Tecnica para búsqueda de celulas LE materiales: tubos de macro-hematocrito portas frasquito con 4-8 perlas de vidrio y 1 gota de hepaerina jeringa con aguja gruesa, de 15 cm de largo embudo Introduccion:
El Lupus Eritematoso Sistemico es una enfermedad autoinmune, que afecta a muchos tejidos y organos como articulaciones, piel, sistema nervioso, riñon, corazon, pulmon, sangre, higado, bazo y ojos. Las celulas LE son polimorfonucleares que fagocitaron restos nucleares alterado, proveniente de la destruccion del nucleo de otros leucocitos, por el llamado Factor LE (factor nuclear). Este es Ig Ganti ADN que se fija a la superficie del nucleo y determina alteraciones en la cromatina; y entonces al ser recubierto por anticuerpos, es fagocitado por los neutrofilos. El objetivo es hallar neutrofilos que tengan adherido an su superficie restos nucleares, o bien que los restos esten en su interior. Existen 2 metodos (entre otros) A) Metodo sin coágulo: 1- Sacar sangre al paciente, y colocar en frasquito con las perlas que posean 1 gota de heparina. 2- Dejarlo rotar en el agitador por 30 minutos, o bien agitar vigorosamente por 5 a 10 minutos para generar la lisis de leucocitos. 3- Llevar la muestra a estufa de 37 ºC entre 1 a 4 horas, para darle tiempo a los leucocitos enteros a fagocitar los restos de los lisados y que decanten los globulos del plasma. 4- Con la jeringa de aguja larga aspirar la capa de leucocitos, en la interface plasma-globulos rojos y descargar dentro de 2 a 4 tubos de macrohematocrito. 5- Centrifugar a muy baja velocidad (500-1000 rpm), por 5 minutos. 6- Aspirar nuevamente con la jeringa la capa de leucocitosde los tubos, y descargar en los portas, y realizar los extendido con extensor. 7- Colorear por el metodo de May Grunwald - Giemsa y ver con
objetivo de inmersion. B) Método con coágulo: 1- Se sacan unos 5 a 10 ml de sangre y se la deja coagular durante 2 horas a 37 ºC. 2- Centrifufar a 3500 rpm por 10 minutos. 3- Eliminar el suero y depositar el coagulo sobre varias capas de gasa, y éstas sobre un embudo. 4- Aplastar el coagulo con una varilla y recojer el producto en un tubo de ensayo. 5- Pasar el liquido obtenido a un tubo de macrohematocrito con la jeringa con aguja larga, y centrifugar 15 minutos a 2000 rpm. 6- Usando la misma jeringa, eliminar primero el suero, y luego tomar la capa de leucocitos y depositar en portas para hacer extendidos. 7- Colorear por el metodo de May Grunwald - Giemsa y ver con objetivo de inmersion. Observacion e interpretacion: interpretacion:
Buscar los campos bien coloreados y con las celulas bien separadas, evitando lo observacion de celulas "pegoteadas" por efecto de la lisis y la extension. La prueba es positiva cuando se hallan leucocitos que fagocitaron restos nucleares de los lisados, o bien los tenga adheridos en su superficie, que se notara por la diferencia de color entre el resto nuclear y el nucleo de leucocito entero, y se informara "Se observan celulas LE" El "Fenomeno de Roseta" se debe a la adhesion de 2 o mas neutrofilos a un resto nuclear. Es raro de observar, y se debe diferenciar de las celulas "pegoteadas" propias de extendido. La presencia de leucocitos vacuolados no indica necesariamente la presencia de celulas LE, ya que fagocitaron cualquier resto celular. La prueba no es totalmente especifica, debido a que enfermedades autoinmunes tambien generan celulas LE, y no tiene gran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de pacientes con lupus. Esto se explica por el tratamiento con corticoides en estos enfermos, que inhibe la formacion de este fenomeno, por lo actualmente no tiene valor diagostico y es necesario realizar otras pruebas, tal como a
busqueda de anticuerpos, que son mas sensibles y especificas. Algunos laboratorios sugieren que se confirme la presencia de anticuerpos antinucleares (FAN/ANA) antes de buscar e informar las celulas LE, ya que es una tecnica con alto error. Ademas no es especifica para Lupus, y esta cayendo en desuso. Sin embargo, para diagnosticar LES, es uno de los 10-15 parametros a considerar para confirmar la enfermedad. Imagenes de Celulas LE:
Bibliografia: − Guia de trabajos practicos de la Catedra de Hematologia de la UNLP - Asociación Asociación Lupus Argentina – ALUA - http://www.alua.org.ar http://www.a lua.org.ar − Manual de técnicas de laboratorio en hematología - Joan Lluís Vives i Corrons,Josep Lluís Aguilar Bascompte- 3ra edicion,año 2006. editorial Masson origen de las imagenes: − http://www.freeed.net/sweethaven/MedTech/Hematology/lessonMain.asp? iNum=0411
Facultad de medicina de Londres − http://www1.imperial.ac.uk/medicine/divisions/olddivisions/is/hae matology/morphology/bain/images/slide50/
