Descripción: Objetivos: • Describir las indicaciones de detención rápida del VIH. • Describir la aplicación de la prueba de detección rápida. Fundamento te...
BIOLOGÍA INMUNOENSAYO DE DETECCIÓN CUALITATIVA DE ANTICUERPOS TREPONEMA PALLIDUM Objetivos: • D…Descripción completa
PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR ESCUELA DE BIOANÁLISIS BIO-QUÍMICA MANUAL DE LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA BÁSICA SEMESTRE 2014-2015.
QUINCEAVA PRÁCTICA ELISA POR CROMATOGRAFÍA
Contenido 1.- INTRODUCCIÓN .................................................................................................................. 2 2.- DIAGNÓSTICO DEL EMBARAZO......................... ...................... ......................... .............. 3 3.- PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA .............................................. ..................... ......................... ......................... ...... ! ".- CUESTIONARIO.- ................................................................................................................ !
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1.- Int$od%&&i'n Embarazo: estado fisiológico durante el cual se producen cambios metabólicos y bioquímicos reversibles tras el parto. Los tests de embarazo más habituales son los que se basan en la detección en orina de la hormona onadotropina !oriónica "umana ó subunidad h! #human !horionic onadotropin$. Las c%lulas placentarias #sincitiotrofoblastos$ comienzan a producir esta hormona en respuesta a la implantación del zigoto fertilizado en el &tero. Esto ocurre apro'imadamente ( días despu%s de la fecundación. La concentración sanguínea de esta hormona se duplica cada )* horas+ lo que permite que e'istan algunos test de embarazo que+ en función a la cantidad de h! indiquen el tiempo de embarazo. En general la sensibilidad de estos test hace que detecten la h! a los ,) días de embarazo. - nivel t%cnico los test de embarazo comercial se basan en el old -bsorbed nmuno -ssay #--$ y utilizan una cromatografía en capa fina. Es decir+ una t%cnica en la que a trav%s de una lámina de te'tura parecida al papel+ asciende por capilaridad un líquido #en este caso la orina de la embarazada$. La lámina contiene anticuerpos monoclonales que reconocen h! específicamente y que no se unen a ninguna otra proteína de la orina de la embarazada. /n anticuerpo puede reconocer dos h! formando mallas de alto peso molecular que el líquido+ en su avance+ no puede arrastrar #precipitan$. Esto forma la primera de las bandas del test+ que indica un positivo para embarazo. La banda que se encuentra al e'tremo opuesto a la zona de aplicación de la orina es el control positivo. ndica que había anticuerpos en la lámina y que estos han avanzado con el líquido hasta el final de la lámina+ quedando allí retenidos. Esta banda siempre aparece en los test+ tanto positivos como negativos+ porque hay anticuerpo anti h! en e'ceso. El control positivo indica que la prueba ha sido válida en caso de resultado negativo #descarta que el negativo se deba a la ausencia de anticuerpo$. La detección de h! tambi%n 0uega un papel importante en la detección y tratamiento de modalidades patológicas de embarazo. 1irva como e0emplo el embarazo ectópico. 1u diagnosis puede basarse en la aparición de síntomas propios de embarazo acompa2ados de una ausencia de producción h!. Esto ocurre porque los trofoblastos no son estimulados por la implantación ectópica del zigoto. 1u tratamiento se realiza con metotre'ato. 1in embargo+ si este feto ectópico consigue estimular a los trofoblastos y se genera h! el tratamiento para el embarazo ectópico ha de hacerse mediante cirugía. La detección de h! permite además aclarar el diagnóstico entre varios cánceres de difícil diferenciación: cáncer testicular metastatizado y sarcoidosis sist%mica. Página 2 de 7
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2.- Di()n'*ti&o de+ e,($(o
La gonadotropina coriónica humana #h!$ es una proteína compuesta por dos subunidades 3 y . 1ubunidad 4: es característica de esta hormona por tanto se utiliza para el diagnostico del embarazo. #h!$ aumenta rápidamente al comienzo de la gestación y más tarde disminuye+ especialmente en el tercer trimestre. El análisis de 45h! se puede hacer en orina ó en suero o En orina: se puede detectar unos días despu%s de la falta de la menstruación. o En suero: un día despu%s de la implantación en el &tero
A!"#$%$% &! '($!) 56eterminación cualitativa: rápido+ fácil y fiable 5!onviene realizarlo en la primera orina de la ma2ana 7 Pruebas de anticuerpos monoclonales inmovilizados:
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A!"#$%$% &! %*&(' 5 -nálisis cuantitativos 5 8%todos más utilizados: 9- y EL1-
ELISA EN CROMATOGRAFÍA b0etivos: a. 5!onocer la cromatografía como t%cnica para la determinar la identidad y concentración de los componentes de una mezcla. b. 51eparar mezclas de sustancias+ observando así sus características y los factores que en ella intervienen. Qué es la Cromatografía? La inmunocromatografía es una de las t%cnicas de inmunodiagnóstico más modernas cuyas principales venta0as son la simplicidad y rapidez de la prueba. !ada vez son más las aplicaciones de esta t%cnica+ tanto en el ámbito de los test+ debido a que no es necesario reactivos ni instrumentación adicional+ como en el campo clínico. El e0emplo más conocido son los test de embarazo de las farmacias+ -ntígeno Prostático ;otal #P1-$+ test de ;roponina y recientemente test sobre el <".
1e puede realizar mediante un dispositivo simple desarrollado para detectar la presencia #ó la ausencia$ de un compuesto ob0etivo en la muestra #la matriz$. Este tipo de pruebas son utilizadas com&nmente para el diagnóstico m%dico tanto para pruebas en casa+ ó de empleo en el laboratorio. 1e presenta en un formato de tira+ en el cual la muestra problema fluye a lo largo de un sustrato sólido por medio de una acción capilar. Fundamento
La inmunocromatografía se basa en la migración de una muestra a trav%s de una membrana de nitrocelulosa. La muestra es a2adida en la zona del con0ugado+ el cual está formado por un anticuerpo específico contra uno de los epítopes del antígeno a detectar y un reactivo de detección. 1i la muestra contiene el antígeno problema+ %ste se unirá al con0ugado formando un comple0o inmune y migrará a trav%s de la membrana de nitrocelulosa. 1i no+ migrarán el con0ugado y la muestra sin unirse.
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La zona de captura está formada por un segundo anticuerpo específico contra otro epítope del antígeno. -l llegar la muestra a esta zona+ los comple0os formados por la unión del antígeno y con0ugado quedarán retenidos y la línea se coloreará #muestras positivas$. En el caso contrario las muestras son negativas. La zona control está formada por un tercer anticuerpo que reconoce al reactivo de detección. !uando el resto de muestra alcanza esta zona+ el anticuerpo se unirá al con0ugado libre que no ha quedado retenido en la zona de captura. Esta línea es un control de que el ensayo ha funcionado bien+ porque se colorea siempre+ con muestras positivas y negativas.
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3.- P$o&edi,iento de +( P$/&ti&( ,. btener suero de pacientes que se sospechen de e mbarazo =. !olocar una gota del suero en el casete ó en la tira de !romatografía de capa fina >. Esperar pocos minutos para observar la evidencia de las líneas de !ontrol Positivo+ y si fuera Positiva la prueba+ la línea que lo abaliza. ). 1i no fuera positivo el embarazo no se observa sino una sola línea+ la del !ontrol Positivo.
".- C%e*tion($io.,. El diagnóstico del embarazo se basa en la presencia+ en sangre ó en orina de?? =. En el diagnóstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados participan tres anticuerpos diferentes. dentifíquelos. >. @!uál de ellos está marcado con partículas de colorA @!uál es móvilA
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). En el diagnóstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados+ debe aparecer siempre al menos una línea @para qu% sirveA @!ómo se formaA B. En el diagnóstico del embarazo mediante el uso de anticuerpos inmovilizados @!ómo se forma la banda que nos indica que el resultado es positivoA
5.- Bibliografía a. onadotropin5releasing hormoneChuman chorionic gonadotropin beta based recombinant antibodies and vaccines. J Reprod Immunol. 2009 Dec;83(!2"#$8!%3. &pub 2009 'ct 2. b. "uman chorionic gonadotropin tests. &)pert Rev *ol Dia+n. 2009 'ct;9(,"#,2!,. c. Ectopic pregnancyD ris factors and comparison of intervention success rates in tubal ectopic pregnancy. -lin &)p 'bstet /necol. 20;38("#%,!,0 d. - diagnostic dilemma: metastatic testicular cancer and systemic sarcoidosis F a revieG of the literature. -ase Rep 'ncol. 20 *ar 2;("#8!2 e. 9is factors for persistent gestational trophoblastic neoplasia. J &)p 1er 'ncol. 20;9("#8!
