TUGAS AMAMI “ANALISIS VITAMIN”
Oleh : Kelompok VII (Semester 3) 1. 2. 3. 4.
Luh Kadek Suciari Ni Putu Puri Artini Made Wulan Kesumasari Ni Made Yulia Arisanti
P07134014012 P07134014014 P07134014028 P07134014037
KEMENTRIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR JURUSAN ANALIS KESEHATAN TAHUN AKADEMIK 2015/2016
BAB I PENDAHULUAN 1.1
Latar Belakang Vitamin adalah komponen tambahan makanan yang berperan sangat penting dalam gizi
manusia. Banyak vitamin tidak stabil pada kondisi pemrosesan tertentu dan penyimpanan, dan karena itu kandungan vitamin dalam makanan yang diproses dapat sangat menurun. Vitamin sintetik dipakai secara luas untuk menggantikan vitamin yang hilang dan untuk mengembalikan kandungan vitamin dalam makanan. Beberapa vitamin berfungsi sebagai koenzim yang tanpa vitamin itu enzim tersebut tidak efektif sebagai biokatalis (deMan, 1997). Vitamin adalah senyawa organik yang diperlukan tubuh dalam jumlah yang sangat kecil dan harus disuplai dari makanan karena tubuh tidak dapat menyintesisnya. Suatu vitamin minimal menunjukkan satu fungsi metabolik khusus. Istilah vitamin digunakan oleh Casimir Funk pada tahun 1912 yang meneliti tentang penyakit beri-beri. Vita menunjukkan senyawa yang diperlukan oleh tubuh, sedangkan amine berarti mengandung nitrogen, maka kemudian istilah amine diganti dengan amin, sehingga lebih dikenal dengan vitamin (Muchtadi, 2009). Secara umum pengertian vitamin adalah suatu zat senyawa kompleks yang sangat dibutuhkan oleh tubuh kita yang berfungsi untuk membantu pengaturan atau proses kegiatan tubuh. Tanpa vitamin manusia, hewan dan makhluk hidup lainnya tidak akan dapat melakukan aktifitas hidup . Walaupun vitamin memiliki banyak jenis akan tetapi secara umum vitamin bekerja dengan cara menggalakkan reaksi kimia tertentu dalam suatu proses metabolisme. Jika kekurangan vitamin dapat memperbesar peluang terkena penyakit pada tubuh kita. Ada dua golongan vitamin, yaitu vitamin yang larut dalam lemak dan vitamin yang larut dalam air. Vitamin yang larut dalam lemak adalah vitamin A, D, E, dan K. sedangkan vitamin yang larut dalam air adalah B (thiamin, riboflavin, niacin, piridoksin, asam pantothenat, biotin, sianokobalamin, choline, inositol) dan vitamin C. Kedua golongan vitamin ini mempunyai sifat umum yang berbeda-beda. Ada beberapa senyawa yang berhubungan dengan vitamin, yaitu antivitamin, yang kerjanya dapat merusak struktur vitamin, dan antagonis vitamin, yang kerjanya dapat dapat berkompetisi dengan vitamin (Proverawati, 2011).
Vitamin bukanlah sumber energi, tetapi vitamin melakukan fungsi regulator (pengatur). Vitamin bekerja sama dengan enzim dalam beberapa reaksi kimia. Vitamin juga penting untuk pertumbuhan, pemeliharaan kesehatan, dan reproduksi. Vitamin harus ada dalam tubuh manusia walaupun hanya dalam jumlah kecil karena memiliki fungsi khusus dan tidak dapat digantikan (Pratiwi, 2007). Oleh karena itu, penting bagi kita untuk selalu mengkonsumsi vitamin dalam kadar yang dibutuhkan oleh tubuh. Ada beberapa cara yang dapat digunakan untuk menganalisis vitamin, yaitu dengan cara kualitatif dan kuantitatif. Berdasarkan latar belakang tersebut, maka “Analisis Vitamin” kami gunakan sebagai judul dari paper kami. 1.2
Tujuan 1. Mahasiswa dapat mengetahui pengertian vitamin. 2. Mahasiswa dapat mengetahui fungsi vitamin. 3. Mahasiswa dapat mengetahui klasifikasi vitamin 4. Mahasiswa dapat mengetahui cara analisis vitamin
BAB II PEMBAHASAN
2.1
Pengertian Vitamin Vitamin berasal dari gabungan kata bahasa Latin vita yang artinya "hidup" dan amina
(amine) yang mengacu pada suatu gugus organik yang memiliki atom nitrogen (N), karena pada awalnya vitamin dianggap demikian. Kelak diketahui bahwa banyak vitamin yang sama sekali tidak memiliki atom N. Dipandang dari sisi enzimologi (ilmu tentang enzim), vitamin adalah kofaktor dalam reaksi kimia yang dikatalisasi oleh enzim. Pada dasarnya, senyawa vitamin ini digunakan tubuh untuk dapat bertumbuh dan berkembang secara normal. (Wikipedia,2014) Vitamin merupakan bahan makanan bukan penghasil energi, sehingga harus diberikan dalam makanan sehari-hari untuk mendapatkan kesehatan yang optimal. Vitamin merupakan senyawa-senyawa organik yang memegang peranan penting dalam berlangsungnya berbagai proses vital di dalam tubuh. Masing-masing vitamin memegang peranan yang spesifik yang pada akhirnya dapat memengaruhi organisme keseluruhannya. Vitamin memiliki peran sangat penting untuk pertumbuhan, pemeliharaan kesehatan, dan fungsi-fungsi tubuh lainnya agar metabolisme berjalan normal (Sirajuddin, 2012). 2.2
Fungsi Vitamin Vitamin memiliki peranan spesifik di dalam tubuh dan dapat pula memberikan manfaat
kesehatan. Bila kadar senyawa ini tidak mencukupi, tubuh dapat mengalami suatu penyakit. Tubuh hanya memerlukan vitamin dalam jumlah sedikit, tetapi jika kebutuhan ini diabaikan maka metabolisme di dalam tubuh kita akan terganggu karena fungsinya tidak dapat digantikan oleh senyawa lain. Gangguan kesehatan ini dikenal dengan istilah avitaminosis. Contohnya adalah bila kita kekurangan vitamin A maka kita akan mengalami kerabunan. Di samping itu, asupan vitamin juga tidak boleh berlebihan karena dapat menyebabkan gangguan metabolisme pada tubuh.
Fungsi Vitamin secara umum berhubungan sangat erat dengan fungsi enzim, terutama vitamin - vitamin kelompok B. Ada banyak jenis-jenis vitamin yang memiliki fungsi-fungsi tersendiri. Fungsi vitamin secara umum antara lain sebagai berikut:
Mengatur zat dalam tubuh
Berfungsi menguatkan gigi dan tulang
Mempercepat Pertumbuhan
Memperkuat daya tahan tubuh terhadap penyakit
Mempercepat proses dalam penyembuhan penyakit
Menjaga dan meningkatkan kebugaran tubuh
Memperlambat dalam proses penuaan
Membangun sistem kekebalan tubuh atau sistem imun
Menjaga tubuh tetap segar dan menghilangkan rasa capek
Vitamin juga diperkirakan berfungsi sebagai katalisator dalam reaksi biokimia tubuh Selain itu vitamin berperan sebagai antioksidan, yakni zat untuk menghindari terjadinya
radikal bebas (free radikal bebas). 2.3
Klasifikasi Vitamin Vitamin memiliki dua kelompok yaitu Water Soluble Vitamin atau vitamin yang dapat
larut dalam air seperti vitamin C dan vitamin B, sedangkan Fat Soluble Vitamin atau vitamin yang dapat larut dalam lemak seperti vitamin A,D,E dan vitamin K (Apryani, 2013) 2.3.1
Vitamin Larut Lemak Vitamin yang larut di dalam lemak dalam takaran yang besar akan berbahaya bagi
tubuh karena jenis vitamin ini tidak dapat diekskresikan keluar dan akan tersimpan di dalam tubuh. Adapun vitamin larut larut itu terdiri atas vitamin A, D, E, dan K. a) Vitamin A Vitamin A dikenal luas memiliki manfaat besar untuk mata. Namun selain itu vitamin A memiliki banyak manfaat lainnya seperti berperan dalam perkembangan janin dan menghambat timbulnya kanker. Vitamin A juga berfungsi untuk menjaga kesehatan kulit, dan sangat penting untuk indra penglihatan agar tetap sehat serta menjaga imunitas tubuh. Penyebab penyakit yang
kekurangan Vitamin A yaitu penyakit Katarak, Rabun Senja, Keratomalacia (Perusakan Kornea), Hyperkeratosis (benjolan putih pada folikel rambut). Sumber makanan yang mengandung vitamin A : Jenis buah-buahan yang memiliki warna Merah dan Kuning seperti; wortel, pepaya, pisang, cabe merah, labu kuning, margarine, susu, serta sayuran yang memiliki warna hijau seperti; bayam. b) Vitamin D Vitamin D ini memiliki provitamin D di bawah kulit kita yang bisa berubah menjadi vitamin D ketika kita mendapatkan sinar matahari yang cukup terutama di pagi hari. Fungsi vitamin ini memiliki peranan penting untuk gigi dan tulang, mencegah penyakit rahkitis atau yang disebut pelunakan tulang pada anak-anak, serta dapat membantu tubuh menggunakan kalsium dan phosphor. Jika kekurangan vitamin ini dapat menyebabkan Rheumatoid arthritis atau radang sendi, diabetes, rahkitis serta Penyakit Osteomalasia atau hilangnya unsur fosfor dan kalsium secara berlebihan. Sedangkan makanan yang mengandung vitamin D seperti Susu, udang, paparan sinar matahari, tiram, kedelai, jamur, hati, telur dan ikan. c) Vitamin E Vitamin ini sangat dikenal oleh wanita karena memiliki manfaat yang penting untuk kulit. Vitamin ini berfungsi untuk menjaga kesegaran tubuh, keremajaan kulit dan mencegah kerusakan kulit akibat paparan sinar ultraviolet. Macam-macam manfaat vitamin selanjutnya adalah vitamin E yang memiliki fungsi penting untuk kelancaran fungsi darah dalam melakukan tugasnya, menjaga kesehatan kulit, mata, darah merah dan hati, sebagai antioksidan alami,melindungi paruparu dari polusi udara serta dapat mencegah asam lemak yang berlebihan. Akibat kekurangan vitamin ini dapat menimbulkan kemandulan, gangguan saraf dan otot. Makanan yang mengandung jenis vitamin E yaitu Gandum, padi-padian, minyak sayur, ragi, lobak, kuning telur, cabe rawit, tomat, dan jagung. d) Vitamin K Vitamin K yang mempunyai fungsi sebagai membantu metabolisme tubuh serta dapat mencegah penyakit diabetes, dapat menurunkan resiko terkena penyakit osteoporosis dan dapat menekan proses pendarahan akibat pemakaian senyawa aspirin atau antibiotik yang berlebihan.
Kekurangan vitamin K bisa menyebabkan gusi berdarah, mudah memar, menurunnya kepadatan tulang serta dapat menghambat pembekuan darah. Vitamin ini bisa didapatkan diantaranya dari alpukat, anggur, bluberi, asparagus, peterseli atau parsley dan kiwi.
2.3.2
Vitamin Larut Air Vitamin larut air dapat diekskresikan ke dalam urine sehingga takaran yang besar tidak
membahayakan kesehatan. Akan tetapi jenis vitamin larut air biasanya lebih sering ditemui kasus kekurangan pada manusia. Adapun yang termasuk vitamin larut air ini adalah vitamin B Kompleks dan vitamin C. a) Vitamin B Kompleks Vitamin B Kompleks para umumnya memiliki fungsi untuk membantu proses pencernaan makanan. Vitamin ini memiliki banyak jenis dengan fungsi yang masing-masing berbeda dalam proses metabolisme. Yang termasuk jenis vitamin B adalah sebagai berikut : Vitamin B1 Vitamin B1 memiliki fungsi yang sangat penting untuk system saraf dan fungsi jantung serat dapat mencegah penyakit beri-beri. Akibat kekurangan vitamin ini bisa mengalami penyakit beri-beri, kulit kering, kulit bersisik, serta dapat mengalami penurunan daya tahan tubuh, nafsu makan menjadi berkurang dan susah untuk buang air besar. Adapun sumber makanan yang mengandung vitamin B1 seperti Kacang hijau, daging, kacang kedelai, susu, tepung, roti, ayam, daging tanpa lemak, ikan dan lain-lain. Vitamin B2 Memiliki Fungsi yang penting untuk kulit, pertumbuhan jaringan tubuh, serta dapat mencegah kepekatan mata terhadap cahaya. Sedangkan akibat kekurangan vitamin B2 dapat menimbulkan terjadinya penyakit Ariboflavinosis, dapat menyebabkan kulit kering, mulut kering, bibir pecahpecah, kulit bersisik serta dapat menurunnya daya tahan tubuh. Sedangkan makanan yang mengandung vitamin ini meliputi Susu, sayur hijau yang berdaun, daging tanpa lemak,kacang hijau,pisang dan sebagainya. Vitamin B3 Mempunyai fungsi sebagai membantu makanan menjadi energy, mencegah penyakit pellagra, membantu system saraf,serta dapat membantu dalam mencegah berkurangnya
nafsu makan. Adapun penyakit yang akan timbul ketika kekurangan vitamin ini seperti Penyakit Pellagra, dan akan merasakan badan lemas, otot mudah keram dan kejang serta insomnia. Makanan yang mengadung vitamin B3 seperti Roti, daging sapi, ikan (salmon dan tuna), telur, Brokoli, susu, hati, ragi, asparagus. Vitamin B5 Berfungsi untuk membantu pemecahan nutrisi makanan ( trutama pada lemak ), memproduksi senyawa asam lemak, neurotransmiter , sterol, hormon tubuh serta dapat menjaga komunikasi system saraf dan otak. Jika kekurangan vitamin ini dapat menyebabkan penyakit Paresthesia, sulit tidur, kulit kering dan bersisik, dan otot mudah kram, adapun makanan yang mengandung vitamin ini seperti daging , sayur-sayuran,brokoli, dan avocado. Vitamin B6 Vitamin B6 memiliki fungsi yang penting untuk menjaga kesehatan gigi dan gusi, serta sangat penting untuk sel-sel darah merah dan system saraf serta mampu menghasilkan antibodi. Penyakit yang timbul dari kekurangan vitamin ini dapat menimbulkan penyakit anemia atau kekurangan darah serta dapat mengakibatkan terjadinya gangguan dalam system saraf. Makanan yang mengandung B6 seperti Kacang-kacangan daging, pisang, dan saursayuran. Vitamin B7 Fungsi vitamin B7 dapat membantu raksi biokimia tubuh seperti transfer karbondioksida dan metabolisme karbohidrat dan lemak. Makanan yang mengandung vitamin ini meliputi Gandum, daging, kacang-kacangan, pisang, kuning telur dan ragi. Penyakit yang akan timbul Karen kekurangan vitamin ini diantaranya depresi, Dermatitis, anemia, Enteritis, nusea, dan kerontokan rambut. Vitamin B9 Memiliki fungsi yang dapat mencegah kecacatan pada janin, menurunkan resiko penyakit jantung, serta dapat membantu dalam proses metobolisme protein yang berlangsung dan dapat membangun sel-sel darah merah yang sehat, sangat cocok untuk yang sedang mengandung agar janin terjaga akan kesehatannya. Akibat kekurangan vitamin ini yaitu dapat terjadinya kecacatan pada janin. Sumber makanan yang mengandung vitamin ini seperti; bayam, biji bunga matahari, jeruk, telur, hati dan kacang polong. Vitamin B12
Memiliki fungsi untuk menjaga kesehatan sistem saraf, sangat penting untuk membantu dalam pertumbuhan anak-anak, serta dapat mencegah penyakit anemia. Penyakit yang timbul akibat kekurangan vitamin ini dapat menimbulkan anemia serta cepat lelah. Makanan yang mengandung vitamin B12 yaitu daging, susu, hati, telur dan ikan. b) Vitamin C Vitamin ini memiliki fungsi untuk menjaga kesehatan gigi dan gusi serta tulang, mencegah penyakit kudis, dapat meningkatkan daya tahan tubuh, dapat membentuk sel-sel tubuh dan pembuluh darah, serta sebagai antioksidan. Dampak kekurangan vitamin C yaitu Sariawan, lidah pecah-pecah, anemia, dan penyakit kudis. Sumber makanan yang mengandung vitamin C seperti jeruk, strawberry, tomat, arbei, susu, mentega, asparagus dan ikan. 2.4 Analisis Vitamin
Ada dua cara yang dapat digunakan untuk menganalisis vitamin, yaitu dengan cara kualitatif dan kuantitatif. Berikut adalah beberapa metode yang dapat digunakan untuk menganalisis vitamin, meliputi; 2.4.1 Vitamin A (Retinol) A. Uji Kualitatif Uji Identifikasi Vitamin A dengan Pereaksi Carr-Price Prinsip : Berdasarkan penambahan kloroform dan asam asetat anhidrid. Selanjutnya dibubuhkan seujung sendok kristal SbCl3 ke dalamnya sehingga terbentuk warna biru yang akan berubah menjadi merah coklat berarti positif vitamin A. Cara Analisis : a. Disiapkan alat dan bahan b. Dimasukkan 5 tetes minyak ikan ke dalam tabung reaksi c. Ditambahkan 10 tetes kloroform, kemudian homogenkan dengan baik d. Ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrit e. Selanjutnya, dibubuhkan seujung sendok Kristal Sbcl3 ke dalamnya f. Perhatikan perubahan warna g. Jika terbentuk warna biru yang akan berubah menjadi merah coklat berarti vitamin A positif. Uji Identifikasi Vitamin A dengan Pereaksi Trikloroasetat (TCA) Prinsip :
Berdasarkan penambahan pereaksi asam trikloroasetat dalam kloroform amati warna yang terjadi bila timbul warna biru kehijauan menandakan positif vitamin A. Cara Analisis : a. Disiapkan alat dan bahan b. Dimasukkan 5 tetes minyak ikan ke dalam tabung reaksi c. Tambahkan 1 ml pereaksi asam trikloroasetat dalam kloroform d. Dihomogenkan dengan baik e. Amati warna yang terjadi, jika timbul warna biru kehijauan menandakan positif vitamin A. B. Uji Kuantitatif Prinsip : Vitamin A akan terekstrak ke dalam larutan organik. Semua transretinol dan 13 cisretinol diukur dengan HPLC dengan kolom silika. HPLC adalah metode yang akurat digunakan dalam pengukuran vitamin A. Metode Kromatografi (HPLC) : Preparasi Sampel Dimasukkan sebanyak 40 mL sampel (makanan formula atau susu cair) ke dalam tabung digesti 100 ml, tambahkan 10 ml etanolik pirogallol (2% pirogallol dalam 95% etanol) dan sabunkan dengan etanolik KOH (10% KOH dalam 90% etanol) pada suhu ruang selama 18 jam. Ekstraksi Pipet 3 ml sampel yang telah terdigesti ke dalam tabung sentrifus 15 ml dan tambahkan 2 ml air. Ekstrak dengan 7 ml heksan-dietileter (85:15). Ulangi ekstraksi sebanyak dua kali. Masukkan sampel terekstrak ke dalam tabung volumetrik 25 ml. Tambahkan 1 ml heksadekan
(heksadekan (1) + hexan (100)) dan diencerkan sampai 25 ml dengan
heksan. Pipet 15 ml ekstrak yang sudah diencerkan ke dalam tabung sentrifus dan uapkan dengan nitrogen. Larutkan residu dalam 0,5 ml heptan. Parameter Kromatografi :
Kolom : 15 cm x 4.5 mm dipadati dengan 3 mm silika (Apex m silika)
Fase gerak : Isokratik, heptane dan isopropanol (1-5%)
Deteksi : UV , 340 nm
Flow rate : 1-2 ml/menit
Perhitungan Kadar
area puncak sampel standar vit. A volume akhir (mL) fp area puncak standar Kadar vitamin A bobot sampel (g)
2.4.2 Vitamin D (Kalsiferol) A. Uji Kualitatif Prinsip : Berdasarkan penambahan larutan H2O2 5% dihomogenkan kemudian dipanaskan lalu didinginkan. Selanjutnya dilakukan uji dengan pereaksi Carr-price. Amati perubahan warna jika berwanra jingga kuning berarti positif vitamin D. Cara Analisis : a. b. c. d. e.
Disiapkan alat dan bahan Dimasukkan masing-masing 10 tetes minyak ikan ke dalam 2 tabung reaksi Ditambahkan 10 tetes larutan H2O2 5% Dikocok campuran kira-kira 1 menit. Dipanaskan di atas api kecil perlahan-lahan sampai tidak ada gelembung-gelembung
gas yang keluar. Usahakan jangan sampai mendidih. f. Dinginkan tabung dibawah air kran. g. Dilakukan uji dengan uji pereaksi Carr-Price h. Amati perubahan warna yang terjadi. Adanya warna jingga kuning berarti positif vitamin D. B. Uji Kuantitatif
Prinsip : Analisis vitamin D pada umumnya menggunakan analisis Bioassay (analisis menggunakan hewan percobaan atau manusia), dimana analisis kadarnya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 550 nm. Perhitungan kadarnya menggunakan kurva standar. Cara Analisis : Metode utama analisis kadar vitamin D adalah secara bioassay. Karena ada perbedaan nilai antirachitis vitamin D dari berbagai sumbernya. 1. Preparasi sampel & Persiapan alat dan bahan 2. Periode deplesi (penghabisan) : pemberian diet Rachitogenic selama 18-25 hari. Tikus yang digunakan berumur ≤ 30 hari dengan berat badan ≥ 44 g tetapi ≤ 60 g 3. Pengujian : mulai hari terakhir deplesi sampai 8 atau 11 hari setelah deplesi. Selama
pengujian, tikus terdeplesi diberi vitamin D dengan jumlah diketahui (standard) dan tidak diketahui (sampel)
4. Jumlah vitamin dalam sampel ditentukan dari warna tulang tibia (tulang kering) proximal paling akhir atau tulang radius atau ulna distal paling akhir. 5. Dimasukkan 2 ml larutan yang diuji dalam tabung spektrometer dan ditambah 4 ml larutan jenuh Antimoni-trikhlorida dalam khloroform bebas air 6. Ditunggu 10-15 menit dan serapannya dibaca pada 500 nm 7. Kadar vitamin D dapat dihitung dengan persamaan kurva standar . Perhitungan Kadar : µg Tiamin HCl tiap 5mL larutan uji = 2.4.3 Vitamin E (Tokoferol) A. Uji Kuantitatif Prinsip : Untuk produk makanan umumnya : sampel disaponifikasi dengan reflux, diekstrak dengan heksan dan diinjeksi ke dalam fase normal kolom HPLC yang disambungkan pada detektor fluoresensi Untuk Margarin dan Minyak nabati : sampel dilarutkan dalam heksan, MgSO4 ditambahkan untuk mengganti air kemudian difilter dan diuji dengan HPLC Untuk minyak : dilarutkan dalam heksan dan diinjeksi secara langsung ke dalam kolom HPLC Metode Kromatografi (HPLC) : Produk makanan umum Tambahkan 10 ml pirogallol 6 % ke sampel, campurkan dan aliri dengan N2. Panaskan pada suhu 70°C selama 10 menit dengan sonikasi. Tambahkan 2 ml KOH 60 %, campurkan dan aliri dengan N2. Dipanaskan selama 30 menit pada suhu 70°C. Sonikasi selama 5 menit, dinginkan pada suhu ruang dan tambahkan NaCl dan air. Ekstrak dengan heksan (0,1% BHT) sebanyak 3 kali. Tambahkan 0,5 g MgSO4 dan homogenkan. Saringlah dan encerkan sampai volume dengan heksan dan injeksi 20 l. Margarin dan minyak nabati Tambahkan 40 ml heksan (0,1% BHT) ke dalam 10 g sampel dan homogenkan. Tambahkan 3 g MgSO4 dan campur, biarkan 2 jam. Saringlah dan encerkan sampai volume dengan heksan. Injeksi 20 l. Parameter Kromatografi - Kolom : Hibar RT, Lichrosorb Si60 5m, 25 cmx4.6 mm - Fase gerak : 0,9% isopropanol dalam heksan - Flow : 1 ml/menit - Detektor-fluoresensi, Ex = 290 nm, Em = 330 nm
Perhitungan Kadar : area sampel standar vit. E volume akhir (mL) fp area standar Kadar vitamin E bobot sampel (g)
2.4.4 Vitamin K (Menadion) A. Uji Kuantitatif Prinsip : Prinsip yang digunakan dalam analisis vitamin K adalah ekstraksi vitamin kobalamin dengan asam asetat. Sampel dan standar pembanding yang mengandung vitamin kobalamin disuntik ke kolom HPLC pada panjang gelombang yang telah ditentukan. Cara Analisis Ekstraksi vitamin K diawali dengan penimbangan sampel (contoh; keong macan, kerang salju, atau kerang tahu) sebanyak 2-5 gr yang mengandung sekitar 40 mikrogram vitamin B12 dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup. Bufer asetat sebanyak 20 ml dan 0,2 ml larutan kalium-sianida ditambahkan pada tabung reaksi. Tabung dimasukkan ke dalam penangas air mendidih selama 30 menit, lalu didinginkan dan diencerkan sampai 50 ml dengan air suling dan disaring dengan kertas whatman 42. Homogenisasi selama 5 menit dengan ultrasonic dan didiamkan pada suhu ruang sampai dingin. Penambahan 25 ml metanol dan ditepatkan sampai volume 50 ml dengan asam asetat 2 %. Sampel disentrifuse pada 4000 rpm selama 30 menit. Supernatan dipisahkan untuk disuntikkan ke HPLC, dengan kondisi HPLC sebagai berikut : Fase gerak : H2O pH 2 Kolom : C18 Kecepatan aliran : 0,5 ml/menit Pompa : 515 HPLC pump Injector : Cecil 1100 series Program : Isokratik Detektor : UV visible Panjang gelombang : 280 nm Sensitivitas : 0,01 AUFS Suhu : kamar Tekanan : 6000 psi Perhitungan Kadar
area sampel standar vit. K volume akhir (mL) fp Kadar vitamin K area standar bobot sampel (g)
2.4.5 Vitamin C (Asam Askorbat) A. Uji Kualitatif Prinsip : Berdasarkan penambahan pereaksi benedict akan menghasilkan warna hijau kekuningan sampai merah bata yang menandakan reaksi positif (+) mengandung vitamin C. Cara analisis : 1. Disiapkan alat dan bahan 2. Dimasukkan kedalam tabung reaksi 5 tetes larutan benedict 3. Dipanaskan di atas api kecil sampai mendidh selama 2 menit 4. Perhatikan adanya endapan yang terbentuk. Warna hijau kekuningan sampai merah bata menandakan vitamin C positif. Prinsip : Larutan sampel dinetralkan dengan menambahkan NaHCO3 (pH=8), lalu direaksikan dengan FeCl3 akan menghasilkan warna ungu yang menandakan reaksi positif (+) mengandung vitamin C. Cara Analisis : 1. Disiapkan alat dan bahan 2. Masukan 10 tetes larutan asam askorbat 1% ke dalam tabung reaksi. 3. Kemudian, dinetralkan larutan (pH = 8) menggunakan NaHCO3 5%. 4. Ditambahkan 2 tetes larutan FeCl3 5. Diamati warna yang terjadi. Adanya warna merah-ungu berarti vitamin C positif. B. Uji Kuantitatif Prinsip : Prinsip yang digunakan dalam analisis vitamin C adalah dengan oksidasi analat oleh I 2 sehingga I- tereduksi menjadi ion iodida kemudian ditambahkan C2 dan C3 dengan indikator amilum. Akhir titrasi ditandai dengan warna biru (iod-amilum). Cara Analisis : Sebanyak 5 mL vitamin C ditambahkan 25 mL aquades kemudian ditambahkan 2 mL larutan Pati 1 %. Setelah itu dititrasi dengan larutan iodin standar 0,01 N. Akhir titrasi terbentuk warna biru yang tetap. Titrasi harus dikerjakan cepat karena pada senyawa lain seperti glutathion dan sistein akan teroksidasi perlahan-lahan oleh larutan iodin dan menghasilkan hasil yang tidak akurat (error). Perhitungan Kadar :
Perhitungan penetapan kadar vitamin C menggunakan rumus : Kadar Vit. C
mL larutan Iodin 0,88 mg askorbat mL Iodin
1 mL 0,01 N iodin ekuivalen dengan 0,88 mg asam askorbat. 2.4.6 Vitamin B Kompleks 2.4.6.1 Vitamin B1 (Tiamin) A. Uji Kualitatif Prosedur A : 1. Masukkan 10 tetes larutan yang diuji (misalnya thiamin 1%) ke dalam tabung reaksi 2. Tambahkan 10 tetes larutan Pb-asetat 10% dan 1 mL NaOH 6 N 3. Campurlah dengan baik, perhatikan warna kuning yang terjadi 4. Lalu panaskan dan amati perubahan yang terjadi (Jika timbul endapan warna coklat-hitam yang menandakan positif mengandung vitamin B1 ) Prosedur B : 1. Masukkan 10 tetes larutan yang diuji (misalnya: thiamin 1%) ke dalam tabung reaksi 2. Tambahkan 10 tetes larutan bismuth nitrat, campurlah dengan baik 3. Lalu tambahkan pula 2 tetes larutan KI 5% 4. Perhatikan perubahan warna yang terjadi (Jika timbul warna endapan merah jingga berarti positif mengandung vitamin B1 ) B. Uji Kuantitatif Prinsip : Ekstraksi dan hidrolisis enzimatis dari ester-ester tiamin fosfat dan pembersihan. Metode ini didasarkan pada pengukuran fluoresensi dari bentuk oksidasi tiamin (tiokrom). Metode Alkalimetri : Adanya hidroklorida pada tiamin hidroklorida dapat dititrasi dengan natrium hidroksida 0,1 N menggunakan indikator brom timol biru. Prosedur penetapan kadar tiamin hidroklorida dengan metode alkalimetri : Lebih kurang 500 mg tiamin hidroklorida yang ditimbang seksama, dilarutkan dalam 75 mL air bebas CO2 lalu dititrasi dengan NaOH 0,1 N menggunakan indikator brom timol biru. Tiap mL NaOH 0,1 N setara dengan 33,70 gram tiamin hidroklorida.
Berat ekivalen (BE) tiamin hidroklorida pada penetapan secara alkalimetri adalah sama dengan berat molekulnya (BM). Hali ini disebabkan karena tiap 1 mol tiamin hidroklorida bereaksi dengan 1 mol NaOH. Metode Argentometri : Adanya klorida dalam tiamin hidroklorida dapat ditetapkan secara argentometri dengan menggunakan metode Volhard. Pada penetapan dengan metode Volhard suasananya harus asam sebab jika suasananya basa maka akan terjadi reaksi antara perak nitrat dengan basa membentuk Ag(OH) yang pada tahap selanjutnya akan membentuk endapan putih Ag2O, akibatnya perak nitrat tidak hanya bereaksi dengan sampel tetapi juga bereaksi dengan basa. Prosedur penetapan kadar vitamin B1 secara argentometri : Lebih kurang 100 mg tiamin hidroklorida yang ditimbang secara seksama dilarutkan dalam 20 mL air. Larutan diasamkan dengan asam nitrat encer dan ditambah 10 mL perak nitrat 0,1 N. Endapan yang terjadi disaring dan dicuci dengan air sampai tidak mengandung klorida. Filtrat selanjutnya dititrasi dengan larutan baku ammonium tiosianat 0,1 N menggunakan indikator besi (III) amonium sulfat. Tiap mL perak nitra 0,1 N setara dengan 16,86 mg tiamin hidorklorida. Berat ekivalen (BE) tiamin hidroklorida pada penetapan secara argentometri adalah setengah dari berat molekulnya (BM/2). Ini disebabkan karena tiap 1 mol tiamin hidroklorida (yang mengandung 2 Cl-) bereaksi dengan 2 mol AgNO3. Metode Gravimetri : Tiamin dalam tablet vitamin B1 dan dalam injeksi dapat ditetapkan secara gravimetri dengan cara mengendapkan larutan tiamin menggunakn asam silikowolframat. Prosedur penetapan kadar tiamin dengan metode gravimetri : Sejumlah tertentu tablet yang telah ditimbang secara seksama dan setara dengan lebih kurang 50 mg tiamin hidroksida, diencerkan dengan air secukupnya hingga 50 mL lalu ditambah 2 mL asam klorida pekat dan dipanaskan hingga mendidih. Pada larutan yang telah mendidih ini selanjutnya ditambah dengan cepat tetes demi tetes 4 mL asam silikowolframat yang baru disaring lalu dididihkan selama 4 menit. Larutan disaring melalui penyaring kaca masir lalu dicuci dengan 50 mL campuran mendidih yang terdiri atas 1 bagian volume asam klorida pekat dan 19 bagian air yang mengandung asam silikowolframat 0,2% (b/v), kemudian dicuci 2 kali tiap kali dengan 5 mL aseton. Sisa dikeringkan pada suhu 105oC selama satu jam lalu didinginkan selama 10 menit dan
dibiarkan dalam eksikator di atas larutan asam sulfat 38% dan ditimbang. Tiap gram sisa setara dengan 192,9 mg tiamin hidroklorida. Perhitungan Kadar : Perhitungan kadar vitamin B1 dapat dihitung dengan rumus :
Dimana volume AgNO3 adalah volume hasil titrasi dan untuk Normalitas AgNO3 adalah hasil standarisasi larutan AgNO3 dengan NaCl kemudian dikalikan dengan mg kesetaraan vitamin B1 dan hasilnya dibagi dengan Normalitas kesetaraan AgNO3 yang dikalikan dnegan berat penimbangan NaCl lalu dikalikan 100%. Dimana Tiap ml larutan AgNO3 0,1 N setara dengan 16,86 vitamin B1. 2.4.6.2 Vitamin B2 (Riboflavin) A. Uji Kuantitatif Prinsip : Ektraksi, pembersihan dan kompensasi adanya substansi pengganggu dan ditentukan dengan fluorometer Metode spektrofotometri : Larutan riboflavin dalam pH 4,0 menunjukkan absorbs maksimum (λ maks) pada 444 nm. Cara ini digunakan untuk menetapkan kemurnian riboflavin atau untuk penetapan riboflavin dilakukan dengan cara terlindung dari cahaya. Prosedur penetapan kadar riboflavin tunggal secara spektrofotometri : Sekitar 100 mg riboflavin yang ditimbang seksama dilarutkan dengan pemanasan dalam campuran 2 mL asam asetat glacial dan 150 mL air. Larutan selanjutnya diencerkan dengan air, didinginkan, ditambah air secukupnya hingga 1000 mL. pada 10,0 mL larutan ditambah 3,5 mL natrium asetat 0,1 M kemudian ditambah air secukupnya hingga 100 mL. kadarnya dihitung dengan menggunakan riboflavin baku sebagai pembanding. Perhitungan Kadar : µg Tiamin HCl tiap 5mL larutan uji = 2.4.6.3 Vitamin B3 (Niasin)
A. Uji Kuantitatif Prinsip : Prinsip penentuan analisis didasarkan pada tingkat kemampuan larutan vitamin B3 untuk mengabsorbsi beberapa jenis panjang gelombang. Metode Spektrofotometer : Preparasi Sampel, Timbang sampel (kira-kira mengandung 0,1 mg niasin) dan tambahkan NH2SO4, autoklaf selama 1 jam dan dinginkan. Atur pH sampai 6,8 dan encerkan sampai volume konsentrasi 0,1 g niasin/mL. campur dan saring Preparasi tabung pengujian, Pengulangan sedikitnya menggunakan 0,5, 1,0, 2,0, 3,0, 4,0 dan 5,0 mL sampel kemudian tambahkan air sampai mencapai 5 mL. tambahkan 5 mL Difco Basal medium untuk niasin ke dalam masing-masing tabung, autoklaf selama 10 menit pada suhu 121 oC dan dinginkan Preparasi standar Sama dengan preparasi pengujian Standar = larutan yang mengandung 0,1 μL/mL niasin Inokulasi dan inkubasi
(37 oC, 16-18 jam)
Tambahkan 1 tetes inokulum ke masing-masing tabung, tutup tabung dan inkubasi pada suhu 37 oC selama 16-18 jam sampai kekeruhan maksimum pada tabung dengan konsentrasi niasin paling tinggi. Pengukuran Absorbansi diukur pada panjang gelombang 540-660 nm. Perhitungan Kadar : Penentuan kadar Vitamin B3 dilakukan dengan mengukur tingkat kemampuan absorbansi larutan vitamin dengan berbagai panjang gelombang dan konsentrasi berbeda-beda sehingga dapat dibuat kurva linear dengan menggunakan nilai hubungan antara panjang gelombang dengan absorbansi larutan. 2.4.6.4 Vitamin B7 (Biotin) A. Uji Kuantitatif Prinsip : Ektraksi, pembersihan dan kompensasi adanya substansi pengganggu dan ditentukan dengan fluorometer Metode spektrometri : Larutan riboflavin dalam pH 4,0 menunjukkan absorbs maksimum (λ maks) pada 444 nm. Cara ini digunakan untuk menetapkan kemurnian riboflavin atau untuk penetapan riboflavin dilakukan dengan cara terlindung dari cahaya. Prosedur penetapan kadar riboflavin tunggal secara spektrofotometri :
Sekitar 100 mg riboflavin yang ditimbang seksama dilarutkan dengan pemanasan dalam campuran 2 mL asam asetat glacial dan 150 mL air. Larutan selanjutnya diencerkan dengan air, didinginkan, ditambah air secukupnya hingga 1000 mL. pada 10,0 mL larutan ditambah 3,5 mL natrium asetat 0,1 M kemudian ditambah air secukupnya hingga 100 mL. kadarnya dihitung dengan menggunakan riboflavin baku sebagai pembanding. Perhitungan Kadar : µg Tiamin HCl tiap 5mL larutan uji = 2.4.6.5 Vitamin B9 (Asam Folat) A. Uji Kuantitatif Prinsip : Prinsip yang digunakan dalam analisis vitamin B9 adalah menggunakan beberapa larutan yaitu larutan sampel, larutan standar, dan eluent dengan metode identifikasi dengan cara menginjeksi larutan standar dan larutan sampel ke dalam sistem HPLC. Metode dan Tahapan Analisis : Pembuatan Fase Gerak - Ditimbang seksama 1640 mg natrium asetat dengan menggunakan neraca analitik (untuk volume 2 L larutan MPh). - Dimasukan ke dalam beaker glass 2000 mL. - Dilarutkan dengan 1800 mL purified water, kemudian diaduk dengan magnetic stirer. - Diatur pH dengan menambahkan asam asetat glasial hingga mencapai pH 3,0. - Ditambahkan purified water hingga volume mencapai 2000 mL. Kemudian jadilah larutan - Diambil 1800 mL larutan 1 dengan menggunakan gelas ukur 2000 mL. - Ditambahkan asetonitril sebanyak 200 mL, kemudian dikocok hingga larutan homogen. - Disaring ke dalam botol dengan menggunakan millipore 0,45 mm. Preparasi Standar - Ditimbang seksama 100 mg standar folic acid dengan menggunakan neraca analitik. - Dimasukan kedalam labu ukur 250 mL. - Diencerkan dengan larutan buffer citrate secukupnya, kemudian dilarutkan dengan buffer citrate hingga tanda batas labu ukur. (Standar 1). - Dipipet 5 mL dari standar 1 kedalam labu ukur 100 mL, kemudian diencerkan dengan larutan buffer citrate hingga tanda batas labu ukur. (Standar 2).
- Dipipet 2.5 mL dari standar 2 kedalam labu ukur 100 mL, kemudian diencerkan dengan larutan buffer citrate hingga tanda batas labu ukur. (Standar 3). - Masing-masing standar disaring dengan filter 0,45 µm kedalam vial HPLC untuk dianalisis. Preparasi Sampel - Ditimbang seksama 6 tablet sediaan obat yang akan dianalisis.
- Ditaruh pada cawan petri dan diberi nomor sesuai urutan saat penimbangan. - Dilakukan penghitungan rata-rata bobot dalam 1 tablet. Pengkondisian HPLC Dilakukan pencucian kolom HPLC sebagai berikut : - Dicuci Kolom Utispher HDO C18 125×4,6 mm dengan Asetonitril 70% selama 45 menit. - Dicuci Kolom Utispher HDO C18 125×4,6 mm dengan Metil Alkohol 10% selama 45 menit. - Dicuci Kolom Utispher HDO C18 125×4,6 mm dengan MPh selama 45 menit. Uji Disolusi - Siapkan alat disolusi, RPM diatur menjadi 75 rpm. - Isi alat disolusi dengan air sampai batas, kemudian tunggu suhu mencapai 37˚C. - Setelah suhu mencapai 37˚C masukkan sampel sesuai nomor urutan, dimulai dari nomor 1, kemudian beri selang 1 menit untuk sampel berikutnya hingga sampel nomor 6. - Setelah dimasukkan sampel terakhir kemudian nyalakan timer atur waktu 60 menit. - Setelah 60 menit ambil larutan dari basket 1 menggunakan syringe dan masukkan ke dalam tabung nomor 1. Pada menit berikutnya ulangi langkah tersebut pada basket nomor 2 dan masukkan pada tabung nomor 2, lakukan sampai basket nomor 6. - Pipet 2 mL larutan masing-masing dari tabung nomor 1 sampai 6 kemudian dimasukkan pada tabung nomor 7 dan dicampur. - Saring masing-masing tabung dan masukkan ke dalam vial HPLC dan beri sesuai nomor. - Masukkan Buffer Citrate ke dalam vial HPLC sebagai larutan kontrol (eluent). - Kemudian Masukkan kedalam HPLC dengan urutan vial yaitu vial eluent, vial standar 1, vial standar 2, vial standar 3, vial sampel 1, vial sampel 2, vial sampel 3, vial sampel 4, vial sampel 5, vial sampel 6, vial sampel 7, vial standar 1, vial standar 2, vial standar 3, dan vial eluent Identifikasi
Diinjeksikan 20 µL larutan standar dan larutan sampel ke dalam sistem HPLC (High Performance Liquid Chromatography). Perhitungan Kadar Perhitungan penetapan kadar vitamin B9 menggunakan rumus : DF 0
0
1 5 2,5 900 1000 4,5g 250 100 100 1
disolusi
Kadar B 9
mg disolusi 100 0 0 mg LC
A sampel mg standar DF A standar
2.4.6.6 Vitamin B12 (Kobalamin) A. Uji Kuantitatif Prinsip : Prinsip yang digunakan dalam analisis vitamin B12 adalah ekstraksi vitamin kobalanin dengan asam asetat. Sampel dan standar perbandingan yang mengandung vitamin kobalanin disuntik ke kolom HPLC pada panjang gelombang yang telah ditentukan. Metode dan Tahapan Analisis : Ekstraksi vitamin B12 diawali dengan penimbangan sampel sebanyak 2-5 g yang mangandung sekitar 40 mikrogram vitamin B12 dimasukkan ke dalam tabung reaksi tertutup. Buffer asetat sebanyak 20 mL dan 0,2 mL larutan kalium sianida ditambahkan pada tabung reaksi. Tabung dimasukkan ke dalam penangas air mendidih selama 30 menit, lalu ddinginkan dan diencerkan sampai 50 mL air suling dan disaring dengan kertas Whatman 42. Homogenisasi selama 5 menit dengan ultrasonic dan didiamkan pada suhu ruang sampai dingin. Penambahan 25 mL metanol, dan tepatkan sampai volume 50 mL dengan asam asetat 2 %. Sampel disentrifuse pada 4000 rpm selama 30 menit. Supernatan dipisahkan untuk disuntikkan ke HPLC, dengan kondisi HPLC sebagai berikut: Fase gerak : H2O pH 2 Kolom : C18 Kecepatan aliran : 0,5 mL/menit Pompa : 515 HPLC pump Injektor : Cecil 1100 series Program : Isokratik Detektor : UV visibel Panjang gelombang : 280 nm Sensitivitas : 0,01 AUFS Suhu : kamar Tekanan : 6000 psi
Perhitungan Kadar : Perhitungan penetapan kadar vitamin B12 menggunakan rumus :
Kadar vitamin B12
area sampel standar vit. B12 volume akhir (mL) fp area standar bobot sampel (g)
BAB III PENUTUP 3.1 Kesimpulan 1. Vitamin adalah kofaktor dalam reaksi kimia yang dikatalisasi oleh enzim. Pada dasarnya, senyawa vitamin ini digunakan tubuh untuk dapat bertumbuh dan berkembang secara normal. 2. Fungsi vitamin secara umum antara lain sebagai berikut; Mengatur zat dalam tubuh, Berfungsi menguatkan gigi dan tulang, Mempercepat Pertumbuhan , Memperkuat daya tahan tubuh terhadap penyakit, Mempercepat proses dalam penyembuhan penyakit, Menjaga dan meningkatkan kebugaran tubuh, dsb.Selain itu vitamin berperan sebagai antioksidan, yakni zat untuk menghindari terjadinya radikal bebas (free radikal bebas). 3. Vitamin memiliki dua kelompok yaitu Water Soluble Vitamin atau vitamin yang dapat larut dalam air seperti vitamin C dan vitamin B, sedangkan Fat Soluble Vitamin atau vitamin yang dapat larut dalam lemak seperti vitamin A,D,E dan vitamin K 4. Kadar vitamin dapat diukur dengan cara yang berbeda-beda. Namun secara umum ada dua cara yang dapat digunakan untuk menganalisis vitamin, yaitu dengan cara kualitatif dan kuantitatif.
DAFTAR PUSTAKA
Naga.
2014.
Analisis
Vitamin.
[online].
tersedia:
https://www.scribd.com/doc/248899851/MAKALAH-ANALISIS-VITAMINdocx#download [diakses 01 Maret 2016 13:00 Wita] Jumadil.2001.Pengertian dan Definisi Vitamin - Fungsi, Guna, Sumber, Akibat Kekurangan, Macam dan Jenis Vitamin.(online).tersedia:http://www.organisasi.org/1970/01/pengertiandan-definisi-vitamin-fungsi-guna-sumber-akibat-kekurangan-macam-dan-jenisvitamin.html. [diakses 01 Maret 2016 13:05 Wita] Robi.2014.Macam-Macam
Manfaat
dan
Fungsi
Vitamin.
(online).tersedia:http://www.robi.web.id/2014/03/macam-macam-dan-fungsi-vitamin.html. [diakses 01 Maret 2016 14:00 Wita] Winda.
2011.
Laporan
Praktikum
Vitamin.
[online].
tersedia:
http://tugaswindaselesaijuga.blogspot.co.id/2011/06/laporan-praktikum-vitamin.html [diakses 02 Maret 2016 13:00 Wita] deMan, John M. 1997. Kimia Makanan. Bandung: Institut Teknologi Bandung. Muchtadi, Deddy. 2009. Pengantar Ilmu Gizi. Bandung: Alfabeta. Pratiwi, Sri Maryati, dkk.. 2007. Biologi untuk SMA Kelas XI. Jakarta: Erlangga. Proverawati, Atikah dan Erna Kusumawati. 2011. Ilmu Gizi untuk Keperawatan dan Gizi Kesehatan. Yogyakarta: Nuha Medika. Sirajuddin, Saifuddin. 2012. Penuntun Praktikum Biokimia. Makassar: Universitas Hasanuddin.
