CAROLINA RODRIGUEZ, LISBETH RODRIGUEZ TALLER: VIRUS SATELITES
1. Definición Los virus satélites son agentes agentes subvirales de RNAss que carecen de genes que podrían codificar las funciones necesarias para la replicación. De este modo dependen para su multiplicación en la coinfección de una célula hospedera con un virus auxiliar. Los genomas satelitales tienen una porción sustancial o todas sus secuencias de nucleótidos distintas de las de los genomas de su virus auxiliar (Fauquet CM, 2005). Existen dos clases principales de satélites: los virus satélites y los ácidos nucleicos de los satélites. Los virus satélites se caracterizan por tener componentes nucleoproteicos distintos que están presentes en las preparaciones de partículas de virus auxiliares. Los virus satélites tienen genomas de ácido nucleico que codifican una proteína estructural que encapsida el genoma. Los ácidos nucleicos satelitales codifican proteínas no estructurales, o no protegen en absoluto, y están encapsulados por el PC de los virus auxiliares. Una clase relacionada de agentes es la de los ARN que se asemejan a los satélites pero que codifican una función necesaria para el éxito biológico del virus asocia do. Estos pueden ser considerados como componentes que remedian una deficiencia en un virus defectuoso. Estos se denotan como RNA satelital, es decir, no codifican una replicasa, pero se clasifican como parte del genoma del virus que ayudan. La distinción entre los ARNs de satélite y los ARNs similares a los los satélites satélites puede en algunos casos ser relativamente relativamente leve leve (Fauquet (Fauquet CM, 2005). 2. Características Característ icas morfológicas Los satélites son genéticamente distintos de su virus auxiliar en virtud de tener una secuencia de nucleótidos sustancialmente diferente. (Fauquet CM, 2005). Virus satélite de abeja-parálisis crónica: Icosaedrico desnudo, aproximadamente 12 nm de diámetro, tamaño ARNss 1kb. Virus satélite de la necrosis del tabaco: Icosaedrico desnudo, aproximadamente 17 nm de diámetro, ARNss.
(Zone, 2016) 3. Propiedades fisicoquímicas fisicoquími cas No se ha reportado ninguna según el 8 reporte del Comité internacional de Taxonomía de Virus (Fauquet CM, 2005). 4. Clasificación Clasifica ción taxonómica
Los satélites no constituyen un grupo taxonómico homogéneo (Fauquet CM, 2005). De ARNss virus satélites: Subgrupo 1: virus satélite asociado al virus de la parálisis crónica de la abeja
virus satélite de abeja-parálisis crónica
Subgrupo 2: virus satélite que se asemejan al virus satélite de la necrosis del tabaco
virus satélite del mosaico de línea blanca del maíz virus satélite del mosaico del Panicum virus satélite del mosaico del Tabaco virus satélite de la nec rosis del Tabaco
5. Genoma-Características morfológicas Utilizamos el Virus de la hepatitis D para ejemplificar el genoma de un virus satélite.
(Hunt, 2008). 6. Mecanismo de replicación
Utilizamos el Virus de la Hepatitis D puesto que su genoma es similar a un virus satelite
(1) El virión se une a los hepatocitos a través de una interacción entre la gran HBsAg y un receptor de membrana característico en la célula hospedera; (2) el virión entra en la célula desnudo; (3) la RNP se dirige al núcleo; (4) el ARN genómico se transcribe en el núcleo para formar el ARN antigenómico, que forma el origen para la replicación de nuevas
transcripciones del genoma circular, y el ARNm contiene el marco de lectura abierto; (5) el ARNm se exporta al citoplasma donde se traduce en el retículo endoplásmico para formar nuevas moléculas de antígeno de la hepatitis D; (6) las nuevas moléculas de antígeno regresan al núcleo, donde el pequeño-HDAg apoya aún más la replicación del genoma; (7) las RNPs se exportan al citoplasma donde grandes-HDAg facilita la asociación con proteínas de la envoltura de HBV en el retículo endoplásmico para formar nuevas partículas de virus; (8) estas partículas salen por gemación a través de un compartimiento intermedio; (9) que se exportan desde el hepatocito a través de la red trans-Golgi para volver a infectar a otras células. RNP = ribonucleoproteína. ARNm = ARN mensajero. VHB = virus de la hepatitis B. HBsAg = antígeno de superficie de la hepatitis B. HDAg = antígeno de la hepatitis D.
La entrada y el no recubrimiento de HDV pueden ser similares a los pasos que ocurren con el auxiliar. Ambos virus requieren el dominio S1 de la proteína de la envoltura del virus de la hepatitis B (auxiliar) para el absorción. La replicación del genoma implica la síntesis de ARN dirigida por ARN llevada a cabo por la ARN polimerasa II de la célula hospedera en el núcleo. Ocurre por un mecanismo de círculo rodante que genera formas oligoméricas de cada complementariedad, que luego se someten a escisión autocatalítica específica del sitio y ligación para generar monómeros genómicos y antigenómicos circulares. 7. Enfermedades producidas por Virus Satélites (Sosa, Roldan, Chelston, & Cruz, 1997) (Fauquet CM, 2005) Enfermedad de la parálisis crónica en las abejas Mosaico de la línea blanca del maíz Mosaico del Panicum (Pasto) Mosaico del Tabaco Necrosis del Tabaco 8. Diferencias entre virus satélites y virus
No parece haber correlación taxonómica entre los virus que están asociados con los satélites. Los satélites parecen haber surgido de forma independiente varias veces durante la evolución del virus. Algunos virus están asociados con más de un virus satélite y algunos satélites están soportados por más de una especie de virus auxiliar (Fauquet CM, 2005). 9. Mecanismos de detección a nivel de laboratorio Microscopía electrónica. Rejillas de cobre cubiertas con carbono, sumergidas por 5
minutos en una gota de extracto de hojas infectadas con el detección y caracterización parcial de una variante amarilla del virus mosaico del pepino en gladiolo . Cada rejilla se coloca después en una gota de ácido fosfotúngstico al 2% (pH 7.2) o en acetato de uranilo al 2 % (pH 6.8), por 15 minutos. Posteriormente se colocan en papel filtro, para eliminar el líquido sobrante y observar al microscopio electrónico de transmisión. Se realizaron preparaciones similares con purificaciones parciales del virus separado de gladiolo (Torres et al.,2002). Extracción y análisis electroforético de ARN de doble cadena. El ARN viral de doble
cadena (ARN-dc) se obtiene utilizando el método de cromatografía en columna de celulosa. El análisis del ARN-dc se realiza por electroforesis en poliacrilamida (6 %), utilizando un minigel (1.75 mm x 7 cm x 8 cm), montado en una minicámara. Las condiciones de electroforesis deben ser más o menos a 100 V por 2.5 h a temperatura de laboratorio. Los geles se tiñen con bromuro de etidio (50 ng·ml-1) y fotografiado con luz ultravioleta o teñidos con nitrato de plata. Para calcular el peso molecular relativo del ARN-dc del virus del gladiolo se pueden utilizar los ARN-dc del virus mosaico del tabaco (TMV) (4.3 y 0.4 x 106 Daltons) y virus mosaico del pepino (CMV) (2.0, 1.9, 1.3 y 0.5 x 106 D), además de los tratamientos enzimáticos con ARNasa y ADNasa de los extractos de ARNdc obtenidos de las plantas enfermas. (Torres et al.,2002). Purificación de TMV y STMV. Las hojas infectadas congeladas (100 g) se muelen en una licuadora con 200 mL de Tris HCl 0.2 M a pH de 7.2 y 2 mL de β -mercaptoetanol. La
suspensión se filtra a través de una gasa y se centrifuga 15 min a 8000 rpm. El sobrenadante se recupera y se le adiciona 8% de n-butanol lentamente con agitación y, después de 2 h de reposo, se centrifuga y al sobrenadante resultante se le añade 4% de polietilenglicol 6000-8000 (PEG). La solución se deja reposar toda la noche y el TMV se recupera por centrifugación a 8000 por 15 min. Al sobrenadante se le agrega 4% más de PEG y 4 h más tarde el STMV se recupera por centrifugación. (Rosa et al., 2003). Patrones electroforéticos de proteínas. Se preparan geles de poliacrilamida a 15% conteniendo dodecil sulfato de sodio (PAGE-SDS). Las muestras de proteínas (1 mg mL−1)
se suspenden en 0.1 M Tris HCl, pH 6.8 y 2% (w/v) de SDS. La separación de proteínas se realiza corriendo los geles a 20 mA de 2 a 3 h. Los geles se tiñen con una solución de metanol: ácido acético: agua (45:45:10 v/v/v) conteniendo azul brillante de Coomassie R250 a una concentración final de 0.25% (w/v). El desteñido se hace con la misma solución, sin el colorante. Se utiliza un marcador de peso molecular (4.3 y 0.4 x 106 Daltons). (Rosa et al., 2003).
Bibliografía
Fauquet CM, M. M. (2005). Virus Taxonomy: VIIIth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. USA: El sevier . Hunt, R. (03 de Marzo de 2008). Los Virus de la Hepatitis . Obtenido de Microbiologia e inmunologia On-line: http://www.microbiologybook.org/Spanish-Virology/spanishchapter18.htm Rosa, A. P.-d. (2003). STRUCTURAL CHARACTERIZATION OF SATELLITE TOBACCO MOSAIC VIRUS ARN. Revistas Científicas de América Latina . Sosa, C. M., Roldan, F. P., C. B., & Cruz, J. J. (1997). Manual de técnicas para el diagnóstico de las enfermedades de las pla ntas. Mexico: Instituto Interamericano de Cooperacion para la Agricultura. Torre-Almaráz1, R. D., & Monsalvo-Reyes1, A. C. ( 2002). DETECCIÓN Y CARACTERIZACIÓN PARCIAL DE UNA VARIANTE AMARILLA DEL VIRUS MOSAICO DEL PEPINO EN GLADIOLO. Revista Chapingo Serie Horticultura . Zone,
Dependoparvovirus . V. (15 de 11 de 2016). http://viralzone.expasy.org/all_by_protein/226.html#tab7
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