1) Componentes del sabouraud (dextrosa, peptona de caseína, glucosa, agar- agar y carne) a)Sabouraud Glucosado Agar Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.). En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH ácido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Además, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.
b)AGAR SABOURAUD DEXTROSA Este medio de cultivo es utilizado para cultivo de mohos y levaduras patógenas y no patógenas. El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificación a la fórmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patógenos, particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentración de dextrosa y la acidez del pH hacen a éste un medio selectivo para hongos. Con la adición de cicloheximida, estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Este medio es también utilizado para la determinación microbiológica en cosméticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrógeno para el crecimiento de los microorganismos, la dextrosa actúa como fuente de energía y el agar es agregado como agente solidificante.
Compuestos en gramos Dextrosa 40.0 Peptona de Caseína 5.0 Digerido Pancreático de Tejido Animal 5.0 Agar Bacteriológico 15.0
pH 5.6 ± 0.2
2) Tipos de sabouraud
a) Medios para hongos
Agar glucosado de Sabouraud El Agar glucosado de Sabouraud es usado para cultivar hongos y tiene un pH bajo que inhibe el crecimiento de la mayoria de bacterias, además tiene un antibiótico (gentamicina) que inhibe específicamente el crecimiento de bacterias gramnegativas .
Agar Infusión Cerebro Corazón Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo microbiano. La infusión de cerebro de ternera, la infusión de corazón vacuno y la peptona, son la fuente de carbono, nitrógeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el fosfato disódico otorga capacidad buffer.
Agar papa dextrosa es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras a partir de muestras de alimentos, derivados de leche y productos cosméticos.
Agar extracto de malta Tiene un alto contenido de peptona.
b) Dentro de los medios de cultivos para hongos más empleados está el Sabouraud cuyos ingredientes principales son maltosa y peptona,el medio De Czapex-Don compuesto por sales inorgánicas y un azúcar, el medio Littman se usa para el aislamiento inicial del hongo, contiene bilis, cristal violeta y estreptomicina que inhiben el desarrollo de la mayoría de las posibles bacterias contaminantes. A continuación la composición y preparación de algunos medios de cultivos más importantes para hongos: A) Sabouraud dextosa agar : (Tanto para hongos filamentosos como levaduriformes). B) Sabouraud modificado : (Para hongos filamentosos). C) Medio De Czapek-Dox : (Útil en la diferenciación de algunos mohos). D) Medio De Littman : (Para siembra primaria). E) Medio de Conservación. F) Medio De Gorodkowa : (Para esporulación de levaduras, para observar esporas).
G) Otros medios: Agar Harina de Trigo (para hifas y Clamidosporas) Utilizaremos para realizar nuestro microcultivo. Agar Extracto de Malta (para esporulación) Agar Zanahoria (para esporulación). Agar Miel. Agar Harina de Maiz. Medio de Arroz. Agar Acetato, etc.
3) Utilidades del KOH El examen directo con KOH consiste en la toma de muestras: escamas, pelos o fragmentos de uñas, su incubación con hidróxido potásico al 10-30% y su posterior visualización en el microscopio, lo que permite observar la existencia de hifas septadas (dermatofitosis), formas levaduriformes o pseudohifas (candidiasis) que son suficientes para confirmar el diagnóstico. Es el método más sencillo para saber que un hongo es el causante de la infección a estudiar. Esta sustancia sirve para disolver el material de fondo y así poder observar mejor los elementos fúngicos, en algunos laboratorios se añade DMSO (dimetilsulfóxido) en una proporción de 60/4 lo cual facilita la absorción del KOH. Sobre la muestra se coloca un cubreobjetos y se observa con el microscopio de luz a un aumento de 10x ó 20x para localizar las estructuras del hongo y luego estudiamos el campo sospechoso a un aumento de 40x. La luz se debe disminuir y el condensador se pone en una posición baja para poder apreciar mejor los elementos fúngicos los cuales no tienen color; utilizando el negro de clorazol podemos evitar este problema ya que nos da mejor contraste.
4) Como es la técnica de sabouraud de azul de lactofenol, componentes
COMPOSION
Acido láctico Azul de Anilina Glicerina Acido Fénico Agua desionizada Técnica 1. Tratar/aclarar la muestra durante 1 a 15 minutos, en función de la consistencia con 1 a 5 gotas de los álcalis. 2. Añadir agua varias veces y succionar, p. ej. con papel de filtro 3. Añadir de 1 a 2 gotas de solución de azul de lactofenol, colocar el cubreobjetos y teñir , después de 2 minutos observar al microscopio. El material se tiñe por tinción en un paso. Los elementos fungosos aparecenazul oscuro. Nota En caso de material de cultivo sin tratamiento previo añadir de 1 a 2 gotas de solución de azul de lactofenol, colocar el cubreobjetos y teñir así, después de 2 minutos observar al microscopio.