LAPORAN PERCOBAAN IV PEMERIKSAAN KADAR FLAVONOID TOTAL EKSTRAK SEBAGAI KUERSETIN DAN PENENTUAN KADAR KUERSETIN
NAMA
: Luthfi Utami Setyawati
NPM
: 260110150013 260110150013
HARI/TANGGAL PRAKTIKUM
: Kamis, 10 November 2016
ASISTEN LABORATORIUM
: 1. Michael Djajaseputra 2. Devi Suryani 3. Fenadya Rahayu A
LABORATORIUM ANALISIS FARMASI FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS PADJADJARAN JATINANGOR 2016
PEMERIKSAAN KADAR FLAVONOID TOTAL EKSTRAK SEBAGAI KUERSETIN DAN PENENTUAN KADAR KUERSETIN
I.
TUJUAN Melakukan pemeriksaan parameter spesifik ekstrak dengan : 1. Menentukan kadar flavonoid total ekstrak sebagai kuersetin dengan metode kolorimetri alumunium klorida. 2. Melihat adanya kandungan kuersetin dalam ekstrak dengan metode KLT.
II.
PRINSIP 2.1 Parameter Spesifik Parameter spesifik meliputi pemeriksaan identitas, organoleptis, kadar
senyawa terlarut dalam pelarut tertentu, uji kandungan kimia ekstrak, kadar total golongan kandungan kimia, kadar kandungan kimia tertentu (DepKes RI, 2000).
2.2 Flavonoid Flavonoid adalah zat aktif yang terdapat pada tumbuhan yang mempunyai struktur kimia C6-C3-C6 yang tiap bagian C6 merupakan rantai alifatik (Rompas, et al, 2012).
2.3 Metode Kolorimetri Alumunium Klorida Prinsip penetapan flavonoid dengan metode kolorimetri AlCl 3 adalah terbentuknya kompleks antara AlCl 3 dengan gugus keto pada atom C-4 dan juga dengan gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-4 yang bertetangga dari flavon dan flavonol (Cahyanta, 2016).
2.4 Spektrofotometri Prinsip spektrofotometri adalah berdasarkan absorpsi cahaya pada panjang gelombang tertentu te rtentu melalui suatu larutan yang mengandung kontaminan
yang akan ditentukan konsentrasinya. Jumlah cahaya yang diserap sebanding dengan konsentrasi kontaminan dalam larutan (Lestari, 2009).
2.5 KLT KLT merupakan teknik pemisahan campuran berdasarkan perdedaan afinitasnya dengan fase stasioner berupa lapisan tipis suatu adsorben dan fase mobilnya adalah berupa campuran pelarut (Sumawinata, 2002).
III.
REAKSI 3.1 Reaksi Aluminium Klorida dengan Quersetin (Flavonoid)
(Azizah, et al, 2014).
3.2 Reaksi Aluminium Klorida dengan Flavon
(Mursyidi, 1990).
3.3 Reaksi Aluminium Klorida dengan Flavonol
(Mursyidi, 1990).
IV.
TEORI DASAR Karena peningkatan penggunaan obat herbal di seluruh dunia dan produk
herbal membuat pasar global digunakan secara global, keamanan dan kualitas tanaman obat dan produk herbal jadi menjadi perhatian utama bagi otoritas kesehatan, farmasi dan masyarakat (Pathik, et al., 2011). Umumnya, semua obat-obatan, baik itu sintetik atau yang berasal dari tumbuhan, harus memenuhi persyaratan dasar yang aman dan efektif (Kunle, 2012). Berbagai penelitian dan pengembangan yang memanfaatkan kemajuan teknologi juga dilakukan sebagai upaya peningkatan mutu dan keamanan produk yang diharapkan dapat lebih meningkatkan kepercayaan terhadap manfaat obat bahan alam tersebut (Anam, 2013). Perlu dikembangkan metode standardisasi sediaan obat tradisional, salah satunya adalah dengan penetapan kadar salah satu kandungan senyawa aktif dalam sediaan obat tradisional (Cahyanta, 2016). Flavonoid merupakan salah satu senyawa antioksidan golongan fenolik alam yang terbesar dan terdapat dalam semua tumbuhan, sehingga dapat dipastikan terdapat flavonoid pada setiap telaah ekstrak tumbuhan. Flavonoid merupakan salah satu golongan senyawa yang terbukti dapat digunakan sebagai antioksidan, antikanker, dan antidepresan (Azizah, et al, 2014). Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder yang terbentuk melalui jalur sikimat. Senyawa ini diproduksi dari unit sinnamoil-CoA dengan
perpanjangan rantai menggunakan 3 malonil-CoA. Enzim khalkon synthase mengabungkan senyawa ini menjadi khalkon. Khalkon adalah prekursor turunan flavonoid pada banyak tanaman (Dewick, 2002). Uji parameter spesifik kadar total golongan kandungan kimia bertujuan untuk memberikan informasi kadar kandungan golongan kimia sebagai parameter mutu ekstrak dalam kaitannya kaitannya dengan efek farmakologis farmakologis (DepKes RI, 2000). Spektofotometer UV-Vis dapat digunakan untuk analisis kuantitatif dalam penentuan jumlah flavonoid yang terdapat dalam ekstrak metanol (Carbonaro, 2005). Spektofotometer adalah alat yang digunakan untuk mengukur energi secara relatif jika energi tersebut ditransmisikan, direfleksikan, atau diemisikan sebagai fungsi dari panjang gelombang. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu, dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang diabsorpsi (Neldawati, 2013). Penentuan flavonoid total dalam ekstrak dilakukan untuk mengetahui prosentase kandungan flavonoid total dalam ekstrak menggunakan metode kolorimetri
aluminium
klorida
dengan
pengukuran
absorbansi
secara
spektrofotometri (Cahyanta, 2016). 2016). Spektrum flavonoid biasanya ditentukan dalam larutan dengan pelarut metanol atau etanol. Spektrum khas flavonoid terdiri atas dua maksimal pada rentang 230-295 nm (pita II) dan 300-560 nm (pita I) (Neldawati, 2013). Sebagai pembanding dapat digunakan kuersetin yang merupakan flavonoid golongan flavonol yang mempunyai gugus keto pada C-4 dan memiliki gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari flavon dan flavonol (Cahyanta, 2016). Di dalam isolasi senyawa, kromatografi sangat penting dan fundamental untuk identifikasi, deteksi pemisahan, deteksi optimasi fase gerak, deteksi kemurnian, dll. KLT akan memvisualkan senyawa-senyawa yang terkandung dalam bahan sehingga bisa diketahui sifat-sifatnya terutama polaritas (Saifudin, 2014).
KLT menggunakan fase stasioner berupa lapisan tipis suatu adsorben, misalnya gel silika dilapiskan pada pelat dan fase mobilnya adalah berupa campuran pelarut. Sampel diaplikasikan pada pelat kemudian pelat diberdirikan dengan ujung bawah dengan pelarut. Ketika pelarut naik akibat aksi kapiler pada adsorben, komponen sampel terbawa dengan kecepatan yang berbeda, dapat dilihat sebagai deretan titik-titik setelah pelatnya dikeringkan atau diwarnai atau dilihat di bawah cahaya UV (Sumawinata, 2002). Uji parameter spesifik pola kromatografi bertujuan untuk memberikan gambaran awal komposisi kandungan kimia berdasarkan pola kromatogram (DepKes RI, 2000).
V.
ALAT DAN BAHAN 5.1 Alat -
Alat pengaduk
-
Beaker glass
-
Chamber
-
Gelas ukur
-
Kertas saring
-
Labu ukur
-
Mikropipet
-
Pipa kapiler
-
Pipet volume
-
Plat KLT
-
Spektrofotometer UV-Vis
5.2 Bahan -
AlCl3 10%
-
Aquades
-
Baku quersetin
-
Campuran n-butanol, asam asetat, aquades
-
Etanol 95%
VI.
-
Kalium asetat
-
Larutan ekstrak
-
Uap amonia
DATA PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN 6.1 Pembuatan Larutan Uji Ekstrak
No
Prosedur
Hasil
Foto
Didapat 1 gram 1
Diambil 1 gram ekstrak
ekstrak kental daun jambu biji
2
3
Ekstrak dilarutkan dalam 25 mL etanol 95%
Ekstrak menjadi
Diaduk selama 3 jam
larut dalam pelarut
dengan menggunakan alat
etanol 95%
pengaduk magnetic stirer Larutan disaring, filtrat 4
yang diperoleh di ad etanol 95% sampai 25 mL
Didapat larutan ekstrak sebanyak 25 mL
(Azizah, et al, 2014).
6.2 Pembuatan Kurva Baku No
Prosedur Dibuat serangkaian larutan kuersetin
1
dalam etanol dengan konsentrasi 40, 60, 80, 100 dan 120 µg/mL
Hasil Didapat quersetin dengan konsentrasi 40, 60, 80, 100 dan 120 µg/mL
Foto
Diambil 0,5 mL dari masing-masing larutan, dicampur dengan 1,5 mL etanol 2
95%; 0,1 mL alumunium klorida 10%; 0,1 mL kalium asetat 1 M dan 2,8 mL aquades
Diinkubasi pada suhu 3
kamar selama 30 menit
Diukur serapannya dengan spektrofotometer UV4
Vis pada panjang gelombang maksimum yaitu 438 nm
5
Didapat 5 mL campuran sampel di beaker glass dengan konsentrasi 4, 6, 8, 10, dan 12 ppm
Sampel terinkubasi
A=0,1384 (4ppm) A=0,42 (10 ppm) A=0,5169 (12ppm)
Dibuat kurva baku
Y=0,0472x-
standar
0,0509
(Azizah, et al, 2014).
R 2=1
6.3 Penentuan Jumlah Flavonoid dari Larutan Uji Ekstrak No
Prosedur
Hasil
Didapat 0,5 mL 1
Diambil sejumlah 0,5 mL
larutan ekstrak
ekstrak etanol sampel
daun jambu biji di gelas beaker
Didapat 5 mL
2
Sampel dicampur dengan
campuran ekstrak,
1,5 mL etanol 95%; 0,1
alumunium klorida,
mL alumunium klorida
kalium asetat,
10%; 0,1 mL kalium asetat
aquades, etanol
1 M dan 2,8 mL aquades
95% di gelas beaker
3
Diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar
Diukur serapannya dengan 4
spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum yaitu 438 nm
5
Sampel terinkubasi
A1=0,3355 A2=0,3316 A3=0,3349
Dihitung jumlah flavonoid
Didapat jumlah
dengan metode kolorimetri
flavonoid sebagai
Foto
alumunium klorida
quersetin sebesar
dihitung dengan
2,03875%
persamaan :
Keterangan :
F1=jumlah flavonoid dengan metode AlCl 3
C=kesetaraan kuersetin (ppm)
V=volume total ekstrak etanol (mL)
F=faktor pengenceran
m=berat sampel (g) (Depkes RI, 2000).
6.4 Pengujian Kualitatif Kandungan Kuersetin dalam Ekstrak No
1
Prosedur
Hasil
Larutan ekstrak dan baku
Larutan ekstrak dan
kuersetin ditotolkan
baku quersetin
masing-masing 1 cm di
telah ditotol 1 cm
atas plat KLT
di atas plat KLT
Foto
Didapat plat yag Plat dikembangkan dalam chamber jenuh yang 2
mengandung 200 mL campuran n-butanol, asam asetat dan air (4:1:5)
telah dikembangkan dalam chamber yang berisi pelarut champur yang telah jenuh
Plat menjadi 3
Plat dikeringkan dan
kering, terlihat spot
dilihat di bawah sinar UV
sampel dan baku quersetin
Rf sampel dihitung dan 4
dibandingkan dengan Rf standar
Rf ekstrak = 0,94 Rf quersetin = 1
Untuk pengujian warna spot sampel pada plat, spot ditetesi amonia. Hasil 5
positif ditunjukan dengan perubahan warna menjadi kuning pekat (kuersetin) (Depkes RI, 2000).
Spot baku quersetin berwarna kuning, spot ekstrak tampak lebih jelas
VII. PERHITUNGAN 7.1 Perhitungan Pengenceran Kurva Baku
7.2 Pembuatan Kurva Baku Konsentrasi
Absorbansi
(ppm) (X)
(Y)
4
0,1348
10
0,42
12
0,5169
Kurva Baku Kuersetin 0,6 0,5169
0,5 0,42
0,4
Absorbansi
0,3
Linear (Absorbansi)
0,2
y = 0,0472x - 0,0508 R² = 1
0,1384
0,1 0 0
5
10
15
7.3 Penentuan Jumlah Flavonoid dari Larutan Ekstrak
7.4 Pengujian Kualitatif Kandungan Quersetin dalam Ekstrak -
Jarak yang ditempuh ekstrak (X1) = 3,3 cm
-
Jarak yang ditempuh baku (X 1) = 3,5 cm
-
Jarak yang ditempuh pelarut (y) = 3,5 cm
VIII. PEMBAHASAN Pada praktikum kali ini dilakukan uji KLT ekstrak dan spektrofotometri kolorimetri ekstrak daun jambu biji. Uji KLT dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya kandungan kuersetin dalam sampel ekstrak daun jambu biji. Sedangkan uji kolorimetri dilakukan untuk mengetahui kadar flavonoid total ekstrak sebagai quersetin. Sampel yang digunakan dalam praktikum kali ini yaitu ekstrak daun jambu biji. Menurut literatur (FHI), daun jambu biji mengandung quersetin sebagai identitas kimianya. Dengan begitu dapat diperkirakan bahwa sampel ekstrak daun jambu biji yang digunakan juga mengandung quersetin querseti n sehingga dapat ditentukan kadarnya. Hal pertama yang dilakukan yaitu membuat larutan uji ekstrak. Larutan uji ini berfungsi sebagai sampel yang akan diamati. Caranya yaitu dengan melarutkan satu gram ekstrak daun jambu biji kental dengan 25 mL etanol 95% kemudian diaduk dengan magnetic stirer selama 3 jam. Setelah itu larutan disaring dan ditambah etanol hingga 25 mL.
Digunakan etanol sebagai pelarut karena berdasarkan literatur dan pembuktian praktikum yang telah dilakukan oleh praktikan pada praktikum sebelumnya, menunjukkan bahwa kandungan zat aktif pada simplisia daun jambu biji lebih tertarik dengan pelarut etanol dibandingkan dengan pelarut air. Lalu alasan diaduk selama 3 jam menggunakan magnetic stirer yaitu agar proses pelarutan dapat berjalan dengan baik dengan tanpa meninggalkan sisa bahan (ekstrak) pada permukaan gelas beaker tempat melarutka ekstrak. Dengan begitu kandungan zat aktif dapat terdistribusi secara merata dalam larutan tersebut sehingga ketika dilakukan uji hasilnya akan mendapatkan hasil uji yang baik. Pada uji KLT, yang pertama kali dilakukan yaitu membuat fase gerak berupa pelarut campur n-butanol, asam asetat ase tat dan da n air dengan perbandingan 4:1:5. Setelah pelarut campur dibuat selanjutnya pelarut dijenuhkan di dalam chamber. Pelarut yang telah jenuh dapat diamati dengan perubahan suhu chamber menjadi lebih panas dari sebelumnya. Setelah pelarut jenuh, plat silika gel yang telah totol dengan baku quersetin dan sampel ekstrak dimasukkan ke dalam chamber sampai mengembang, yaitu sampai pelarut campur telah melewati jarak pada plat silika gel yang telah ditentukan. Setelah itu plat ditempatkan dalam chamber jenuh yang mengandung uap amonia kemudian diamati bawah sinar UV 254 nm. Prinsip kerjanya memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan. Semakin dekat kepolaran sampel dengan pelarut/fase gerak maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut. Pelarut campur yang digunakan sebelumnya dijenuhkan terlebih dahulu agar agar fase gerak dapat bergerak dengan mudah dalam fase diam. Ciri pelarut sudah jenuh yaitu suhu chamber menjadi hangat, ada uap di penutup chamber. Selain itu dapat juga dilihat menggunakan kertas saring yang diletakan di sisi dalam chamber, jika kertas saring basah artinya pelarut telah jenuh. Pelarut yang dipilih untuk pengembang disesuaikan dengan sifat kelarutan senyawa yang dianalisis. Campuran pelarut yang digunakan bersifat polar. Kuersetin merupakan senyawa
polifenol yang memiliki lima gugus gugus hidroksi (-OH), yang mengakibatkan senyawa ini memiliki kepolaran tinggi. Digunakan plat silika gel karena bahan tersebut bersifat inert, tidak bereaksi terhadap pereaksi-pereaksi yang lebih sensitif. Plat silika gel bersifat non polar sehingga digunakan pelarut yang bersifat polar. Penotolan larutan ekstrak dan baku quersetin dilakukan menggunakan pipa kapiler agar sampel yang ditotolkan jumlahnya tidak terlalu banyak. jika jumlah sampel yang ditotolkan terlalu banyak, bentuk spot bisa menjadi tidak bulat sehingga dapat mengganggu proses pengukuran Rf. Totolan antara baku dan ekstrak diberikan jarak 1 cm agar titik antara ekstrak dengan baku tidak bercampur. Penambahan/penyemprotan dengan uap amoniak dapat membantu proses pengamatan karena amoniak yang bereaksi dengan quersetin dan akan memberikan warna kuning. Plat silika diamati di sinar UV 254 nm karena tipe plat silika yang digunakan yaitu GF254, artinya plat tersebut menyerap cahaya pada panjang gelombang 254 nm sehingga akan tampak gelap, sedangkan yang akan berfluorosensi yaitu bercak atau spot ekstrak dan quersetin. Dengan begitu jarak yang ditempuh ekstrak dan quersetin dapat diamati dengan jelas sehingga nilai Rf nya dapat ditentukan. Ketika akan memasukkan tangan ke dalam alat fluorosens untuk memberi tanda batas jarak tempuh sampel harus menggunakan sarung tangan karena sinar UV berbahaya bagi tubuh, dapat menyebabkan mutasi gen. Untuk itu perlu adanya tindakan pencegahan. Namun karena praktikan tidak membawa sarung tangan, penandaan spot tidak dilakukan saat sedang diamati di bawah sinar UV, namun penandaan spot dibantu dengan cara meneteskan amonia di atas spot sampel ekstrak untuk memperjelas spotnya.
Hal selanjutnya yang diakukan yaitu menghitung nilai Rf ekstrak dan nilai Rf
quersetin
kemudian
dibandingkan.
Rf
dapat
digunakan
untuk
mengidentifikasikan suatu senyawa. Jika kedua zat memiliki nilai Rf yang mirip maka dapat dikatakan bahwa senyawa yang terkandung dalam kedua zat tersebut memilki karakteristik yang sama. Dari hasil percobaan didapat nilai Rf ekstrak adalah 0,94 sedangkan nilai Rf quersetin adalah 1. Dengan begitu dapat disimpulkan bahwa ekstrak yang digunakan (ekstrak daun jambu biji) mengandung quersetin karena nilai ekstrak keduanya berdekatan. Namun nilai Rf KLT yang bagus berkisar antara 0,2 - 0,8. Jika Rf terlalu tinggi, yang harus dilakukan adalah mengurangi kepolaran fase gerak, dan sebaliknya. Nilai Rf yang didapat oleh praktikan lebih dari 0,8 karena fase gerak yang digunakan bersifat polar sedangkan sampel yang digunakan bersifat sangat polar. Jika akan dilakukan uji KLT menggunakan sampel yang sama, praktikan sarankan untuk mengganti kombinasi pelarut campur yang digunakan agar hasil yang didapat lebih akurat. Sebelum dilakukan uji kolorimetri pada ekstrak daun jambu biji, dibuat terlebih dahulu baku quersetin untuk membuat kurva baku. Tujuan dibuatnya kurva baku yaitu karena kurva baku akan dijadikan sebagai pembanding terhadap ekstrak yang akan diuji. Alasan digunakan quersetin sebagai baku pembanding yaitu karena quersetin merupakan flavonoid golongan flavonol yang memiliki gugus keto pada atom C-4 dan juga gugus hidroksil pada atom C-3 dan C-5 yang bertetangga. Dalam pembuatan kurva baku harus memenuhi syarat validasi. Salah satu syarat validasi yaitu adanya regresi linier. Regresi linier ini berguna untuk mengetahui pegaruh/hubungan pegaruh/hubungan antara variabel bebas dengan variabel terikat. te rikat. Dalam membuat kurva baku, yang pertama dilakukan yaitu membuat larutan stok quersetin 200 ppm sebanyak 100 mL. Lalu dari larutan stok tersebut dilakukan pengenceran sehingga didapat quersetin dengan konsentrasi 120 ppm, 100 ppm, 80 ppm, 60 ppm dan 40 ppm. Masing-masing pengenceran dibuat dalam
volume 10 mL. Alasan dilakukan pengenceran yaitu untuk mendapatkan larutan baku quersetin dalam berbagai variasi konsentrasi sehingga dapat dibuat kurva baku yang memiliki regresi linier. Pengenceran juga dilakukan agar sampel tidak terlalu pekat sehingga dapat diidentifikasi di spektrofotometer. Lalu jumlah volume pengenceran yang dibuat tidak terlalu banyak, hanya 10 mL. Hal tersebut disesuaikan dengan kebutuhan pengamatan yang akan dilakukan agar tidak ada bahan yang terbuang sehingga tidak boros dan dapat lebih hemat. Setelah itu ke dalam beberapa gelas beaker dimasukkan 0,5 quersetin dengan berbagai konsentrasi pada masing-masing gelas beaker, lalu ditambahkan 0,1 mL AlCl 3, 0,1 mL kalium asetat, 1 mL etanol 95% dan 2,8 mL aquades. Jika sudah campuran larutan diinkubasi selama 30 menit pada suhu ruang lalu barulah diamati di spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimal 438 nm. Kemudian dibuat kurva kalibrasi dengan menghubungkan nilai absorbansi sebagai sumbu Y dan nilai konsentrasi baku quersetin sebagai sumbu X. Alasan ditambahkannya AlCl 3 yaitu agar terbentuk kompleks berwarna biru antara AlCl3 dengan gugus keto pada atom C-4 dan gugus hidroksi pada atom C-3 atau C-5 yang bertetangga dari golongan flavon dan flavonon sehingga akan dapat diserap pada spektrofotometri UV-Visibel. Panjang gelombang maksimal yang digunakan yaitu 438 nm karena pada panjang gelombang tersebut dapat menyerap warna biru yang dihasilkan oleh komplek AlCl 3 dan quersetin secara maksimal. Sedangkan penambahan kalium asetat berfungsi untuk mendeteksi adanya gugus 7-hidroksil pada quersetin. Sebelum diamati di spektrofotometri UV-Vis sampel diinkbasi terlebih dahulu agar reaksi dapat berjalan sempurna sehingga memberikan intensitas warna yang maksimal, dengan begitu cahaya yang diserap akan maksimal juga. Penambahan aquades hanya dimaksudkan sebagai penggenap agar didapat konsentrasi yang diinginkan. Setelah
sampel
diinkubasi,
selanjutnya
diukur
serapannya
di
spektrofotometer UV-Vis UV-Vis dengan λmax 438 nm. Setelah itu barulah dibuat kurva baku dan dicari nilai R 2 nya dengan menghubungkan nilai absorbansi sebagai
sumbu y dan konsentrasi sebagai sumbu x. x . Nilai r yang mendekati 1 menunjukkan kurva kalibrasi linier dan terdapat hubungan antara konsentrasi larutan quersetin dengan nilai serapan. Dari hasil pengukuran dan perhitungan didapat kurva baku quersetin dengan
Y=0,0472x-0,0509 dan R 2=1. Nilai R 2 yang baik menurut
penelitian terbaru yaitu berkisar antara 0,99-1. Dengan begitu dapat disimpulkan bahwa kurva baku yang dibuat dapat digunakan karena memenuhi me menuhi syarat validasi regresi linier. Setelah dibuat kurva baku selanjutnya barulah dilakukan uji penentuan kadar flavonoid total ekstrak sebagai quersetin dengan cara memasukkan 0,5 larutan ekstrak pada gelas beaker, lalu ditambahkan 0,1 mL AlCl 3, 0,1 mL kalium asetat, 1 mL etanol 95% dan 2,8 mL aquades. Jika sudah campuran larutan diinkubasi selama 30 menit pada suhu ruang lalu barulah diamati di spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang maksimal 438 nm. Dalam menggunakan kuvet untuk uji spektrofotometri perlu diperhatikan. Bagian kuvet yang boleh dipegang yaitu bagian yang agak buram, jangan sampai memegang bagian yang bening. Hal tersebut karena bagian bening kuvet akan dilewati oleh sinar. Jika bagian bening dipegang dengan tangan, dikhawatirkan ada kotoran atau lemak yang menempel pada kuvet sehingga cahaya yang dilewatkan pada kuvet tidak dapat menembus dan lewat pada larutan uji. Dengan begitu proses pengukuran absorbansi absorbansi akan terganggu. Dari hasil pengukuran didapat nilai absorbansi rerata ekstrak yaitu 0,334. Nilai tersebut merupakan nilai Y. Selanjutnya nilai Y tersebut disubtitusikan pada persamaan yang didapat pada uji kurva baku untuk mendapatkan konsentrasi quersetin (C) sebagai x. Dari hasil perhitungan didapat nilai C sebesar 8,155 ppm. Selanjutnya barulah dihitung jumlah flavonoid yang terkandung dalam ekstrak menggunakan rumus
. F merupakan faktor pengenceran.
Perlu dikalikan dengan faktor pengencernya karena yang akan dihitung adalah kadar flavonoid total dari sejumlah 1 gram ekstrak yang dilarutkan pada 25 mL etanol. Jika tidak dikalikan dengan faktor pengencer, maka yang didapat hanyalah
kadar flavonoid yang terkandung dalam ekstrak yang telah diencerkan, hasil yang diperoleh akan lebih kecil dan hal tersebut jelas salah. Sehingga perlu dikalikan dengan faktor pengencer untuk mengetahui jumlah flavonoid total ekstrak yang terdapat dalam sejumlah 1 gram ekstrak dalam 25 mL yang digunakan di awal. Dari hasil perhitungan didapat jumlah flavonoid dalam ekstrak sebesar 2,03875%. Menurut Farmakope Herbal Indonesia, kadar flavonoid total pada ekstrak daun jambu biji tidak kurang dari 1,40% dihitung sebagai quersetin dan diukur pada panjang gelombang 425 nm. Dengan begitu, ekstrak daun jambu biji yang digunakan sesuai dengan syarat yang telah ditentukan. Artinya Artinya ekstrak tersebut tersebut dapat digunakan untuk dibuat suatu sediaan obat jadi.
IX.
SIMPULAN 9.1 Dapat ditentukan kadar flavonoid total ekstrak sebagai kuersetin dengan metode kolorimetri alumunium klorida. Kadar yang didapat yaitu sebesar 2,03875%. 9.2 Didapat Rf baku kuersetin adalah 1 sedangkan Rf ekstrak daun jambu biji adalah 0,94. Hal tersebut ters ebut menunjukan bahwa dalam ekstrak tersebut mengandung senyawa kuersetin karena nilai Rf keduanya saling berdekatan.
DAFTAR PUSTAKA
Anam, Syariful, M. Yusran, Alfred T., Nurlina I., Ahmad K., Ramadanil, M. Sulaiman Z. 2013. Standarisasi Ekstrak Etil Asetat Kayu Sanrego ( Lunasia ( Lunasia amara Blanco). Blanco) . Online Journal of Natural Science. Vol. 2 (3) : 1-8. Azizah, Dyah Nur, Endang K., Fahrauk F. 2014. Penetapan Kadar Flavonoid Metode AlCl3 pada Ekstrak Metanol Kulit Buah Kakao ( Theobroma cacao L.). Kartika L.). Kartika Jurnal Ilmiah Farmasi. Vol. Farmasi. Vol. 2 (2) : 45-49. Cahyanta, Agung Agung Nur. 2016. 2016. Penetapan Kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun Daun Pare Metode Kompleks Kolori dengan Pengukuran Absorbansi secara Spektrofotometri. Jurnal Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah Farmasi. Vol. 5 (1) : 58-61. Carbonaro and Grant. 2005. Absorption of Quercetin and Rutin in Rat Small Intestine. Annals Intestine. Annals Nutrition and Metabolism. Metabolism. Vol. 49 (3) : 178-182. DepKes RI. 2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Obat. Jakarta : DepKes RI. Dewick, P.P. 2002. Medicinal Natural Products, Nottingham :
A Biosynthetic Approach. Approach.
John Wiley and Sons, Ltd., School of Pharmaceutical
Sciences University of Nottingham. Kunle, O.F., et al. 2012. Standardization of Herbal Medicines-A review. Available
online
at
http://www.academicjournals.org/article/article1380017716_Kunle%20et% 20al.pdf . [Diakses 31 Oktober 2016 pukul 9:31 WIB]. Lestari, Fatma. 2009. Bahaya Kimia : Sampling dan Pengukuran Kontaminan Kimia di Udara. Jakarta Udara. Jakarta : EGC. Mursyidi, A. 1990. Analisis 1990. Analisis Metabolit Sekunder. Yogyakarta : UGM Press.
Neldawati, Ratnawulan dan Gusnedi. 2013. Analisis Nilai Absorbansi dalam Penentuan Kadar Flavonoid untuk Berbagai Jenis Daun Tanaman Obat. Pillar of Physics. Vol. Physics. Vol. 2 : 76-83. Pathik, Patel, Patel N. M., Patel P. M. 2011. WHO Guidelines on Quality Control of Herbal Medicines. IJRAP. Medicines. IJRAP. Vol. Vol. 2 (4) : 1148-1154. Rompas, R.A., Hosea J. Edy dan A. Yudistira. 2012. Isolasi dan identifikasi flavonoid dalam Daun Lamun (Syringodium ( Syringodium isoetifolium). isoetifolium). Pharmacon Pharmacon.. Vol. 1(2) : 59-63 Saifudin, Aziz. 2014. Senyawa Alam Metabolit Sekunder Teori, Konsep dan Teknik Pemurnian. Yogyakarta : Deepublish. Sumawinata, Narlan. 2002. Seranai Istilah Kedokteran Gigi Inggris-Indonesia. Jakarta : EGC.
