DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS

DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS 1. INTRO NTRODU DUC CCIÓ CIÓN Las transaminasas o amino transferasas son enzimas que catalizan la transferencia de un grupo amino de un aminoácido a un cetoácido (reacción de transaminación), requieren de un grupo prostético: el fosfato de piridoxal para su acción catalítica. Niveles bajos se detectan en pacientes dializados o con deficiencia de vitamina B6. Existen Existen transami transaminasa nasas s de interés interés clínico ya que los valores valores de sus concent concentraci raciones ones en suero suero son empleados como indicadores de enfermedades cardíacas o hepáticas. Las transaminasas se encuentran presentes en todos los tejidos pero en altas concentraciones en hígado, músculo esquelético, esquelético, riñón, glóbulos glóbulos rojos y corazón. Su aumento se asocia asocia con enfermedades enfermedades que afectan dichos tejidos, tales como: hepatitis, cirrosis, infarto del miocardio, etc.

GOT

GPT

L - aminoácido

Cetoácido

1

L - aminoácido del cetoácido 1

1

Cetoácido del aminoácido 1

Fosfato Fosfato de piridoxa piridoxal: l: es una coenzima coenzima derivada derivada de la Vitamina Vitamina B 6 (pirido (piridoxina xina)) cuya función función es la transferencia de grupos amino en la reacción de transaminación. Por ejemplo el alfa – cetoglutarato recibe el grupo amino del fosfato de piridoxal para formar glutamato.

2.

FUNDAMEN MENTO

La determinación de la transaminasa transaminasa glutámico oxalacética o aspartato aminotransferasa aminotransferasa (GOT) se basa en la siguiente reacción: GOT

L – aspartato + alfa – cetoglutarato

Glutamato + Oxalacetato Fosfato de piridoxal

+ NH2

La determinación de la transaminasa glutámico pirúvica o alanina aminotransferasa (GPT) se basa en la siguiente reacción: GPT

L – alanina + alfa – cetoglutarato

Glutamato + Piruvato

Fosfato de piridoxal

+ NH2

Reacción química de coloración medio alcalino

Oxalacetato o Piruvato + 2,4 – dinitrofenilhidrazina

Hidrazona (cromógeno)

3. PROCE ROCEDI DIMI MIE ENTO NTO Tubo Blanco Sustrato para GOT/corazón Sustrato para GPT/hígado

Tubo GOT

Tubo GPT

500 µl

500 µl

-- -

-- -

---

500 µl

Incubar por 3 minutos a 37ºC.

Agua destilada Muestra (suero)

100 µl -- -

--200 µl

-- 100 µl

500 µl

500 µl

5 ml

5 ml

Incubar por 30 minutos a 37ºC Rvo. de color

500 µl

Incubar por 20 minutos a temperatura ambiente NaOH 0,4N

5 ml

Leer las absorbancias en el espectrofotómetro a λ= 505 nm.

4. RESUL ESULTADOS DOS ABS GOT = 0.052 ABS GPT = 0.044 ABS BLANCO = 0.000 Determinar Determinar la actividad de las transaminasa por interpolación de las absorbancias absorbancias obtenidas en la curva de calibración.

5. VALOR ALORES ES DE REF REFER EREN ENCI CIA A GOT = 5 U/I – 40 U/I GPT = 5 U/I – 45 U/I

6. IMPO IMPOR RTANCI ANCIA A CLÍ CLÍNI NICA CA

Los niveles aumentados de GPT pueden indicar: -

Alcoholismo Anemia he hemolítica Cáncer de de hí hígado Cirrosis

Distrofia muscular Enfe Enferm rmed edad ades es rena renale les s agu aguda das s Enfe Enferm rmed edad ades es musc muscul ular ares es prim primar aria ias. s. Enfermedad de de Wi Wilson

Hepatitis viral

Infe Infecc ccio ione nes s víric víricas as (mon (monon onuc ucle leos osis is,, ...) ...) Inte Interv rven enci cion ones es de ciru cirugí gía a car cardi diac aca a Isquemia he hepática Medi Medica came ment ntos os tóxi tóxico cos s del del híga hígado do

Necrosis hepática Pancreatitis aguda

Traumatismos musculares

Los niveles aumentados de GOT pueden indicar: -

Alcoholismo Anemia he hemolítica Cole Colest stas asis is (ob (obst stru rucc cció ión n de vía vía bil bilia iar) r)

Cirrosis

Enferm ermedad dades muc mucu ular lares

Hepatitis

Infe Infecc ccio ione nes s víric víricas as (mo (mono nonu nucl cleo eosi sis, s, ...) ...)

Infarto de miocardio

Inte Interve rvenc ncio ione nes s de de cir cirug ugía ía card cardia iaca ca Isquemia he hepática Medi Medica came ment ntos os tó tóxico xicos s del del híga hígado do Pancreatitis aguda Tumor hepático