FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA Efecto antiinflamatorio de un gel elaborado a base de la flor de pacra pacra accope etalum talum gi g i g anteum anteum (weddel) ulbrich) en ratas attus ra r attus ttus) (L accop ratas (R attus
Proyecto de investigación Autor: Vásquez Aguilar José Luis
Asesor: Mgtr. Liz Elva Zevallos Escobar
Chimbote - Perú 2016
Efecto antiinflamatorio de un gel elaborado a base de la flor de pacra pacra accope etalum talum gi g i g anteum anteum (weddel) ulbrich) (L accop
2. Contenido (índice) 3.
Introducción…………………………………………………………….
4.
Planeamiento de la investigación……………………………………….
4.1. Planteamiento Plante amiento del problema…………………………………………… probl ema…………………………………………… a) Caracterización del Problema……………………………………………. b) Enunciado del problema………………… problema……………………………… ………………………… …………………. ……. 4.2. Objetivos de la investigación………… i nvestigación………………………… ………………………… …………………. ………. 4.3. Justificación de la investigación…………………………………………….. investigación…………………………………………….. 5. Marco teórico y conceptual………………………………………………….. 5.1. Antecedentes……………………………………………………………….. 5.2. Bases teóricas de la investigación…………… investigación………………………… ………………………… ………………… …… 5.3. Hipótesis…………………………………………………………………….. 6. Metodología…………………………………………………………………… 6.1. El tipo de investigación………………………………………………………. 6.2. Nivel de la investigación de las tesis………………………………………… tesis ………………………………………… 6.3. Diseño de la investigación…………………………………………………… investigación…………………………………………………… 6.3.1 Obtención del extracto………………………………………………………. 6.3.2 Tamizaje fitoquímico………………………………………………………... 6.3.3 Diseño y formulación de un gel……………………………………………… 6.3.4 Control de calidad del gel……………………………………………………. 6.3.5 Actividad antiinflamatoria en Rattus rattus…………………………………. 6.4. El universo y muestra…………………………………………………………. 6.5. Definición y operacionalización de variables…………………………… variables…………………………………. ……. 6.6. Técnicas e instrumentos i nstrumentos de recolección de datos…………………………… datos…………………………….. .. 6.7. Plan de análisis……………………………………………………………….. 6.8. Matriz de consistencia…………………………………………………………. 6.9. Principios Principios éticos………………………………………………………………… 7. Referencias bibliográficas………………………………………………………….
3. Introducción El siguiente proyecto de investigación previene del proyecto de línea actualizada: Investigación en plantas medicinales de importancia terapéutica; considerándose así la siguiente pregunta de investigación: ¿Tendrá efecto antiinflamatorio en ratas Rattus
rattus un gel elaborado a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich (PACRA PACRA)?
Esta investigación pretende como objetivo general determinar el efecto antiinflamatorio de un gel elaborado a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich en ratas Rattus rattus, siendo los objetivos específicos derterminar el tamizaje fitoquímico del extracto de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich, elaborar un gel a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel ) ulbrich y determinar el control de calidad del gel elaborado a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich.
La presente investigación desarrollará un estudio de tipo experimental, con un enfoque cuantitativo, el diseño de la investigación permitirá elaborar un gel antiinflamatorio a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich.
Para el análisis estadístico, los datos serán agrupados y presentados en tablas, expresándose valores medios ± error estándar, en un intervalo de confianza del 95%, porcentajes de eficacia, figuras que explican mejor los hallazgos. Se tendrá en cuenta una p<0,05 para considerar significativos los hallazgos. Se aplicará un análisis de varianza para establecer la significancia estadística del tratamiento.
4
4. Planeamiento de la investigación. 4.1. Planteamiento del problema: a) Caracterización del Problema: Actualmente en el Perú el uso de plantas medicinales está tomando aceptación, esto debido a que gran parte de la población recurre a fuentes naturales como un recurso para el tratamiento de enfermedades. El Perú como país del tercer mundo tiene todavía mucho por hacer, como elevar el nivel de vida de los pobres, disminuir la desnutrición infantil y aminorar diversas afecciones. Es así que a los profesionales de la salud y más aún a los Químicos Farmacéuticos nos toca el deber de contribuir con nuestros conocimientos científicos y hacer extensivo las propiedades de nuestras especies que pueden abarcar el mercado interno y el externo. La posibilidad de industrialización de nuestros recursos naturales, terapéuticos, es una línea promisoria que tendría sustento siempre y cuando corroboremos su eficacia, primero con la identificación de sus componentes y posteriormente su aplicación en personas. ( 1) Uno de los riesgos del uso de los analgésicos es la nefritis intersticial, y la gastritis entre otras enfermedades. Se estima que el 11% de todos los casos de insuficiencia renal, es atribuido al consumo de analgésicos. El tratamiento no supervisado del dolor se ha complicado al extenderse el uso de antiinflamatorios no esteroideos (AINES), para esta indicación. Su consumo creciente aumenta los riesgos de efectos adversos e interacciones medicamentosas, tanto en prescripción médica como en automedicación. Para ejemplificar las complicaciones que un medicamento puede acarrear, tenemos el caso del ácido acetilsalicílico, una sustancia de uso común capaz de disminuir la temperatura del cuerpo, combatir el dolor y la inflamación, siempre que es ingerida en una dosis adecuada. Sin embargo, su consumo irracional y en cantidades inadecuadas afecta al aparato digestivo, provocando hemorragias en esta parte del organismo, es decir pérdida de sangre a nivel del esófago y estómago. ( 2)
5
El paciente opta por el uso indiscriminado e inadecuado y desordenado de los analgésicos, con o sin receta, para aliviar en lo posible sus síntomas y dolencias. La automedicación con analgésicos constituye en nuestro medio un problema de salud pública. El uso regular y frecuente de analgésicos como aspirina y paracetamol, particularmente cuando se toman juntos para tratar cefaleas no específicas, puede causar cefalea crónica como reacción adversa. ( 2) El proceso inflamatorio incluye una serie de fenómenos que pueden ser desencadenados por diversos estímulos como son agentes infecciosos, isquemia, interacciones antígeno-anticuerpo, y lesiones térmicas o físicas de otra índole. Cada tipo de estímulo desencadena un patrón característico de reacción o respuesta que constituye una variante relativamente menor del mismo fenómeno. A un nivel macroscópico, la respuesta por lo común se acompaña de los conocidos signos clínicos como eritema, edema y dolor (hiperalgesia) a la palpitación y espontáneo. Las respuestas inflamatorias surgen en tres fases diferentes y cada una al parecer es mediada por mecanismos distintos: una fase transitoria aguda que se caracteriza por vasodilatación local y mayor permeabilidad; una fase subaguda tardía que se identifica más bien por infiltración de leucocitos y fagocitos, y una fase proliferativa crónica en que se advierten degeneración y fibrosis tisulares. En el proceso global, intervienen muchos mecanismos Gallin y col.1992; Kelly y col. , 1 993. La habilidad para desencadenar una respuesta de esta índole es esencial para la supervivencia, dados los innumerables agentes patógenos y lesivos ambientales existentes, aunque en algunas situaciones y enfermedades la respuesta que se expone puede ser intensificada y perpetuada sin un beneficio manifiesto. ( 3) La presencia de la inflamación es lo que hace más perceptible la enfermedad a un individuo. Se podría y suele ocurrir durante años, antes de que exista en niveles suficientes para ser aparente o clínicamente significativa. ( 4)
6
Cuánto tiempo en realidad ha estado latente para determinar el grado de severidad de una enfermedad y a menudo el pronóstico, asumiendo que la inflamación podría ser controlada. También se podría argumentar que sin inflamación la mayoría de las enfermedades ni siquiera existirían. ( 4) Recuerde, que una amplia gama de problemas de salud, incluyendo, pero no limitados al dolor crónico, obesidad, ADD/ADHD, neuropatía periférica, diabetes, enfermedades cardiacas, derrame cerebral, migrañas, problemas de tiroides, problemas dentales y cáncer son desencadenados por la inflamación, lo que debe tratarse debidamente si desea ser sanado. ( 4)
b)
Enunciado del problema: ¿Tendrá el gel elaborado a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich (PACRA PACRA) efecto antiinflamatorio en ratas Rattus rattus?
4.2. Objetivos de la investigación: 4.2.1 Objetivo general Determinar el efecto antiinflamatorio de un gel elaborado a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) en ratas Rattus rattus
4.2.2. Objetivos específicos - Derterminar el tamizaje fitoquimico del extracto de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel). - Elaborar un gel a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel). - Determinar el control de calidad del gel elaborado a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel).
4.3. Justificación de la investigación: Es de primordial importancia que el farmacéutico realice estudios y aprobaciones farmacológicas de plantas medicinales con la finalidad de establecer si presentan o no las propiedades curativas atribuidas, para utilizarlas como una elección en la terapéutica, así como determinar la efectividad y seguridad que éstas poseen al ser utilizadas por la población. Por lo tanto es necesario realizar un estudio farmacológico de la flor de Pacra Pacra (Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich), ya que a esta especie se le asigna propiedades antiinflamatorias que no cuentan con una base científica. El desarrollo de 7
la aprobación farmacológica de esta planta mana con la finalidad de solventar las necesidades de las personas que puedan contar con un bajo recurso económico.
5. Marco teórico y conceptual. 5.1. Antecedentes En una investigación se postularon como objetivos determinar si la administración por vía oral del extracto etanólico de flores de Laccopetalum giganteum (Pacra-pacra) en ratas normales aumenta la fertilidad. Diseño: Estudio experimental. Lugar: Facultad de Medicina y Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Material biológico: Ratas. Intervenciones: Cuarentiocho animales fueron divididos aleatoriamente en 2 grandes grupos, de 24 cada uno. El primero fue control, con solución salina fisiológica (SSF) 5mL/kg y el segundo con extracto vía oral, 300 mg/kg, durante 15 días. Cada grupo consideró 6 hembras y 6 machos juntos, y 6 hembras y 6 machos separados. Los animales que estuvieron juntos fueron sacrificados, para observar la presencia de fetos en el útero; y a los animales que estuvieron separados, se les extrajo muestra de sangre, para conocer el nivel de testosterona en machos y LH, FSH, estrógenos y progesterona en hembras, expresándose en ug/dL; el dosaje hormonal se realizó por el método de electroquimioluminiscencia. Asimismo, se determinó GOT, GPT, urea y creatinina, según las técnicas utilizadas en el laboratorio clínico. Principales medidas de resultados: Gravidez, FSH, LH, estrógenos y progesterona en ratas hembras; testosterona en ratas machos. Resultados: Los flavonoides, compuestos fenólicos y taninos estuvieron en mayor cantidad en el extracto etanólico. El 100% de ratas que recibió el extracto etanólico de la planta y estuvo junto a los machos resultó grávida; y, las separadas que recibieron el mismo extracto, presentaron incremento de FSH en las hembras y testosterona en los machos, comparativamente a los controles respectivos. Los niveles de GOT, GPT, urea y creatinina se encontraron dentro de los límites aceptados. Conclusiones: En condiciones experimentales, el extracto etanólico de las flores de Laccopetalum giganteum (pacra-pacra) incrementó la fertilidad en ratas normales. (5) Un estudio evaluó el efecto antiinflamatorio y cicatrizante del Gel del extracto de Aloe vera y su contenido (sábila) procedente de Lima, se preparó el Gel del extracto de Aloe vera al 20% que fue aplicado por vía tópica en 40 pacientes entre las edades 20 a 50 años, de ambos sexos, en el Establecimiento de Salud Ganimedes DISA LIMA ESTE del Ministerio de Salud, y otro grupo de 40 pacientes (grupo control) sin la aplicación del Gel del extracto de Aloe vera, comparando ambos casos se demostró la eficacia antiinflamatoria y cicatrizante del Gel del extracto de Aloe vera, que consistió en el control de la medición de la inflamación y la herida leve cerrada al paciente, desde su llegada por Emergencia (tópico) al establecimiento de Salud, por efecto de un trauma accidental o por otra índole; primero se evalúo el estado general del paciente para un diagnóstico médico, luego se plantea para su consentimiento del estudio a realizar, iniciando el uso tópico mediante controles de observación y medición de la zona inflamada y herida leve cerrada, así como el cambio de color de la piel y reacciones adversas que puede ocasionar el uso tópico hasta su recuperación total. El estudio del Gel del extracto de Aloe vera (sábila) de 8
acuerdo con los ensayos efectuados y los objetivos generales propuestos, han demostrado su efecto anti inflamatorio y cicatrizante en la parte externa de la piel, el cual se realizó por el método mecánico y tópico. El Gel del extracto de Aloe vera, es un producto natural muy económico, de acceso fácil en su elaboración, presentando actividad antiinflamatoria y cicatrizante, administrada por vía tópica en los pacientes tratados en mención. La calidad de la inflamación y la cicatrización obtenida con Gel del extracto de Aloe vera demuestra que es de gran utilidad en tratamiento dermatológico o en cirugía plástica, obteniendo mejores resultados en regeneración de tejido o piel y epitelización de las heridas. ( 6) Un trabajo de investigación se desarrolló para verificar la actividad antiinflamatoria de la Baccharis teindalensis Kunt. y para elaborar un lipogel a partir de esta. En el inicio de la investigación, se realizó la recolección del material vegetal, la elaboración del Boucher para la identificación taxonómica, y a la planta se le sometió a los procesos secado y molienda, para posteriormente realizar la obtención del extracto hidroalcohólico, y un extracto etanólico total en el cual se realizó la investigación fitoquímica. Al verificar su toxicidad y su eficacia en la actividad antiinflamatoria se formuló y elaboró el lipogel utilizando el extracto hidroalcohólico de Baccharis teindalensis Kunt. como principio activo, posteriormente se realizó los controles de calidad; en procesos y en producto terminado, en donde se evalúo parámetros organolépticos, físicos, posológicos, de biodisponibilidad y microbiológicos, lo cuales permiten establecer que el producto cumple con todas las especificaciones establecidas. Luego se procedió a la investigación y a la experimentación farmacológica y se efectuó: la evaluación de la actividad antiinflamatoria de la forma farmacéutica. Al terminar la investigación se desarrolló el lipo gel en su presentación efectiva, el cual cumple con los parámetros de calidad y buenas prácticas de manufactura y que puede ser una nueva alternativa terapéutica válida, para los problemas inflamatorios.( 7) En otra investigación se elaboró un gel de uso tópico a base de chilca ( B. latifolia) y hierbamora (S. nigrum) el mismo que se ha comparado con diclofenaco como referencia para probar el efecto antiinflamatorio. Los principios activos de los extractos se han identificado por tamizaje fitoquímico, cromatografía de capa fina y espectromofotometría, en la elaboración del gel se utilizaron extractos fluidos, para la tintura se usaron extractos hidroalcohólicos al 40%, ambos productos envasados en recipientes plásticos con tapa, el gel no presenta grumos, es homogéneo con una viscosidad de 54,60 centipóins, extensibilidad de 4,36cm; la tintura presenta un pH de 5,60 y densidad relativa de 0,97g/L, los análisis microbiológicos de los productos presentaron ausencia de microorganismos contaminantes. Para la comprobación de la eficacia del gel en ratas Wistar el método utilizado fue la inducción de edema plantar con carragenina al 2% frente a un grupo control con aplicación de gel de extracto de chilca (T2), gel de extracto de hierbamora (T 3) y gel de la mezcla de extractos (T 4), la concentración del gel y el diclofenaco gel es de 1% (T 1). La inflamación en ratas con la aplicación del gel se obtuvo que a 1 hora, con T 2 es 3,63cm, con T3 es 3,47cm, con T 4 es 3,40cm frente a T 1 es 3,33cm. Con la aplicación del gel en pacientes tenemos que a 1 hora con T 2 es de 38,32cm, con T 3 es 38,33cm, con T 4 es 39,33cm frente a T 1 es de 40,33cm. Se comprueba que la mezcla de extractos disminuye la inflamación, al igual que con el diclofenaco. El gel de mezcla de extractos disminuyó la inflamación tanto en ratas como en pacientes.( 8) .
9
En un trabajo de investigación se evaluó el efecto antiinflamatorio y cicatrizante del extracto etanólico de hojas de Senna reticulata (Willd)H.Irwin & Barneby “Retama” procedente del Departamento de San Martín (Tarapoto). Se determinaron los metabolitos secundarios mediante la marcha fitoquímica, identificando flavonoides, alcaloides, taninos, saponinas y glicósidos. Luego se efectuó el screening cromatográfico, para posteriormente realizar las lecturas al espectrofotómetro.Para la investigación farmacológica se preparó una crema base cold-cream a la cual se le añadió concentraciones de 5%, 10% y 20% del extracto, realizando el estudio antiinflamatorio y cicatrizante en ratones albinos de 25 a 30 g. Comparándose con Diclofenaco al 1% en gel para el efecto antiinflamatorio dando resultados no significativos. Mostró acción cicatrizante significativa confrontando con NeomicinaBacitracina, glicina, L-cisteína, DL-treonina; obteniendo mayor efecto con la crema al 20% luego la crema al 10% y la crema al 5% del extracto etanólico. ( 9)
El presente trabajo de investigación se realizó con el objeto de medir el efecto anti-inflamatorio se la Manzanilla, (Matricaria Recutita) en preparación de gel por vía tópica, sobre la inflamación de la encía en la zona de erupción de la dentición primaria, en una población de niños comprendidos entre las edades de 6 meses a 2 años, de la casa No. 1 de la Sociedad Protectora del Niño, de la ciudad de Guatemala. ( 10) Para el desarrollo de esta investigación se seleccionó una muestra de 30 niños con inflamación de la encía en la zona de erupción de la detención primaria, el grado de inflamación se midió utilizando el Indice gingival (Löe y Silness) modificado. ( 10) Se asignaron al azar 30 pomos que contenían gel (15 con manzanilla y 15 sin manzanilla), uno a cada niño, seguidamente se procedió a realizar las aplicaciones de gel a cada niño sobre el área de erupción dentaria inflamada, por medio de un hisopo, 2 veces por día, después del desayuno y del almuerzo durante 4 días; se realizaron 5 evaluaciones clínicas para medir el grado de inflamación, la primera antes del inicio de las aplicaciones de gel, la segunda a las 24 horas de la primera evaluación y así sucesivamente hasta la quinta evaluación. (10) Al terminar las evaluaciones clínicas se procedió a identificar los pomos asignados al azar a cada niño y se procesaron los datos. ( 10) Los resultados obtenidos con los niños que se les aplicó gel con manzanilla fueron satisfactorios, ya que mostraron una reducción significativa del grado de inflamación en la encía en la zona de erupción dentaria, comparado con los resultados obtenidos con los niños que se les aplicó gel sin manzanilla los cuales no mostraron reducción en el grado de inflamación. ( 10) Sobre la base de los resultados obtenidos en esta investigación en cuanto al efecto desinflamatorio de la manzanilla en preparación de gel, se considera que puede tomarse en cuenta como una alternativa de medicamento natural para tratar la inflamación en la etapa de erupción de la dentición primaria. ( 10)
10
5.2. Bases teóricas de la investigación Pacra pacra Taxonomía: La clasificación taxonómica y descripción botánica de la especie Según cronquist A. (1988). Es: División: magnoliophyta Clase: magnoliopsida Orden: ranunculales Familia: ranunculaceae Género: laccopetalum Especie: Laccopetalum giganteum (Wedd.) Ulbrich Nombre vulgar: Pacra pacra (11) Hierba suculenta, hasta 0,80 m de altura, raíces múltiples y largas, fasciculadas, 10-15 por planta. Hojas arrosetadas, basales y caulinares, coriáceas, espatuladas, bordes dentado-mucronulados, las basales tan largas como la planta, las caulinares de tamaño variable, ambas 1-3 cm en su porción angosta y 6-8 cm en su porción más ancha, verde-azuladas. Flores hemisféricas, 10-15 cm diámetro, verdosas, solitarias; sépalos imbricados 5(-6) 8-10 cm de largo, 6-8 cm de ancho, poros 2-4 mm ancho; pétalos imbricado-fimbriados con nectarios notorios a modo de grandes cavidades, 2-4 mm ancho; estambres numerosos, filamentos hasta 2 cm largo, anteras con inserción basal, 0,5 cm largo, amarillos; carpelos glabros, estilo corto 3 cm largo, 2 cm ancho, suculento, estigma ampliamente capitado 2,5-3,5(-4) cm diámetro, verdoso. Fruto no conocido. (13) (15)
Etimología del género: Griego Lakkos=agujero, cavidad; petalon=pétalo. En alusión a los numerosos nectarios que se distribuyen en cada pétalo. Género monotípico. (15) Nombres vulgares: “pacra”, “pacra-pacra” (López 2045, HUT), “pagra -pagra”, “huamanripa” (Macbride, 1937; Web erbauer, 1945; Soukup, 1970). (12) (16) (17) Distribución y Ecología: Es una planta endémica que crece a 4000 - >4500 m.s.n.m. (Brako & Zarucchi, 1993), distribuida desde el norte del Dpto. Ancash, Prov. Pallasca hasta el Dpto. Cajamarca, Prov. Hualgayoc (Macbride, 1937; Weberbauer, 1945); sin embargo excursiones botánicas modernas indican que actualmente solamente estaría restringida a la zona de Pallasca (Distrito Conchucos) y sur y este del Dpto. La Libertad (Huamachuco y Bolivar). Crece en zonas pedregosas y rocosas, sobre rocas calcáreas y de arenisca en la Cordillera de Pelagatos (Weberbauer, 1945), Conchucos (Pera et al., 2004) en Ancash y zonas aledañas, asociada con especies diversas mayormente arbustivas y herbáceas altas, arrosetadas o almohadilladas, tales como: Gentianaceae 11
(e.g. Gentianella spp.), Asteraceae (e.g. Chuquiraga sp., Senecio spp.), Fabaceae (e.g. Lupinus spp.). (17) Lamiaceae (e.g. Satureja spp.), Ranunculaceae (e.g. Ranunculus spp.), Orchidaceae (e.g.Masdevallia sp.) entre otras. (17)
Etnobotánica e Importancia: Empleada en medicina folclórica humana, las flores tienen mucha fama como remedio contra la tos y se venden en los pueblos (Soukup, 1970), para combatir afecciones de la garganta y pulmones (Macbride, 1937; www.sacha.org) inclusive fue usada de esta forma por los antiguos peruanos del incanato (Chávez, 1977 en Palacios, 1993). Las flores mezcladas con sal se dan al ganado, porque se consideran como un remedio eficaz para aumentar la fecundidad (según Weberbauer; en Soukup, 1970). En la comunidad de Conchucos la flores son cortadas en pedazos o trozos pequeños y se combinan con las hojas de «chocho silvestre» Lupinus sp. denominado «copcho», la mezcla es guardada 24 horas, tiempo en el cual emite calor (elevadas temperaturas), luego se extiende en mantas y se les da de comer al ganado vacuno, especialmente al que no entra en celo y a los machos para ser mas fecundos, añadiendo sal. En esta misma comunidad se ha comprobado que sirve también como purgante eficaz (diarreico) en el ganado ovino y caprino. Así mismo cuando los lugareños (e.g. pastores), prueban el néctar emitido por los nectarios de los pétalos, presentan fuertes dolores de cabeza y alucinaciones (Pera et al., 2004). La planta tiene acción vesicante, produciendo ampollas y quemaduras al poner en contacto con la piel humana, a pesar de ello falsos curanderos siguen utilizando este método contra la artritis y reumatismo colocando los pétalos directamente sobre la piel previo vendaje de los órganos afectados produciendo resultados fatales, como quemaduras de tercer grado. Igualmente se tiene la falsa creencia que es afrodisíaco y que aumenta la potencia sexual masculina y a las mujeres para poder tener progenie, para lo cual los «chamanes» o «falsos curanderos» o «charlatanes» maceran la flor en depósitos mezclándola con aguardiente (alcohol de caña de azúcar), «algarrobina» (miel de algarrobo, Prosopis sp.), «chuchuhuasi» (licor de Maytenus spp.), entre otras, vendiéndolas en copas a personas incautas. También lo utilizan para dar baños de florecimiento mezclándola con Alchemilla nivalis Kunth (Prov. Bolivar, Barbamarca, Dpto. La Libertad). Ecológicamente mantiene los nutrientes del suelo y evita los derrumbes altoandinos. Y desde el punto de vista paisajístico es una de las plantas que da vistosidad y atractivo al ambiente en donde habita, lo cual podría ser explotado en Turismo. (12) (15) (16) (17)
Conservación de la Especie: Esta hermosa y rara planta conocida vulgarmente como “pacra pacra” desde el punto
de vista de la Flora Autóctona del Perú es una planta ENDÉMICA, es decir propia de un determinado lugar o región, no existiendo en otras partes del Perú y el mundo. Actualmente presenta escasas poblaciones en el área, a pesar de ello está siendo depredada en grandes cantidades (e.g. se han llegado a decomisar hasta 350 kg de flores cada tres meses) por los lugareños (campesinos, curanderos, «charlatanes») especialmente las flores, quienes las comercializan en los mercados locales, de Sihuas, Huánuco y de la costa (Chimbote, Chiclayo, Lima). (14) Por las razones expuestas es de nuestra opinión que la especie Laccopetalum giganteum (Wedd.) Ulbrich (Ranunculaceae) por no estar registrada en alguna área de conservación, el manejo y/o protección de esta especie es urgente. Recientemente ha sido declarada según la Categorización de Especies Amenazadas de Flora Silvestre 12
del Perú como en Peligro Crítico (CR) según el D.S. 043-2006-AG. Este aspecto respalda que esta especie debe ser declarada PLANTA INTANGIBLE a fin de evitar que por la continua depredación a la que es sometida se extinga; así mismo, hacer cumplir estrictamente el Decreto Supremo recién emitido con rigurosas supervisones in situ. Se sugiere que el mecanismo para que la zona así como las plantas sean declaradas intangibles debe iniciarse a solicitud de los pobladores y por ende del Municipio y autoridades locales ante las autoridades competentes del estado peruano (e.g. INRENA). (14)
Estrategias y Conservación: La conservación de la especie debe ser integral e involucrar: 1) a los científicos (de las Universidades de la región, ONGs u otros) efectuando estudios exhaustivos sobre la biología y ecología (tener una idea exacta de las poblaciones que existen actualmente) de la especie, en lo posible incentivar su propagación in vitro y su conservación en bancos de germoplasma; 2) al Estado a través del Ministerio de Agricultura y el Instituto Nacional de Recursos Naturales (INRENA) con leyes de protección y estrategias para su cumplimiento; 3) la participación del gobierno Regional de Ancash y La Libertad y Local de las Provincias de Pallasca, Bolivar y Huamachuco, asesorando, proponiendo proyectos, creando conciencia conservacionista (educación ambiental) y trabajando conjuntamente con 4) la población del Distrito de Conchucos y otros donde aún está presente la especie. La misma que será beneficiada por las bondades turísticas que ofrece el área, pero utilizando los recursos conjuntos en forma sustentable, de tal suerte que después solucionar sus necesidades económicas prioritarias, “sientan la necesidad de aprovechar el recurso, pero a la vez conservarlo”. De esta forma
se garantizaría la protección de esta especie y su ecosistema de uso local a través de una protección integral. Finalmente, se plantea urgentemente la delimitación del área donde habita la especie, la creación de la zona de amortiguamiento y ser declarada zona de protección o intangible que según el Sistema Nacional de Areas Naturales Protegidas por el Estado (SINANPE) se trataría de un Santuario Nacional y con ello proteger el habitat donde viven escasas poblaciones de esta especie endémica. (17)
GELES Los geles son sistemas de dispersión, habitualmente transparente, uniformes, fácilmente deformados, que constan como mínimo de dos componentes. De éstos, uno es líquido y actúa como agente dispersante y el otro, un componente generador de estructura, habitualmente una materia coloidal sólida, ésta estabiliza la parte líquida formando una red tridimensional. (29) LOS HIDROGELES Pueden definirse como redes poliméricas capaces de absorber una cantidad significativa de agua (>20% de su peso seco) sin disolverse o perder su integridad estructural. (22) Los hidrogeles que en estado deshidratado presentan un aspecto cristalino y se denominan xerogeles, además de su inmediata definición de ser geles conteniendo agua, son polímeros o copolímeros con unas características particulares: son 13
hidrofílicos, insolubles en agua y en presencia de la misma (o de cualquier fluido acuoso) se hinchan, aumentando de volumen y pasando a tener una consistencia blanda y elástica, pero manteniendo su forma, hasta alcanzar un equilibrio físicoquímico. (22) HIDRÓFOBOS (OLEOGELES) Están constituidos por excipientes como la parafina líquida adicionada de polietileno, aceites grasos gelificados con sílice coloidal o por jabones de aluminio o zinc. (21) HIDRÓFILOS (HIDROGELES) Se elaboran con excipientes hidrófilos como el agua, el glicerol y los propilenglicoles, gelificados con sustancias como goma de tragacanto, almidón, derivados de la celulosa, polímeros carboxivinílicos, silicatos de magnesio y aluminio. (21)
PREPARACIÓN En la preparación de hidrogel intervienen el agua, el agente gelificante seleccionado, a la concentración conveniente para obtener la consistencia adecuada; además, se requiere la adición de una sustancia higroscópica como la glicerina, el propilenglicol o el sorbitol, que impida la desecación rápida una vez que la preparación se aplica sobre la piel. Estas sustancias actúan, así mismo, mejorando la elasticidad y hacen más fácil la extensión del preparado sobre la superficie cutánea. Debe agregarse siempre un agente antimicrobiano; lo más conveniente es la adición de una solución acuosa de metilparabeno al 0.075% y de propilparabeno al 0.025%. (19) Los hidrogeles se utilizan para favorecer la regeneración de heridas ulcerosas y en quemados, ya que crean un medio permanentemente húmedo en la herida, estimulando con ello la actividad celular en todas las fases de la cicatrización, además absorbe los exudados y secreciones. El ambiente húmedo que crea el hidrogel hace que se ablande y desprenda el tejido necrótico, favorece la regeneración del tejido en la fase de granulación, absorbiendo las secreciones, e igualmente crea un ambiente favorable a la división y actividad celular del tejido epitelial; finalmente, este tipo de apósitos no se adhiere a la herida, lo que resulta ventajoso para el paciente. Así mismo, previenen la contaminación bacteriana de las heridas, pudiendo incluso incorporar algún antibiótico, y son permeables al oxígeno. (22) Los extractos hidroalcohólicos y glicólicos también pueden incorporarse a los vehículos emulsionados, pero en este caso, se incluyen en la fase acuosa. Estos extractos también pueden utilizarse en vehículos con elevado contenido acuoso: lociones, hidrogeles, champús, geles de baño. En ocasiones es incompatible la coloración que imprime el extracto al producto cosmético (crema, champú, etc.). Para evitar este inconveniente los extractos glicólico e hidroalcohólico se someten a un enfriamiento intenso, reposo y filtración para separar la clorofila y otros compuestos que careciendo de actividad biológica dan coloración al extracto. (20) EXCIPIENTES Son sustancias auxiliares que ayudan a que el principio activo se formule de manera estable, eficaz y, sobre todo, seguras para el paciente. Estos excipientes se pueden clasificar de varias maneras, pero lo más interesante es atendiendo a la función que realizan dentro del medicamento. Lo más frecuente es que una misma sustancia tenga más de una función; por ejemplo, el etanol ayuda a solubilizar principios activos 14
parcialmente solubles en agua y además es un estupendo conservante. A continuación vamos a enumerar algunas de sus funciones y ejemplos de sustancias más o menos cercanas a nosotros e indispensables para formular un medicamento estable, seguro y eficaz. (26) Los geles que están formadas en gran medida por excipientes, estas formas farmacéuticas pueden tener estructura de emulsión, de gel o de crema, pero la característica común es que suelen estar compuestas por fases acuosas y fases oleosas, que debido a emulgentes se interponen de manera estable. Su fabricación es algo parecido a hacer mayonesa, la fase acuosa es el vinagre, la fase oleosa es el aceite y el emulgente es la lecitina presente en la yema del huevo, cuando se agita, las diferentes fases se interponen y la lecitina hace que se estabilicen, dando lugar a esta mezcla homogénea. Bien, pues los excipientes de la mayoría de los geles y pomadas sufren un proceso parecido. La liberación del principio activo depende de la fase predominante, las fases acuosas predominan cuando queremos que el fármaco actúe a nivel externo, es decir en las capas superficiales de la piel. Pero si necesitamos que el fármaco penetre bien o que esté largo rato actuando, se buscan excipientes grasos, que formen una película oclusiva sobre la piel. (26)
CONTROL DE CALIDAD El concepto actual de calidad defiere notablemente del que existía hace unas décadas. Entonces se buscaba sobretodo controles de calidad en las distintas fases de elaboración de formas farmacéuticas: control de materias primas y materiales de acondicionamiento, control en proceso y control en producto terminado. Si los diferentes controles de calidad resultaban correctos, se estimaba que la calidad del producto final era aceptable. Hoy en día se considera que el sistema de control de calidad, por etapas o sectorial, no es suficiente y lo que se intenta aplicar es el concepto de “garantía de calidad”. ( 30) Este concepto abarca, además de los controles de calidad básicos, ya mencionados, el concepto de operar de acuerdo a unas normas que disminuyan el riesgo de errores en la elaboración de medicamentos, y garantizar la obtención de un producto final con la calidad prevista durante el tiempo de validez establecido en el material de acondicionamiento. (30) Como conclusión, podemos decir que la garantía de calidad se puede definir como “la
suma total de actividades organizadas con el objeto de garantizar que los medicamentos posean la calidad requerida para su uso previsto”. Este sistema
sustituye al concepto antiguo que suponía que la calidad era competencia únicamente del servicio de control de calidad del laboratorio farmacéutico. El objetivo del sistema de garantía de calidad es conseguir que todo salga desde el principio, con la ayuda de todo el personal que participa en las distintas fases de consecuencia de un producto farmacéutico. (24) (30) Para conseguir un adecuado aseguramiento de la calidad, se han establecido unas normas que ya están vigentes en la industria farmacéutica a nivel ministerio, con la denominación en España de “Normas de Correcta Fabricación” (N -C.F.) y que tienen carácter obligatorio. A nivel de la Oficina de Farmacia se han establecido las denominadas “Normas de Correcta Fabricación de Fórmulas Magistrales y Preparados Oficiales”, que de momento tienen el carácter de recomendación con el fin de que el 15
farmacéutico formulador se vaya adaptando progresivamente a una f orma de operar homogénea para que al conseguir la mayor calidad posible en la elaboración de formulaciones magistrales y oficinales, cumplir con el mandato de la Ley del Medicamento (25/1990 del 20 de Diciembre) (24) (30).
NORMAS DE CORRECTA FABRICACIÓN DE FÓRMULAS MAGISTRALES Y PREPARADOS (NCFF) CONTROL DE CALIDAD DE LAS FORMULACIONES El último documento elaborado por el Consejo ínter territorial de Salud, define los principios generales y una serie de normas de carácter técnico y científico de acuerdo a los conocimientos actuales, a los que debe ajustarse la programación de fórmulas magistrales y oficinales. (26) (27) (28) (30) El documento se hizo público en marzo de 1992. Anteriormente se publicaron en alguna comunidad autónoma, como en Cataluña, los requisitos técnico-sanitarios que deben de cumplir las oficinas de farmacia, y dentro de ellos, en forma muy resumida, se mencionaban los elementos necesarios para disponer de un laboratorio de Farmacotecnia y control. (26) (27) (28) (30)
CONTROL DE CALIDAD DE LAS FORMULACIONES Los ensayos que se realicen en las formulaciones nunca deberán ser destructivos en las formulaciones magistrales y en general deberán ser pruebas sencillas con un equipamiento como el reflejado anteriormente. (18) Como ensayos químicos de tipo cualitativo pueden servir reacciones coloreadas, como las clásicas de alcaloides. Pruebas muy interesantes que dan información cualitativa y semicuantitativa son las cromatográficas en capa fina, empleando reveladores químicos (vapores de Iodo, etc.) o métodos físicos como la luz ultravioleta. (18) Los exámenes organolépticos son importantes. La aparición de coloraciones o la presencia de manchas o partículas extrañas, dan una buena información sobre la calidad del preparado. La utilización del microscopio óptico es de gran importancia para el examen del tamaño de la fase dispersa en emulsiones y suspensiones y para la identificación de plantas medicinales. (19) (28) Los ensayos galénicos son útiles para cumplir una serie de especificaciones de las formulaciones. Como resumen diremos que el control de calidad del producto acabado, en el caso de las fórmulas magistrales, comportará, como mínimo, un examen detallado de los caracteres organolépticos y un control de peso. (19) (23) (28)
INFLAMACIÓN La supervivencia de todos los organismos requiere que puedan eliminar los agentes invasores extraños, como patógenos infecciosos, y los tejidos dañados. Estas funciones están mediadas por una compleja respuesta del huésped denominada inflamación. La inflamación es una respuesta protectora cuya intención es eliminar la causa inicial de la lesión celular, así como las células y los tejidos necróticos resultantes de la lesión original. La inflamación cumple su función protectora diluyendo, destruyendo o neutralizando los agentes perjudiciales (p. ej., microbios y 16
toxinas). A continuación, pone en marcha los acontecimientos que en último término curan y reparan los sitios de la lesión. Sin inflamación, las infecciones pasarían desapercibidas y las heridas nunca cicatrizarían. En el contexto de las infecciones, la inflamación forma parte de una respuesta protectora más amplia que los inmunólogos dominan inmunidad innata. ( 25) Aunque la inflamación ayuda eliminar las infecciones y otros estímulos nocivos y da comienzo a la reparación, la reacción inflamatoria y el posterior proceso reparador pueden causar un daño considerable. Los componentes de la reacción inflamatoria que destruyen y eliminan los microbios y los tejidos muertos son capaces de lesionar también los tejidos normales. Por consiguiente, la lesión puede acompañar a reacciones inflamatorias beneficiosas completamente normales y la patología puede incluso convertirse en la característica dominante si la reacción es muy intensa (p. ej., cuando la infección es grave), prolongada (p. ej., cuando el agente causal resiste la erradicación), o inapropiada (p. ej., cuando se dirige frente a autoantígenos en enfermedades autoinmunitarias, o a antígenos ambientales generalmente inocuos en transtornos alérgicos). Algunas de las enfermedades más desconcertantes en los humanos son transtornos en los que la base fisiopatológica es una inflamación inapropiada, con frecuencia crónica. Por ello, el proceso de la inflamación es fundamental en la práctica totalidad de la medicina clínica. ( 25) Las células y las moléculas de la defensa del huésped circulan normalmente en la sangre, y el objetivo de la reacción inflamatoria es llevarlas al sitio de la infección o del daño tisular. Varios tipos de células y moléculas desempeñan funciones importantes en la inflamación. Éstas comprenden los leucocitos de la sangre y las proteínas plasmáticas, células de las paredes vasculares y células y matriz extracelulares (MEC) del tejido conjuntivo circundante. ( 25) La inflamación puede ser aguda o crónica. La aguda tiene un comienzo rápido y corta duración, que va de pocos minutos a varios días, y se caracteriza por exudación de líquido y proteínas plasmáticas y acumulación predominantemente de leucocitos polimorfonucleares. La inflamación crónica puede ser más insidiosa, tiene una mayor duración (de días a años) y queda tripificada por el aflujo de linfocitos y macrófagos con proliferación vascular y fibrosis (cicatrización) acompañantes. Sin embargo, como se describe más adelante, estas formas básicas de inflamación pueden superponerse, y muchas variables modifican su curso y aspecto histológico. ( 25) Todas las reacciones inflamatorias agudas siguen una secuencia bastante estereotípica en la que los vasos sanguíneos y los leucocitos son los principales participantes. Cuando un huésped se encuentra con un agente lesivo (p. ej., un microbio) o células muertas, los fagocitos residentes en los t ejidos intentan eliminar estos agentes. Al mismo tiempo, los fagocitos y otras células del huésped reaccionan a la presencia de una sustancia extraña o anormal liberando varias moléculas de proteínas y lípidos que funcionan como mediadores químicos de la inflamación. También se producen mediadores a partir de las proteínas plasmáticas que reaccionan con los microbios o con los tejidos lesionados. Algunos de estos mediadores actúan sobre los pequeños vasos sanguíneos de la vecindad y promueven la salida de plasma y el reclutamiento de leucocitos circulantes en el sitio donde se localiza el agente causal. Los leucocitos reclutados son activados por el agente lesivo y por mediadores producidos localmente, y los leucocitos activados intentan eliminar el agente causal por fagocitosis. Un efecto secundario desafortunado de los leucocitos es que pueden dañar los tejidos normales del huésped. ( 25) Las manifestaciones externas de la inflamación, que con frecuencia se denominan sus signos cardinales, son consecuencias de cambios vasculares y del reclutamiento 17
celular: calor, rubor y tumor. Las dos características cardinales adicionales de la inflamación aguda, dolor y pérdida de la función (functio laesa), se producen como consecuencia de la elaboración de mediadores y del daño mediado por los leucocitos. Cuando se elimina el agente lesivo y los mecanismos antiinflamatorios se vuelven activos, el proceso remite y el huésped vuelve a un estado de salud normal. Si no se puede eliminar rápidamente el agente lesivo, el resultado puede ser una inflamación crónica. (25)
Los traumatismo (constusos y penetrantes) y los agentes físicos y químicos (lesión térmica, p. ej., quemaduras o congelación; radiación; algunas sustancias químicas ambientales) lesionan las células del huésped y desencadenan reacciones inflamatorias. La necrosis tisular (de cualquier causa), incluida la isquemia (como en el infarto de miocardio) y la lesión física y química. Cuerpos extraños (astillas, suciedad, suturas). Reacciones inmunitarias (también llamadas reacciones de hipersensibilidad) frente a sustancias ambientales o frente a los propios tejidos. Dado que estos estímulos para las respuestas inflamatorias no pueden eliminarse, tales reacciones tienden a ser persistentes, tiene con frecuencia características de inflamación crónica y son causas importantes de morbilidad y mortalidad. En ocasiones se emplea el término <> para referirse a este grupo de transtornos. ( 25)
Cada uno de estos estímulos puede inducir reacciones con algunas características distintivas, pero todas las reacciones inflamatorias tienen las mismas características básicas. Describimos, en primer lugar, las reacciones típicas de la inflamación aguda y sus características morfológicas y, a continuación, los mediadores químicos responsables de estas reacciones. ( 25)
Cambios Vasculares Cambios en el calibre y flujo vascular. Los cambios en los vasos sanguíneos comienzan rápidamente después de la infección o lesión pero pueden desarrollarse a velocidades variables, dependiendo de la naturaleza e intensidad del estímulo inflamatorio original. ( 25) Aumento de la permeabilidad vascular. En la fase inicial de la inflamación, la vasodilatación arteriolar y el aumento del flujo sanguíneo llevan a un aumento de la presión hidrostática intravascular, lo que da lugar al paso de líquido de los capilares a los tejidos. Este líquido, denominado trasudado, es esencialmente un ultrafiltrado de plasma sanguíneo y contiene pocas proteínas. Sin embargo, la trasudación se ve pronto eclipsada por un aumento de la permeabilidad vascular que permite el paso de líquido rico en proteínas e incluso de células (denominado exudado) al intersticio. La pérdida de líquido rico en proteínas al espacio perivascular reduce la presión osmótica intravascular y aumenta la presión osmótica del líquido intersticial. El resultado neto es una salida de agua e iones a los tejidos extravasculares. La acumulación de líquido en los espacios extravasculares recibe el nombre de edema; el líquido puede ser un trasudado o un exudado. Mientras que los exudados son típicos de la inflamación, los trasudados se acumulan en diversas afecciones no inflamatorias. ( 25) Respuestas de los vasos linfáticos. Gran parte del énfasis en la descripción de la inflamación se pone en las reacciones de los vasos sanguíneos, pero los linfáticos participan también en la respuesta. Como es bien sabido, la pequeña cantidad de líquido intersticial formado normalmente es eliminado por la circulación linfática. En la inflamación, el flujo linfático aumenta y ayuda a evacuar el líquido del edema del 18
espacio extravascular. Dado que las uniones de los vasos linfáticos son laxas, el líquido linfático se equilibra al final con el líquido extravascular. Además del líquido, los leucocitos y los restos celulares pueden encontrar su camino a la linfa. En las reacciones inflamatorias intensas, especialmente las causadas por microbios, los vasos linfáticos pueden transportar el agente causal; pueden llegar a inflamarse de modo secundario. ( 25)
Acontecimientos celulares: reclutamiento y activación de los leucocitos Tal como se ha descrito anteriormente, una función importante de la respuesta inflamatoria es liberar leucocitos en el sitio de lesión y activarlos. Los leucocitos ingieren los agentes causales, destruyen las bacterias y otros microbios, y eliminan el tejido necrótico y las sustancias extrañas. Un precio que se paga por la potencia ofensiva es que, una vez activado, pueden inducir daño tisular y prolongar la inflamación, ya que los productos de los leucocitos que destruyen los microbios pueden también lesionar los tejidos normales del huésped. Por consiguiente, la clave para la función normal de los leucocitos en la defensa del huésped es asegurarse de que sean reclutados y activados sólo cuando es necesario (es decir, en respuesta a invasores extraños y tejidos muertos). ( 25)
Reclutamiento de leucocitos La secuencia de acontecimientos en el reclutamiento de los leucocitos a partir de la luz vascular al espacio extravascular consta de: 1) marginación, adhesión al endotelio y rodamiento a lo largo de la pared vascular; 2) firme adhesión al endotelio; 3) Transmigración entre las células endoteliales y, 4) migración en los tejidos intersticiales hacia un estímulo quimiotáctico. El rodamiento, la adhesión y la transmigración están mediadas por la unión de moléculas de adhesión complementarias en los leucocitos y superficies endoteliales. Mediadores químicosquimioatractantes y ciertas citosinas- afectan a estos procesos modulando la expresión o avidez de superficie de las moléculas de adhesión y estimulando el movimiento direccional de los leucocitos. ( 25)
Activación de leucocitos Una vez que los leucocitos han sido reclutados en el sitio de infección o de necrosis tisular, deben activarse para llevar a cabo sus funciones. Los estímulos para la activación incluyen microbios, productos de las células necróticas y varios mediadores. Los leucocitos expresan sobre su superficie diferentes tipos de receptores que notan la presencia de microbios. Estos comprenden los receptores de tipo Toll (TLR, Toll-like receptors), así denominados por su hemología con la proteína Toll de Drosophila, que reconoce a la endotoxina (LPS) y otros muchos productos bacterianos y víricos; los receptores de siete proteínas G transmembrana, que reconocen ciertos péptidos bacterianos y mediadores producidos en respuesta a los microbios, y otras familias de receptores. El compromiso de estos receptores por los productos microbianos o por diversos mediadores de la inflamación induce numerosas respuestas en los leucocitos que son parte de sus funciones defensivas normales y se agrupan bajo el término genérico de activación leucocitaria. La activación leucocitaria da lugar al aumento de muchas funciones:
Fagocitosis de las partículas, una etapa inicial en la eliminación de las sustancias dañadas.
19
Producción de sustancias que destruyen los microbios fagocitados y eliminan los tejidos muertos; estos productos leucocitarios incluyen enzimas lisosómicas y especies reactivas del oxígeno y del nitrógeno. Producción de mediadores que amplifican la reacción inflamatoria, incluidos los metabolitos del ácido araquidónico y citosinas. ( 25)
Desenlaces de la inflamación aguda Aunque las consecuencias de la inflamación aguda se modifican por la naturaleza e intensidad de la lesión, el sitio y tejidos afectados, y la capacidad del huésped para organizar una respuesta, la inflamación aguda tiene, generalmente, uno de estos tres desenlaces:
Resolución. Cuando la lesión es limitada o de breve duración, no ha habido daño tisular o éste es mínimo, y cuando el tejido es capaz de sustituir cualquier célula lesionada de modo irreversible, el desenlace habitual es la restauración a una normalidad histológica y funcional. La terminación de la respuesta inflamatoria aguda implica la neutralización, descomposición o degradación enzimática de los diversos mediadores químicos, la normalización de la permeabilidad vascular y el cese de la migración leucocitaria con la posterior muerte (por apoptosis) de los neutrófilos extravasados. Además, los leucocitos comienzan a producir mediadores que inhiben la inflamación y limitan de este modo la reacción. En último término los esfuerzos combinados del drenaje linfático y de la ingestión por los macrófagos de los restos necróticos llevan a la eliminación del líquido de edema, células inflamatorias y detritus del campo de batalla. (25) La progresión a la inflamación crónica puede seguir a la inflamación aguda si no se elimina el agente causal. En algunos casos, puede haber signos de inflamación crónica al comienzo de la lesión (p. ej.; en la infecciones víricas o en las respuestas inmunitarias a los autoantígenos). Según la extensión y continuación de la lesión tisular inicial, así como la capacidad de los tejidos afectados para volver a crecer, la inflamación crónica puede seguirse del restablecimiento de la estructura y función normales o puede llevar a cicatrización. (25) La cicatrización o fibrosis es la consecuencia de una destrucción tisular sustancial o cuando se produce la inflamación en tejidos que no se regeneran. Además, los exudados fibrinosos intensos (debidos al aumento de la permeabilidad vascular) pueden no ser absorbidos completamente y son organizados por crecimiento del tejido conjuntivo, con fibrosis resultantes. Pueden formarse abscesos en el marco de unos infiltrados de neutrófilos extensos o en ciertas infecciones bacterianas o fúngicas (se dice entonces que estos organismos son piogénicos o <>). Dada la destrucción tisular de base (incluido el daño en la MEC), el desenlace habitual de la formación de abscesos es la cicatrización. ( 25)
MEDIADORES QUÍMICOS DE LA INFLAMACIÓN Una vez descritos los acontecimientos vasculares y celulares en la inflamación aguda, y las alteraciones morfológicas acompañantes, describimos a continuación los mediadores químicos responsables de estos acontecimientos. Se conocen muchos mediadores y se ha utilizado este conocimiento para designar un gran arsenal de fármacos antiinflamatorios, que son prominentes en las estanterías de las farmacias. (25)
20
Los mediadores pueden ser producidos localmente por células en el sitio de la inflamación, o pueden estar circulando en el plasma (habitualmente sintetizados por el hígado) como precursores inactivos que se activan en el sitio de la inflamación. Los mediadores derivados de la célula se hallan secuestrados normalmente en gránulos intracelulares y son secretados rápidamente con la activación celular (p. ej.; la histamina en las células cebadas) o se sintetizan de novo en respuesta a un estímulo (p. ej.; prostaglandinas y citocinas). Los mediadores derivados de las proteínas del plasma (proteínas del complemento, cininas) sufren habitualmente una escisión proteolítica para adquirir sus actividades biológicas. ( 25) La mayoría de los mediadores inducen sus efectos al unirse a receptores específicos en las células diana. Los mediadores pueden actuar sólo sobre una o muy pocas dianas, o tener acciones muy generalizadas, con desenlaces diferentes según el tipo de célula afectada. Algunos mediadores tiene actividades enzimáticas directas, tóxicas o de ambos tipos (p. ej.; proteasas lisosómica y ROS). ( 25) Los mediadores pueden estimular las células dianas para liberar moléculas efectoras secundarias. Diferentes mediadores pueden tener acciones similares y en este caso pueden ampliar una respuesta particular o pueden tener efectos opuestos, sirviendo de este modo para controlar la r espuesta.( 25) Las acciones de la mayoría de mediadores se hallan reguladas de modo muy ajustado. Una vez activados y liberados de la célula, los mediadores se descomponen rápidamente (p. ej.; metabolitos del ácido araquidónico), se inactivan por enzimas (p. ej.; la cininasa inactivada la bradicinina), son eliminados. (25)
Inflamación crónica La inflamación crónica es una inflamación de duración prolongada (de semanas a meses y años) en la que la inflamación activa, la lesión tisular y la cicatrización se suceden simultáneamente. En contraste con la inflamación aguda, que se distingue por los cambios vasculares, edema y un infiltrado predominantemente de neutrófilos, la inflamación crónica se caracteriza por:
Infiltración con células mononucleares, incluidos macrófagos, linfocitos y células plasmáticas. Destrucción tisular, en gran medida inducida por los productos de las células inflamatorias. Reparación, que implica la proliferación de nuevos vasos (angiogénesis) y fibrosis. (25)
La inflamación aguda puede progresar a inflamación crónica. Esta transición se produce cuando no puede resolverse la respuesta aguda, ya sea por la persistencia del agente lesivo o por interferencia con el proceso de cicatrización normal. Por ejemplo, una úlcera péptica del duodeno muestra inicialmente inflamación aguda seguida por el comienzo de los estadios de resolución. Sin embargo, los brotes recurrentes de lesión del epitelio duodenal interrumpen este proceso y dan lugar a una lesión caracterizada por inflamación aguda y crónica. Otra posibilidad es que algunas formas de lesión (p. ej.; infecciones víricas) den lugar a una respuesta que implica una inflamación crónica desde el comienzo. ( 25) La inflamación crónica surge en las siguientes situaciones:
21
Infecciones persistentes por microbios difíciles de erradicar como micobacterias y ciertos virus y hongos. Enfermedades inflamatorias de medicación inmunitaria (enfermedades por hipersensibilidad). ( 25)
Células inflamatorias Macrófagos Linfocitos Células plasmáticas Eosinófilos Células cebadas (25)
Inflamación granulomatosa La inflamación granulomatosa es un patrón distintivo de la inflamación crónica caracterizado por agregados de macrófagos activados que adoptan un aspecto epitelioide. Los granulomas se encuentran en ciertos estados patológicos específicos; en consecuencia, el reconocimiento del patrón granulomatoso es importante por el número limitado de afecciones (algunas potencialmente mortales) que lo causan. Los granulomas se pueden formar en el marco de respuesta de células T persistentes a ciertos microbios (como Mycobacterium tuberculosis, T. pallidun u hongos), donde las citocinas derivadas de las células T son responsables de la activación crónica de los macrófagos. La tuberculosis es el prototipo de enfermedad granulomatosa causada por infección y debe ser siempre excluida como causa cuando se identifiquen granulomas. También se pueden desarrollar granulomas en respuesta a cuerpos extraños relativamente inertes (p. ej.; sutura o astilla), formándose los denominados granulomas de cuerpo extraño. La formación de un granuloma <> de modo efectivo al agente causal y es, por tanto, un mecanismo de defensa útil. Sin embargo, la formación de un granuloma no siempre lleva a la erradicación del agente causal, que con frecuencia es resistente a la destrucción o degradación, y la inflamación granulomatosa con la posterior fibrosis puede incluso ser la principal causa de disfunción del órgano en algunas enfermedades como la tuberculosis. (25)
EFECTOS SISTÉMICOS DE LA INFLAMACIÓN Cualquiera que haya sufrido un brote intenso de una enfermedad vírica (como la gripe) ha experimentado los efectos sistémicos de la inflamación, denominados colectivamente reacción de fase aguda, o síndrome de respuesta inflamatoria sistémica. Las citosinas TNF, IL-1 e IL-6 son los mediadores más importantes de la reacción de fase aguda. Estas citosinas son producidas por los leucocitos (y otros tipos celulares) en respuesta a la infección o en reacciones inmunitarias y son liberadas sistémicamente. Con frecuencia, el TNF induce la producción de IL-1, que a su vez estimula la producción de IL-6, formando una cascada de citocinas. El TNF y la IL-1 tienen acciones biológicas similares, aunque estas pueden diferir de modos sutiles. La IL-6 estimula la síntesis hepática de numerosas proteínas plasmáticas, descritas más adelante. ( 25) La respuesta de fase aguda consta de varios cambios clínicos y patológicos.
Fiebre, caracterizada por una elevación de la temperatura corporal, generalmente de 1 a 4 °C. Es una de las manifestaciones más prominentes de 22
la respuesta de fase agua, especialmente cuando la inflamación está causada por infección. La fiebre se produce en respuesta a sustancias denominadas pirógenos que actúan estimulando la síntesis de PG en las células vasculares y perivasculares del hipotálamo. Los productos bacterianos, como los lipopolisacáridos (LPS, denominados pirógenos exógenos) estimulan los leucocitos para que liberen citosinas como IL-1 y TNF (denominados pirógenos endógenos) que aumentan los niveles de ciclooxigenasa que convierte el AA en prostaglandinas. En el hipotálamo, las PG, especialmente las prostaglandinas E 2 (PGE2), estimulan la producción de neurotransmisores, que funcionan para readaptar el ajuste de temperatura a un nivel más alto. Los AINEs, incluido el ácido acetilsalicílico, reducen la fiebre al inhibir la ciclooxigenasa y bloquear la síntesis de PG. Se ha demostrado que una temperatura corporal elevada ayuda a los anfibios a defenderse de infecciones microbianas, y se supone que la fiebre hace lo mismo en los mamíferos, aunque se desconoce su mecanismo. ( 25) Concentraciones plasmáticas elevadas de las proteínas de fase aguda, que son proteínas plasmáticas, sintetizadas principalmente en el hígado, cuyas concentraciones pueden aumentar varios cientos de veces como parte de la respuesta a los estímulos inflamatorios. Tres de las proteínas mejor conocidas son la proteína C reactiva (PCR), el fibrinógeno y la proteína Amiloide A sérica (SAA). La síntesis de estas moléculas está aumentada por los hepatocitos por la regulación de citocinas, especialmente la IL-6. Muchas de las proteínas de fase aguda, como PCR y SAA, se unen a las paredes de las células microbianas y pueden actuar como opsoninas y fijar complemento, promoviendo así la eliminación de los microbios. El fibrinógeno se une a los hematíes haciendo que formen pilas (rouleaux) que sedimentan más rápidamente por unidad de gravedad que los hematíes tomados individualmente. Esta es la base para determinar la velocidad de sedimentación globular (VSG) como prueba sencilla para la respuesta inflamatoria sistémica causada por cualquier tipo de estímulo, incluyendo el LPS. En la actualidad, se utilizan las concentraciones séricas elevadas de la PCR como marcador de mayor riesgo de infarto de miocardio o de accidente cerebrovascular en los pacientes con vasculopatía aterosclerótica. Se cree que la inflamación está implicada en el desarrollo de la aterosclerosis y una PCR aumentada es una medida de inflamación. ( 25) La leucocitosis es una característica frecuente de las reacciones inflamatorias, especialmente de las inducidas por infecciones bacterianas. El recuento leucocitario suele elevarse a 15000 o 20000 células/µl, pero en ocasiones puede alcanzar cifras extraordinariamente elevadas, hasta de 40000 e incluso 100000 células/µl. Estas extremas elevaciones reciben la denominación de reacciones leucemoides porque son similares a los recuentos celulares obtenidos en la leucemia. La leucocitosis se produce inicialmente por una liberación acelerada de células a partir de la reserva posmitótica de la médula ósea (causada por citosinas, incluidos el TNF y la IL-1) y se asocia, por consiguiente, con una elevación del número de neutrófilos más inmaduros en la sangre (desviación a la izquierda). La infección prolongada estimula también la producción de los factores estimulantes de colonias (CSF, colony-stimulating factors), que aumentan la producción de leucocitos por la médula ósea, lo que compensa la pérdida de estas células en la reacción inflamatoria. La mayoría de las infecciones bacterianas inducen un aumento en el recuento de neutrófilos, denominado neutrofilia. Las infecciones víricas, como la mononucleosis infecciosa, la parotiditis y la rubéola, se asocian con un aumento del número de linfocitos (linfocitosis). El asma bronquial, la fiebre del heno y las infestaciones por parásitos implican un aumento en la cifra absoluta de eosinófilos, produciéndose eosinofilia. Ciertas infecciones (fiebre tifoidea e 23
infecciones causadas por algunos virus, rickettsias y ciertos protozoos) se asocian paradójicamente con un menor número de leucocitos circulantes (leucopenia), probablemente debido a un secuestro inducido por citocinas de los linfocitos en los ganglios linfáticos. ( 25) Otras manifestaciones de la respuesta de la fase aguda incluyen aumento de la frecuencia cardíaca y de la presión arterial; disminución de la sudación, principalmente por redirección del flujo de sangre del lecho cutáneo al vascular para reducir al mínimo la pérdida de calor por la piel; y escalofríos (temblores), enfriamiento (percepción de tener frío porque el hipotálamo reajusta la temperatura corporal), anorexia, somnolencia y malestar, probablemente por la acción de las citocinas sobre las células cerebrales. La inflamación crónica se asocia con un síndrome de emaciación denominado caquexia, que es principalmente el resultado de la supresión el apetito mediada por el TNF y la movilización de los depósitos de grasa. ( 25) En las infecciones bacterianas graves (sepsis), las grandes cantidades de organismos y de LPS en la sangre o en el tejido extravascular estimulan la producción de enormes cantidades de varias citosinas, sobre todo TNF, así como IL-12 e IL-1. Como consecuencia, los niveles circulantes de estás aumentan y la naturaleza de la respuesta del huésped cambia. Unos niveles elevados de TNF causan coagulación intravascular desaminada (CID), hipoglucemia y shock por hipotensión. Esta triada clínica se describe como shock séptico, la reparación comienza casi tan pronto como se inician los cambios inflamatorios e implica varios procesos, incluidos la proliferación y diferenciación celular y el depósito de la MEC. ( 25)
REPARACIÓN DE LA INFLAMACIÓN Un aspecto crítico para la supervivencia de un organismo es la capacidad para reparar el daño causado por las lesiones tóxicas y la inflamación. La respuesta inflamatoria a los microbios y tejidos lesionados no sólo sirve para eliminar estos peligros sino que también pone en marcha el proceso de reparación. El término <> hace referencia al restablecimiento de la arquitectura y funciones tisulares después de una lesión. Se produce por dos tipos de reacciones. Algunos tejidos son capaces de reemplazar los componentes dañados y esencialmente retornar a un estado normal; este proceso recibe la denominación de <>. Si los tejidos lesionados son incapaces de un restablecimiento completo, o si las estructuras de soporte del tejido han resultado seriamente dañadas, la reparación se produce depositando tejido conjuntivo (fibroso), proceso denominado <>, que da lugar a la <>. Aunque la cicatriz fibrosa no es normal, proporciona la suficiente estabilidad estructural para que el tejido lesionado suela ser capaz de funcionar. Después de varios tipos de lesión, tanto la regeneración como la formación de cicatriz contribuyen en diversos grados a la reparación a largo plazo. El término <> se utiliza muy comúnmente para describir el extenso depósito de colágeno que se produce en los pulmones, hígado, riñón y otros órganos como consecuencia de inflamación crónica, o en el miocardio después de necrosis isquémica (infarto). Si se desarrolla fibrosis en un espacio tisular ocupado por un exudado inflamatorio, se denomina <> (como en la neumonía organizada que afecta al pulmón). ( 25) La reparación implica la proliferación de varias células y unas interacciones estrechas entre las células y la matriz extracelular (MEC). Por lo tanto, la comprensión del proceso de reparación requiere un cierto conocimiento del control de la proliferación celular y de las funciones de la MEC. ( 25)
24
5.3. Hipótesis El gel elaborado de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich (PACRA PACRA) tendrá efecto antiinflamatorio al ser administrado en ratas.
6. Metodología. 6.1. El tipo de investigación Experimental
6.2. Nivel de la investigación de las tesis. Cuantitativo
6.3. Diseño de la investigación. El presente estudio desarrollará los siguientes procedimientos que se seguirán para resolver nuestra pregunta de investigación:
6.3.1 Obtención del extracto hidroalcohólico Método por percolación: Se mezclará cuidadosamente la droga molida con suficiente cantidad de alcohol de 70° a fin de que quede uniforme y apreciablemente humedecida, déjese en reposo durante 15 minutos transfiérase a un percolador apropiado comprimiremos la droga firmemente. Verteremos suficiente cantidad del menstruo de alcohol de 70° para saturar la droga se tapará la boca del percolador y cuando el líquido esté a punto de gotear, cerraremos el orificio inferior del percolador y dejaremos macerar la droga por espacio de 24 horas.
25
6.3.2 Tamizaje Fitoquímico
Se procederá de acuerdo al siguiente esquema: 30 – 50 g de droga cruda Extraeremos con 90 – 150 mL cloroformo Por maceración durante 48 horas a temperatura ambiente Filtraremos
Extracto clorofórmico Mediremos y calcularemos la concentración
Residuo solido Pesaremos y secaremos
Extraeremos con 3 veces el peso del residuo en volumen con etanol por Maceración durante 48 horas a temperatura ambiente Filtrar
Extracto alcohólico Mediremos y calcularemos la concentración
Residuo solido Pesaremos y secaremos
Extraeremos con 3 veces el peso del residuo en volumen con agua por Maceración durante 48 horas a temperatura ambiente Filtraremos
Extracto acuoso Mediremos y calcularemos la concentración
Residuo solido Pesaremos y secaremos
26
6.3.3 Diseño y formulación de un gel Para la preparación de un lote de un litro de gel antiinflamatorio al 1% partimos de la siguiente formula: INGREDIENTES
CANTIDADES
Carbopol NF MPB (Metilparabeno sódico) NF PPB (Propilparabeno sódico) NF TEA (trietanolamina) Agua Extracto fluido de la flor de PACRA PACRA
15 g 0,100g 0,010g 20 g 960 mL 7g
Proceso de preparación del gel: 1. Se prepara una suspensión coloidal de Carbopol 940 en agua desionizada. 2. Disolver en agua el metilparabeno base y propilparabeno base. 3. Agregar el Carbopol 940 con agitación constante, Agitar hasta homogenización, dejar en reposo 24 horas para lograr una buena hidratación. 4. Mezclar con el extracto y finalmente se neutraliza con trietanolamina, homogeneizando hasta que adquiera características de gel. 5. Envasar y etiquetar.
6.3.4 Control de calidad del gel El control de calidad del producto terminado tiene como propósito determinar si una forma farmacéutica posee los atributos de calidad previamente establecidos. Estos atributos buscan poder conseguir en último término que el medicamento cumpla el objetivo para el cual fue diseñado de manera segura y eficaz.
1. Determinación Organoléptica Del Gel A la tintura se procede a analizar el aspecto, color, olor, sabor.
a.) Aspecto: Es un gel homogéneo al tacto, libre de grumos, al ser analizada mediante visualización directa. b.) Color: amarillo que se determina por el tinte que presenta el gel. c.) Olor: Característico a la planta. 2. Determinación de la presencia de grumos en el gel Tomar una pequeña cantidad con los dedos y aplicar suavemente en el dorso de la mano y observar si hay la presencia o ausencia de grumos.
27
3. Determinación de untuosidad al tacto del gel Tomamos una pequeña cantidad del gel con los dedos y aplicamos suavemente en el dorso de la mano y observamos si hay la presencia de partículas.
4. Determinación del pH Se mide en el medidor del pH previamente calibrado con soluciones de pH 4 y 7. Sacar el electrodo del lampón lavar con agua destilada y secar con papel filtro. En otro vaso se coloca la muestra (gel) e introducir el electrodo limpio homogenizar y determinar el pH. Anotar los resultados.
5. Determinación de la Extensibilidad del gel Bajo la denominación de extensión o extensibilidad de un gel se entiende su capacidad para ser aplicado y distribuido uniformemente sobre la piel. Se pesa 0,23±0,02 g de muestra a 25°C se presiona entre dos superficies de vidrio sobre las cual se adiciona una pesa de 100 g durante 1 minuto. El área originada es la variable respuesta (Extb.)
6. Determinación de la viscosidad del gel Tomamos una muestra representativa del gel e introducimos en el viscosímetro, sometemos a la acción de la temperatura del baño maría a 25°C y tomar el tiempo desde el punto de partida hasta la señal indicada en el viscosímetro.
6.3.5 Actividad antiinflamatoria del extracto de la flor de PACRA PACRA (Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich) en Rattus rattus
6.3.5.1. Edema de la pata inducida por carragenina El método del edema plantar por carragenina fue descrito por primera vez por Winter et al. y posteriormente modificado por Sughisita et al. (1981). Consiste en la administración subcutánea de una pseudosolución de λ – carragenina, un mucopolisacárido surfatado extraído del alga marina Chondrus crispus, a nivel de la aponeurosis plantar de la pata de la rata, provocando una reacción de carácter inflamatorio mediada por liberación de diversos autacoides (histamina, serotonina, bradiquinina, prostaglandinas, etc.) el producto a ensayar se puede administrar por diferentes vías intraperitonial, oral. 28
Una hora después de la administración, la histamina y la serotonina tienen un papel principal como mediadores. Aproximadamente de una hora y media a dos y media horas después de la inyección de carragenina, intervienen las kininas como mediadores. La última fase está mediada por las prostaglandinas, fundamentalmente PGE1, PGE2 y PGF3. La respuesta vascular máxima ocurre aproximadamente a las 4 horas de la administración de carragenina y coincide con la fase mediada por las prostaglandinas. La extravasación de proteína tiene lugar durante toda la respuesta al agente adematógeno. Respecto a la migración celular fundamentalmente de leucocitos polimorfonucleares, comienza a dos horas de haber inyectado el agente. Hay que estandarizar el ensayo: hora, temperatura, etc. Se prefiere la carragenina ante otros irritantes porque el edema que se produce esta menos modificado por factores ajenos a los propiamente característicos de la inflamación y además porque la actividad antiinflamatoria de este test guarda una buena correlación con la actividad antiinflamatoria en clínica. a. Protocolo experimental en ratas Animales de experimentación. Se utilizan lotes de 4 ratas Holtzman de sexo homogéneo, aproximadamente de 140 – 170 g de peso en ayunas de 12 horas. Descripción de la técnica. Se miden los volúmenes normales de la pata derecha posterior de las 4 ratas en un pletismómetro digital. Las infusiones a ensayar se administran en dosis de 1000mg/Kg de peso mientras que para los extractos se utilizan dosis equivalentes de materia seca vegetal. La administración se hace por vía oral, empleando jeringas de 1mL con agua adaptadas para ser usadas como sonda orogástrica. El vehículo utilizado es agua o disolvente usado para hacer los extractos. El grupo control recibe solamente el vehículo y otro grupo una dosis del agente antiinflamatorio previamente estandarizada para cada condición particular (generalmente 120mg/Kg de ibuprofeno). Media hora después de la administración de la infusión o extracto, se inyecta 0,1 mL de una disolución acuosa al 1% de carragenina en la aponeurosis plantar derecha de las ratas. La medida del volumen de la pata derecha inflamada se realiza por inmersión en el agua que contiene el pocillo del plestismómetro hasta el maléolo lateral. Esta medición se realiza 1, 4 y 14 horas después del inicio del experimento. Por diferencia entre los volúmenes de las patas mediadas antes de la producción de la inflamación y a los tiempos 1, 4 y 14 y se calcula el porcentaje de la inflamación producido, con la siguiente fórmula: −
%inflamación=
x 100
Siendo: Vt = Volumen de la pata inflamada a un tiempo X Vo = Volumen normal 29
Se determina el porcentaje de la inflamación para cada rata y se calcula el área bajo la curva de la inflamación y por análisis de varianza se determina si hubo efecto significativo entre los grupos tratados y el control. Los compuestos evaluados fueron extracto hidroalcohólico de la flor de PACRA PACRA, diclofenaco sódico de 100mg, como control positivo y alcohol al 40% que se utilizó en todos los casos como vehículo. Se utilizarán 12 ratas Holtzman machos de 340 – 472 g de masa corporal, las cuales serán seleccionadas aleatoriamente en grupos de 3, según la dosis de ensayo matendiendo al tratamiento utilizado quedó el esquema de ensayo de la forma siguiente:
T0
REPETICIONES
I II III
R1 R5 R9
T1 R2 R6 R10
T2 R3 R7 R11
T3 R4 R8 R12
La dosis utilizada de los extractos será de 1000mg/Kg peso corporal de los animales Donde: T0 = Banco Etanol 40% T1 = Diclofenaco 10mg/Kg T2 = Diclofenaco 30mg/Kg T3 = Extracto PACRA PACRA
6.3.5.2 Actividad antiinflamatoria del producto terminado a base de PACRA PACRA (Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich) en Rattus rattus
T0
REPETICIONES
I II III
R1 R2 R3
T1 R4 R5 R6
T2 R7 R8 R9
Donde: T0 = Banco T1 = Diclofenaco 1% T2 = Gel de Extracto PACRA PACRA La dosis utilizada del gel será de 1g para todas las ratas. 30
6.4. El universo y muestra. Población vegetal: conjunto de flores de PACRA PACRA (Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich). La materia prima será recogida en el distrito de Conchucos, provincia de Pallasca, departamento de Ancash. Población animal: 15 ratas Holtzman de ambos sexos, obtenidas del instituto nacional de salud
6.5. Definición y operacionalización de variables Variable Definición conceptual
Definición operacional
Indicador
independiente gel de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich (PACRA PACRA)
Habitualmente
En
la
preparación
de
transparente, uniformes, intervienen
el
fácilmente
seleccionado
que
deformados, gelificante
constan
mínimo
de
como concentración
agua,
hidrogel DOSIS: 0,1g al 1%
el
agente a
conveniente
la para
dos obtener la consistencia adecuada;
componentes. De éstos, además, se requiere la adición de una uno es líquido y actúa
sustancia
higroscópica
como
la
como agente dispersante glicerina, el propilenglicol o el sorbitol y el otro, un componente que impida la desecación rápida una generador de estructura, vez que la preparación se aplica habitualmente
una sobre la piel.
materia coloidal sólida
Variable Definición conceptual
Definición operacional
Indicador
dependiente
Efecto Antiinflamatorio de las flores de Laccopetalum giganteum
Acción de inhibir o Administración previa del gel a Inflamación pedal y reducir la inflamación evaluar y la determinación del los valores de proteína C reactiva tras la administración porcentaje de inhibición de la (PCR). de una sustancia inflamación mediante la medida coloidal.
del diámetro del volumen de la pata derecha inflamada.
(weddel) ulbrich (PACRA PACRA)
31
6.6. Técnicas e instrumentos de recolección de datos 1. Aclimatación mínimo dos días en jaulas metálicas con viruta de madera, en condiciones estándares iluminación y temperatura para eliminar el efecto del estrés, con alimentos y agua a libertad. Se pueden utilizar otras cepas de ratas. 2. Se utilizarán ratas machos cepa Holtzman con un peso promedio (210±10 g), las cuales serán aleatorizadas, pesadas y marcadas, para formar grupos de cuatro animales cada uno como indica el siguiente diseño. Grupos
Tratamientos
Dosis
1
Solución suero fisiológico
4mL/Kg
2
Carragenina + Diclofenaco 1%
2 a 4g
3
Carragenina + Producto a evaluar
Dosis 1
3. Se administrarán los extractos a dosis diferentes y solución control de Tween 80 al 1% y otro grupos una dosis del agente antiinflamatorio previamente y los estándares farmacológicos de diclofenaco 1% a dosis de 2 a 4g.
4. Media hora después de la administración de las soluciones, inyectará 0,1 ml de una disolución acuosa al 1% de carragenina la aponeurosis plantar derecha de las ratas. 5. La medida del diámetro del volumen de la pata derecha inflamada se realizará por medición directa con un micrómetro digital en la zona plantar. Esta medición se realizará 1 h, 4 h y 14 horas después del inicio del experimento. 6. Por diferencia entre diámetros de las patas medidas antes de la inflamación y a los tiempos 1 h, 4h y 14 horas se calculará el porcentaje de inflamación producido. 7. Se tomará como indicador: inflamación pedal y los valores de proteína C reactiva (PCR). 8. La unidad de medida: Volumen de inflamación pedal en mililitros (mL) o en milímetros (mm). 9. Los datos serán agrupados y presentados en una ficha de registro de datos.
32
6.7. Plan de análisis. Para el análisis estadístico, los datos serán agrupados y presentados en tablas, expresándose valores medios ± error estándar, en un intervalo de confianza del 95%, porcentajes de eficacia, figuras que explican mejor los hallazgos. Se tendrá en cuenta una p<0,05 para considerar significativos los hallazgos. Se aplicará un análisis de varianza para establecer la significancia estadística del tratamiento.
33
6.8. Matriz de consistencia
TÍTULO DE LA
FORMULACIÓN
INVESTIGACIÓN
DEL PROBLEMA
OBJETIVOS:
HIPOTESIS
VARIABLE
TIPO DE
DISEÑO DE
INVESTIGACIÓN
INVESTIGACIÓN
POBLACI ÓN Y MUESTR A
Variable
Objetivo general:
Efecto antiinflamatorio de un gel elaborado a base de la flor de PACRA
PACRA
(Laccopetalum giganteum
(weddel) ulbrich)
Determinar el efecto antiinflamatorio de un gel elaborado a base de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ¿Tendrá el gel en ratas Rattus rattus elaborado a base de las Objetivos específicos: flores de Laccopetalum Identificar los metabolitos giganteum secundarios presentes en el extracto (weddel) de las flores de Laccopetalum ulbrich giganteum (weddel). (PACRA PACRA) efecto - Elaborar un gel a base de las flores antiinflamatorio de Laccopetalum giganteum (weddel). en ratas Rattus rattus?
-Obtención del extracto hidroalcohólico
independiente:
El gel elaborado de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich (PACRA PACRA) tendrá efecto antiinflamatorio al ser administrado en ratas
Gel de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich (PACRA PACRA)
-Identificación de metabolitos secundarios
Variable dependiente: EXPERIMENTAL
Efecto Antiinflamatorio de las flores de Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich (PACRA PACRA)
-Diseño y formulación de un gel -Actividad antiinflamatoria del extracto de la flor de PACRA PACRA (Laccopetalum giganteum (weddel) ulbrich) en Rattus
Ratas Holtzman
rattus
34
6.9. Principios éticos Se tomarán en cuenta las consideraciones éticas de una investigación en la que se experimenta con animales. En cada ensayo se utilizará el mínimo número de animales posible que garantice resultados estadísticamente fiables. Los animales estarán en jaulas y recintos apropiados, en espacios con condiciones ambientales estandarizadas y controladas.
7. Referencias bibliográficas: 1. Silva, D.H. et al. Plantas medicinales de la Amazonía Peruana Lima: IPSSIMET pp. 256. 1995. 2. La Familia Cristiana [Sede Web]. México: Ediciones Paulinas, S.A.; 2014 [acceso 16 de junio del 2016]. De Calzada Bermelo F. La automedicación ¡un riesgo a la salud!. Disponible en: http://www.lafamiliacristiana.com.mx/lfc/index.php?option=com_k2&view=item&Itemid= 66&id=968 3. Stites, D.; P. Inmunología Humana y Básica. 1ra Edición. El Manual Moderno S.A. pp. 205-255. 1994. 4. Marquis D. Noticias de salud natural: Como la inflamación afecta cada aspecto de su salud [Internet]. 2015 [citado 05 Jun 2016]. Disponible en: http://articulos.mercola.com/sitios/articulos/archivo/2015/04/25/la-inflamaciondesencadena-sintomas-de-enfermedades.aspx 5. Jurado B, Barreda A, Martínez J, Ráez E, Moral G, Arroyo Acevedo J L, Palomino C, El extracto etanólico de las flores de Laccopetalum giganteum (pacra-pacra) aumenta la fertilidad en ratas. Anales de la Facultad de Medicina 200768238-243. Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=37968304.Fecha de consulta: 15 de junio de 2016. 6. Crispín Pérez V. Efecto antiinflamatorio y cicatrizante del extracto liofilizado de Aloe Vera (Aloe Vera (L) burm. f.) presentado en forma de gel farmacéutico. [Tesis de magister]. Lima: Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2012. 7. Rubio Taipe P. Diseño y elaboración de un lipo gel antiinflamatorio de Bacharis teindalensis Kunt. (CHILCA). [Tesis de grado]. Quito: Facultad de Ciencias Químicas, Carrera de Química Farmacéutica, Universidad Central del Ecuador; 2016. 8. Aragadvay Yungán S. Elaboración y control de calidad de tintura y gel cicatrizante y antiinflamatorio a base de Chilca (bacharis latifolia) y Hierbamora (solanum nigrum). [Tesis de grado]. Riobamba: Facultad de Ciencias, Escuela de Farmacia y Bioquímica, Escuela Superior Politécnica de Chimborazo; 2009. 9. Vargas Carbajal C. Estudio de la actividad cicatrizante y antiinflamatoria del extracto alcohólico de las hojas de Senna reticulata (Willd.) H. Irwin & Barneby (“Retama”). 35
[Tesis de magister]. Lima: Escuela de Post-grado, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2007. 10. Herrera Gómez V. Medición del efecto antiinflamatorio del gel de manzanilla (Matricaria recutita) en niños con inflamación de la encía en la zona de erupción de la dentición primaria, comprendidos entre las edades de 6 meses a 2 años, de la casa No. 1 de la Sociedad Protectora del Niño de la Ciudad de Guatemala, en el mes de setiembre del año 2001. [Tesis de grado]. Guatemala: El Tribunal de la Facultad de Odontología, Universidad de San Carlos de Guatemala; 2002 11. Cronquist A. The evolution and classification of flowering plants. New York: The New York Botanical Garden; 1988. p. 555. 12. ABIS. 2006. Andean Botanical Information System. http://www.sacha.org/ Macbride, 1937. Flora of Peru. Bot. Ser. Field Museum of Natural History. Vol. 13 part 2(2): 660-661. 13. Laccopetalum giganteum (Wedd.) Ulbr., Bot. Jahrb. Syst. 37: 404. 1906. Ranunculus giganteus Wedd., Chloris Andina 2: 30. 1857-62. Tipo: Perú. Raimondi 1861 (P). 14. Palacios, J. 1993. Plantas medicinales Nativas del Perú I. Concejo Nacional de Ciencia y Tecnología, CONCYTEC, Lima-Perú. 15. Pera, J., E. Alvítez; N. Melgarejo & W. Aguilar. 2004. Flora altoandina del Distrito de Conchucos, Prov. Pallasca, Dpto. Ancash, Perú con énfasis en Laccopetalum giganteum (Wedd) Ulbrich (Ranunculaceae). Libro de Resumenes del X Congreso Nacional de Botanica, Trujillo, Perú. pág. 146. 16. Soukup, J. 1970. Vocabulario de los Nombres Vulgares de la Flora Peruana. Edit. Salesiana S.A. Lima, Perú. 17. Weberbauer, H. 1945. El Mundo Vegetal de los Andes Peruanos. Estudio Fitogeográfico. Edit. Lumen. Ministerio de Agricultura. Lima. 18. CÁCERES, A. Plantas de Uso Medicinal en Guatemala. Guatemala: Universitaria 1996. pp. 5, 43,110 19. CALVOPIÑA, E. BARRIGAS, W. Manual de Buenas Prácticas de Manufactura BPM para los Trabajadores de la Industria Farmacéutica. Quito: 1999. pp. 55,77, 105, 201. 20. CANDO, M Comparación del Efecto Cicatrizante de Geles Elaborados a Base de Propóleo y Caléndula en Heridas de Conejos. Tesis. Dr. Bioquímica y Farmacia. Riobamba. Escuela Superior Politécnica del Chimborazo. Facultad de Ciencias. Escuela de Bioquímica y Farmacia, 2006. pp. 50-70. 21. FREIRÉ, H. Química General. Quito: 2da Edición. pp. 18,40. 22. Arias J, Aller M, Fernández E, Arias J, Lorente L. Propedéutica quirúrgica [Internet]. 1ra ed. Madrid: Editorial Tébar; 2004 [citado 5 jun 2016]. Disponible en:
36
