tml tml tt&Rbb:::.monograas.combtra tt&Rbb::: .monograas.combtraajosbacteriasbacterias.st ajosbacteriasbacterias.stml ml tt&Rbb:::.losmicroio tt&Rbb::: .losmicroios.com.arbmicro s.com.arbmicroiosbestructura\20 iosbestructura\20acteriana.tml acteriana.tml tt&Rbbes.ans:ers.aoo.comb'uestionbin tt&Rbbes.ans:ers.aoo .comb'uestionbindex_'id2004 dex_'id200401110?=2
OemaR OemaR hLE hLEAP6A# AP6A# Yu7 es una le%adura_ #e denomina le%adura a cual'uiera de los di%ersos ongos microsc*&icos unicelulares 'ue son im&ortantes &or su ca&acidad &ara reali+ar la descom&osici*n mediante fermentaci*n de di%ersos cuer&os org@nicos, &rinci&almente los a+Tcares o idratos de carono, &roduciendo distintas sustancias. Aun'ue en algunos textos de ot@nica se considera 'ue las le%aduras ]%erdaderas] &ertenecen s*lo a la clase Ascomcota, desde una &ers&ecti%a microiol*gica se a denominado le%adura a todos los ongos con &redominio de una fase unicelular en su ciclo de %ida, incluendo a los ongos asidiomicetes. 1a" le4adura" son organismos aeroios aun'ue mucas es&ecies son fermentadoras, otras no lo son, como los g7neros Cr&tococcus 6odotorula. Las le%aduras suelen fermentar unos &ocos glTcidos, &rinci&almente exosas disac@ridos
YKara 'ue se utili+a_ Las le%aduras se an utili+ado desde la &reistoria en la elaoraci*n del &an del %ino, &ero los fundamentos cient>cos de su culti%o uso en grandes cantidades fueron descuiertos &or el microi*logo franc7s Louis Kasteur en el siglo /. Zo se utili+an en distintos ti&os de fermentaci*n. Los diferentes usos de las le%aduras sonR como fuente de %itaminas del com&lejo S de tiamina, en algunas fases de la &roducci*n de antii*ticos ormonas esteroides, como alimento &ara animales seres umanos.
6e&roducci*n de las le%aduras. Las le%aduras se re&roducen asexualmente &or gemaci*n o rotaci*n sexualmente mediante ascos&oras o asidioes&oras. urante la re&roducci*n asexual, una nue%a ema surge de la le%adura madre cuando se dan las condiciones adecuadas, tras lo cual la ema se se&ara de la madre al alcan+ar un tamao adulto. En condiciones de escase+ de nutrientes las le%aduras 'ue son ca&aces de re&roducirse sexualmente formar@n ascos&oras. Las le%aduras 'ue no son ca&aces de recorrer el ciclo sexual com&leto se clasican dentro del g7nero Candida.
&iempo de reproducci6n La le%adura es la &rimera c7lula eucariota en la 'ue se a intentado ex&resar &rote>nas recominantes deido a 'ue es de f@cil uso industrialR es arata, culti%arla es sencillo se du&lica cada 50 minutos en condiciones nutriti%as fa%orales. Adem@s, es un organismo f@cil de modicar gen7ticamente lo 'ue &ermite reali+ar ex&erimentos en %arios d>as o semanas. #in emargo, las le%aduras &oseen un mecanismo de glicosilaci*n diferente al 'ue se encuentra en c7lulas umanas, &or lo 'ue los &roductos son inmunog7nicos.
Yu7 forman &ueden tener_ Las le%aduras son ongos 'ue forman sore los medios de culti%o colonias &astosas, constitu>das en su maor &arte &or c7lulas aisladas 'ue suelen ser esf7ricas, o%oideas, eli&soideas o alargadas.
Kartes de una le%adura
CA6ACOE6k#O/CA# MV69VL8/CA# Los caracteres morfol*gicos de las le%aduras se determinan mediante su oser%aci*n microsc*&ica. Adem@s, los criterios morfol*gicos se asan en el modo de re&roducci*n %egetati%a de la morfolog>a celular, de la formaci*n de &seudomicelio de micelio. La forma de la le%adura &uede ser desde esf7rica a o%oide, en forma de lim*n, &iriforme, cil>ndrica, triangular, e incluso alargada formando un %erdadero micelio o un falso micelio. Oami7n se diferenc>an en cuanto a su tamao, miden de 110 um anco &or 2= um de longitud. #on &artes oser%ales de su estructura, la &ared celular, el cito&lasma, las %acuolas, los gl*ulos de grasa, los gr@nulos, los cuales &ueden ser metacrom@ticos, de alTmina o de almid*n. Kara &oder oser%ar el nTcleo es &reciso utili+ar tinciones es&eciales. La estructura celular es de ti&o eucari*tico, &ero sin sistema fotosint7tico. La &ared r>gida, se caracteri+a &or la &resencia, en su com&osici*n, de dos &olisac@ridosR manano glucano. Algunas le%aduras &roducen una c@&sula constituida &or fosfomanos. El nTcleo est@ rodeado de una memrana 'ue &ersiste durante la di%isi*n celular. El nTmero de
cromosomas es %ariale de unas a otras. Las le%aduras en ningTn caso son m*%iles.
YLas le%aduras se di%iden en gru&os_ #>. Las le%aduras &ertenecen a dos clases de ongosR Fa"comiceto" o Fba"idiomiceto" , aun'ue mucas de ellas se &resentan comTnmente en la forma im&erfecta. Las le%aduras Fa"comicética" forman ascas lires, con 1 a 4 ascos&oras, en las es&ecies ifales las ascas est@n desnudas. Las asco&oras de las le%aduras son algo m@s resistentes al calor la desecaci*n 'ue las c7lulas %egetati%as, si ien tienen muca menor resistencia t7rmica 'ue las es&oras acterianas, &or lo 'ue mantienen la %iailidad de la es&ecie durante los camios ad%ersos del medio amiente. El modo de di&loidi+aci*n en las le%aduras ascomic7ticas se efectTa entre una c7lula su rote, como es el caso de #c:anniomces, #c:anniomce s, earomces otras, o &uede efectuarse entre dos c7lulas inde&endientes, &or fusi*n directa (#ci+osaccaromces) o &or medio de un tuo de conjugaci*n Ancasi E8 ?1 (gosaccaromces). En el caso de le%aduras estaili+adas en el estado di&loide, 7ste se restaura &or conjugaci*n de las ascos&oras dentro del asca (#accaromcodes). En ciertos casos, si el cigoto se re&rodce &or mitosis, existen en el mismo ciclo las fases %egetati%as a&loide di&loide (#accaromces). La gura siguiente muestra un es'uema de %arios g7neros de le%aduras . Entre las le%aduras ba"idiomicética" se encuentran 9iloasidium (teleomorfo de Cr&tococcus) 'ue forma ifas con f>ulas, #&oroolomces 'ue &roduce es&oras ex*genas en la
&unta de una &rotuerancia de la c7lula las descarga con fuer+a, 6odotorula 'ue, como la anterior, forma un &igmento carotenoide rojo.
&oda" &oda" la" le4adura" producen !ermentaci6n< Las le%aduras son organismos aeroios aun'ue mucas es&ecies son fermentadoras, otras no lo son, como los g7neros Cr&tococcus 6odotorula. Las le%aduras suelen fermentar unos &ocos glTcidos, &rinci&almente exosas disac@ridos. El g7nero #accaromces unos &ocos m@s, son fermentadores en7rgicos de los a+Tcares ajo condiciones anaer*iocas. e;;era, su anamorfo Srettanomces algunas otras, fermentan glucosa m@s r@&ido en aeroiosis . Las le%aduras oxidati%as, como Kicia memranaefaciens, &roducen ni%eles inace&tales de acetalde>do, 7steres @cido ac7tico en %inos. Las es&ecies fermentati%as . ailii, e;;era intermedia #accaromcodes lud:igii causan una caronataci*n excesi%a, sedimento, turiedad, @cidos 7steres desagradales. #*lo #c:anniomces, #c:anniomces , Li&omces #accaromces diastaticus &ueden idroli+ar almid*n. Vtras &oseen acti%idad &ectinol>tica. Mucas es&ecies sinteti+an todas las %itaminas necesarias, &ero algunas re'uieren iotina otros com&uestos . Las le%aduras asesinas secretan &oli&7&tidos t*xicos &ara otras es&ecies de le%aduras, aTn del mismo g7nero, adem@s suelen iniir a otros organismos. Kueden ser contaminantes en la fermentaci*n de mostos, dominando a la ce&a industrial &ara dar un &roducto es&Treo, aun'ue &or otra &arte una ce&a asesina seleccionada &uede su&rimir a las le%aduras sal%ajes indeseales.
Amiente en el 'ue se &uede encontrar una le%adura
Las le%aduras se encuentran con frecuencia en las ojas las Uores, aun'ue en nTmero mu &e'ueo, siendo los insectos un im&ortante %ector de diseminaci*n de las mismas. Est@n sore la e&idermis de frutas &ueden &enetrar a los tejidos suacentes como resultado de un dao mec@nico. El suelo es un im&ortante reser%orio, desde el cual &ueden llegar a los alimentos, &ero tami7n suelen allarse en el agua de lagos r>os. #u &resencia de&ende de la tem&eratura, el &Z, la umedad la dis&oniilidad de a+Tcares sim&les . Las le%aduras constituen la causa m@s comTn de alteraci*n de frutas jugos, &ues tienen a+Tcares fermentales ele%ada acide+. ComTnmente asociadas con el deterioro de las frutas secas est@n gosaccaromces rouxii es&ecies de Zansenias&ora, Candida, earomces Kicia. Oami7n Oami7n forman &arte de la microiota de &roductos l@cteos c@rnicos. Las le%aduras de las &asturas suelo de los corrales &ueden ser trans&ortadas a los mataderos de all> a las carcasas. Cr&tococcus laurentii, Cr&tococcus luteolus, 6odotorula mucilaginosa earomces ansenii suelen allarse en carcasas de cordero cerdo. Kor otra &arte, #c:anniomces Li&omces son g7neros t>&icos del suelo. Las &rinci&ales es&ecies &resentes en los &roductos l@cteos son lu%eromces marxianus . ansenii, aun'ue tami7n se encuentran 6. mucilaginosa, arro:ia li&oltica Candida &ara&silosis .
/denticaci*n de una le%adura La forma no es un indicio &ara la identicaci*n de las es&ecies, ni la %ariedad morfol*gica en un mismo culti%o es una &ruea de la contaminaci*n del mismo. El com&ortamiento siol*gico es mu im&ortante &ara la identicaci*n. Mientras 'ue las caracter>siticas morfol*gicas sexuales &ermiten generalmente identicar el g7nero, las caracter>sticas caracter>sti cas
io'u>micas denen la es&ecie de la le%adura, &or ejem&lo la utili+aci*n de com&uestos caronados (almid*n, Larainosa, cada%erina, celoiosa, 2cetogluconato, citrato, eritritol, galactosa, inositol, lactosa, lisina, maltosa, manitol, meliiosa, metilgluc*sido, rafinosa, ramnosa, sacarosa, trealosa, xilosa) nitrogenados (nitratos), el crecimiento a =N pC, la fermentaci*n de glucosa sacarosa, la necesidad de %itaminas, la resistencia a la cicloeximida, la idr*lisis de urea o el desarrollo en &resencia de algunos iniidores (acetato de sodio 1\, cloruro de sodio 1<\, glucosa <0\) . La identicaci*n s*lo &uede lle%arse a cao sore una ce&a en culti%o &uro, &re%iamente aislada en una &laca de medio gelicado. #e comien+a examinando el as&ecto de los culti%os tras incuaci*n a 24pC durante = d>as o m@s. #e oser%a el Manual de Microiolog>a de los Alimentos . as&ecto del culti%o en medio l>'uido, la formaci*n de sedimento su as&ecto (no, grueso), la &el>cula su&ercial la &roducci*n de gas. #e examina el culti%o en el mismo medio con 2\ de agar &ara denir el tamao de las colonias, la forma (contornos n>tidos o irregulares, con%exas o c*nca%as), la su&ercie (mate o rillante) la &igmentaci*n . Las caracter>sticas micromorfol*gicas se estudian sore &re&araciones microsc*&icas efectuadas en estado fresco. La a&titud &ara la lamentaci*n se maniesta en un microculti%o (%er ca&>tulo =) sore agar arina de ma>+ (arina de ma>+ =0 g, agar 20 g, agua 1 litro (?)) tras una incuaci*n de = d>as. #e oser%a si se trata de &seudomicelio o micelio %erdadero, adem@s la aundancia ramicaci*n. La formaci*n de clamidoconidios ( clamidos&oras) es caracter>stica de Candida alicans, Metscni;o:ia ocasionalmente se &uede %er en culti%os %iejos de Oricos&oron o Cr&tococcus. Las alistos&oras de #&oroolomces u otros, al ser &roectadas al aire se acumulan sore la ta&a de la caja de Ketri.
Kara la identicaci*n de las le%aduras ascomic7ticas es necesario &oner en e%idencia las ascas las ascos&oras. Al no tener todas las es&ecies las mismas exigencias, se deen utili+ar simult@neamente %arios medios de es&orulaci*n semrarlos a &artir de un culti%o en fase ex&onencial (). El m7todo de identicaci*n sim&licado dado &or 7a; q Seucat (?) &ermite la r@&ida correcta identicaci*n del 51\ de las le%aduras, e inclue todas las comunes en los alimentos. Las &rueas de asimilaci*n se lle%an a cao agregando los a+Tcares al medio ase nitrogenado est7ril (sulfato de amonio g, fosfato mono&ot@sico g, sulfato de magnesio e&taidratado 0, g, agar 20 g, agua 1 litro) los com&uestos con nitr*geno al medio ase caronado (glucosa 10 g, fosfato mono&ot@sico 1 g, sulfato de magnesio e&taidratado 0, g, agar 20 g, agua 1 litro). La necesidad de %itaminas se demuestra %olcando una gota de una sus&ensi*n de c7lulas en agua est7ril sore un caldo lire de %itaminas (glucosa 10 g, sulfato de amonio g, fosfato mono&ot@sico 1 g, sulfato de magnesio e&taidratado 0, g, agar 20 g, agua 1 litro) como testigo se em&lea el mismo medio adicionado de 10 mL de extracto de le%adura al 2\ . La fermentaci*n se demuestra &or el camio de &Z la retenci*n de gas en el &e'ueo tuo in%ertido colocado dentro del medio ase (tri&tona g, extracto de le%adura g, agua 1 litro) al 'ue se aadi* 2, ml de soluci*n etan*lica de a+ul de romotimol 20 g de glucosa o sacarosa. Kara demostrar el crecimiento a aja acti%idad agua, alta acide+ o la resistencia a la cicloeximida, se agrega al medio ase est7ril (tri&tona g, extracto de le%adura g, glucosa g, agua 1 litro), 1<0 g de cloruro de sodio o <00 g de glucosa o 10 mL de @cido ac7tico glacial o 10 mL de una soluci*n de cicloeximida al 1\. La idr*lisis de urea se oser%a &or la alcalini+aci*n del medio de culti%o (extracto de le%adura 0,1 g,
fosfato mono&ot@sico 1 g, fosfato dis*dico 1 g, urea 20 g, soluci*n de rojo de fenol al 1\ 1 mL, agua 100 mL).
tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ibLe%adura tt&Rbb:::.unsa.edu.arbiliobre&ositoriobmalim200Nb?\20le% aduras.&df tt&Rbbale+amora.galeon.combaciones145==4.tml tt&Rbb:::.google.com.mxbimgres_ '&artesdeunale%aduraqnum10qles ?15qtodqi:102?qi?55qtmiscqtnids/a&K5 e%658MRqimgrefurltt&Rbbedgardo&edullarodrigue+.:ord&res s.comb2012b0Nb0=bindustriaa s.comb2012b0Nb0 =bindustriaalimentaria limentarialas las le%adurasbqdocidd &12'948#30Mqimgurltt&Rbbedgardo&edullarodrigue+.les. :ord&ress.comb2012b0Nble%aduras 4.gifq:00q=<2qeis% 4P/'188;2g8n?Sgq+oom1qia 4P/'188;2g8n? Sgq+oom1qiactcq%&x?q%& ctcq%&x?q%&12
OemaR OemaR hZV8V# hZV8V# Yu7 es un ongo_ En iolog>a, el t7rmino 9ungi (lat>n, literalmente ]ongos]) designa a un gru&o de organismos eucariotas entre los 'ue se encuentran los moos, las le%aduras las setas. #e clasican en un reino distinto al de las &lantas, animales acterias. Esta diferenciaci*n se dee, entre otras cosas, a 'ue &oseen &aredes celulares com&uestas &or 'uitina, a diferencia de las &lantas, 'ue contienen celulosa deido a 'ue algunos crecen bo actTan como &ar@sitos de otras es&ecies. Actualmente se consideran como un gru&o eterog7neo,
&olil7tico, formado &or organismos &ertenecientes &or lo menos a tres l>neas e%oluti%as inde&endientes.
Y*nde se &uede encontrar estos ongos_ Los ongos se encuentran en @itats mu di%ersosR &ueden ser &ir*los (Koliota caronaria) o co&r*los (Ksiloce co&ro&ila). YC*mo cual es la clasicaci*n de estos ongos_ u ecolog>a es mu di%ersa. Aun'ue a re&resentantes acu@ticos, &rinci&almente son terrestres. En funci*n de c*mo consiguen la materia org@nica 'ue necesitan, encontramosR ongos &ar@sitos, tanto de &lantas como de animales causando enfermedades conocidas como micosis. Ejem&lo son las tias, roas, el corne+uelo, &ie de atleta, candidiasis, etc... ongos sa&rotos, ocu&an en los ecosistemas el ni%el tr*co de los descom&onedores siendo res&onsales de la minerali+aci*n de los ioelementos. ongos simi*ticos, con los algas formando los l>'uenes, o con ra>ces de &lantas en las microrri+as.
arte" 5ue con!orman a un )ongo'
Kartes de un ongo &enicillumR (1) Zifa, (2) Conidi*foro, (=) 9i@lide, (?) Conidia, () #e&tos La maor>a de los ongos crecen como ifas, estructuras cil>ndricas liformes de 2 a 10 micr*metros de di@metro asta %arios cent>metros de longitud. Las ifas crecen en sus @&icesW las ifas nue%as se forman t>&icamente &or la a&arici*n de nue%os @&ices a lo largo de ifas &reexistentes &or un &roceso llamado de ramicaci*n, o en ocasiones el extremo a&ical de las ifas se ifurca, dando lugar a dos ifas con crecimiento &aralelo.
;ué !orma o como pueden "er e"to" )ongo"< os ongos se &resentan ajo dos formas &rinci&alesR ongos lamentosos (antiguamente llamados ]moos]) ongos le%aduriformes. El cuer&o de un ongo lamentoso tiene dos &orciones, una re&roducti%a otra %egetati%a.1 La &arte %egetati%a, 'ue es a&loide generalmente no &resenta coloraci*n, est@ com&uesta &or lamentos llamados ifas (usualmente microsc*&icas)W un conjunto de ifas conforma el micelio2 (usualmente %isile). A menudo las ifas est@n di%ididas &or tai'ues llamados se&tos. Los ongos le%aduriformes o sim&lemente le%aduras son siem&re unicelulares, de forma casi esf7rica. o existen en ellos una distinci*n entre cuer&o %egetati%o re&roducti%o.
YC*mo se re&roducen_
Los ongos se re&roducen sore todo &or medio de es&oras, las cuales se dis&ersan en un estado latente, 'ue se interrum&e s*lo cuando se allan condiciones fa%orales &ara su germinaci*n. Cuando estas condiciones se dan, la es&ora germina, surgiendo de ella una &rimera ifa, &or cua extensi*n ramicaci*n se %a constituendo un micelio. Las es&oras de los ongos se &roducen en es&orangios, a sea asexualmente o como resultado de un &roceso de re&roducci*n sexual. En este Tltimo caso la &roducci*n de es&oras es &recedida &or la meiosis de las c7lulas, de la cual se originan las es&oras mismas. Las es&oras &roducidas a continuaci*n de la meiosis se denominan meios&oras. Como la misma es&ecie del ongo es ca&a+ de re&roducirse tanto asexual como sexualmente, las meios&oras tienen una ca&acidad de resistencia 'ue les &ermite sore%i%ir en las condiciones m@s ad%ersas, mientras 'ue las es&oras &roducidas asexualmente cum&len sore todo con el ojeti%o de &ro&agar el ongo con la m@xima ra&ide+ extensi*n &osile.
&iempo en el 5ue "e reproducen< La %elocidad de crecimiento de las ifas de un ongo es %erdaderamente es&ectacularR en un ongo tro&ical llega asta los mm &or minuto.
$19/(/$$/0N 98GEN 1 (0RM 78 $R8$/M/8N&0 Hongo" =lamento"o" Micros&orum Orico&ton Orico&ton E&idermo&ton As&ergillus arios g7neros ('ue causan micetomas) Zongos en le%adura Malasse+ia
Es&orotrix Zisto&lasma Slastomces Karacoccidiodes Cr&tococcus
$19/(/$$/0N 98GN 81 &/0 78 /N(8$$/0N / N(8$$/0N ;E8 R07E$8 Mico"i" "uper=ciale" $utánea" ermatotosis Micros&orum Orico&ton Orico&ton E&idermo&ton Oia %ersicolor Malasse+ia #ucut@neas Es&orotricosis Es&orotrix Mico"i" pro!unda" 9i"témica Slastomicosis Slastomces Karacoccidiodemicosis Karacoccidiodes Coccidiomicosis Coccidioides Zisto&lasmosis Zisto&lasma V&ortunista Cri&tococosis Cr&tococcus Candidiasis C@ndida As&ergilosis As&ergillus
7i!erencia" entre Hongo" C Bacteria"
Me &arece mu im&ortante em&e+ar a organi+ar un &oco los conce&tos @sicos de microiolog>a, &or ejem&lo, las diferencias 'ue existen entre ongos acterias, &ues nos &uede audar a entender como actuan, como &ueden transformar la materia org@nica, &or'ue &ueden resisitir la acci*n de antii*ticos o so&ortar condiciones extremas. En la actualidad, la clasicaci*n de todos los seres %i%os se reali+a desde el &unto de %ista celular, lo 'ue lle%a a la &rimera &rimordial diferencia entre las acterias los ongosR Las acterias son organismos &rocar>oticos, cua &rinci&al caracter>stica es carecer de memrana nuclear, lo 'ue lle%a a 'ue su material gen7tico este dis&erso liremente en el cito&lasma. Este eco fa%orece 'ue su re&roducci*n, &or si*n inaria, sea mu efecti%a. As>, &or ejem&lo, en el momento de &roducir una infecci*n, lo Tnico 'ue re'uiere es du&licar su material gen7tico di%idirse en dos, &or lo 'ue r@&idamente &uede afectar un organismo. En el caso de los Zongos, son organismos eucar>oticos, 'ue se caracteri+an &or &resentar una memrana nuclear. Este eco fa%orece 'ue su material gen7tico se encuentre se&arado de los dem@s org@nelos &ueda reali+ar di%isiones de su nTcleo, necesarias &ara la es&orulaci*n, 'ue es la &rinci&al forma de re&roducci*n de este organismo. Las acterias son todos organismos unicelulares mientras 'ue los ongos, &ueden encontrarse, en la naturale+a, en forma &luricelular (ongos lamentosos o moos) o en forma unicelular (le%aduras). En cuanto a su estructura, las acterias &resentan una &ared celular fuerte r>gida 'ue las &rotege sir%e de sost7n &ara las &artes m@s d7iles io'u>micamente acti%as de la acteria. Esta &ared se encuentra formada @sicamente &or &e&tidoglicano ( molécula formada por proteínas y carbohidratos o azúcares). La coloraci*n de 8ram, &ermite diferenciar dos grandes gru&os de acteriasR las 8ram &ositi%as 8ram negati%as. Las &rimeras tienen una &ared celular m@s gruesa 'ue las segundas, lo 'ue &ermite diferenciarlas en el momento de la coloraci*n.
Las c7lulas de los ongos &luricelulares o moos &oseen &aredes r>gidas 'ue rodean el cito&lasma. En este caso, las &aredes celulares est@n com&uestas de 'uitina, sustancia 'ue tami7n se encuentra en el ca&ara+*n de cangrejos langostas. Algunas acterias &resentan organelos como las mrias Uagelos 'ue les dan mo%ilidad. Oodos los ongos son inm*%iles. Las acterias &ueden ser aeroias o anaeroias, estrictas o facultati%as facultati%as (es decir que alternan la aerobiosis y la anaerobiosis). La maor>a de los ongos son aeroios. Vtra diferencia im&ortante de resaltar entre estos dos microorganismos, es su as&ecto macrosc*&ico 'ue se e%idencia cuando son culti%ados en el laoratorio. En este caso, las acterias forman colonias (se reere a la forma en que crecen las bacterias) con caracter>sticas caracter>sticas denidas comoR 9ormas &unteadas o circulares Colonias ele%adas, con%exas e incluso &lanas. Sordes lisos, ondulados o loulados. Colores, 'ue &ueden ser rillantes o mate. En el caso de los ongos, las colonias &resentan caracter>sticas mu diferentesR 9ormas lamentosas, ri+oides e irregulares. prominencia en el centro de la Ele%aciones umilicadas ( prominencia colonia) algodonosas. Sordes lamentosos o estriados. Colores fuertes mu %ariados. ormalmente son mate. A continuaci*n encontraran ejem&los de este ti&o de coloniasR
8%emplo -
#e oser%an colonias t>&icas de ongos lamentosos, con ordes irregulares, ele%aciones umilicadas, ordes estriados su crecimiento in%asi%o.
8%emplo .
En este caso se oser%a muco mejor la ele%aci*n umilicada el car@cter in%asi%o algodonoso de algunos ongos. Es comTn oser%ar, en un medio de culti%o, el crecimiento simult@neo de diferentes ti&os de ongos.
8%emplo 3
En este caso se oser%a crecimiento acteriano con colonias &untiformes o circulares, ordes lisos en algunos casos ondulados loulados. /gualmente se oser%an diferentes coloraciones. 8%emplo +
En este caso se oser%a el crecimiento simult@neo de ongos acterias, con las diferencias en sus colonias a antes mencionadas. Es&ero 'ue con las imagenes esta re%e ex&licaci*n, sea m@s clara la diferencia entre ongos acterias. Como %emos, su forma de crecer es una e%idente diferencia, as> como cuando &ensamos en los mam>ferosR la allena es un mamifero, &ero tami7n lo es el gatoongos acterias son microorganismos, &ero con organi+aciones diferentes hestilos de %ida, tam>en, diferentes. tt&Rbb:::.cic.mxbocumentosbC/Cb#itiosbSiodi%ersidadb&dfsbCa&?b0?\20Sac terias\20\20ongos.&df tt&Rbbconocimientosmicologia. tt&Rbbconocimi entosmicologia.logs&ot.mxb2010 logs&ot.mxb20101201arci 1201arci%e.tml %e.tml tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ib9ungiClasicac tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ib9 ungiClasicaci.C=.S=ncl.C=. i.C=.S=ncl.C=.A1sicadelos A1sicadelosong ong os tt&Rbbrecursos.cnice.mec.esbiologiabacilleratobsegun tt&Rbbrecursos.cnice.mec.esbiologi abacilleratobsegundobiologiabud0 dobiologiabud0Nb020N Nb020N 0?020?=.tmll 0?020?=.tm tt&Rbbintimicro.logs&ot tt&Rbbintimicr o.logs&ot.mxb&bclasicacion .mxb&bclasicaciondeongos.tml deongos.tml
tt&Rbbclaudia+amrano.:ord&ress.comb201 tt&Rbbclaudia+amrano.:or d&ress.comb2010b04b2
Karcial 2 OemaR OemaR hM/C6V#CVKkA hM/C6V#CVKkA Yu7 es microsco&>a_ Microsco&>a (o tami7n sin tilde vmicrosco&iaw)1 es el conjunto de t7cnicas m7todos destinados a acer %isile los ojetos de estudio 'ue &or su &e'uee+ est@n fuera del rango de resoluci*n del ojo normal. #i ien el microsco&io es el elemento central de la microsco&>a, el uso del mismo se re'uiere &ara &roducir las im@genes adecuadas, de todo un conjunto de m7todos t7cnicas anes &ero extr>nsecas al a&arato. Algunas de ellas son, t7cnicas de &re&araci*n manejo de los ojetos de estudio, t7cnicas de salida, &rocesamiento, inter&retaci*n registro de im@genes, etc. Exce&tuando t7cnicas es&eciales como las utili+adas en microsco&io de fuer+a at*mica, microsco&io de iones en cam&o microsco&io de efecto tTnel, la microsco&>a generalmente im&lica la difracci*n, reUexi*n o refracci*n de algTn ti&o de radiaci*n incidente en el sujeto de estudio.
Kartes uso del microsco&io Con frecuencia la Ciencia la O7cnica %an de la mano, casi todos los a%ances cient>cos an sido el resultado de nue%os a%ances t7cnicos, esto es &articularmente ilustrati%o en lo referente al uso del microsco&io. Al descurimiento de la c7lula se lleg* gracias a una serie de descurimientos cient>cos 'ue estu%ieron ligados a la mejora de la calidad de los microsco&ios. Pno de los &ioneros en la construcci*n de estos a&aratos fue Anton %an Leeu:enoe;. Leeu:enoe; . $6mo e" un micro"copio<
El microsco&io es un a&arato 'ue aumenta la imagen de los ojetos nos &ermite oser%ar a'uello 'ue, en un &rinci&io, es in%isile &ara el ojo umano. 9ue utili+ado &or &rimera %e+, como tal, &or el oland7s Anton %an Leeu:enoe; el ao 1
El enfo'ue del ojeto se reali+a con el tornillo macrom7trico, des&u7s se ana con el tornillo microm7trico, asta conseguir una %isi*n &erfecta. Pna %e+ enfocado el ojeto, se &asa al ojeti%o inmediatamente su&erior, asta otener el aumento deseado.Cada %e+ 'ue camies de ojeti%o cuida de no tocar la &re&araci*n, el %idrio se &uede rom&er. La luminosidad &ara oser%ar la muestra la &uedes regular mo%iendo el diafragma asta conseguir la m@s adecuada &ara cada caso. Como unidad de medida , en microsco&ia se utili+a la micra (). #u e'ui%alencia esR -J K -,-*** mm W &or tanto, - mm K -*** J $6mo "e prepara una ob"er4aci6n micro"c6pica< Kara oser%ar &erfectamente un ojeto es necesario someterla a un &roceso de &re&araci*n 'ue desta'ue a'uellas &artes 'ue nos interesen. Oami7n, 'ue conser%e la muestra &ara oser%aciones &osteriores. os fases de este &roceso sonR la =%aci6n latinci6n' Con la =%aci6n se consigue 'ue la muestra 'ue 'ueremos oser%ar no se mue%a. #e suele utili+ar diferentes l>'uidosR alcool et>lico N0\, @cido ac7tico...W tami7n se utili+an altas tem&eraturas 'ue audan a desidratar la muestra. El ojeto, una %e+ jado, dee la%arse en un medio a&ro&iado como alcool o agua. La tinci6n consiste en colorar la muestra 'ue 'ueremos oser%ar &ara, as>, destacar a'uellas &artes 'ue nos interesen oser%ar. La gama de colorantes es mu %ariada, cada uno resalta una &arte diferente del ojeto. Los colorantes siguientes suelen utili+arse &ara resaltar las &artes de la c7lulaR La estructura celularR a+ul de metileno, orce>na ac7tica. El cito&lasma celularR eosina, fucsina @cida, %erde lu+. El nTcleo celularR fucsina @sica, %erde metilo. tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ibMicrosco& \C=\AaMicrosco&.C=.Aa.C=.S=&tica tt&Rbbiesm.edu.g%a.esb&tearbP#V\20EL \20M/C6V#CVK/V.tm
OemaR OemaR hK6PESA# hK6PESA# S/VPkM/CA# S/VPkM/CA# ;ué e" una prueba bio5uímica< Las &rueas io'u>micas son una serie de an@lisis cl>nicos 'ue sir%en a la Medicina como a&oo a la ora de diagnosticar infecciones &or acterias.
Algunas de estas &rueasR /M#/$
El /M/C se com&one de cuatro &rueasR /ndol, 6ojo de metilo, ogesKros;auer Citrato. #u nalidad es identicar un organismo del gru&o de los coliformes. La &resencia de estos indica contaminacion fecal. /ndol
La &ruea del indol estudia la ca&acidad de degradar el tri&t*fano con &roducci*n de /ndol metaolitos ind*licos. Ro%o de Metilo
Estudia la fermentaci*n @cido mixta con &roducci*n de @cidos estales en el tiem&o.
#oge" ro"Lauer
Estudia la fermentaci*n utanodi*lica con formaci*n de un metaolito intermediario neutro. O7cnicaR O7cnicaR #emrar #emrar el medio medio e incuar incuar de 2? a ?4 a =N pC. #egTn el %olumen del medio aadir %olumen de los reacti%os, agitar &ara ex&oner el medio al V2. K KV#/O/VR Color rojo roji+o en menos de 1. K E8AO/VR Amarillo en su&ercie. $itrato
Estudia la ca&acidad de utili+ar el citrato como Tnica fuente de carono. 8nzimatica" 0Dida"a
La oxidasa estudia la &resencia del en+ima citocromo c oxidasa 'ue actTa en la cadena res&iratoria del organi"mo' $atala"a
Estudia si el microorganismo &osee el en+ima catalasa 'ue actTa descom&oniendo el &er*xido de idr*geno. $oagula"a
Co@gulos formados &or la reacci*n de la coagulasa en un tuo de ensao. Estudia la &roducci*n del en+ima coagulasa, ca&a+ de coagular el &lasma. iferencia #ta&lococcus aureus de otras es&ecies. Erea"a
Estudia si el microorganismo &osee el en+ima ureasa 'ue catali+a la idr*lisis de la urea. Reducci6n Nitrato"
Estudia la ca&acidad de los microorganismos &ara reducir los nitratos &or la &resencia de un conjunto de en+ima denominado nitrato reductasa 7 Galacto"ida"a
Estudia la ca&acidad de &roducir B galactosidasa, en+ima necesario &ara metaoli+ar la lactosa. 7e"carboDila"a": Estudia si el microorganismo &roduce los en+imas 'ue descaroxilan los amino@cidos &resentes en el medio.
OemaR hO/C/ E 86AM /ntroducci6n ;ué e" una tinci6n< Pna tinci*n o coloraci*n es una t7cnica auxiliar utili+ada en microsco&>a &ara mejorar el contraste en la imagen %ista al microsco&io. Los colorantes tinturas son sustancias 'ue usualmente se utili+an en iolog>a medicina &ara resaltar estructuras en tejidos iol*gicos 'ue %an a ser oser%ados con la auda de diferentes ti&os de microsco&ios. Los diferentes colorantes &ueden ser utili+ados &ara aumentar la denici*n examinar grandes cortes de tejido (resaltando &or ejem&lo ras musculares o tejido conecti%o), &olaciones celulares (&or ejem&lo clasicando diferentes c7lulas sangu>neas) o incluso &ara resaltar organelas dentro de c7lulas indi%iduales. En io'u>mica, esto im&lica agregar un colorante es&ec>co (esto signica 'ue se una de manera selecti%a a sea a A,
&rote>nas, l>&idos, caroidratos, etc.) a un sustrato &ara cualicar o cuanticar la &resencia de un determinado com&uesto. Oanto la tinci*n como el marcado Uuorescente &ueden ser%ir &ara los mismos &ro&*sitos.
;ué e" C para 5ue "ir4en lo" colorante"< colorante"< La maor>a de los colorantes son com&uestos org@nicos 'ue tienen alguna anidad es&ec>ca &or los materiales celulares. Mucos colorantes utili+ados con frecuencia son mol7culas cargadas &ositi%amente (cationes) se cominan con intensidad con los constituentes celulares cargados negati%amente, tales como los @cidos nucleicos los &olisac@ridos @cidos. Ejem&los de colorantes cati*nicos son el a+ul de metileno, el cristal %ioleta la safranina. Vtros colorantes son mol7culas cargadas negati%amente (aniones) se cominan con los constituentes celulares cargados &ositi%amente, tales como mucas &rote>nas. Esos colorantes incluen la eosina, la fucsina @cida el rojo Congo. Vtro gru&o de colorantes son sustancias li&osolulesW los colorantes de este gru&o se cominan con los materiales li&>dicos de la c7lula, us@ndose a menudo &ara re%elar la locali+aci*n de las got>culas o de&*sitos de grasa. Pn ejem&lo de colorante li&osolule es el negro #ud@n. #i se desea sim&lemente incrementar el contraste de las c7lulas &ara la microsco&>a, son sucientes los &rocedimientos sim&les de tinci*n. El a+ul de metileno es un uen colorante sim&le 'ue actTa sore todas las c7lulas acterianas r@&idamente 'ue no &roduce un color tan intenso 'ue oscure+ca los detalles celulares. Es es&ecialmente Ttil &ara detectar la &resencia de acterias en muestras naturales, &uesto 'ue la maor &arte del material no celular no se tie.
;ué colorante" "e puede utilizar en una tinci6n< 7a una eDplicaci6n de 5ue con"ite cada uno' $olorante" )i"tol6gico" má" comune"
Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes &artes de las c7lulas o tejidos, estas &ro&iedades son utili+adas como una %entaja &ara re%elar &artes o @reas es&ec>cas. Algunos de los colorantes iol*gicos m@s comunes se listan m@s aajo. A menos 'ue se indi'ue lo contrario la maor>a de estos colorantes se utili+an con c7lulas tejidos jados. Las tinciones %itales ('ue &ueden ser utili+adas con organismos %i%os) se encuentran destacadas.
zul brillante de $ooma""ie
Coomassie lue (tami7n conocido como a+ul rillante) es un colorante 'ue tie en forma no es&ec>ca a todas las &rote>nas con un fuerte color a+ul. #e utili+a frecuentemente &ara teir las corridas de &rote>nas en las electroforesis en gel. zul de metileno
A+ul de metileno se utili+a &ara teir c7lulas animales, &ara acer m@s %isiles sus nTcleos. Es tami7n utili+ado &ara teir los extendidos de sangre &ara ser utili+ados en citolog>a como colorante %ital en el recuento de reticulocitos.
zul Nilo
El ile lue (o ile lue A), es decir a+ul ilo, tie a los nTcleos de color a+ul. Oami7n Oami7n &uede ser utili+ado &ara teir c7lulas %i%as. Bi"marcL bron
Sismarc; ro:n, Marr*n Sismarc;, (tami7n conocido como Sismarc; ro:n o Mancester ro:n) le im&arte un color amarillo a las mucinas @cidas. #e &uede utili+ar con c7lulas %i%as.
Bromuro de etidio
El romuro de etidio (SE) se intercala en el A le otorga un color rojo naranja Uuorescente. A &esar de 'ue no es ca&a+ de teir c7lulas %i%as a 'ue no atra%iesa las memranas intactas, &uede ser utili+ado &ara identicar c7lulas 'ue se encuentran en las eta&as nales de la a&o&tosis, a 'ue tales c7lulas &oseen unas memranas muco m@s &ermeales. Kor el mismo moti%o, el romuro de etidio es utili+ado como un marcador de a&o&tosis en &olaciones celulares &ara locali+ar las andas de A en una corrida en electroforesis en gel. Este colorante &uede ser utili+ado en cominaci*n con naranja de acridina (A) en el conteo de c7lulas %iales. Esta tinci*n cominada SEbA le otorga a las c7lulas %i%as un color %erde Uuorescente mientras 'ue las c7lulas a&o&t*ticas a&arecen con la distinti%a Uuorescencia rojonaranja. $armín
El carm>n es un colorante de un intenso color rojo 'ue &uede ser utili+ado como sal de litio &ara teir glic*geno, mientras 'ue las sales de alumrecarm>n son colorantes 'ue se adieren al nTcleo. Las tinciones con carm>n re'uieren del uso de un mordiente, 'ue usualmente es aluminio o alumre. $ri"tal 4ioleta
El cristal %ioleta, al ser cominado con un mordiente adecuado, tie las &aredes celulares de color &Tr&ura. El cristal %ioleta es un com&onente im&ortante en la coloraci*n de 8ram. 7/
El AK/ es un colorante nuclear (tie el nTcleo) Uuorescente, se excita con lu+ ultra%ioleta &ara &roducir una fuerte Uuorescencia a+ul cuando se encuentra unido al A. El AK/ se une a las regiones de alta re&etici*n AO en los cromosomas. Adem@s no es %isile cuando se se utili+a con un microsco&io de transmisi*n corriente. Kuede ser utili+ado en c7lulas %i%as o jadas. La t7cnica de tinci*n con AK/ es es&ecialmente adecuada &ara &ar a el recuento celular.< 8o"ina
La eosina se utili+a m@s frecuentemente como contracoloraci*n de la ematoxilina, im&artiendo un color 'ue %a del rosado al rojo al material
cito&lasm@tico, memrana celular, algunas estructuras extracelulares. Adem@s im&arte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina &uede ser utili+ada tami7n en algunas %ariantes de la coloraci*n de 8ram, en mucos otros &rotocolos de tinci*n. e eco existen dos com&uestos mu estrecamente relacionados (aun'ue no iguales) conocidos como eosina. El m@s frecuentemente utili+ado es la eosina (tami7n conocida como eosina amarillenta) a 'ue &osee una tonalidad amarillenta mu sua%e. El otro com&uesto conocido como eosina es la eosina S, tami7n conocida como eosina a+ulada o rojo im&erial, la cual &osee una sua%e tonalidad a+ul. Los dos colorantes son intercamiales, el la utili+aci*n de uno u otro es m@s una cuesti*n de &referencia tradici*n.
Oinciones Oinciones m@s utili+adas utili+adas &ara microiol microiolog>a og>a &incione" para Microbiología
Oinci*n de Oinci*n 8ram
Oinci*n de Oinci*n iel eelsen Oinci*n de Oinci*n #caeer 9ulton
Oie endos&oras endos&oras de %erde acterias en rojo
#ir%e &ara diferenciar endos&oras acterias
Oinci*n de Oinci*n Con;lin
Oie endos&oras endos&oras de %erde, similar a #caeer9ulton
Oinci*n de Oinci*n 8rocott
etecci*n de microorganismos, microorganismos, en es&ecial fTngicos.
Oinci*n de Oinci*n ieterle
STs'ueda de microorganismos, ej., Treponema pallidum
Oinci*n Oinci*n negati%a
Es mu utili+ada en Oie el el exterior, microsco&>a microsco&>a electr*nica. En &ero no el interior microsco&>a microsco&>a *&tica &ara de c7lulas identicar microorganismos microorganismos estructuras enca&sulados.
Oie las las &aredes Oinci*n Oinci* n con celulares celulares de de mucicarmin &olisac@ridos de a un intenso color rojo
#ir%e &ara diferenciar acterias con &ared de &olisac@ridos de otras 'ue no. (Ej Cryptococcusson mucicarmina )
Oinci*n de 8ram Yu7 es la tinci*n de gram_ La tinci*n de 8ram o coloraci*n de 8ram es un ti&o de tinci*n diferencial em&leado en microiolog>a &ara la %isuali+aci*n de acterias, sore todo en muestras cl>nicas. ee su nomre al acteri*logo dan7s Cristian 8ram, 'ue desarroll* la t7cnica en 144?. #e utili+a tanto &ara &oder referirse a la morfolog>a celular acteriana como &ara &oder reali+ar una &rimera a&roximaci*n a la diferenciaci*n acteriana, consider@ndose
Sacteria 8ram &ositi%a a las acterias 'ue se %isuali+an de color moradas Sacteria 8ram negati%a a las 'ue se %isuali+an de color rosa o rojo o grosella.
Ex&licaci*n de como funciona la tinci*n de 8ram El cristal %ioleta (colorante cati*nico) &enetra en todas las c7lulas acterianas (tanto 8ram &ositi%as como 8ram negati%as) a tra%7s de la &ared acteriana. El lugol es un com&uesto formado &or /2 (odo) en e'uilirio con / (oduro de &otasio) #l (#iulterio), los cuales est@n &resente &ara soluili+ar el odo, actTan de mordiente, aciendo 'ue el cristal %ioleta se je con maor intensidad a la &ared de la c7lula acteriana. El /2 entra en las c7lulas forma un com&lejo insolule en soluci*n acuosa con el cristal %ioleta. La me+cla de alcoolacetona 'ue se agrega, sir%e &ara reali+ar la decoloraci*n, a 'ue en la misma es solule el com&lejo /2bcristal %ioleta. Los organismos 8ram &ositi%os no se decoloran, mientras 'ue los 8ram negati%os s> lo acen. Kara &oner de maniesto las c7lulas 8ram negati%as se utili+a una coloraci*n de contraste. Zaitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. es&u7s de la coloraci*n de contraste las c7lulas 8ram negati%as son rojas, mientras 'ue las 8ram &ositi%as &ermanecen a+ules. La safranina &uede o no utili+arse, no es crucial &ara la t7cnica. #ir%e &ara acer una tinci*n de contraste 'ue &one de maniesto las acterias 8ram negati%as. Al t7rmino del &rotocolo, las 8ram &ositi%as se %er@n a+ul%iol@ceas las 8ram negati%as, se %er@n rosas (si no se i+o la tinci*n de contraste) o rojas (si se us*, &or ejem&lo, safranina). Esta im&ortante coloraci*n diferencial fue descuierta &or Zans Cristian 8ram en 144?. En este m7todo de tinci*n, la extensi*n acteriana se cure con soluci*n de uno de los
colorantes de %ioleta de metilo, 'ue se deja actuar durante un la&so determinado. #e escurre luego el exceso de %ioleta de metilo se aade luego una soluci*n de odo, 'ue se deja durante el mismo tiem&o 'ue la anteriorW des&u7s se la%a el &ortaojetos con alcool asta 'ue 7ste no arrastre m@s colorante. #igue a tal tratamiento una coloraci*n de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, &ardo Sismarc;, &ironin S o asta inclusi%e %erde de mala'uita.
YC*mo se si mi &ruea sali* negati%a o &ositi%a_ Ex&lica Y&or'ue_ La tinci*n de 8ram es usada &ara clasicar acterias sore la ase de sus formas, tamaos, morfolog>as celulares reacci*n 8ram (color). A ni%el del laoratorio es Ttil como test &ara un r@&ido diagn*stico &resunti%o de agentes infecciosos, tanto en muestras como en culti%os en crecimiento, adicionalmente sir%e &ara %alorar la calidad de la muestra cl>nica. Las acterias se tien gram &ositi%as (), gram negati%as (^) o no se tien deido a sus diferencias en la com&osici*n de su &ared ar'uitectura celular. Las acterias gram () tienen una gruesa ca&a de &7&tidoglucano gran cantidad de @cidos teic*icos 'ue no son afectados &or la decoloraci*n con alcool bo acetona, reteniendo el colorante inicial acom&lejado con iodo %isuali+@ndose en distintos grados de tonos desde el %ioleta al a+ul claro, de&endiendo de si la naturale+a de su &ared celular est@ intacta o daada (&or tratamientos antii*ticos, edad celular). Las acterias gram (^) tienen en su &ared celular una delgada ca&a de &e&tidoglucano ligada a una memrana externa &or mol7culas de li&o&olisac@ridos. Esta memrana externa es daada &or el alcool bo acetona de la decoloraci*n, &ermitiendo 'ue el &rimer colorante
acom&lejado con iodo esca&e sea reem&la+ado &or el contracolorante.
Krocedimiento de como se reali+a esta tinci*n(8ram) &écnica de la coloraci6n gram
(i%ar un !roti"
Con la auda de un mecero, Uamear un asa acteriol*gica es&erar 'ue enfr>e un &oco. Oomar Oomar el asa (&re%iamente (&re%iamente Uameada) Uameada) con 7sta tomar un &oco de muestra. Pna %e+ otenida una &e'uea cantidad de la muestra (con el asa), acer 'ue 7sta tenga contacto con una l@mina &ortaojetos, la cual ser%ir@ &ara de&ositar la muestra contenida en el asa. Con el asa (conteniendo la muestra) sore la l@mina &ortaojetos, &roceder a reali+ar la extensi*n de la muestra en el &ortaojetos mediante mo%imientos giratorios (dar %ueltas con el asa) sore la l@mina, de tal forma 'ue al terminar la extensi*n, tengamos como &roducto una es&iral en la &arte media de la l@mina. Es&erar 'ue se'ue al aire lire o audarse con la llama de un mecero &ara jar la muestra, teniendo en cuenta 'ue el calor no dee ser directo (s*lo se &asa &or la llama), &uesto 'ue el calor excesi%o &uede camiar la morfolog>a celular de las acterias a oser%ar. El calor deseale es a'u7l en el 'ue el &ortaojetos sea a&enas demasiado caliente &ara ser colocado sore el dorso de la mano.
&inci6n
Con %ioleta cristal, %ioleta de genciana, a+ul de metileno o en todo caso tinta cina utili+ando una cantidad suciente de dico colorante sore la muestra, como &ara lograr curirla &or com&leto. #e deja actuar al colorante &or 1 minuto. Esta tinci*n de 1 minuto est@ dada &ara traajar a una tem&eratura amiente de 2 pC. 8n%uague
Al transcurrir el minuto, se dee enjuagar la l@mina conteniendo la muestra con agua corriente. Kara reali+ar el la%ado, se dee tener en cuenta 'ue el corro de agua V dee caer directamente sore la muestra, 7sta dee caer sore la &arte su&erior de la l@mina 'ue no contiene muestra. El corro dee ser un corro delgado, a&roximadamente de medio a un mil>metro de es&esor. Oami7n el enjuague se dee reali+ar &oniendo la l@mina &ortaojetos en &osici*n inclinada acia aajo... La soluci*n de cristal %ioleta, se recomienda sea al 1\ .
Mordiente
Pna %e+ enjuagado el &ortaojetos, se a&lica como mordiente odo o lugol durante = minuto m@s. El mordiente es cual'uier sustancia 'ue forma com&uestos insolules con colorantes determina su jaci*n en las acterias.. 7ecoloraci6n >pa"o critico@
Kasado el minuto de aer actuado el mordiente, el frotis se decolora con etanol al N \, etanol al 5 \, acetona o
alcoolacetona, asta 'ue a no escurra m@s l>'uido a+ul. Kara esto se utili+a el gotero del frasco del decolorante. #e %an aadiendo cantidades sucientes del decolorante, asta lograr 'ue 7ste salga totalmente trans&arente, es decir, asta 'ue a no escurra m@s l>'uido a+ul. 1a4ado C "ecado
La%ar con agua &ara 'uitar los residuos de decolorante es&erar 'ue se'ue la l@mina al aire lire o con la auda de la llama de un mecero de la forma anteriormente descrita. &inci6n de contra"te
Pna %e+ 'ue la l@mina a sec*, &rocedemos a teir nue%amente, &ero esta %e+ se %a a utili+ar un colorante de contraste como &or ejem&lo la safranina, dejar actuar durante 1 minuto. Nue4o en%uague
Kasado el minuto corres&ondiente, se &rocede a enjuagar la l@mina con agua, se escurre el agua sorante se seca en la forma anteriormente descrita. e esta manera, a tendremos listo el frotis &ara su res&ecti%a oser%aci*n microsc*&ica.
Metodología 5ue "e utiliza en la tinci6n de Gram
6ecoger muestras.
Zacer el extendido en es&iral.
ejar secar a tem&eratura amiente o jarlas utili+ando un mecero.
9ijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (Uameado = %eces a&rox.)
Agregar a+ul %ioleta (cristal ( cristal %ioleta o %ioleta o %ioleta de genciana) es&erar 1 min. Oodas las c7lulas gram &ositi%as gram negati%as se tien de color a+ul&ur&ura.
Enjuagar con agua.
Agregar lugol lugol es&erar entre 1 minuto.
Enjuagar con agua.
Agregar acetona acetona bo bo alcool alcool es&erar asta 4 a 1 segundos a&roximadamente(&arte critica de la coloracion) Enjuagar con agua. Oinci*n Oinci*n de contraste contraste agregando safranina safranina o o fucsina fucsina @sica @sica es&erar ? segundos. Este tinte dejar@ de color rosadoroji+o las acterias 8ram negati%as.
Etilidade" de la tinci6n de Gram En el an@lisis de muestras cl>nicas suele ser un estudio fundamental fundamental &or cum&lir %arias funcionesR /denticaci*n &reliminar &reliminar de la acteria causal de la infecci*n. Ptilidad como control calidad del aislamiento acteriano. Los morfoti&os acterianos identicados en la tinci*n de 8ram se deen de corres&onder con aislamientos acterianos reali+ados reali+ados en los culti%os. #i se oser%an maor nTmero de formas acterianas 'ue las aisladas a 'ue reconsiderar los medios de culti%os em&leados as> como la atm*sfera de incuaci*n. A &artir de la tinci*n de 8ram &ueden distinguirse %arios morfoti&os distintosR Los cocos son de forma esf7rica. Kueden a&arecer aislados des&u7s de la di%isi*n celular (Micrococos), a&arecer &or &ares (i&lococos), formar cadenas (Estre&tococos), (Estre&tococos), o agru&arse de manera irregular irregular (Estalococos). Los acilos &oseen forma alargada. En general suelen agru&arse en forma de cadena (Estre&toacilos) o en em&ali+ada.
Oami7n Oami7n &ueden &ueden distinguirse los los es&irales, 'ue se clasican clasican en es&irilos si son de forma r>gida o es&iro'uetas si son landas onduladas. #i &or el contrario, &oseen forma de ]coma], o cur%ados, entonces se los designa %irios.
9undamentos de diferenciaci*n de 8ram &ositi%o 8ram negati%o Los fundamentos de la t7cnica se asan en las diferencias entre las &aredes celulares de las acterias 8ram &ositi%as 8ram negati%as La &ared celular de las acterias 8ram &ositi%as &osee una gruesa ca&a de &e&tidoglicano, adem@s de dos clases de @cidos teicoicosR Anclado en la cara interna de la &ared celular unido a la memrana &lasm@tica, se encuentra el @cido li&oteicoico, m@s en la su&ercie, el @cido teicoico 'ue est@ anclado solamente en el &e&tidoglicano (tami7n conocido como mure>na) Kor el contrario, la ca&a de &e&tidoglucano de las 8ram negati%as es delgada, se encuentra unida a una segunda memrana &lasm@tica exterior (de com&osici*n distinta a la interna) &or medio de li&o&rote>nas. Oiene una ca&a delgada de &e&tidoglicano unida a una memrana exterior &or li&o&rote>nas. La memrana exterior est@ eca de &rote>na, fosfol>&ido li&o&olisac@rido. Kor lo tanto, amos ti&os de acterias se tien diferencialmente deido a estas direrencias constituti%as de su &ared. La cla%e es el &e&tidoglicano, a 'ue es el material 'ue conere su rigide+ a la &ared celular acteriana, las 8ram &ositi%as lo &oseen en muca maor &ro&orci*n 'ue las 8ram negati%as.
La diferencia 'ue se oser%a en la resistencia a la decoloraci*n, se dee a 'ue la memrana externa de las 8ram negati%as es solule en sol%entes org@nicos, como &or ejem&lo la me+cla de alcoolbacetona. La ca&a de &e&tidoglucano 'ue &osee es demasiado delgada como &ara &oder retener el com&lejo de cristal %ioletabodo 'ue se form* &re%iamente, &or lo tanto este com&lejo se esca&a, &erdi7ndose la coloraci*n a+ul%iol@cea. Kero &or el contrario, las 8ram &ositi%as, al &oseer una &ared celular m@s resistente con maor &ro&orci*n de &e&tidoglicanos, no son susce&tiles a la acci*n del sol%ente org@nico, sino 'ue este actTa desidratando los &oros cerr@ndolos, lo 'ue im&ide 'ue &ueda esca&arse el com&lejo cristal %ioletabodo, %ioletabodo, manteniendo la coloraci*n a+ul%iol@cea.
&ema: “Recuentto en placa” /ntroducci6n
0tro" método" para contar mciroorgani"mo" Medida del crecimiento microiano Kodemos medir el crecimiento microiano siguiendo diferentes &ar@metros algunos de los cuales &resentar7 a continuaci*n. o deemos ol%idar 'ue en condiciones de crecimiento e'uilirado todos los &ar@metros del culti%o e%olucionan de forma &ro&orcional , &or consiguiente, midiendo uno de ellos (el de medida m@s f@cil) &odemos medir el resto.
En este a&artado re%isaremos los &rinci&ales m7todos de recuento de microorganismos. Pna informaci*n m@s com&leta &uede encontrarse en la conexi*n M7todos de recuento. Los m7todos &ara el seguimiento de la e%oluciy&on de un culti%o microiano &ueden clasicarse en directos e indirectos. Los m7todos directos se asan en la medida de la e%oluci*n del nTmero de c7lulas %i%as (t7cnicas de &la'ueo) o del nTmero de &art>culas (t7cnicas microsc*&icas de contadores de &art>cuas). Ls m7todos indirectos se asan en la medida de algTn &ar@metro del culti%o 'ue nos &ermite deducir informaci*n sore la e%oluci*n del nTmero de microorganismos. La elecci*n de un m7todo de seguimiento del culti%o en concreto de&ende de las caracter>sticas del culti%o del &roceso. Entre los m7todos &rinci&ales de recuento de microrganismos &odemos destacarR 1. Las t7cnicas de recuento microsc*&ico de c7lulas sin jar usando microsco&>a de contraste de fae. Kara ello se cuenta el nTmero de &art>culas en un %olumen determinado usando una c7lula de KetroZauser o de euauer (&ortaojetos modicado en e 'ue una rejilla nos &ermite conocer el %olumen 'ue estamos oser%ando). El &rocedimiento es r@&ido sencilloW &ero no &ermite distinguir c7lulas %i%as inm*%iles de c7lulas muertas. 2. Contaje de &art>culas utili+ando sistemas autom@ticos del ti&o Coulter Counter. La o&eraci*n de estos sistemas es sencilla (m7todo de em&leo) &ermite r@&idamente determinar el nTmero de &at>culas &resentes en una sus&esi*n la distriuci*n de sus tamaos. El &rolema es 'ue no distingue entree c7lulas %i%as muertas ni entre c7lulas agregados de material insolule &resente en la sus&ensi*n del culti%o.
=. O7cnicas de recuento en &laca, asadas en colocar en un medio de cultui%o adecuado un %olumen determinado de muestra. Cada una de las c7lulas aisladas dar@ lugar, des&u7s de la incuaci*n corres&ondiente, a una colonia de forma 'ue el nTmero de estas nos &ermitir@ estimar el nTmero de c7lulas &resentes en la muestra &la'ueada (semrada). El sistema es f@cil de utili+ar en el caso de c7lulas aisladas (no sir%e en el caso de ongos lamentosos, &or ejem&lo). Kuede reali+arse semrando en su&ercie (extendiendo un %olumen dado de muestra sore el medio de culti%o s*lido) o en &rofundidad (me+clando un %olumen dado de muestra con el medio de culti%o antes 'ue solidi'ue). Esta Tltima o&ci*n &ermite reali+ar el recuendto de microorganismos microaer*los 'ue no crecen ien en la su&ercie de las &lacas de culti%o. Kara 'ue el sistema de recuento en &laca tenga %alide+ estad>stica, es necesario contar entre =0 =00 colonias con ojeto de disminuir el error de la medida. ?. O7cnicas turidom7tricas asadas en la medida de la turide+ de los medios de culti%o en los 'ue crecen microorganismos unicelulares. La turide+ es &ro&orcional a la masa de las &art>culas en sus&ensi*n (c7lulas) su medida nos &ermite estimarla. Kara ello se utili+a un e'ui&o similar al 'ue se em&lea en la medida de la asorancia de lu+ &or disoluciones coloreadas (color>metro, &or ejem&lo). Las medidas se acen a una longitud de onda adecuada (normalmente en el entorno de 0 nm) los %alores se suelen denominar %alores de densidad *&tica. La limitaci*n de este sistema, &or otra &arte mu sencillo, es 'ue no distingue c7lulas %i%as de muerta 'ue normalmente no es ca&a+ de detectar densidades celulares menores a 10.000 c7lulas &or mililitro. . Medida de &eso seco. El sistema consiste en la ltraci*n del culti%o a tra%7s de una memrana 'ue retenga las c7lulas su &osterior desecaci*n asta &eso constant. El sistema, o%iamente, no disferencia c7lulas %i%as de muertas su sensiilidad es limitada.
<. Medida del AOK. Es una medida relati%amente sencilla asada en la emisi*in de lu+ &or la luciferasa de luci7rnaga (Kotimus &ralis) en &resencia de V2 de AOK. e esta forma se &uede medir la concentraci*n de AOK en un %olumen dado de culti%o. Esta medida es interesante &or'ue la concentraci*n de AOK decae r@&idamente en las c7lulas muertas, de forma 'ue esa medida indirecta detecta Tnicamenta las c7lulas %i%as. Los sistemas de medida del crecimiento celular se an ada&tado t7cnicamente &ara &oder ser utili+ados como sistemas online. En una o&raci*n on line no es necesario extraer la muestra del culti%o &ara reali+ar la medida. Esto es mu im&ortante en el caso de fermetaciones en gran %olumen &or'ue &ermite reali+ar medidas en tiem&o real disminue los riesgos de contaminaci*n. Antes de cerrar este a&artado a 'ue sealar 'ue en la naturale+a a muc>simos m@s microorganismos de los 'ue &odemos detectar &or la maor>a de los sistemas de recuento. e eco, se estima 'ue en el suelo o en el agua &odemos culti%ar Tnicamete &ro&orciones menores al 1\ de los microorganismos %i%os. Esto es deido a %arias causas entre las 'ue se cuenta la falta de medios de culti%o adecuado, la de&endencia de otros microorganismos &ara el culti%o deido a &rocesos de sintrof>a la oligotrof>a (iniici*n &or altas concentraciones de nutrientes) 'ue muestran algunos microorganismos.
isoluciones =.?.1.1 9undamento En general los recuentos acterianos ajos est@n asociados con alimentos seguros. La maor>a de los alimentos industriali+ados (exce&to, &or ejem&lo, los &roductos fermentados) deen ser considerados como inadecuados &ara el consumo cuando contienen un gran nTmero de microorganismos aun cuando estos microorganismos no sean
conocidos como &at*genos no aan alterado de forma a&reciale los caracteres organol7&ticos del alimento. Algunos microi*logos an estimado el recuento acteriano como uno de los mejores indicadores del grado de alteraci*n de los alimentos.
=.?.1.2 Material El necesario &ara acer disoluciones de la muestra (%er &rotocolo de disoluciones). Klacas de Ketri &i&etas de 10 mL 1 mL, est7riles. Agar tri&tosaglucosaextracto de le%adura (Klate count agar) fundido, en el ao termost@tico a ?pC, est7ril.
=.?.1.= Kre&araci*n del medio, incuaci*n ex&resi*n de resultados Zacer disoluciones disoluciones de la muestra al 1b10. 1b100.etc, segTn estime el grado de contaminaci*n. Koner 1mL de cada disoluci*n decimal en &lacas de Ketri (&or du&licado). Aadir 1 mL de medio de culti%o (fundido, a ?pC en un ao termost@tico) dar mo%imientos circulares de %ai%7n &ara 'ue se distriua la muestra uniformemente. /ncuarR una serie de &lacas a 20pCb = d>as (&sicr*los) otra serie de &lacas a =pCb 2 d>as (mes*los). Kara incuar las &lacas introducirlas in%esrtidas en la estufa. Kasado el &er>odo de incuaci*n contar las &lacas 'ue tengan entre =0 =00 colonias.
Ex&resar el resultado en ufcbg de alimento. Kara ello se cuenta el du&licado se alla la media, multi&lic@ndose &or la in%ersa del factor de diluci*n en el 'ue se reali+* el recuento. Oami7n Oami7n es adecuado adecuado ex&resar ex&resar el el resultado resultado calculando calculando el logaritmo del %alor anterior log ufcbg.
8losario Metalosimo El metaolismo es el conjunto de reacciones io'u>micas &rocesos f>sico 'u>micos 'ue ocurren en una c7lula en el organismo.1 Estos com&lejos &rocesos interrelacionados interrelacionados son la ase de la %ida a escala molecular, &ermiten las di%ersas acti%idades de las c7lulasR crecer, re&roducirse, mantener sus estructuras, res&onder a est>mulos, etc Gluco"a
La glucosa es un monosac@rido con f*rmula f*rmula molecular Cas &or cada gramo en condiciones est@ndar. Es un is*mero 'ue la fructosa, con diferente &osici*n relati%a relati%a de los gru&os VZ V
$iclo de Lreb"
El ciclo de res (tami7n llamado ciclo del @cido c>trico o ciclo de los @cidos tricarox>licos) tricarox>licos) es una ruta meta*lica, es decir, una sucesi*n de reacciones 'u>micas, 'ue forma &arte de la res&iraci*n celular en todas las c7lulas aer*icas. En c7lulas eucariotas se reali+a en la mitocondria. En las &rocariotas, el ciclo de res se reali+a en el cito&lasma, es&ec>camente en el citosol. 8nizma"
Las en+imas1 son mol7culas de naturale+a &roteica 'ue catali+an reacciones 'u>micas, siem&re 'ue sean termodin@micamente &osilesR una en+ima ace 'ue una reacci*n 'u>mica 'ue es energ7ticamente energ7ticamente &osile (%er Energ>a lire de 8is), &ero 'ue transcurre a una %elocidad mu aja, sea cin7ticamente cin7ticamente fa%orale, es decir, transcurra a maor %elocidad 'ue sin la &resencia de la en+ima.2 = En estas reacciones, las en+imas actTan sore unas mol7culas denominadas denominadas sustratos, las cuales se con%ierten en mol7culas diferentes
denominadas denominadas &roductos. Casi todos los &rocesos en las c7lulas necesitan en+imas &ara 'ue ocurran a unas tasas signicati%as. A las reacciones mediadas &or en+imas se las denomina reacciones en+im@ticas.
tt&Rbb:::.a1?.san.g%a.esblaoratoriobQebgram.tm tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ibKrue tt&Rbbes.:i;i&edia.orgb:i;ibKrueaio'u\C= aio'u\C=\Amica \Amica tt&Rbb:::.monograas.combtra tt&Rbb:::.monograas.combtraajos511b&rueasio' ajos511b&rueasio'uimicasb&rueas uimicasb&rueas io'uimicas.&df
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