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Metodo cono de arenaDescripción completa
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geoteknik
Descripción: Densidad
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biofarmasi
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Digestibilidad in situ MZD Miguel F Zamudio Delgado
Digestibilidad in situ •
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Consiste en colocar dentro del rumen bolsas de tela sintética con el alimento que se pretende evaluar Las bolsas permanecerán en el rumen tiempos crecientes de 0 a 72 horas Generalmente se introducen al rumen en orden inverso, primero las de 72 horas y al final las de 3, 2, o 1 h
Digestibilidad in situ
Digestibilidad in situ
Digestibilidad in situ •
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El orden inverso es para retirar las bolsas el mismo tiempo Se lavan con agua (puede ser en lavadora) Por cada tiempo de incubación se debe agregar una bolsa de las mismas características que las que contienen muestra pero vacía. Esto servirá para estimar la adherencia de bacterias y otros componentes presentes en el rumen
Digestibilidad in situ •
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No se necesitan reactivos pero si animales canulados Se obtienen valor de digestibilidad a diferentes tiempos de incubación que tiene ventajas sobre la digestibilidad in vivo en la que se obtiene un solo dato Por ser varios datos es necesario utilizar un modelo matemático para interpretarlos
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Los resultados son similares a los que se obtienen con la cinética enzimática de Michaelis La máxima digestibilidad corresponde a Vmax El tiempo medio de degradación corresponde a la constante de Michaelis, Km Además se puede utilizar un modelo matemático que estima la fase LAG, que es el tiempo que las bacterias tardan en iniciar la degradación del alimento Así como en cinética enzimática se utiliza la ecuación de Lineweaver-Burk en Digestibilidad in situ se utiliza este otro modelo
Cinética enzimática
La Vmax empíricamente es difícil de obtener
MZD
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MZD
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Procedimiento para el uso del modelo –
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En orden descendente se escriben los tiempos de incubación y sus correspondientes porcentajes de desaparición En la siguiente columna se escribe el porcentaje de desaparición considerando la desaparición máxima como el 100 % (desaparición potencial) En la siguiente columna se escribe la diferencia entre 100 y la desaparición potencial y se obtiene el logaritmo natural del resultado que se escribe en la siguiente columna (LN del residual de la MS degradable) Se realiza una ecuación de regresión donde el tiempo es la variable independiente “x” y la desaparición la dependiente “y”
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Para realizar esta gráfica se utiliza la ecuación de la línea, que normalmente se estudia en la preparatoria en la materia Geometría Analítica
y = m x + b MZD
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y = m x + b Donde: •
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y = variable dependiente m = pendiente de la línea b = intercepto en el eje de la y MZD
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La pendiente (m) se calcula con la siguiente ecuación:
O más fácil la suma de productos de x y, entre la suma de cuadrados de x En nuestro caso x es 1/[S] y y es 1/Vo MZD
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El intercepto en y se calcula:
Donde y y x barra son los promedio de los valores de x y y MZD
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Finalmente y solo para estimar que tan relacionadas están los valores de x con los valores de y se calcula r
O más fácil la suma de productos de x y, entre la raíz de suma de cuadrados de x por la raíz de la suma de cuadrados de y Si r = 1 (o – 1) la correlación es perfecta, si r = 0 es desastrosa (no existe correlación), si r esta cercana a 0 la correlación es baja si esta cercana a 1 (o -1) es alta
MZD
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Una vez realizada la ecuación de regresión se obtiene: –
Tiempo medio = 0.693/m
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Fase LAG = (LN (100)- b)/m
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Degradación/hora = -m
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Degradación máxima = la obtenida en el tiempo máximo de incubación
Digestibilidad in vitro Tilley y Terry 1963 •
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Se realiza por triplicado en tubos de ensaye con tapón que permite la salida de gases, se utilizan blancos para corregir MS procedente del fluido ruminal Se utiliza 20 % de líquido ruminal Y 80 % de solución amortiguadora (saliva de McDougall) Las incubaciones para todos los tiempos se preparan al mismo tiempo, según los tiempos de incubación se para la fermentación por refrigeración
Digestibilidad in vitro •
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(Mertens y Loften, 1980)
R = Doe k(t-L) + U
Donde t > L y R = D0 + U, donde, 0 < t < L, donde: R = residuo de MS o FDN al tiempo de incubación = t; D0 = fracción digestible en el tiempo t ≤ L , D0 = R – U; k = constante de grado de digestión; L = tiempo discreto lag; U = fracción indigestible.
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Para calcular el tiempo discreto lag: D0 = D´´ e k(t-L), ln D0 = LnD´´ -k(L); L = (ln D0 – ln D´´)/ -k, donde, D´´ = intersección de la ecuación de ln (RU) sobre el tiempo al tiempo t = 0. La MS o FDN residual en cada tiempo de incubación se usa para hacer un modelo de regresión no linear empleando el procedimiento PROC NLIN (SAS, 1999)
Variable X 1 Curva de regresión ajustada 5 4.5 4 3.5 3 Y
Y2.5
Pronóstico para Y 2
Lineal (Pronóstico para Y)
1.5 1 0.5 0 0
10
20
30 Variable X 1
40
50
60
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Una vez realizada la ecuación de regresión se obtiene: –
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Tiempo medio = 0.693/m; 693/-0.0456 = 15.2 h Fase LAG = (LN 100)- b]/m; (4.605 – 4.54)/0.0456 = -1.42 h (si LAG negativo entonces = 0 Degradación/hora = - m = 0.045 o 4.5% Degradación máxima = la obtenida en el tiempo máximo de incubación = 71.31 %
Digestibilidad por producción de gas •
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Se realiza por triplicado o quintuplicado en frascos de vacuna de 100 mL con tapón hermético a 39 oC El medio tiene 10% de líquido ruminal y 90% de solución amortiguadora La solución debe estar en anaerobiosis, como indicador se utiliza resazurina Se mide la producción de gas por desplazamiento de agua (a 39oC) O por medio de un medidor de presión y el uso de una ecuación de regresión para transformarla a volumen
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Desventajas –
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Más sensible a la presencia de oxígeno que la digestibilidad in vitro (Tilley y Terry, 1963) Es necesario hacer mediciones durante la noche Las condiciones de obtención del líquido ruminal son más estrictas Parte del gas obtenido no se debe a su producción sino a la neutralización de los AGV (AGCC)
Digestibilidad por producción de gas •
Ventajas –
La misma muestra se utiliza para las primeras mediciones que para la última
No es necesario obtener los residuos por cada tiempo de incubación
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Se pueden determinar los componentes del gas producido
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Se puede incubar con estimulantes o inhibidores de la fermentación
Modelos para graficar datos de producción de gas in vitro (Pitt et al 1999)
