UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICO IOLÓGICAS Y Y FARMACÉUTICAS BIOLÓGICAS INMUNOLOGÍA 6o “B “B””
PROBLEMARIO RESPUESTA ANTÍGENO - ANTICUERPO DOCENTE: DR. JOSÉ FRANCISCO ZAMBRANO ZARAGOZA.
ALUMNOS: VARGAS SOLÍS JORGE ALBERTO. GUADARRAMA DELGADILLO LUIS CARLOS.
INSTRUCCIONES: Resuelva caa u!" e l"s s#$u#e!%es &'"(le)as* e! e+u#&"s e "s &e's"!as. ,a'a l"s %e-%"s u%#l#ce le%'a a'#al e / &u!%"s* es&ac#a" se!c#ll"* %e-%" 0us%#1#ca". Las $'21#cas* #(u0"s* as3 c")" l"s 'esul%a"s e 'e$'es#4! 5"!e se 'e+u#e'a6 e(e'2! se' #!se'%a"s c")" #)a$e!.
1. La !"#$%!"a &! '%a"(o )(a'o *A+ B+ C , D- &! 'o/%0a&o &! a2"!o3 a'a((!a&o( &! 2!(&#!(o a''#&!"a45!"!. S# !5a(0o+ ! a7a $%! 'a&a )(a'o 'o"!7a 1- a2"!o 13a'a((!a&o( 1 *13A1-+ 8- a2"!o 13 a'a((!a&o( 8 *13A8-+ 9- a2"!o 8 a'a((!a&o( 1 *83A1- , ;- a2"!o 8 a'a((!a&o( 8 *83A8-. E4 a'a((!a&o( 1 "#!! % 2!o 5o4!'%4a( &! 6<+<<< &a4"o! , !4 a'a((!a&o( 8 %o 5a,o(+ &! 18<+<<< &a4"o!. S%2o0a $%! "#!! % a"#'%!(2o a"#31 , %o a"#38 *a5o &! 'o!/o- , 5a('a&o(! &! 2!o 5o4!'%4a( &! 1=<+<<<+ 1<<+<<< , ><+<<< &a4"o!. U"#4#'! “?!"!(34o"” 2a(a &!"!(5#a( !4 'o"!#&o &! 'a&a )(a'o , 5%!"(! 4o 2a"(o! &! (!'oo'#5#!"o $%! 'a(7a !2!(a( &! 1+ 8+ 9 , ;. S% (!2%!"a "a5#@ &!! #&#'a( $%! a"#'%!(2o o 'o5#a'# &! a"#'%!(2o ! %"#4#a(7a 2a(a 'a&a 2(%!a+ a7 'o5o 4a !24#'a'# &! % (aoa5#!"o. A 78A 9;Da
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A8=;Da A/8/;Da R: S# a&l#ca'2! a %""s l"s 1'asc"s A!%#87 &'ec#&#%a!" "s e las 1'asc"s 5A > B6* l"s cuales se #1e'e!c#a'2! u!" el "%'" e(#" al aca''ea"' 5A > A/6 c"''es&"!#e!%e al 1'asc" &"' sus #1e'e!%es ,M &"' ?es%e'!8Bl"%* a!" las (a!as 'es&ec%#vas e A > B e 9 > < ;Da a&'"-#)aa)e!%e 5c"''es&"!#e!%e al &es" el @a&%e!" c"! su aca''ea"' c"''es&"!#e!%e6. L"s 1'asc"s !" &'ec#&#%a"s 5>a #e!%#1#ca"s c")" &"s#(les C > D6* > al es%a' #s&"!#(les &a'a la 'eacc#4! A!%#87/ &'ec#&#%a'2! > se #1e'e!c#a'2! C el D &"' el ,M e1#!#" &"' el aca''ea"'.
8. U"!& o"#!! %a 2(!2a(a'# &! a45#a @(#'a o#a *BSA- 2%(#)#'a&a &! %!(o o(5a4 &! o#o. Pa(a &!"!(5#a( # ! 4a 2(!2a(a'# &! BSA $%!&a a40%a o"(a 2(o"!7a @(#'a &!'#&! %"#4#a( “?!"!(34o"”. a- Q%@ a"70!o %"#4#a(7a 2a(a 2(!2a(a( !4 a"#%!(o !'!a(#o 2a(a &!"!'"a( 4a #52%(!a ! 4a 2(!2a(a'# &! BSA R: Se u%#l#a'2 sue'" ("v#!" al cual &'ev#a)e!%e se le e-%'a0" el BSA* sue'" el cual c"!%e!'2 %"a #)&u'ea +ue &"'3a #!clu#'se e! la )ues%'a
e BSA !" &u'a. S# e! el es%e'! (l"% !" se &'ese!%a! (a!as e! la )ues%'a* s#$!#1#ca +ue !" e-#s%e! %ales #)&u'eas e! #c@a )ues%'a. - A%5#!&o $%! 4a 2(!2a(a'# &! BSA ! 2%(a+ &#%/! ! 2a"( &! (!'oo'#5#!"o ! “?!"!(34o"”+ $%! 'a(7a !2!(a(+ # %"#4#a(H !4 a"#'%!(2o 2(!2a(a&o ! !4 #'#o A.
E a5o 'ao+ !24#$%! % (aoa5#!"o.
Se lle$a a la c"!clus#4! e +ue al se' &u'a la s"luc#4! e BSA* usa!" a!%#cue'&"s a1#!es a las #)&u'eas +ue @a> e! el sue'" ("v#!"* las cuales &'esu!%a)e!%e !" es%2! &'ese!%es e! la s"luc#4!* > al !" &"e'se u!#' > $e!e'a' 'eacc#4! a!%#$!#ca* !" @a('2 1"')ac#4! e (a!as e! el es%e'! (l"%.
9. U&.+C%a"#)#'a 4a 'o'!"(a'# &! 2(o"!7a &! % a"70!o &!o5#a&o 29<$) 2o( !4 5@"o&o &! B(a&)o(&+ 2a(a 4o $%! 'o"(%,! %a '%(a &! !"H&a( *= 2%"o- 'o BSA. *<+ 1+ 8.=+ = , 1< L &! BSA &! 1 50J5L-. Lo (!%4"a&o &! ao(a'#a a =K= 5 $%! o"#!! o 4o #0%#!"!: "%o 1 8 9 ; =
Co'!"(a'# BSA *50J54 /.
ao(a'#a .// .
D! 4a 5%!"(a *29<$)-+ 'o4o'a 8 L &! %a %'# 1:1= 2a(a 4a &!"!(5#a'#. La ao(a'#a $%! o"#!! ! &! <.1;>
a. D!"!(5#! 4a 'o'!"(a'# &! 2(o"!7a &! 4a 29<$) , �a '5o 2(!2a(a( %a o4%'# 'o 9< 0 &! 29<$) 2a(a #5%#a( % (a" *o4%5! &! #5%#a'# 8<< L-+ 2a(a 4a o"!'# &! a"#'%!(2o 5oo'4oa4!. Se calcula! las c"!ce!%'ac#"!es e caa s"luc#4! e la s#$u#e!%e )a!e'a: Ci×Vi Cf = Vf
C# C"!ce!%'ac#4! #!#c#al e la s"luc#4! 5)$H)L6. V# V"lu)e! +ue se @a %")a" e la s"luc#4! #!#c#al 5)L6. V1 V"lu)e! 1#!al e la s"luc#4! 5)L6. C1 C"!ce!%'ac#4! 1#!al e la s"luc#4! 5)$H)L6. Se 'e+u#e'e c"!ve'%#' e l a )l usa!" el s#$u#e!%e 1ac%"' e c"!ve's#4!: n mL =n µL
# *L /.
1 mL 1000 µL
# *54 . ./ . .
Se calcula! las c"!ce!%'ac#"!es 1#!ales e &<+1( e! la s"luc#4!
# *54 . ./ . .
C# *50J54
) *54
Sus%#%u>e!":
# *54-
C) *50J54-
.
.
./
./
.
.
.
.
Se c"!s%'u>e la $'21#ca c"! l"s a%"s a!%e'#"'es > a &a'%#' e es%a "(%e!e' la 'e$'es#4! l#!eal
BSA *50J54 .-8< /.-8< .-8< .-8/
Y Ao(a'#a .// .
Al c"!"ce' las c""'e!aas e la $'21#ca* se 'eal#a la s#$u#e!%e 'e$'es#4! l#!eal:
R!0(!#o !"a"#' M%4"#"24! R R $%a(! A&/%"!& R S$%a(! S"a&a(& !((o( o!(a"#o &)
./= .=/< .//< .=/
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'o!))#'#!" I"!('!2 .=< " 9/.= BSA *50J54-
F .<<9= .<<9= .=9= .//=/ ./=<= ./// .<9/
23 a4%! .//
Lo?!( U22!( K= K= 8.9 .=
.=
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9.9= .9<=
.<
C"! l"s a%"s e la 'e$'es#4! %e!e)"s la R )Kl%#&le* > R/ #!#ca la c"!1#a(#l#a e la $'21#ca. El val"' & es )e!"' a la s#$!#1#ca!c#a* &"' l" %a!%" se &uee c"!clu#' +ue la &e!#e!%e es #1e'e!%e e ce'" > &"' l" %a!%" @a> u!a 'elac#4! e!%'e l"s BSA > las a(s"'(a!c#as. C"! la ecuac#4! e la 'ec%a e la $'21#ca 5> ./- 8 .//<6 se &uee "(%e!e' la c"!ce!%'ac#4! e &'"%e3!as e la s"luc#4! e &<+1(. x =
x =
y −b m
0.148 + 0.223 0.1852
Concentración de p30qfb .9/ A@"'a se calcula'2 la c"!ce!%'ac#4! e la )ues%'a es&e0a!" C# Ci =
Cf ×Vf Vi
Concentración inicia! de prote"na# en p30qfb 9./ )$H)L.
Lue$"* &a'a &'e&a'a' la s"luc#4! e <)#c'"$'a)"s e &<+1( se c"!v#e'%e! las u!#aes e )#c'" a )#l# $'a)"s n mg =n µg
1 mg 1000 µg
! $ NK)e'" e $ +ue se esea! c"!ve'%#'. ! )$ NK)e'" e )$ 'esul%a!%es e la c"!ve's#4!. Se "(%#e!e u!a c"!ce!%'ac#4! e .< )$ Se 'eal#a u!a #luc#4! c"! u! v"lu)e! 1#!al e )l. C"! la c"!ce!%'ac#4! calculaa a!%e'#"')e!%e. Se calcula'a el v"l. I!#c#al e )ues%'a es&e0a!" V# Vi=
Cf ×Vf Ci
C"! l"s a%"s: C1 .<)$H)L V1 )L C# 9./)$H)l E! $o!%&en inicia! de &%e#tra es .=-8 > se c")&le%a a )L &a'a "(%e!e' u!a c"!ce!%'ac#4! 1#!al e .< )$H)l
D!2%@ &! (!a4#a( !4 2(o'!#!"o &! )%#+ !4!''# &! #(#&o5a , '4oa'#+ o"#!! %a '4oa $%! 2(o&%'! % a"#'%!(2o &! '4a! I0G $%! &!o5#a “QFB.919”.
. R!a4#a 4a "#"%4a'# &!4 a"#'%!(2o 2o( ELISA+ 2a(a 4o '%a4+ !##4#a %a 24a'a &! 2o4#!"#(!o 'o %a o4%'# &! 29<$) *9< 0J5L-+ D!2%@ &!4 2(o'!o &! 4o$%!o+ a&#'#oa &#)!(!"! %'#o! &!4 A QFB.919 , &!/a #"!(a''#oa( &%(a"! %a o(a a 9C. Laa 4a 24a'a "(! !'! , a&#'#oa % a"#'%!(2o a"#3(a" 'o/%0a&o a RP. R!2#"! 4a #'%a'# , !4 4aa&o , (!!4a 'o 8O83OPD , &!2%@ &! 1= 5#%"o &!"#!! 4a (!a''# 'o 8SO; >N. L!! 4a ao(a'#a a ;K< 5 , 4o (!%4"a&o $%! o"#!! o 4o #0%#!"! *a4o(! (%"o-: 1J%'# &! 5A QFB .919 =
A;K<5 . . . .< ./ .= . ./ .
A;K< 5 'o"(o4 N!0a"#o <.
a0a % 0(H)#'o &! 4o (!%4"a&o+ &!"!(5#! 4a !'%a'# &! 4a (!'"a , 'a4'%4! !4 "7"%4o &!4 a"#'%!(2o+ &!)##&o @"! 'o5o 4a %'# 'o 4a $%! ! o"#!! !4 =< &! 4a #"!(a''# 5H#5a+ 5!&#&a 'o5o ao(a'#a *(!&o&!! # &!'#5a4! !4 (!%4"a&o )#a4-.
U%#l#a!" u!a 'e$'es#4! l#!eal se "(%#e!e! l"s a%"s e las s#$u#e!%es %a(las: Coeficiente de corre!ación &'!tip!e Coeficiente de deter&inación R() R() a*%#tado Error t"pico Ob#er$acione#
E"a&7"#'a &! (!0(!# .9 .= ./=<9/ .< 9
El $a!or p #!#ca +ue s# @a> 'elac#4! e!%'e la A(s"'(a!c#a > la #luc#4!* &e'" l"s e)2s val"'es s"! )u> (a0"s +ue el e''"' el )"el" se'3a )u> al%". E!%"!ces la $'21#ca !" es c"!1#a(le > se'2 !ecesa'#" 'eal#a' )"#1#cac#"!es.
Se al%e'a'"! l"s val"'es e - al a&l#ca' u! l"$ > se l"$'4 au)e!%a' la c"!1#a(#l#a a u! /.. C"! la ecuac#4! e la 'ec%a e la $'21#ca6 es &"s#(le calcula' a&'"-#)aa)e!%e el %3%ul" el a!%#cue'&". Ec. Rec%a: > 8<.</l!5-6 =. y − 6 . 1115 ln ( x )= Ec. 56 −3.342
x =e
y − 6.1115
−3.342
Ec. 56
Se sus%#%u>e P* > se "(%#e!e u! 'esul%a" e .9/.
'. Po"!(#o(5!"!+ (!a4#a % !a,o 'o52!"#"#o 2a(a &!"!(5#a( 4a !2!'#)#'#&a& &!4 5A QFB.919+ 2a(a 4o '%a4 5!'4a <.1 0 &!4 A QFB.919 'o &#)!(!"! 'a"#&a&! &!4 a"70!o 29<$) o &! o"(o a"70!o *o (!4a'#oa&o- &!o5#a&o BGM. E"a 5!'4a 4a %"#4#a 'o5o “a"#'%!(2o 2(#5a(#o” 2a(a (!a4#a( % !a,o &! ELISA #5#4a( a4 &!'(#"o ! !4 2H((a)o *a- , o"#!! 4o #0%#!"! (!%4"a&o *a4o(! (%"o-:
A;K< 5 0 A0 a&#'#oa&o 29<$) < <.6= 1 <.61= 8.= <.;66 = <.9;> 1< <.8;= 1= <.111 8< <.1<= A;K< 5. Co"(o4 !0a"#o <.
BGM <.6= <.6= <.6= <.6= <.6= <.6= <.6=
a0a % 0(H)#'o &! 4o (!%4"a&o.
C%H4! o % 'o'4%#o! &! !"! !2!(#5!"o R: El a!%#cue'&" QFB.<< es es&ec31#c" &a'a el a!%3$e!" &<+1( > !" &a'a BGM. No"a: E"! #'#o o (!$%#!(! (!0(!#+ 2o( 4o $%! !4 1< 'o((!2o&#!"! a !! (%(o 2aa(H a 4a !24#'a'# &!4 2(o4!5a.
&. F#a45!"!+ 2a(a 'a4'%4a( 4a 'o"a"! &! a)##&a& &!4 5A QFB.919+ %"#4#a !4 5@"o&o &!'(#"o 2o( B!a"", !" a4 *1K>-+ aa&o ! 4a 4!, &! a''# &! 5aa. Pa(a !44o+ !##4#a %a 24a'a &! 2o4#!"#(!o 'o !4 !$%#a4!"! a &#)!(!"! 'a"#&a&! &! 29<$) *9+ 8+ 1.=+ 1 , <.= 0-. D!2%@ &! 4o$%!a(4a+ ! #'%a(o 'o &#)!(!"! 'o'!"(a'#o! &!4 5A QFB.919 *= %'#o! &o4! !(#a&a+ ##'#a&o 'o 9.< 0J5L- , ! 2(o#0%# 'o !4 !a,o &! 5a!(a #5#4a( a 4o &!'(#"o ! !4 #'#o *A- , o"#!! 4a ao(a'#a a ;K< 5. Lo (!%4"a&o &! ao(a'#a o"!#&o *(%"o- ! 5%!"(a ! 4a #0%#!"! "a4a:
A0 0 5A 0J5L 9 D#4%'# 1 D#4%'# 8 D#4%'# 9 D#4%'# ; D#4%'# =
9 <.>=8 <.8= <.68= <.=66 <.;K> <.;=
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1.= <.<; <.6<1 <.=8= <.;66 <.;<= <.9>=
1 <.6> <.=1= <.;= <.9K= <.98= <.86=
<.= <.;> <.968 <.8K= <.88= <.1>= <.196
C"!%'"l Ne$a%#v" .= CTRL A(s Ma- . 5#!#ca la )2-#)a a(s"'(a!c#a "(%e!#a* > 'e&'ese!%a el e #!%e'acc#4! A$8A(6.
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D!"!(5#! 4a !'%a'# &! 4a (!'"a 2a(a 'a&a %a &! 4a 'a"#&a&! &! A0 %"#4#a&a+ %"#4#a&o 4o &a"o &! ao(a'#a vs 'o'!"(a'# &! 5A QFB.919. Ta(la: )A( $H)L
9 1.= <.= <.9= <.1>= <.
G'21#ca:
9 ./ .9/ .=/ .== . .
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U"#4#a&o 4a !'%a'# &! 4a (!'"a+ 'a4'%4! 4a 'o'!"(a'# &!4 5A !'!a(#o 2a(a o"!!( !4 =< &! 4a %# 'o !4 A0+ 'o (!2!'"o a4 CTRL A Ma. Da%"s "(%e!#"s e caa u!a e las ecuac#"!es e la 'ec%a )"s%'aas e! la $'21#ca:
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A0 .µ$H)l . .= .
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e CTLR e )2-. A(s 5+, ,e!#e!%e 5&6 O'e!aa al "'#$e! 5b6 )A( 5µ$H)l6 5 6 ,a'a calcula' )A( s"l" es !ecesa'#" sus%#%u#' l"s a%"s e caa u!a e las A$ x =
y −b m
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)A( 5µ$H)l6 5 6
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Ca4'%4! 4a 'o"a"! &! a)##&a& &!4 5A QFB.919+ 2a(a 4o '%a4 !4!''#o! 4o &o a4o(! 5H '!('ao &! 4a 'o'!"(a'# &! 5A 'a4'%4a&a a4 =< &! 4a %# *#'#o -+ A1*=<- , A8*=<-+ 2a(a %"#4#a(4o ! 4a #0%#!"! !'%a'#:
Ka∗¿ 1 / 2 (2∗ Ab 1 ( 50 ) − Ab 2 ( 50 ) )
a4o( ao4%"o
No"a: La 'o'!"(a'# a %"#"%#( ! 4a )(5%4a a"!(#o( &!! !( !2(!a&a ! molaridad (M) . Pa(a !44o+ 'o#&!(! 4o #0%#!"!: -
1 5o4@'%4a &! I0G !$%#a4! a 8.;K<K=1<316 50 Molaridad 5o4!J4#"(o
B!a"",+ V. D.+ B!a"",+ B. G. W 4ao+ X. G. *1K>-. M!a%(!5!" o) 5oo'4oa4 a"#o&, a))##", , o3 'o52!"#"#! !,5! #55%oaa,. Journal of Immunological Methods 1<<*18-: 1931K.
L"s "s val"'es )2s ce'ca!"s e la c"!ce!%'ac#4! e )A( calculaa al s"! .9=/ > .=.
mAb 150 =
mAb 250 =
0.7062 μg 1 ml
0.6858 μg 1 ml
0.001 mg
×
×
1 μg
0.001 mg 1 μg
×
×
1 molécula IgG 1 mol × − 16 23 2.490795 x 10 mg 6.023 x 10 moléculas
1 molécula IgG −16
2.490795 x 10
mg
×
1 mol 6.023 x 10
23
moléculas
×
×
1000 mL 1 L
1000 mL 1 L
=4.707 x 10−
=4.571 x 10−
Sus%#%u>e!" la ecuac#4! e la c"!s%a!%e e a1#!#a se "(%#e!e la s#$u#e!%e ecuac#4!: 1 Ka= =18.38235294 x 10 M − − − 5C"!s%a!%e e 2 ( 2 × ( 4.707 x 10 M ) −( 4.571 x 10 M ) ) 8
9
1
9
a1#!#a &a'a el )A( QFB.<<.6
;. U&. &!!a 'o52a(a( 4a )(!'%!'#a &! PMN 2a'#!"! 'o %a !)!(5!&a& a%"o#)4a5a"o(#a '(#'a 'o % 0(%2o 'o"(o4 *% #2"!# ! $%! 4o 2a'#!"! 'o !)!(5!&a& a%"o#)4a5a"o(#a "#!! 5a,o( 5!(o &! PMN ! a0(! 2!(#)@(#'a $%! 4o %/!"o ao-. Pa(a !44o+ 4#a 4o !(#"(o'#"o &! %a 5%!"(a &! a0(! 2!(#)@(#'a &! 9< 2a'#!"! , 9< %/!"o '47#'a5!"! ao+ , (!a4#a !4 5a('a/! &! %2!()#'#! %"#4#a&o 4o #0%#!"! a"#'%!(2o: #. A"#3CD163FITC ##. ANTI3CD113PE ###. ANTI3CD1;3PERCP Y &!"!'"a 4a 2o4a'#o! '!4%4a(! 2o( '#"o5!"(#a &! )4%/o. a- E !4 #0%#!"! !$%!5a+ #&#$%! 4a 2o4a'#o! '!4%4a(! $%! o"!&(7a+ &! %a 5%!"(a (!2(!!"a"#a+ %"#4#a&o o4o 4o '(#"!(#o &! "a5ao , 0(a%4a(#&a&. E'#!((! 4a 2o4a'# ! 4a $%! !'o"(a(7a 4o PMN. E24#$%!.
9
9
Mol Litr
Mol Litr
R: La &'"&"'c#4! 'ela%#va e l#!1"c#%"s* )ac'41a$"s > $'a!ul"c#%"s se e%e')#!a 12c#l)e!%e a &a'%#' e $'21#cas e %a)a" 5 .or/ar Scatter .SC 6 c"!%'a c")&le0#a celula' 5Side Scatter SSC 6. El FSC ('#!a #!1"')ac#4! c"''es&"!#e!%e al v"lu)e! e &a'%3cula* )#e!%'as +ue el SSC es%2 a" &"' la c")&le0#a #!%e'!a e la )"lcula.
G'a!ul"c#%"s
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ENFERMOS S-: .9 5.96/: /.= ´ : 9.9
Jue$" e @#&4%es#s:
´ ´ a1 1 > 2
CONCLUSIÓN: e encontró evidencia
estad"stica su&ciente para indicar 'ue los pacientes con enfermedad autoinamatoria
Es%a3s%#c" e &'ue(a: ´ 2 1 −
√
2
s1 s2 + n n
Tomando en cuenta el valor Z, se buscó en su respectiva tabla este resultado, con un alfa de 95% (0.05), y un valor p de 0.54!, un valor cr"tico de #.$4.
´ ´ o1 1 ! 2
" =
SANOS S-: . 5.6/: //.9 ´ : =.9/
2
=
70.17 −69.72
√
248.06 30
+ 224.70 30
= 0.11
