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TOMA DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN..................................................................1
2
PRUEBA PREVIA DE SALINIDAD................................................................................3
3
PH DEL SUELO.................................................................................................................5
4
ASIMILABLES: CALCIO, MAGNESIO, SODIO Y POTASIO...................................7
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MICRONUTRIENTES ASIMILABLES DEL SUELO..................................................9
6
CATIONES CAMBIABLES Y CAPACIDAD CAPACIDAD DE CAMBIO CATIÓNICO CATIÓNICO ..............11
7
CARBONO Y MATERIA ORGÁNICA.........................................................................15
8
FÓSFORO ASIMILABLE EN SUELOS
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NITRÓGENO KJELDAHL ............................................................ ............................................................................................ ................................ 21
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BORO ASIMILABLE......................................................................................................25
11
EXTRACTO DE PASTA SATURADA..........................................................................27
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DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE YESO ......................................................... 29
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DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE YESO.......................................................31
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ANÁLISIS FOLIAR.........................................................................................................33
15
NITRÓGENO EN HOJAS...............................................................................................37
.......................................................................
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1 TOMA DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN 1.1 TOMA DE MUESTRAS De manera general, la toma de muestra de suelo ha de hacerse teniendo en cuenta, por una parte, la vaiablidad del mismo dentro de ciertos límites, y por otra, el fin a que se destina la muestra obtenida. Con respecto a la primera condición es muy importante que se tomen, siempre que sea posible, muestras múltiples de acuerdo con un método normalizado, teniendo en cuenta las características del terreno. En cuanto a la finalidad se distinguen: a) Muestras de suelos naturales. b) Muestras de suelos de cultivo En este curso nos centraremos en la toma de muestras de suelos de cultivo. En todos los casos debe realizarse una inspección previa del campo a muestrear para dibujar un diagrama en el que se señalen las distintas parcelas, cultivos, tratamientos fertilizantes, zonas de condiciones anormales y otras características que puedan diferenciar unos suelos de otros. Sobre ese diagrama se traza un plan del número de muestras a tomar, forma de tomarlas y orden de muestreo, teniendo en cuenta que debe recogerse una muestra distinta por cada porción de terreno con características peculiares y que debe tomarse una muestra como mínimo por cada 2 Ha. A continuación se numeran las bolsas en las que se van a guardar las muestras y se inicia su recogida. Las muestras de suelo se recogen generalmente a una profundidad de 0-30 cm, por uno de los procedimientos siguientes: 1.
Utilizando una barrena de 30-35 cm de longitud cuya parte roscada debe tener, como mínimo, unos 3 cm de diámetro. La muestra se toma introduciendo la barrena en el suelo hasta unos 30 cm de profundidad, tirando de ella hacia arriba y pasando el suelo adherido a la bolsa.
2.
Empleando una sonda, que consiste en un tubo cilíndrico cuya parte inferior es media caña de 40 a 60 cm de longitud terminada en punta afilada. Después de introducirla en el suelo, por rotación sobre su eje, permite extraer una porción de aquel desde la superficie hasta 30 cm de
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1 TOMA DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN 1.1 TOMA DE MUESTRAS De manera general, la toma de muestra de suelo ha de hacerse teniendo en cuenta, por una parte, la vaiablidad del mismo dentro de ciertos límites, y por otra, el fin a que se destina la muestra obtenida. Con respecto a la primera condición es muy importante que se tomen, siempre que sea posible, muestras múltiples de acuerdo con un método normalizado, teniendo en cuenta las características del terreno. En cuanto a la finalidad se distinguen: a) Muestras de suelos naturales. b) Muestras de suelos de cultivo En este curso nos centraremos en la toma de muestras de suelos de cultivo. En todos los casos debe realizarse una inspección previa del campo a muestrear para dibujar un diagrama en el que se señalen las distintas parcelas, cultivos, tratamientos fertilizantes, zonas de condiciones anormales y otras características que puedan diferenciar unos suelos de otros. Sobre ese diagrama se traza un plan del número de muestras a tomar, forma de tomarlas y orden de muestreo, teniendo en cuenta que debe recogerse una muestra distinta por cada porción de terreno con características peculiares y que debe tomarse una muestra como mínimo por cada 2 Ha. A continuación se numeran las bolsas en las que se van a guardar las muestras y se inicia su recogida. Las muestras de suelo se recogen generalmente a una profundidad de 0-30 cm, por uno de los procedimientos siguientes: 1.
Utilizando una barrena de 30-35 cm de longitud cuya parte roscada debe tener, como mínimo, unos 3 cm de diámetro. La muestra se toma introduciendo la barrena en el suelo hasta unos 30 cm de profundidad, tirando de ella hacia arriba y pasando el suelo adherido a la bolsa.
2.
Empleando una sonda, que consiste en un tubo cilíndrico cuya parte inferior es media caña de 40 a 60 cm de longitud terminada en punta afilada. Después de introducirla en el suelo, por rotación sobre su eje, permite extraer una porción de aquel desde la superficie hasta 30 cm de
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profundidad. Una vez fuera, con un vástago de diámetro un poco inferior al de la parte interior de la sonda se puede arrastrar toda la muestra a la bolsa. 3.
Por medio de una pala o azadón se cava un hoyo en forma de V de unos 30 cm de profundidad y de la pared de éste se corta una capa delgada en toda su profundidad.
Cualquiera que sea el medio utilizado, se repite la operación hasta obtener unos 2 kg de muestra. Esto se efectuará recorriendo la parcela en zigzag.
1.2 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Una vez recogidas adecuadamente las muestras de suelo en el campo deben ser trasladadas al laboratorio y extendidas sobre papel para su secado. Una vez seco el material de suelo debe hacerse pasar por un tamiz de 2 mm, descartandose los guijarros pequeños pero no los grumos de suelo. Por lo general, para reducir el tamaño de las partículas de suelo y hacerlas pasar por el tamiz de 2 mm se utiliza un mortero con mano con punta de goma o un rodillo de madera para pulverizar los terrones y los grumos. Una vez tamizado el material de suelo se debe homogeneizar cuidadosamente. El material de suelo tamizado por la red de 2 mm es apropiado para la determinación de los constituyentes solubles en agua, los cationes intercambiables, el pH, la cal libre y varias otras reacciones químicas.
1.3 REFERENCIA: CHAPMAN, H.D. y PARKER, F.P, 1973."Métodos de análisis para suelos, plantas y aguas". Editorial Trillas. México. GUITIÁN OJEA, F. & CARBALLAS FERNÁNDEZ, T. “TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE SUELOS” 2ª Edición. Editorial PICO SACRO.1976. PRIMO YÚFERA, E. & CARRASCO DORRIEN, J.M. “QUÍMICA AGRÍCOLA I. Suelos y Fertilizantes” 1ª Edición. Editorial Alhambra. 1973
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2 PRUEBA PREVIA DE SALINIDAD
2.1 FUNDAMENTO: La prueba previa de salinidad tiene por objeto detectar si una de las causas de posibles problemas en los cultivos es el exceso de sales solubles en el suelo. Para diagnosticar si existe o no riesgos de daños por salinidad, se recurre a la medida de la conductividad eléctrica C.E. de un extracto de suelo. En el caso de la prueba previa puede trabajarse con extractos diluidos que se puedan preparar de forma rápida y cómoda, de forma que el análisis pueda realizarse sistemáticamente en todas las muestras que se reciban en un laboratorio. Cada vez que en la prueba previa se detecte que el suelo está salinizado, habrá que profundizar el estudio acercándose más a las condiciones de campo, se preparará un extracto de pasta saturada en lugar de extractos mas diluidos, para analizar en el cationes, aniones y C.E.
2.2 MATERIAL: •
Frascos de polietileno con tapon.
•
Embudos.
•
Papel de filtro.
•
Conductímetro
2.3 PROCEDIMIENTO: •
•
Pesar 10 g de muestra y pasarla a un frasco de 100 ml Añadir 50 ml de agua destilada
•
Tapar y agitar durante 30 minutos para que se equilibre la disolución
•
Dejar reposar unos minutos
Leer la conductividad habiendo calibrado previamente el conductivímetro. Los resultados se expresarán en dS/m que es equivalente a mmho/cm
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Se suele considerar que pueden existir problemas debido al exceso de sales si la salinidad del extracto 1:5 es superior a 0,2 dS/m. La gravedad del problema depende de la resistencia de los diferentes cultivos a la salinidad.
2.4 REFERENCIA: Porta Casanellas “Tecnicas y experimentos en edafología” Editado por Collegi oficial d’enginyers agrònoms de catalunya. Barcelona 1986.
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3 pH DEL SUELO
3.1 FUNDAMENTO: Las plantas cultivadas y las asociaciones vegetales tienen un óptimo de crecimiento entre límites de pH bastante estrechos, siendo uno de los objetivos más importantes del técnico agrícola corregir los valores del pH del suelo para adaptarlos a las plantas que se cultivan. La determinación del pH es una medida imprescindible en todo laboratorio de suelos. Como la suspensión de suelo en agua u otra solución cualquiera no es un sistema homogéneo, ha de tenerse en cuenta este carácter al realizar la determinación. Por otra parte, para poder efectuar la medida de pH, ha de añadirse al suelo agua o un electrolito, y, como el pH varía con la dilución, es necesario fijar la cantidad de agua añadida para obtener resultados reproducibles.
3.2 MATERIAL: Vasos de precipitado de 100 ml, varillas de vidrio, pHmetro.
3.3 REACTIVOS: Solución de KCl 0,1M: Disolver 37,28 g de KCl en 500 ml de agua destilada.
3.4 PROCEDIMIENTO: pH en agua: Se pesan 10 g de suelo y se añaden 25 ml de agua destilada. Agitar vigorosamente con agitador magnético durante 5 minutos. Dejar reposar durante 30 minutos para que la solución se equilibre. Agitar las muestras antes de tomar la lectura. pH en solución de cloruro potásico: Se procede igual que en el caso anterior. En este caso se añaden 25 ml de KCl, se agita durante 5 minutos y se deja en reposo media hora.
3.5 RESULTADO: Expresar el resultado de ambas medidas: pH (H 2O) y pH (KCl).
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Tabla 1. Valores de pH orientativos en suelos agrícolas SECANO
REGADIO
Muy alto
8.5
Alto
7.6-8.5
Alto
> 7.6
Normal
6.5-7.5
Normal
6.3-7.5
Bajo
5.5-6.4
Bajo
<6.4
Muy Bajo
5.5
3.6 BIBLIOGRAFIA: Guitian y Carballos T., 1976. Técnicas de análisis de suelos. Ed.Pico Sacro. Santiago de Compostela.
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4 ASIMILABLES: CALCIO, MAGNESIO, SODIO Y POTASIO
4.1 FUNDAMENTO El conocimiento
de los macroelementos asimilables
del suelo se realiza
generalmente mediante procedimientos que utilizan en una primera fase soluciones extractoras con propiedades químicas similares a las que podrían encontrarse en el suelo, en las proximidades de las raíces de las plantas. Las determinaciones de Calcio, Magnesio, Sodio y Potasio Asimilables se realizan utilizando una solución extractora de Acetato Amónico a pH=7 y determinando posteriormente dichos cationes asimilables por espectrofotometría de absorción atómica.
4.2 MATERIAL Agitador rotatorio de botellas, matraces aforados y otro material volumétrico, pipetas de 1 y 5 ml, embudos, frascos lavadores, y espectrofotómetro de absorción atómica.
4.3 REACTIVOS Solución extractora de Acetato amónico 1N : En un matraz aforado de 1l se añaden unos 600 ml de agua destilada. A continuación se añaden 57 ml de ácido acético glacial y finalmente 68 ml de NH4OH concentrado de densidad 0,9 g/ml. El NH4OH Se debe añadir con un embudo de cuelo largo de tal manera que llegue al fondo de lsolución del ácido. Dejar enfriar y ajustar el pH a 7 con ácido acético o NH 4OH. Solución de La2O3 al 3%: Se pesan 17.6 g de oxido de lantano y se disuelven en unos 100 ml de H 2O destilada. A continuación se añaden 50 ml de HCl, se deja enfriar y se enrasa a 500 ml con H 2O destilada. Solución de LiCl 2,5 N: Se pesan 4,24 g de cloruro de litio, se disuelven en agua y se enrasa a 100 ml.
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4.4 PROCEDIMIENTO Se introducen 5 g de suelo seco y tamizado en frasco de agitación con 200 ml de solución extractora. Se agita la mezcla en el agitador rotatorio durante dos horas. A continuación se filtra y se recoge el filtrado en un frasco de polietileno. Para determinar el Ca y el Mg se realizan diluciones 1:10, 1:100 y 1:250 del extracto recogido que contengan también un 0,3 % de La 2O3, para ello se utilizará una solución de La2O3 al 3 % y se diluirá 10 veces. Posteriormente se miden ambos cationes por absorción atómica. Para la medida del sodio y del potasio se realizan diluciones 1:5 o 1:10 del extracto recogido que contengan también 1 ml de LiCl 2,5 N por cada 25 ml de disolución. Estos dos elementos se miden por emisión atómica.
4.5 RESULTADOS El resultado obtenido en ppm de la lectura del espectrofotómetro de Absorción Atómica se expresará en gramos de cada catión asimilable por kilogramo de suelo.
4.6 BIBLIOGRAFIA Guitian F. y Carballos T. 1976. Técnicas de Análisis de suelos. Ed. Pico Sacro. Santiago de Compostela.
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5 MICRONUTRIENTES ASIMILABLES DEL SUELO
5.1 FUNDAMENTO Los elementos hierro, manganeso, cobre, zinc y otros han demostrado ser causa de irregularidades en el desarrollo de las plantas por fenómenos de toxicidad en algunos casos, y de carencia en otros. El concepto de toxicidad o carencia de oligoelementos del suelo va asociado a la planta que se desea cultivar, es decir, un suelo puede ser tóxico en un elemento para una planta dada, mientras que para otras pueden ser necesarias grandes cantidades del mismo. Sin embargo, a pesar de haberse demostrado claramente estos fenómenos de carencia en las plantas, pocas veces faltan estos elementos en el suelo, justificándose únicamente la carencia de ellos por no encontrarse en forma asimilable por la planta. El objetivo de esta práctica es extraer y medir dichos micronutrientes y, comprobar que efectivamente, se encuentran en pequeñas cantidades en el suelo. Los métodos generales de determinación de oligoelementos utilizan soluciones extractoras; en el método que se utiliza a continuación se emplea EDTA 0.05 M a pH=7.
5.2 MATERIAL Agitador rotatorio de botellas, matraces aforados y otro material volumétrico, pipetas de 1 y 5 ml, embudos, frascos lavadores, y el espectrofotómetro de absorción atómica.
5.3 REACTIVOS Solución de AEDT 0,05M: Pesar 163,6 g de Ácido Dietilentetraacético dihidrato sal disódica, disolver en agua destilada y enrasar a 1 l.
5.4 PROCEDIMIENTO Se pesan 15 g. de suelo (seco y tamizado) y se introducen en una botella de agitación añadiendo 75 ml de la solución extractora EDTA; se aggita la mezcla en el agitador rotatorio durante una hora. A continuación se filtra y se recoge sobre un frasco de polietileno. La solución se deja filtrar aproximadamente durante doce horas. 9
Del extracto recogido se hacen diluciones 1:10 y 1:100, enrasando los matraces con agua destilada. Dichas diluciones junto con el extracto se miden en el espectrofotómetro de absorción atómica. La lectura fotométrica se interpola en la curva patrón para obtener el resultado.
5.5 RESULTADOS El resultado obtenido en ppm de la recta de regresión se expresará en gramos de cada oligoelemento asimilable por kilogramo de suelo.
5.6 BIBLIOGRAFIA Vivo P.J. 1955 Soil Science 79, 459. Velasco A. 1978. Oligoelementos en suelos de la comarca de Pedroches (Córdoba). Tesina de Licenciatura (Univ. de Córdoba).
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6 CATIONES CAMBIABLES Y CAPACIDAD DE CAMBIO CATIÓNICO
6.1 FUNDAMENTO La capacidad de cambio catiónico de un suelo es la cantidad de cationes que pueden situarse en sus posiciones de intercambio, expresada en meq/100g de suelo. Es una característica del suelo que depende de su composición química, fundamentalmente del contenido y naturaleza de las arcillas, de la materia orgánica, etc. Su estudio es de gran interés, tanto para la interpretación genética y sistemática del suelo, pues está relacionada directamente con el complejo de alteración, como para conocer su comportamiento práctico, puesto que constituye un índice de la aptitud del suelo para retener y suministrar nutrientes a las plantas. El método empleado consiste, en primer lugar, en desplazar los cationes de cambio del suelo por Na+ con una solución de una sal sódica (AcONa 1N). Los cationes de cambio Ca 2+ y Mg2+ se medirán en el líquido de lavado. A continuación y tras eliminar el exceso de sal con sucesivos lavados con etanol, se desplazará el Na + de las posiciones de intercambio con una sal de NH4+. El Na+ desplazado dará la medida de la capacidad de cambio total (T). Para determinar los cationes de cambio Na+ y K +, se añadirá sobre una muestra de suelo una solución de una sal amónica (AcONH4) para desplazar todos los cationes del complejo de cambio. Dichos cationes se determinarán en los líquidos de lavado.
6.2
MATERIAL
Tubos de centrífuga; matraces aforados de 50 y 100 ml; pipetas de 1 y 5 ml; embudos; agitador mecánico, centrífuga; espectrofotómetro de Absorción Atómica.
6.3 REACTIVOS Disolución de acetato sódico 1N (pH=8.2): Pesar y disolver 136 g de AcONa·3H 2O en 1l de agua destilada, el pH debe ser 8.2. Ajustar el pH con AcOH o NaOH Solución de Acetato amónico 1N (pH=7): En un matraz aforado de 1l se añaden unos 600 ml de agua destilada. A continuación se añaden 57 ml de ácido acético glacial y 11
finalmente 68 ml de NH4OH concentrado de densidad 0,9 g/ml. El NH4OH Se debe añadir con un embudo de cuelo largo de tal manera que llegue al fondo de lsolución del ácido. Dejar enfriar y ajustar el pH a 7 con ácido acético o NH 4OH. Etanol 95% Disolución de oxido de lantano(3% La)-ácido clorhídrico (20%): Pesar 17.6 g de La2O3 y añadir 100 ml de HCl concentrado. Enrasar en un matraz de 500 ml con agua destilada. Disolución de LiCl 2,5 N: Se pesan 4,24 g de cloruro de litio, se disuelven en agua y se enrasa a 100 ml.
6.4 PROCEDIMIENTO 6.4.1
CAPACIDAD DE CAMBIO TOTAL
Se pesan 5 g de suelo. Se introducen en un tubo de centrífuga y se añaden 33 ml de AcONa 1N; se tapa el tubo y se agita durante 5 min en el agitador mecánico. Se destapa y se centrifuga hasta que el líquido sobrenadante esté claro (aproximadamente 5 min). A continuación, se decanta el líquido sobrenadante y se recoge sobre un matraz de 100ml (dicho matraz se etiquetará como Ca2+ y Mg2+ de cambio). Este tratamiento se repetirá tres veces. A continuación se procede a lavar el suelo y centrifugar 3 veces con 33 ml de etanol al 95%; el sobrenadante de estos lavados no se recoge. El Na+ adsorbido en la muestra se desplaza con AcONH4: se lava y se centrifuga 3 veces seguidas con 33 ml de AcONH4 1N, recogiendo el sobrenadante sobre matraces aforados de 100 ml (se etiquetarán como T, ya que el Na es indicativo de la capacidad de cambio total). Hacer diluciones 1:10 y 1:100 de la solución en la que se ha recogido el Ca 2+ y Mg2+ de cambio, añadiendo la cantidad de solución de La2O3 (3% La)-HCl (20%) necesaria para que la solución final sea, a la vez del 0,3% en La y del 2% en HCl. A continuación se procederá a la determinación de Ca2+ y Mg2+. Hacer diluciones 1:100 de la solución recogida después de los sucesivos lavados con AcONH4 añadiendo 1 ml de LiCl 2,5 N por cada 25 ml de disolución. A continuación se procederá a la determinación de la capacidad de cambio total (T), determinando el contenido en Na+. La capacidad de intercambio catiónico se expresa en cmol(+)/Kg de suelo o en meq/100 g de suelo.
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6.4.2
CATIONES DE CAMBIO
Se pesan 5 g de suelo. Se introducen en un tubo de centrífuga y se añaden 33 ml de AcONH4 1N; se tapa el tubo y se agita durante 5 min en el agitador mecánico. Se destapa y se centrifuga hasta que el líquido sobrenadante esté claro. Se repite este tratamiento 3 veces recogiendo el sobrenadante sobre matraces aforados de 100 ml. Hacer diluciones 1:5 y 1:10 en agua destilada de la solución recogida, añadiendo 1 ml de LiCl 2,5 N por cada 25 ml de disolución. A continuación se procederá a la determinación de los cationes de cambio Na+ y K +, determinando su contenido en la disolución madre o en la dilución. Los cationes de cambio se expresan en en cmol(+)/Kg de suelo meq/100 g de suelo.
6.5 CALCULOS Calcular los siguientes parámetros: •
•
•
T ( o CCC) = capacidad de cambio de cationes (c(mol)/Kg) S = suma de “bases” de cambio: Na+ , K + , Mg2+ y Ca2+ de cambio (cmol(+)/Kg) % V (grado de saturación en bases) =
S T
x100
6.6 BIBLIOGRAFIA Bower, C.A., Reitemeier, R.F. y Fireman, M. “Exchangeable cation analysis of saline and alkaly soils” Soil Sci. 73: 251-261, 1952. MAPA. 1982. MÉTODOS OFICIALES DE ANÁLISIS DE SUELOS Y AGUAS. Madrid.
13
7 CARBONO Y MATERIA ORGÁNICA
7.1 FUNDAMENTO: Los métodos que se utilizan en la determinación del carbono orgánico en los suelos, se basan en la oxidación de la materia orgánica con dicromato potásico y ácido sulfúrico. La velocidad e intensidad de esta oxidación depende en los distintos métodos utilizados, de la cantidad y forma de la materia orgánica en la muestra, así como de la temperatura de reacción utilizada. El Cr3+ procedente de la reducción del dicromato por la materia orgánica se valora por métodos colorimétricos o volumétricos.
7.2 MATERIAL: Vasos de precipitado de 250 ml; varillas de vidrio; embudos; lana de vidrio; matraces aforados de 100 y 50 ml; pipetas de 5 ml; espectrofotómetro.
7.3 REACTIVOS: K 2Cr2O7 al 8 %: Pesar 80 g de K 2Cr2O7, disolverlo en agua y enrasar a 1 l. H2SO4 concentrado.
7.4 PROCEDIMIENTO: Se pesan entre 0,5 y 1 g de suelos seco y tamizado con tamiz de 2 mm, se ponen en un vaso de precipitado de 250 ml y se añaden 20 ml de dicromato potásico al 8 % y, lentamente y moviendo con una varilla de vidrio, 30 ml de ácido sulfúrico concentrado. Se deja reposar durante 30 minutos. Transcurrido dicho tiempo se filtra el extracto sobre lana de vidrio recogiéndolo en un matraz aforado de 100 ml. Análogamente, preparamos los patrones para la curva patrón del carbono; para ello, partimos de una cantidad dada de glucosa de contenido en carbono conocido: g de C6H12O6 : % de C
:
0
0.025
0.05
0.1
0.1375
0
1
2
4
5.5 15
Hacer diluciones 1:10 tanto de la muestra de suelo como de los patrones y se mide la densidad óptica que absorbe el Cr (III) en el espectrofotómetro a 600 nm.
7.5 CÁLCULOS Y RESULTADOS: El valor obtenido de la recta de regresión está expresado en %C en suelo directamente, ya que para su cálculo se han considerado todas las diluciones realizadas. El resultado final se expresará en g de carbono por kg de suelo y en g de materia orgánica por kg de suelo. El contenido en materia orgánica vendrá dado por la siguiente ecuación: MATERIA ORGÁNICA = K x CARBONO (g/Kg) K (constante) = 1.724 Es interesante también calcular la relación C/N una vez que se han determinado los dos parámetros.
CANTIDADES ORIENTATIVAS DE “C ORGÁNICO (%)” EN SUELOS AGRÍCOLAS
REGADIO Muy alto >2.5 Alto 1.81-2.4 Normal 1.45-1.80 Bajo 1.44-1.15 Muy Bajo <1.15
SECANO Alto Normal Bajo
>0.18 1.10-1.60 <1.09
VALORES ORIENTATIVOS DE LA RELACIÓN “C/N” EN SUELOS AGRÍCOLAS REGADIO Muy alto 15 Alto 12-15 Normal 9-11 Bajo 8-7 Muy Bajo 7
SECANO Alto Normal Bajo
13 9-12 8
7.6 BIBLIOGRAFIA: Guitian F. y Carballos T. 1976. Técnicas de Análisis de suelos. Ed. Pico Sacro. Santiago de Compostela. Porta Casanella, J., López-Acevedo Reguerin, M. y Rodríguez Ochoa, R. 1986. Técnicas y experimentos en edafología. Ed. COL LEGI OFICIAL D’ENGINYERS AGRÒNOMS DE ▪
CATALUNYA. 16
8 FÓSFORO ASIMILABLE EN SUELOS (Método Olsen – Reactivo de Murphy)
8.1 FUNDAMENTO: Extraer el fósforo del suelo con NaHCO3 0,5 M a un pH aproximadamente constante de 8,5 en los suelos calizos, alcalinos o neutros que contengan fosfatos cálcicos, aumenta ala concentración de P en la solución extractora por precipitación de calacio como CaCO3. En los suelos ácidos que contengan fosfatos de hierro y aluminio, la concentración de fósforo en la solución aumenta conforme el pH se eleva. La concentración del complejo de color azul formado por la reducción, con ácido ascórbico, del fosfomolibdato obtenido cuando el molibdato amónico reacciona con el fósforo en medio ácido, en presencia del ion antimonilo, se mide espectrofotométricamente a 880 nm.
8.2 MATERIAL: •
•
•
•
Agitador magnético Frascos de polietileno Vasos de precipitado de 100 ml. Espectrofotómetro.
8.3 REACTIVOS: REACTIVO A: Solución 1: Disolver 12 g de molibdato amónico en 250 ml de agua destilada tibia. Solución 2: En 100 ml de agua destilada disolver 0,2908 g de tartrato de potasio y antimonio.
17
Se trasvasa la solución 1 a un matraz de 2 litros y se añade 1 litro de ácido sulfúrico 5N (140 ml de ácido concentrado, preferiblemente calidad MERCK). Mezclar bien y añadir la solución 2. Volver a agitar y diluir al aforo con agua destilada.
REACTIVO MIXTO: Disolver 1,320 g de ácido ascórbico en 250 ml de reactivo A (ó 1.056 g en 200 ml ó 0,528 g en 100 ml) y mezclar. Este reactivo debe prepararse en el momento de usarse; estable 24 h. SOLUCIÓN PATRÓN DE 1000 ppm DE P: Disolver 1,0984 g de KH2PO4 en 250 ml de agua destilada SOLUCIÓN PATRÓN DE 10 ppm DE P: Diluir 2,5 ml de la solución de 1000 ppm de P a 250 ml con agua destilada. EXTRACTORA OLSEN: BICARBONATO SÓDICO 0.5 M: disolver 42.05 g de NaHCO 3 en 500 ml agua destilada, ajustar el pH a 8,5 con NaOH y diluir a 1l.
8.4 PROCEDIMIENTO 8.4.1
EXTRACCIÓN Añadir a 2,5 g de suelo, una espátula de carbón activo y 50 ml de solución extractora
Olsen. Agitar durante 30 minutos en agitador y filtrar por whatman nº 40. Antes de determinar el P, añadir una gota de indicador 4-nitrofenol y añadir H2SO4 en cantidad equivalente al bicarbonato 0,5 N que se haya pipeteado (si se usa H 2SO4 5N se añade 0,1 ml por ml de problema). Esperar unos minutos hasta que desaparezca la efervescencia y el color amarillo. Si después de añadir el volumen correspondiente de H2SO4 y desaparecida la efervescencia no desapareciese el color del indicador, añadir gota a gota H 2SO4 de la misma concentración hasta desaparición total de dicho color, agitando suavemente.
8.4.2
DETERMINACI ÓN DEL FÓSFORO Pipetear una alícuota del problema en matraces aforados de 50 ml (30 ml máximo)
18
Añadir 8 ml de reactivo mixto, agitar y enrasar con agua destilada. Al agitar el matraz una vez enrasado conviene dejar salir el CO 2 que pueda producirse. Pipetear los siguientes ml de solución patrón de 1 ppm y proceder igual que con los problemas. Volumen de patrón 1 g /ml (ml) 1
2
3
4
Contenido en P ( g )
30
40
50
10
20
5
Medir la absorbancia de la solución en un fotocolorímetro después de 30 minutos y antes de 24 horas a 880 nm de longitud de onda.
8.5 CÁLCULOS Y RESULTADOS. Los resultados obtenidos de la recta de regresión son ppm de fósforo en la disolución. Estos valores se expresaran como ppm de fósforo con respecto al suelo y como % de P 2O5.
CANTIDADES ORIENTATIVAS DE “P OLSEN” EN SUELOS AGRÍCOLAS P (ppm) SECANO arenoso franco arcilloso REGADIO arenoso franco arcilloso REGADIO INTENSIVO arenoso franco arcilloso
Muy Bajo
Bajo
Normal
Alto
Muy Alto
0-4 0-6 0-8
5-8 7-12 9-26
9-12 13-18 17-24
13-20 19-30 25-40
21-42 31-48 41-64
0-6 0-8 0-10
7-12 9-16 11-20
13-18 17-24 21-30
19-30 25-40 31-50
31-48 41-64 51-80
0-8 0-10 0-12
9-16 11-20 13-24
17-24 20-30 25-36
25-40 31-50 37-60
41-64 51-80 61-96
8.6 REFERENCIAS: - CHAPMAN, H.D. y PARKER, F.P, 1973."Métodos de análisis para suelos, plantas y aguas". Editorial Trillas. Mexico - MÉTODOS OFICIALES DE ANÁLISIS DE SUELOS Y AGUAS". Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. Madrid, 1982. - PORTA CASANELLAS, J., 1986. "Técnicas y Experimentos en Edafología". Ed. Colegio de Ingenieros Agrónomos de Cataluña.
19
9 NITRÓGENO KJELDAHL
9.1 FUNDAMENTO: El nitrógeno en el suelo se encuentra principalmente: a) formando parte de la materia orgánica; b) fijado, de modo estable a la red de los silicatos; c) en forma de ion amonio, y d) en forma de nitratos. La mayor parte del nitrógeno está en combinación con la materia orgánica y sólo una pequeña fracción se encuentra en forma asimilable por las plantas en forma de nitratos y amonio intercambiable. El nitrógeno ligado a la materia orgánica constituye una importante reserva del mismo en los suelos. El conocimiento del nitrógeno total en suelos agrícolas y forestales es pues de gran importancia para conocer las reservas de éste y la calidad de la materia orgánica. La determinación más utilizada es la debida a Kjeldhal. El nitrógeno orgánico del suelo se transforma en sales amónicas mediante digestión con ácido sulfúrico utilizando catalizadores para acelerar la reacción. Las sales amónicas formadas se tratan con hidróxido sódico formándose amoniaco que mediante arrastre por vapor se lleva a una solución de ácido bórico.
9.2 MATERIAL: -Digestor o mantas calefactoras. - Matraces kjeldhal o tubos de digestión Büchi. - Destilador automático. - Bureta de 50 ml. - Matraces erlenmeyer de 100 ml.
9.3
REACTIVOS: Ácido sulfúrico de 96-98 %. 21
Ácido bórico al 4 %: Pesar 40 gramos de ácido bórico en un vaso de precipitado de un litro y llevar a volumen en un matraz aforado de un litro Hidróxido sódico al 50 % con un 5 % de tiosulfato sódico : Pesar en un vaso de precipitado de un litro 500 gr. de NaOH y disolver, una vez disuelto añadir 5 gr. de tiosulfato sódico. Enrasar en un matraz aforado de un litro. Disolución patrón de nitrógeno: Pesar 4,7287 gr. de (NH 4)2SO4, disolverlo en agua destilada y enrasar a un litro en un matraz aforado. Esta disolución así preparada contiene 1 gr. N/l. Ácido clorhídrico 0,02 N
9.4 PROCEDIMIENTO: 9.4.1
MINERALIZACI ÓN DE LA MUESTRA. Se pesa 5 gr. de suelo, secado al aire y tamizado por tamiz de 2 mm. de malla, y se
introduce en un matraz kjeldhal de digestión. Se añaden 10 ml de ácido sulfúrico del 96-98 % y unos 0,5 gr. de catalizador (KHSO4, CuSO4 y Se). SE coloca el matraz en el digestor y se calienta durante dos horas. El calentamiento debe empezar de manera suave y aumentar progresivamente hasta ebullición. Se deja enfriar y se destila.
9.4.2
DESTILACIÓN. Se coloca el tubo en el destilador automático y se añade sosa al 50 % y agua destilada. En un matraz erlenmeyer de 100 ml se colocan unos 8 o 10 ml de ácido bórico al 4 % y
unas gotas de indicador mixto. Se destila hasta recoger unos 80 ml en el erlenmeyer. Si el indicador vira de violeta a verde, entonces hay nitrógeno y se pasa a la valoración.
9.4.3
VALORACIÓN .
El contenido del erlenmeyer se valora con ácido clorhídrico 0,02 N previamente titulado. El punto de equivalencia se consigue cuando el indicador vira de verde a violeta. Valoración del HCl. Se toma 1 ml de la disolución patrón de 1 gr./l de nitrógeno y se pone en le destilador, se le añade la sosa al 50 % y se opera de la misma forma que con las muestras. 22
Este paso debe realizarse antes de poner a destilar las muestras.
9.5 CÁLCULOS: Gramos de N/Kg. de suelo = V*Nr*1000/5 Donde: V es el volumen del ácido clorhídrico consumido por la muestra Nr es la normalidad del ácido clorhídrico titulado.
9.6 REFERENCIAS: MÉTODOS OFICIALES DE ANÁLISIS DE SUELOS Y AGUAS". Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. Madrid, 1982. Guitian F. y Carballos T. 1976. Técnicas de Análisis de suelos. Ed. Pico Sacro. Santiago de Compostela.
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10 BORO ASIMILABLE.
10.1 FUNDAMENTO: Se ha demostrado que el Boro que se encuentra en el suelo en forma asimilable coincide con el que es capaz de extraer el agua se opera en determinadas condiciones, por lo qu ese utiliza el agua como solución extractora. No se usan ácidos diluidos debido a que reaccionan con los suelos calizos y varían la acidez del extractor. Su determinación se realiza en el extracto acuoso por colorimetría con curcumina. Esta sustancia se evapora a sequedad en presencia de la solución que contiene boro, desarrollándose un color rojo que se intensifica con ácido oxálico; el producto resultante se disuelve en alcohol etílico, siendo la densidad óptica de esta solución proporcional a la concentración de boro.
10.2 MATERIAL: Espectrofotómetro Baño de agua Matraces de destilación de 100 ml de vidrio exento de boro Matraces aforados de 100 ml. Refrigerantes de reflujo. Vasos de precipitado y pipetas.
10.3 REACTIVOS: Solución de curcumina: Se disuelven 0,04 g de curcumina cristalizada y 5 g de ácido oxálico en 100 ml de alcohol etílico. Solución patrón de boro: Se prepara una solución acuosa de ácido bórico de 100 ppm. A partir de esta se prepara una disolución de 1 ppm.
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10.4 PROCEDIMIENTO: 10.4.1 EXTRACCIÓN En un matraz de destilación de 100 ml se introducen 20 g de suelo tamizado y seco al aires y se añaden 40 ml de agua destilada; se conecta al matraz un refigerante de reflujo y se hace hervir la suspensión durante cinco minutos; después de dejarla enfriar se filtra y se recoge el extracto. 10.4.2 COLORIMETRÍA Se toma 1 ml del extracto y se lleva a un vaso de 100ml; se añaden 4 ml de la solución de curcumina, agitando el vaso mediante una ligera rotación y se evapora a sequedad en baño de agua a 55 ºC, dejando estar el residuo a esta temperatura durante 15 minutos; al cabo de este tiempo se enfría y se recoge el reiduo con 25 ml de alcohol etílico. En vez de los vaso de precipitado y el baño de agua se puede utilizar un rotavapor. Se filtra o centrifuga y se mide la absorbancia a 540 nm. Curva patrón: Se toman cantidades crecientes de la solución patrón de boro de 1 ppm (según la riqueza en boro que se espera encontrar en la solución problema) y se opera de la misma forma que para el extracto del suelo. Se mide la absorbancia y se representa gráficamente las lecturas obtenidas en función de las concentraciones.
10.5 CÁLCULOS Y RESULTADOS: Los valores de absorbancia de las muestras se interpolan en a recta de calibrado y se obtiene la concentración de boro. El valor así obtenido se expresa como gramos de boro por kilo de suelo.
10.6 REFERENCIAS: Guitian F. y Carballos T. 1976. Técnicas de Análisis de suelos. Ed. Pico Sacro. Santiago de Compostela.
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11 EXTRACTO DE PASTA SATURADA 11.1 FUNDAMENTO: La conductividad eléctrica del extracto de saturación del suelo es un buen índice para estimar el efecto de las sales sobre el crecimiento de las plantas. En el presetne método se prepara la pasta saturada de suelo añadiendo agua destilada y agitando hasta qe se alcanza un punto de humedad característico. La pasta se coloca en un filtro y se aplica succión para extraer una cantidad suficiente de solución para analizar. Los datos analíticos del extracto saturado de suelo pueden ser directamente utilizados para estimar el efecto de las sales sobre el crecimiento de las plantas.
11.2 MATERIAL: Recipientes para conservar los extractos, tales como tubos de ensayo o frascos. Recipientes de 250 ml de capacidad para prepara las pastas. Embudo Büchner de unos 20 cm de diámetro. Matraz Kitasato Bomba de vacío.
11.3 PROCEDIMIENTO: 11.3.1 PREPARACIÓN DE LA PASTA Se pesan 250 g de suelo tamizado y seco al aire se colocan en un recipiente. Se añade agua destilada y se mezcla con una espátula hasta que se alcance la saturación. De cuando en cuando, golpear el recipiente sobre la mesa del laboratorio. En el punto de saturación la pasta es brillante a la luz, fluye lentamente cuando el recipiente se inclina y se desliza sobre la espátula sin dejar mancha excepto en los suelos muy arcillosos. La mezcla se deja en reposo durante una hora o más y entonces debe de comprobarse la saturación y rectificarse si es enecesario. Si la pasta se ha endurecido o perdido su brillantez, mezclar con más agua para conseguir la consitencia anterior. Como los suelos se embarran cuando se trabajan con el agua necesaria para llevarlos a la llamada “capacidad de campo”, se
27
debe de añadir más agua inmediatamente hasta lograr el punto de saturación. La pasta con exceso de agua se corrige añadiéndole suelo seco. 11.3.2 SEPARACI ÓN DEL EXTRACTO Transferir la pasta del suelo saturado al embudo Büchner vertiéndola sobre el papel de filtro colocado en el embudo y aplicar vacío. Recoger el extracto sobre un tubo de ensayo en el interior del Kitasato y que se apoye sobre la salida del embudo. No utilizar material pirex si se va a determinar el boro. Si la primera porción del filtrado sale turbia, debe filtrarse nuevamente o desecharse. Si se desean hacer determinaciones de carbonatos o bicarbonatos debe añadirse una solución de hexametafosfato sódico de 1.000 ppm, a razón de una gota por cada 25 ml del extracto, antes de guardarlo y taparlo para evitar así la precipitación de carbonato de clacio. En el extracto de pasta saturada se puede medir el calcio, magnesio, sodio y potasio de manera análoga a como se hizo en el caso de los macroelementos asimilables.
11.4 REFERENICAS: MÉTODOS OFICIALES DE ANÁLISIS DE SUELOS Y AGUAS". Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. Madrid, 1982. PORTA CASANELLAS, J., 1986. "Técnicas y Experimentos en Edafología". Ed. Colegio de Ingenieros Agrónomos de Cataluña.
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12 DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE YESO
12.1 OBJETIVO La presencia de yeso, CaSO4·H2O, en el suelo puede afectar a dos niveles diferentes: •
A nivel agronómico, debido al especial comportamiento de este mineral. Es poco soluble, pero lo suficiente para que el calcio puesto en disolución cree problemas con el abonado fosfatado, en el sentido de provocar retrogradaciones. Además, un exceso de yeso puede dificultar el paso de las raíces debido al endurecimiento excesivo de los horizontes gypsicos durante la estación seca. La presencia de yeso evitará procesos de alcalinización en la mejora de suelos afectados por la salinidad.
•
A nivel analítico, interesa detectar la presencia de esta sal para orientar adecuadamente determinados análisis: concretamente todas las desecaciones deberán realizarse a menos de 50 oC para evitar la pérdida del agua de cristalización; los análisis granulométricos serán difíciles, presentándose frecuentemente floculaciones, etc. Por estos motivos interesa disponer de un ensayo cualitativo para detectar la presencia de este componente en el suelo.
El análisis cuantitativo, más difícil de llevar a cabo, se realizará cuando se haya detectado el problema e interese profundizar en él.
12.2 FUNDAMENTO El método se basa en la precipitación del yeso en líquidos menos polares que el agua, por ejemplo en acetona. Este método detecta la presencia de yeso cuando éste se halla en una cantidad de al menos 3 meq/l, lo que corresponde a 0.26 g de yeso/100 g de suelo si el extracto es 1/10. La solución se satura de yeso para valores de alrededor de 30 meq/l, es decir, unos 2.6 g de yeso/100 g de suelo, en ausencia de otras sales.
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12.3 MATERIAL Balanza granatario con aproximación de + 0.01 g. Agitador rotativo. (Alternativa: Agitador y núcleo magnético + centrífuga). Botella de 200 ml. Embudo de unos 6 cm. de diámetro. Papel de filtro. Tubos de ensayo.
12.4 REACTIVOS Acetona
12.5 PROCEDIMIENTO Pesar una muestra de suelo desecado al aire de 10 a 20 g y colocarla en un frasco al que se añade agua suficiente para disolver parte o todo el yeso presente. Tapar la botella y agitar durante 15 minutos en agitado mecánico. Filtrar el extracto a través de un filtro de porosidad media. Colocar unos 5 ml del extracto en un tubo de ensayo y añadir aproximadamente un volumen igual de acetona. La formación de un precipitado indica la presencia de yeso en el suelo. 12.6 BIBLIOGRAFÍA TAMES,C. (1961):" Prácticas de laboratorio". E.T.S.I.A. Cátedra de Edafología. Madrid. RICHARDS,(1954, 1969): " Saline and alkali soils". Handbook nº 60, 160 pp. USDA. MÉTODOS OFICIALES DE ANÁLISIS DE SUELOS Y AGUAS". Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. Madrid, 1982. PORTA CASANELLAS, J., 1986. "Técnicas y Experimentos en Edafología". Ed. Colegio de Ingenieros Agrónomos de Cataluña.
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13 DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE YESO
13.1 FUNDAMENTO En caso de reacción positiva del método anterior puede interesar conocer la cantidad de yeso presente. Este método se basa en que la solución del sulfato cálcico es menor que la de otros sulfatos generalmente menos abundantes en el suelo. El precipitado que se obtiene por adición de acetona al extracto acuoso del suelo es redisuelto en agua, midiéndose la conductividad eléctrica de dicha disolución para determinar la concentración de sulfato cálcico presente.
13.2 MATERIAL Centrífuga Tubos de centrífuga de fondo cónico de 50 ml Conductimetro
13.3 REACTIVOS Acetona
13.4 PROCEDIMIETO Pesar de 10 a 20 g de suelo desecado al aire y colocarlos en un frasco de unos 250 ml. Añadir un volumen de agua de 5 10 veces superior al peso de suelo. Tapar el frasco y agitar durante 15 minutos e un agitado mecánico. Filtrar el extracto a través de papel de filtro de porosidad media. Transferir 20 ml del extracto obtenido a un tubo de centrífuga y agregar 20 ml de acetona y mezclar. Dejar en reposo durante cinco o diez minutos hasta que flocule el precipitado. Centrifugar con una fuerza centrífuga relativa de 1.000 durante cinco minutos. Decantar el líquido sobrenadante, invertir el tubo y drenar sobre papel de filtro durante cinco minutos. Dispersar el precipitado y enjugar la pared del tubo con 10 ml de acetona soplando por una pipeta. Repetir la centrifugación, decantación y escurrido como antes. Finalmente
31
añadir 40 ml de agua destilada al tubo, tapar y agitar hasta que el precipitado quede completamente disuelto. Medir la conductividad.
13.5 CÁLCULOS Calcular el contenido en yeso del suelo expresado en porcentaje Contenido del suelo en yeso, %
=
0,086 * C * V * V ' 10 * P * V ' '
Donde: C = concentración en meq/l de CaSO4 2H 2O deducida de la lectura de conductividad en la Tabla 2 V’ = volumen en ml de agua añadida para disolver el precipitado. P = peso en g de la muestra de suelo. V = volumen en ml del agua añadida a la muestra de suelo. V’’ = volumen en ml del extracto acuoso utilizado para precipitar con acetona
Tabla 2. Datos de concentración de sulfato cálcico en función de la conductividad eléctrica. Concentración de CaSO4 (meq/l)
C.E. de la solución (mmhos/cm)
1 2
0,121 0,226
5 10 20 30,5
0,500 0,900 1,584 2,205
13.6 REFERENCIAS: MÉTODOS OFICIALES DE ANÁLISIS DE SUELOS Y AGUAS". Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. Madrid, 1982.
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14 ANÁLISIS FOLIAR.
14.1 INTRODUCCIÓN El análisis foliar se basa en la relación entre la concentración de nutrientes en la planta su desarrollo. El análisis de la planta se podría hacer, en principio, de cualquier parte de la planta, sin embargo, dado que la hoja es una sede importante de la actividad metabólica parece lógico pensar que de su nivel nutricional dependerá la actividad vegetativa de la planta, la productividad y la calidad de la fruta. Entre los objetivos más importantes del análisis folar pueden destacarse: a) Estudio del abonado. Dentro de este estudio el análisis foliar persigue: •
Estudiar el equilibrio de los difrentes elementos en la planta, así como extraer conclusiones sobre la riqueza del suelo y del poder de asimilación de las plantas. Este conocimiento del equilibrio de los elementos en la planta permite corregir mejor el equilibrio de los elmentos en el suelo.
•
También se utiliza para relacionar el contenido en elementos nutritivos en la palnta y el rendimiento de ésta. Ya se sabe que la producción de un cultivo está en función del contenido en elementos nutritivos, tal como queda reflejado en la gráfica 5.
•
El análisis foliartambién es válido para seguir una prueba de abonado. Cuando aplicamos un abono para corregir una carencia es importante conocer el tiempo que la planta tarda en absorber el abono y la respuesta que tiene la planta frente a esta absorción.
•
También se utiliza para prevenir carencias como consecuenca del estado nutricional.
b) Confirmación de la sintomatología visual de carencia o exceso. c) Otros objetivos. La comparación del análisis foliar con el análisi de suelo nos dice si la abosrción de determinado nutriente por parte de la planta es adecuada o se encuentra bloqueada. Así pues puede ocurrir que cierto elemento esté en cantidad suficiente en el suelo y sin embargo se 33
encuentre en defecto en la planta como consecuencia de la acción antagónica de otro. Por ejemplo, un contenido elevado en nitrógeno hace que no se absorba bien el cobre en las plantas. También puede ocurrir lo contrario, es decir, que haya un exceso de un elemento en la planta y sin embaro no esté en exceso en el suelo. Esto es porque se produce un efecto sinérgico. Por ejemplo entre el azufre y el hierro. En un medio alcalino, las aportaciones de azufre hacen que el hierro se solubilice y facilite así su absorción.
14.2 TOMA DE MUESTRA La toma de muestras dependerá del objetivo perseguido en el análisis: a) Como guía de fertilización:
La muestra debe representar el estado nutriconal medio de la parcela.
Se tomarán hojas jóvenes completamente desrrolladas.
En especies leñosas, el mejor indicador del nivel de nutrienes son los brotes del año; el muestreo deb e realizarse en jojas de posición basal, mediana o apical, totalmente desarrolladas de las ramas de crecimento del año.
En especies pratenses es normal muestrear toda la parte aérea.
b) Para determinar una malnutrición o toxicidad con síntomas visuales.
De 100 a 200 hojas que sean representativas de la sintomatología que se pretende caracterizar, evitando las más dañadasy tomado al mismo tiemo otra muestra de hojas sanas para comparacion.
Si la sintomatología aprece en otro tejido se tomarán muestras de los tejidos cloróticos.
Una vez determinado el objetivo perseguido en el análisis, lo primero que se debe hacer a la hora de realizar el muestreo es dividir la parcela en unidades de muestreo. Estas unidades son pedazos de terreno que por su uniformidad (igual terreno, igual cultivo, etc.) se pueden representar por una sola muestra. Por último, para que la muestra pueda considerarse válida, es importante seguir el siguiente procedimiento: a) La toma de muestra se hace cuando el contenido de elementos dentro de la hoja es prácticamente constante, y siempre en la misma época. Para 34
facilitar la fecha, debido a que climatológicamente todos los ñaos son diferentes, parece interesatne hacer referncia a algún estado fenológico, con lo cual ya no existirá la posible influencia debida al clima. El estado fenológico de referencia es F2 o 50% de flor abierta. b) Las hojas a muestrear se sacan de la zona media de las ramas del año. Esta rama, que es un brote, tiene que se de vigor medio. El brote no puede ser un brote chupón y su forma no puede ser pendular. Cuando se muestrean arboles las hojas deben estar a una altura media entre 1,5 y 2,5 m y tienen que cogerse en la parte externa. Las hojas deben tener peciolo y, si queremos estudiar algún problema detectado, tienen que ser verdes, sin lesiones y completas. Las muestra de hojas cogidas se introducen en bolsas de polietileno y se ponen en una nevera con hielo para su traslado al laboratorio. Una vez allí se meten en el congelador hasta la hora de realizar el análisis.
14.3 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Las hojas se lavan con agua destilada para eliminar los restos de fertilizantes, fitosanitarios o partículas de suelos adheridas. A continuacion se secan presionando suavemente con un papel de filtro, se les elimina el peciolo y se ponen a secar durante 48-72 horas a una temperatura de 60 ºC en una estufa con aire forzado. Una vez secas, se muelen en un molinillo tipo “Culatti” con tamiz de 1 mm hasta obtener un polvo fino. Las muestras así obtenidas se conservan en sobres de papel en un desecador, para evitar que se humedezcan.
14.4 MATERIAL Cápsulas de porcelana. Horno mufla. Estufa. Matraces aforados de 50 ml.
14.5 REACTIVOS Ácido clorhídrico concentrado.
35
14.6 PROCEDIMIENTO Se pesa 1 g de muestra molida y seca en cápsula de porcelana, se introducen en un horno mufla frío y paulatinamente se elva la temperatura hasta alcanzar los 450 ºC en dos horas. Se mantiene esta temperatura durante otras dos horas más. A continuación se sacan las cápsulas y se colocan en un desecador donde se dejan enfriar lentamente. Para recoger las cenizas se humedecen con unos 2 ó 3 ml de agua destilada y se le añade lentamente 1 ml de ácido clorhídrico concentrado. Se calienta la cápsula sobre placa calefactora hasta la aparición de los primeros vapores, añadiendo entonces unos mililitros de agua destilada. Se filtra la disolución en un matraz aforado de 100 ml a través de papel libre de cenizas, enjuagando 3 ó 4 veces con agua destilada templada. Una vez frío se enrasa con agua destilada. En esta disolución se pueden medir los macronutrientes (Ca, Mg, Na y K) y micronutrientes (Fe, Cu, Mn, Zn) por abosorción y emisión atómica de forma análoga a como se hizo en suelos. También se puede medir el fósforo usando el método de Murphyo el método del cloruro estannoso.
14.7 CÁLCULOS Los resultados se expresan como porcentaje de cada uno de los elementos.
14.8 REFERENCIAS. LÓPEZ RITAS, J. y LÓPEZ MELIDA, J. 1990. “EL DIAGNÓSTICO DE SUELOS Y PLANTAS (MÉTODOS DE CAMPO Y LABORATORIO). 363 pp. Ed. Mundi-Prensa. Madrid. JUNTA DE EXTREMADURA.1992 “INTERPRETACIÓN DE ANÁLISIS DE SUELO, FOLIAR Y AGUA DE RIEGO. CONSEJO DE ABONADO. (NORMAS BÁSICAS)”. Ed. Mundi-Prensa. Madrid. BENTON JONES, J. 2001. “LABORATORY GUIDE FOR CONDUCTIN SOIL TESTS AND PALNT ANALYSIS”. Ed. CRC Press. Boca Ratón, London, New York, Washington D.C. VILLALBÍ FOCADELL, I y VIDAL PERICAS, M. 1988. “ANÁLISIS DE SUELOS Y FOLIARES: INTERPRETACIÓN Y FERTILIZACIÓN”. MONOGRAFÍAS DE LA OBRA AGRÍCOLA DE LA FUNDACIÓN CAJA DE PENSIONES. 36
15 NITRÓGENO EN HOJAS
15.1 FUDAMENTO La determinación del nitrógeno se realiza por el método Kjeldahl. Se ataca el material vegetal con ácido sulfúrico concentrado a ebullución en presencia de un catalizador. El nitrógeno se transforma en amonio que se destila en presencia de una base fuerte en exceso (NaOH). El destilado se recoge sobre ácido y se valora.
15.2 MATERIAL Batería de digestión. Destilador automático. Matraces Kjeldhal. Pipetas Matraces erelenmeyer Microbureta.
15.3 REACTIVOS. Ácido sulfúrico de 96-98 %. Ácido bórico al 4 %: Pesar 40 gramos de ácido bórico en un vaso de precipitado de un litro y llevar a volumen en un matraz aforado de un litro Hidróxido sódico al 50 % con un 5 % de tiosulfato sódico : Pesar en un vaso de precipitado de un litro 500 gr. de NaOH y disolver, una vez disuelto añadir 5 gr. de tiosulfato sódico. Enrasar en un matraz aforado de un litro. Disolución patrón de nitrógeno: Pesar 4,7287 gr. de (NH 4)2SO4, disolverlo en agua destilada y enrasar a un litro en un matraz aforado. Esta disolución así preparada contiene 1 gr. N/l. Ácido clorhídrico 0,02 N
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