CONTAJE DE RETICULOCITOS Los reticulocitos son eritrocitos juveniles que contienen remanente de ácido ribonucleico ribosomal, el cual está presente en grandes cantidades en el citoplasma de los eritrocitos. El número de reticulocitos en sangre periférica es un reflejo del grado de actividad eritropoyética. Los ribosomas tienen la propiedad de reaccionar con ciertos tintes tales como azul brillante de cresilo, azure B o nuevo azul de metileno, formando un precipitado azul de gránulos o filamentos. Esta reacción se produce solo en preparaciones vitales no fijadas. El reticulocito, mientras más inmaduro, va a presentar mayor cantidad de material precipitado. De acuerdo a la cantidad del material, se clasifican los eritrocitos en 4 grupos de maduración. El recuento se puede realizar por tinción y examen microscópico o contadores hematológicos. La muestra que se utiliza es sangre total con EDTA. Este examen debe ser realizado dentro de las 6 horas de trabajo en el laboratorio. Contaje Manual:
Se mezclan volúmenes iguales de sangre con EDTA y tres gotas del colorante (azul brillante de cresilo). La exacta cantidad de sangre que se utiliza, depende del estado de salud del paciente (en anemia, requiere mayor cantidad de sangre, paciente poliglobúlicos requiere menor cantidad de sangre. Colocar a 37 ºc, por 5 min (establece laboratorio el tiempo) Resuspendo las células con una ligera agitación Se realiza un frotis, en el portaobjetos Dejar secar el frotis. Observar con lente 40 x y 100x (inmersión). 1
Para el contaje se ubica un área donde las células no están distorsionadas. Es incorrecto realizar frotis delgados donde las células estén muy separadas. En un frotis adecuado buscamos campos donde las células no estén demasiado sobremontadas. Se cuentan 10 campos de 100 glóbulos rojos bien distribuidos y dentro de esos 10 campos cuántos reticulocitos fueron contados?? Se saca por regla de tres: 1000 GR
70
100
X = 7%
El valor referencia de reticulocitos en recién nacido de 2-6 % y en adulto 0.5 a 2.0 %. Cuando disminuye el número de eritrocitos tal como sucede en una anemia, el valor porcentual debe corregirse según el hematocrito empleando la siguiente fórmula: Hct paciente / Hct normal x valor de reticulocitos observados en % = reticulocitos corregidos %. En caso de anemia intensa, el número de reticulocits circulantes suele ser superior al que corresponde al grado de regeneración eritroblástica. Ello obedece a que la anemia se acompaña siempre de un estímulo eritropoyético compensador, que facilita una salida precoz de reticulocitos desde la médula a sangre periférica, y un acortamiento de su periodo de maduración intramedular, lo que supone un aumento del periodo de maduración periférica. Con esto se observará en sangre 2
periférica con tinción Wright, glóbulos rojos grandes (macrocitos) y de una tonalidad azulada (policromasia). Como se observa existe una relación inversa, aproximadamente lineal, entre el hematocrito y el periodo de maduración periférica de reticulocitos. De esta forma puede calcularse otra magnitud de interés clínico denominada índice de producción reticulocitaria (IPR) o índice de maduración reticulocitaria (IMR) Cuanto más severa es la anemia más inmaduro es el reticulocito liberado, por tanto el IPR es el indicador más preciso de una adecuada respuesta medular frente a la anemia. HEMATOCRITO
DÍAS DE MADURACIÓN DÍAS DE MADURACIÓN EN MO EN SP
15 25 35 45
1 2 2 3
3 2 1½ 1
IPR = % reticulocitos corregidos/tiempo de maduración de los reticulocitos en mo. Un IPR > 3 indica aumento de actividad eritropoyética medular (anemia regenerativoa), mientras que un IPR < 2 indica escasa actividad eritropoyética. CAUSAS DE ERROR EN UN RECUENTO VISUAL DE RETICULOCITOS.
Relación sangre/colorante insuficiente Realizar un recuento sobre un mínimo reducido de eritrocitos. 3
Realizar el recuento en áreas donde los eritrocitos se hallan mal distribuidos o mal inidvidualizados. Confundir los precipitados de ARN con cuerpos de Heinz, cuerpos de Howell.Jolly, precipitados del propio colorante. En casos de esplenectomía, confundir las inclusiones intraeritrocitarias con reticulocitos. Fuente: Terán Ivette, Dra. Documentos de Laboratorio de Hematología. PUCE. Vives Joan, Aguilar Josep. (2000) Manual de Técnicas de laboratorio de hematología. Masson: España
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