Bandeo cromosómico En algunas especies los pares cromosómicos no pueden diferenciarse claramente considerando sólo sus componentes distintivos en sentido longitudinal; en estos casos se debe recurrir a técnicas citológicas especiales para la tinción de los cromosomas, que evidencian "bandas" transversales (oscuras y claras) a lo largo de los mismos, y que corresponden a los distintos tipos de cromatina.
Bandeo C: es relativamente sencilla, y se basa en el uso del colorante Giemsa que tiñe regiones con heterocromatina constitutiva, que en vegetales se halla localizada principalmente en regiones teloméricas, mientras que en animales, se encuentra en regiones centroméricas.
Bandeos G, R, Q: son técnicas basadas en tratamientos enzimáticos que ponen de manifiesto distintos patrones de bandas de la eucromatina a lo largo del cromosoma. El material se tiñe con colorante Giemsa (G, R) ó colorantes fluorescentes, como la quinacrina (Q). Son las bandas más estudiadas en animales y en el hombre. En los vegetales son muy difíciles de obtener por el alto grado de empaquetamiento de los cromosomas metafásicos.
Bandeo NOR: permite identificar cromatina con secuencias medianamente repetidas de ADNr, asociada a las regiones NOR del cromosoma. El número total y localización de las regiones NOR es variable, por lo cual, como ya se expresó, además de su importancia funcional tiene valor cariotípico
Cariotipo espectral, el cariograma se obtiene luego de la identificación y clasifciación de los cromosomas. El cariotipo que se muestra corresponde a un individuo de sexo femenino ya que se observan dos
A su vez el bandeo cromosómico, ha permitido presisar la localización de genes aportando información al llamado mapeo genético. Los bandeos cromosómicos hacen posible que se tenga un mayor conocimiento acerca de la estructura cromosómica y de los reordenamientos que se producen en las distintas
alteraciones tales como: fusiones y fisiones céntricas, translocaciones recíprocas y en tandem; inverciones peri y paracéntricas; delecciones; duplicaciones; contricciones secundarias.; gapss, fracturas cromosómicas, etc. Por otro lado permiten realizar estudios evolutivos de especies relacionadas entre si. La
citogenética
estudia
los
cromosomas
en
relación
con
la
herencia.
En 1956 se descubre el número de cromosomas humanos 2n=46. Lo hacen Levan y Tjio, mediante choque hipotónico (Esto hace que la célula se hinche y se visualicen mejor los cromosomas). Anteriormente se creia que los humanos tenian 2n=44 , ya que se observaban sólo 22 bivalentes puesto que el par X-Y no forma bien esta estructura. Sin embargo, con la técnica del choque hipotónico se pudieron visualizar correctamente todos los cromosomas. Los cromosomas sólo son visibles al microscopio en el periodo de división celular, sobre todo en metafase donde alcanzan el mayor grado de condensación. El tejido con más actividad
mitótica
es
la
médula
ósea.
Cuando se hace un cariotipo se usan linfocitos, los cuales normalmente no se dividen. Entonces los estimulamos con PHA (fitohemoaglutina) que es una sustancia que se extrae de
Phaseolus
Metodología de la técnica de choque hipotónico: · Depositamos sangre en un medio de cultivo. · Incubamos 72 horas a 37 grados. · Anadimos colchicina para que todas las células se paren en metafase. · Lavamos. · Producimos el choque hipotónico. · Incubamos 10 minutos. · Centrifugamos y lavamos. · Fijamos y añadimos colorantes a la muestra.
vulgaris.
Los cromosomas se ordenan por tamaño y por posición del centrómero . Los más grandes y con el centromero en el centro, van antes. Ademas los cromosomas estan clasificados por grupos:
A: 1-2-3 B: 4-5 C: 6-7-8-9-10-11-12-X D: 13-14-15 E: 16-17-18 F: 19-20 G: 21-22-Y En los grupos D y G es donde se producen normalmente las translocaciones debido a la posición del centrómero
.
Los bandeos morfológicos: se obtienen basándose en técnicas inherentes a la heterogeneidad de la cromatina. Existe en ellos una relación con proteínas(histónicas y no histónicas) e interacciones ADN Estos bandeos pueden ser a su vez clasificados en: técnicas de tinción diferencial, métodos de tinción selectiva, coloraciones con fluoroeromos específicos aislados o combinados con colorantes no fluorecentes, y tinciones con anticurpos fluorecentes.
Los bandeos dinámicos: se obtienen basandose en: técnicas que implican la incorporación de una base analoga, bromo-desexiuridina (BrdU), en el ADN durante la fase S del ciclo celular. Se denomina también bandeo de replicación debido a la relación existente entre el tiempo de incorporación del BrdU y el patrón de replicación. Cuando se incorpora BrdU durante la fase de replicación temprana se obtiene un patrón de bandeo R destacándose las regiones ricas en G-C. Luego de realizada esta técnica, los cromosomas pueden visualizarce utilizando distintos métodos de tinción que emplean colorante tales como el Giemesa o el naranja de acridina o utilizando anticuerpos específicos.
Por otro lado si se incorpora la base análoga durante la fase tardía de replicación se obtiene un patrón de bandas G, destacándose las zonas de predominio de secuencias A-T. Los cromosomas pueden ser visualizados utilizando diferentes métodos de tinción. En relación con la nomeclatura para descubrir los diferentes bandeos cromosómicos, se emplea un código de tres letras: la primera, indica el tipo de bandeo utilizado, la segunda, la técnica de deteccioón empleada y la tercera, el tipo de tinción.
Nomeclatura de bandeos morfológicos. QFQ: Bandas Q por fluorecencia usando quinacrina. GTG: Bandas G por tratamiento enzimático con tripsina utilizando Giemsa. RFA: Bandas R por fluorecencia usando naranja de acridina. RHG: Bandas R mediante desnaturalización térmica utilizando Giemesa. THG: Bandas T por desnaturalización térmica empleando Giemesa. CBG: Bandas C por hidróxido de bario utilizando Giemesa. Nomeclatura de bandeos dinámicos. GBG: Bandas G por incorporación de BrdU utilizando Giemesa. RBA: Bandas R por incorporación de BrdU empleando naranja de acridina. RBG: Bandas R por incorporación de BrdU utilizando Giemesa. GB-AAu: Bandas G por incorporación de BrdU empleando anticuerpos específicos unidos a partículas deoro coloidal.
RB-AAu: Bandas R por incorporación de BrdU usando anticuerpos específicos unidos a partículas deoro coloidal.
METODOLOGIA DE LOS ESTUDIOS GENETICOS
