PRACTICA NO 4. TECNICAS CINETICAS Y DE PUNTO FINAL Adriana Moreno Valladares MSc
OBJETIVOS
Conocer los principios básicos de diversos métodos para la medición de sustancias. Técnica cinética y de punto final Identificar los posibles problemas o errores que pueden presentarse en las diferentes etapas del proceso analítico
PRELABORATORIO
Diferencia entre suero y plasma. Lecturas de complejos coloreados en tecnicas de punto final Lectura de NAD y NADH : cofactores en técnica cinéticas . Que biomoleculas se pueden cuantificar por técnicas Cinéticas y de punto final.
FASES DEL PR OCESO ESO ANALÍTICO PROC de laboratorio: pasos que llevan a la obtención de un informe analítico. Las fases que se requieren para obtención de una prueba analítica son
Examen
Pre-instrumental Pre Instrumental Post--instrumental. Post
SUERO
Son
CONTROL
mezclas de sueros de origen bovino, porcino, equino o humano en los que se han determinado las concentraciones de varios constituyentes. El propósito de este suero es determinar el grado de Precisión y Exactitud con la que se está trabajando en el laboratorio. Se debe medir a diario y al cabo de los primeros 30 días se procede a realizar el C ONTROL DE CALIDAD INTERNO.
ESTANDAR O
Son
sustancias de concentración y pureza Se usan como referencia para determinar la concentración en la muestra que queremos analizar. El fundamento del Patrón es que se utiliza para calibrar la técnica. Para calibrar una técnica es necesario conseguir o tener el valor de una constante llamada FACT OR que nos permitirá conocer la concentración del metabolito a analizar en nuestra, y este FACT OR se halla con dos datos del patrón o estándar: su absorbancia y su concentración (esta última es conocida). La fórmula para hallar este dato es:
FACTOR =
PATRON
Si
Concentración del Patrón ____________________ Absorbancia del Patrón
por alguna razón no podemos hallar el factor o no podemos introducirlo en el equipo, podemos hallar la concentración del metabolito en la muestra con la siguiente fórmula: Abs. de la muestra CONCENTRACION DE LA = ____________________ X Concentración del MUESTRA Patrón Abs. del Patrón
BLANCO
1. 2. Es
DE
REACTIVO
El
analizar un blanco de reactivo con cada serie de problema tiene tanta importancia como introducir en la misma un patrón. La determinación del blanco tiene dos objetivos: - Corregir las medidas de problemas y controles. - Vigilar la posible contaminación de los reactivos. preciso leer la absorbancia frente a agua : si es > de 0.400 esta contaminado
CLASES DE CLASES DE TECNICAS UTILIZADAS EN QUIMICA CLINICA
PRUEBAS DE PUNTO FINAL
Ej.
glucosa, ác.úrico, colesterol, triglicéridos, proteínas, etc. Rango
de medición se localiza en el rango visible, especialmente entre 500 y 600 nm, se puede leer en varias longitudes de onda. Los elementos importantes de una técnica de Punto Final, son el Reactivo, el Patrón, el Tiempo de Incubación y la Longitud de onda a que es leído. Su
fundamento es la búsqueda de la formación de un complejo coloreado en un intervalo de tiempo.
PRUEBAS CINETICAS
O ENZIMATICAS
Más sensibles y requieren un manejo más cuidadoso, sujetas a la Temperatura. T Ambiente, 25, 30 C, indicando el factor por el cual se deben multiplicar las absorbancias. Lectura de deltas Continuas: En éstas, la reacción es medida en tiempos muy próximos, y se grafica. La gráfica resultante puede ser ascendente o descendente, dependiendo si el cofactor gana NADH o pierde hidrógenos NAD. AD. Mas de dos puntos de medida Discontinuas: Aquí se llevan a cabo dos mediciones de la actividad de la enzima. Una medición se hace al principio y la otra al final de la reacción, y se cuantifica con base en la actividad del cofactor. La técnica es llamada también Técnica de dos puntos.
Técnicas de punto final
Técnicas cinéticas
Miden
reacciones enzimáticos por Miden reacciones enzimáticos a coloración ENZIMATICAS partir de la actividad de un COLORIMETRICAS cofactor.. CINETICAS UV cofactor UV.. Utiliza de 400 a 600 600nm nm
Utiliza de 334 334,, 340 y 365 365nm nm
Se leen cromógenos
Se lee oxidooxido-reducción
Hay una única lectura
Hay medición continua
Se lee contra blancos
No hay blanco. blanco. Se lee contra celdas de aire o agua
Presentan color
Son incoloros
Se preincuba fuera del equipo
Se preincuba dentro del equipo o a la temperatura de medición
La temperatura es de 37 C o La temperatura es de 37 pero se pueden hacer a 25 , 30 y se temperatura ambiente corrige el valor al multiplicar corrige multiplicar por un valor dado por el inserto °
°
°
°
PROCEDIMIENTO
La práctica permitirá al estudiante determinar los posibles errores que se pueden cometer en el proceso de realización de una técnica cinética y otra de punto final. El procedimiento consta de tres partes:
1.
La primera : identificación de posibles errores en la fase pre instrumental o preanalitica.
2.
La segunda parte corresponde a la fase instrumental o analítica. Separar muestras. Analizar los posibles errores que se pueden generar en la fase analítica o instrumental.
3.
La tercera Errores fase post analítica con situación problemica.
_El anillo.pps
Que tengan una excelente semana !!!!
