“AÑO DE LA DIVERSIFICACIÓN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTODE FORTALECIMIENTODE LA EDUCACIÓN”
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL PROFESIONAL DE FARMACIA F ARMACIA Y BIOQUÍMICA
QUÍMICA ORGÁNICA 2 PRÁCTICA Nº 3 IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS POR MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS Alumno: •
Chepe Cueva, Freddy Jesus M. Docente: •
Q.F. Daniel Ñañez. Sección: •
FB4M1
LIMA - PERU
2016
I.
INTRODUCCION
La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas variantes. En toda separación cromatográfica hay dos fases (sólida, líquida o gas) una móvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto íntimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los componentes dela muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho más lenta
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA Las capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o Placas simplemente. Se usan dos tipos de capas: capa compacta que se adhiere a la placa de vidrio por medio de un agente aglomerante incorporado al adsorbente o por las cualidades adherentes del propio material, y capa suelta. Estas últimas sólo se emplean en la determinación de la actividad de los adsorbentes y en uno o dos casos especiales.
II.
MARCO TEORICO
La cromatografía en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros métodos cromatográficos (en columna, en papel, en fase gaseosa,...) ya que el utillaje que precisa es más simple. El tiempo que se necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la separación es generalmente mejor. Pueden usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruirían el cromatograma. El método es simple y los resultados son fácilmente reproducibles, lo que hace que sea un método adecuado para fines analíticos. Al realizar la elección del adsorbente se debe tener en cuenta el tamaño de las partículas del adsorbente, cuanto más finamente dividido esté mayor será su adhesión al soporte, aunque también se le puede añadir un adherente (yeso). Algunos de los adsorventes más utilizados son: Celulosa, Almidón y Azucares. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido que se queda fijo en la misma posición. La faso móvil puede ser un líquido o un gas que corre a través de una superficie y de la fase estacionaria. Las sustancias que están en un sistema de cromatografía interaccionan tanto con la fase estacionaria como con las fases móviles. La naturaleza de estas interacciones depende de las propiedades delas sustancias así como también de la composición de la fase estacionaria. La rapidez con que viaja una sustancia a través del sistema de cromatografía depende directamente de la interacción relativa entre las sustancias y las fases móvil y estacionaria. En el caso de una mezcla, si cada componente interacciona diferente con la faso móvil y la fase estacionaria, cada uno de ellos se moverá diferente. El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el método ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi en vertical, por la acción de la capilaridad. La cromatografía se realiza en una cubeta. Para conseguir la máxima saturación posible de la atmósfera de la cámara, las paredes se tapizan con papel impregnado del eluyente. Generalmente el eluyente se introduce en la c ámara una hora antes del desarrollo, para permitir la saturación de la atmósfera. El tiempo de desarrollo, por lo general, no llega a los 30 minutos. La mejor posición de desarrollo para un componente es el punto medio entre el origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se
desplazan con mayor y menor velocidad. El frente del eluyente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa.
CONCEPTO DE R.F. Rf es el registro y se define como: distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente. 5, 6 El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturación, etc.). Tiene una reproducibilidad de ± 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa .
III.
MATERIALES Y REACTIVOS 3.1 OBJETIVOS
Aplicar la cromatografía en la identificación de carbohidratos.
Realizar los cálculos del RF con las muestras de glucosa y almidón.
3.2 MATERIALES Y REACTIVOS Materiales: Matraz de 250mL Pipetas de 5mL y 10mL Centrífuga Espátula Backer 250mL Pro pipeta Bagueta Balanza analítica Cuba cromatografica pequeña Asperjador con bombilla
Reactivos: Acido Sulfúrico al 5% Carbonato de Calcio Cromatofolio 20 x20 cm Butanol Acido acético Piridina Acetato de Etilo
Sacarosa Q.P Almidón Q.P Antrona Lugol Etanol Revelador de difenilamina Revelador acido 3.5-dinitrosalisilico
IV.
PROCEDIMIENTO Hidrólisis:
Se peso 1 g de almidón. Se puso en el tubo de ensayo .
A ambos se añado 10 mL de ácido sulfúrico al 5 % y se colocó a baño maria por 20 minutos.
Se neutralizo con de carbonato de calcio, una vez q este neutralizada se llevo a centrifugar y filtrara identificar los azucares por cromatografía en capa fina.
Luego de neutralizar separar en 2 tubos en el mismo volumen para centrifugar.
Cromatografía
Se Preparó las placas cromatografías después de centrifugar las muestras, en el cual se sembró las placas patrón de glucosa más glucosa muestra y en otra placa la glucosa patrón y al almidón.
Lo ponemos en la cuba con las siguientes proporciones n-butanol-agua-ácido acético (1,2:0,2:0,8). Luego dejar secar las placas y llevarlos al rev elador.
V.
La placa con las muestra de glucosa se revelo con antrona y la placa con la nuestra de glucosa patrón y el almidón se revelo con difenilamina. Para que se note más lo llevamos a calentar para observar el recorrido.
RESULTADOS
REVELADOR DE DIFENILAMINA Muestra problema del almidón:
Rf A =
Muestra de glucosa:
Rf B =
=
3.8 5
2
= 0.76
= = 0.4 5
REACCION
INTERPRETACION La práctica de laboratorio tuvo como fin identificar un monosacárido en este caso la glucosa producto de un polisacárido que es el almidón, para poder obtener la glucosa se sometió al almidón a una reacción de hidrolisis, utilizando ácido sulfúrico más calor , los cuales producirán la ruptura de enlaces que forman las glucosas en el compuesto, y para identificar que la reacción se ha llevado a cabo s e añadió lugol a la muestra, el cual la colorea si hay presencia de almidón en ella, pero si el almidón en la muestra ha sufrido una reacción de hidrolisis ahora le nuevo compuesto será la glucosa el cual no reacciona con el lugol. Luego al azúcar obtenido se le realizó el análisis cromatográfico y luego fue revelado con antrona y difenilamina. Del mismo modo pasa con la Sacarosa: realizamos una reacción de hidrólisis, tenemos que descomponer la sacarosa, en primer lugar pesamos la sacarosa y añadimos ácido sulfúrico al 5% y lo llevamos a baño maría ´por 20 minutos lo cual hace que la mezcla se solubilice más rápido, luego se llevó a enfriar y neutralizamos con carbonato de calcio (este reactivo libera oxigeno) y finalmente centrifugamos para obtener por separación la glucosa de la cual esa muestra obtenida se le realizó el análisis cromatográfico y luego fue revelado con antrona y difenilamina.
VI.
CONCLUSIONES Es una técnica de separación simple debido a que durante el proceso sólo se debe preparar el papel cromatográfico, aplicar la muestra y finalmente el revelado.
No es recomendable ubicar las muestras muy cerca una de otra, ya que se puede mezclar las muestras y nos dificultaría su identificación, es por eso que debe tener un espacio mínimo de separación.
La cromatografía se da cuando en el proceso existe una interacción entre la fase móvil, la fase estacionaria, y la estructura del compuesto (proceso de separación de la muestra), y con la disponibilidad de estándares (sustancias puras) para realizar la respectiva comparación con nuestra muestra.
VII.
CUESTIONARIO
1. Indique otros reveladores para identificar azúcares por cromatografía en capa Fina. • Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 ó F366), el número que aparece como subíndice nos indica la longitud de onda de excitación del indicador utilizado. • La introducción de la placa en vapores de yodo. • El rocío con una solución de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento
especialmente protegido y bajo una campana de extracción de gases).
2. Qué otros métodos cromatográficos
de aplican
para identificar
carbohidratos. De ejemplos (Adjunte cromatogramas, gráficos o figuras)
Cromatografía líquida. La fase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes y la fase estacionaria un sólido que interactúa con las sustancias desea
que
se
separar
(cromatografía líquidosólido), o bien un líquido inmiscible con la fase móvil, depositado en la
superficie de un sólido (cromatografía líquido-liquido).
Cromatografía de gases. En este caso la fase m óvil es un gas inerte (helio o nitrógeno) y la fase estacionaria es un sólido (cromatografía gas-sólido) o un líquido “sostenido” por un sólido inerte (cromatografía gas-líquido).
Cromatografía en papel. La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel de filtro.
Cromatografía de permeación en gel. La cromatografía de permeación en gel, también conocida como cromatografía de exclusión es una variante de la CLAE que consiste en una columna cromatográfica empacada de tal manera que las partículas de dicho empacamiento tienen diferentes tamaños de poros o de redes de poros con el fin de que las moléculas de soluto sean retenidas o excluidas basándose en su forma y tamaño y no en el peso molecular.
VIII.
BIBLIOGRAFIA http://es.scribd.com/doc/23351629/Separacion-de-Carbohidratos-PorCromatografia-en-Capa-Fina#scribd. Tema: separación de carbohidratos
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.p df
Harold Hart. Leslie E. Craine. Química orgánica. Décimo segunda, ed. Madrid. 2000. Bloomfield, Molly M. Química de los Organismos vivos. 1ª, ed. México D.F. Limusa. 1992
http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia/capa-fina
http://biblioteca.uns.edu.pe/saladocentes/archivoz/curzoz/cromatograf %EDa.pdf
