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TEMA 12 Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
Tema 12. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 1. Nacimiento de la era de los antibióticos 2. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 2.1. En surco 2.2. Con tiras de papel 2.3. En caldo 2.3.1. Cálculo de la CMI 2.3.2. Cálculo de la CMB 2.4. Con discos de papel 2.4.1. Estandarización del medio de cultivo 2.4.2. Estandarización del inóculo 2.4.3. Estandarización de los discos 2.4.3.1. Concentración de algunos antimicrobianos 2.4.4. Condiciones de incubación y lectura de los resultados 2.4.5. Cepas bacterianas para control de calidad de las pruebas 2.4.6. Fundamento de la prueba de Bauer-Kirby 2.4.6.1. Correlación entre el halo de inhibición y la CMI 2.4.6.2. Ejemplos de sensibilidad/resistencia 2.4.6.3. Resultados atípicos 2.4.7. Limitaciones de la prueba de Bauer-Kirby
Tema 12. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 3. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos con determinación de la CMI 3.1. Técnica de dilución en caldo 3.2. Técnica de dilución en agar 3.3. Técnica de microdilución en caldo 3.4. Test Épsilon
1. Nacimiento de la era de los antibióticos
Penicilina
1929
Estreptomicina
1943
Gramicidina y tirocidina
1943
Clortetraciclina
1944
2. Pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos 2.1. En surco Realizada por Fleming
2.2. Con tiras de papel
2.3. En caldo Efectuar diluciones dobles del antibiótico en un medio de crecimiento líquido
Concentración (mg/L) Añadir una concentración baja (aproximadamente 10.000/ml) de las colonias de prueba a cada dilución
Concentración (mg/L) Observar el crecimiento tras 18-24 h de incubación a 37 ºC
Concentración (mg/L) CMI = 0,25 mg/L
2.3.1. Cálculo de la CMI
CMI = 2 mg/L
2.3.2. Cálculo de la CMB
CMB = 1 mg/L
2.4. Con discos de papel Prueba de Bauer-Kirby
Zona de inhibición
2.4.1. Estandarización del medio de cultivo Agar de Müeller-Hinton Infusión de carne de vaca Casaminoácidos Almidón Agar
300 g/L 17,5 g/L 1,5 g/L 17 g/L
Características Permite crecer a la mayoría de los patógenos Transparente No tiene PABA pH Espesor
2.4.2. Estandarización del inóculo Tomar 4-5 colonias
Incubar hasta turbidez 0,5 de MacFarland
Resuspender en TSB
Sembrar tres veces rotando la placa 120º
2.4.3. Estandarización de los discos
Colocación manual desde el tubo
Discos de alto poder (10-300 µg de los antibióticos) Control calidad (FDA) Posición Colocación manual o con un dispensador No mover Colocación con un dispensador automático
Colocación manual con pinzas estériles
2.4.3.1. Concentración de algunos antimicrobianos
2.4.4. Condiciones de incubación y lectura de los resultados •
Incubación
•
Observación de los halos de inhibición
•
Medida de los diámetros de los halos
2.4.5. Cepas bacterianas para control de calidad de las pruebas
2.4.6. Fundamento de la prueba de Bauer-Kirby
2.4.6.1. Correlación entre el halo de inhibición y la CMI
Elaborado por el CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute)
3.2. Técnica de dilución en agar Replicador manual
Replicador de Steers
3.2. Técnica de dilución en agar
3.2. Técnica de dilución en agar
Ventajas • 32-36 microorganismos • Control de calidad • Placas comerciales • Barata • Automatización • Adecuada para laboratorios con gran volumen de trabajo • CMI
3.3. Técnica de microdilución en caldo Ventajas • 10-12 antibióticos diferentes • Más microorganismos a menos antibióticos • Pipetas multicanal • Lectura automatizada • Resultados en 4 horas