Resumen o sumario La determinación del cortisol sérico total forma parte fundamental de la exploración bioquímica de la función adrenocortical. Dado que esta ho rmona circula en plasma, en parte unida a proteínas de transporte y en parte en estado libre, existe la posibilidad de realizar la determinación de sus diferentes fracciones no solo en sangre sino también en orina, saliva y otros fluidos biológicos. Es posible realizar tanto determinaciones basales como pruebas funcionales y de esta manera evaluar la secreción de cortisol en un momento dado del día, estudiar su variación circadiana y analizar su relación con el resto de los componentes del eje hipotálamo hipófiso-adrenal.
Marco Teórico Cortisol (Hidrocortisona, Componente F), un esteroide C21 con un peso molecular de 363,5 Dalton, es el glucocorticoide humano más importante. Es formado y secretado por la corteza suprarrenal. El 90% del cortisol está ligado a la plasmaproteína transcortina y un 7% está ligado a la albúmina. El resto, la parte no ligada, es la forma biológicamente activa del cortisol, que puede ser determinada en suero, plasma, saliva u orina. Entre las hormonas secretadas por la corteza suprarrenal, juega solamente el cortisol, mediante el mecanismo de retroacoplamiento negativo, un papel en la regulación de la secreción de ACTH. Los glucocorticoides intervienen regulando en los importantes procesos fisiológicos del metabolismo de hidratos de carbono (por ej. glucogénesis, síntesis de glicógeno o aumento de glucosa sanguínea), proteínas (incremento del catabolismo, inhibición de la síntesis) y lípidos. Ellos participan también en la inhibición de reacciones alérgicas e inflamatorias. El cortisol entonces juega un papel importante en reacciones de estrés del cuerpo humano, por ej. Operaciones, enfermedades mayores o en traumas severos. La determinación de cortisol se efectúa para el diagnóstico clínico de anomalías de la síntesis glucocorticoide 1, por ej. Sospecha del síndrome de Cushing, enfermedad de Addison o insuficiencia de la corteza suprarrenal. EIA Competitivo - El análisis CORTISOL ELISA de HUMAN está destinado al uso profesional. El ELISA se basa en la interacción competitiva de cortisol de la muestra y un conjugado enzimático –hormonal por una cantidad limitada de anticuerpos anticortisol monoclonales (ratón). Por eso la cantidad de conjugado hormonalenzimático ligado es inversamente proporcional a la concentración de cortisol en la muestra. Después de la incubación de la muestra y del conjugado hormonalenzimático, el conjugado no ligado es eliminado por lavado. Con la adición de la solución sustrato (paso 2) se desarrolla un color azul, que se transforma a
amarillo después de parar la reacción. La intensidad del color es inversamente proporcional a la concentración de cortisol de la muestra. La absorbancia de los calibradores y muestras se determina haciendo uso de un lector de micropocillos ELISA o sistemas completamente automatizadas (p.ej. instrumentos de las líneas HumaReader o ELISYS de HUMAN). Los valores de concentración de muestras desconocidas se determinan mediante una curva de calibración obtenida con ayuda de calibradores de concentraciones conocidas de cortisol. Interpretación de resultados La concentración de cortisol está sujeta a fuertes fluctuaciones circadianas con valores altos por la mañana y bajos por la noche. Por esta razón es muy importante realizar siempre determinaciones de cortisol de muestras que fueron obtenidas a una hora definida (comúnmente 8 horas de la mañana). Solamente entonces puede resultar una interpretación útil (véase valores normales). Valores de cortisol por encima de los valores normales (hipercortisolismo) señalan al síndrome de Cushing, el cual es indicado en pacientes con concentración anormal de transcortina, por ej. En adiposidad, embarazo o hipotiroidismo. Sin embargo, tampoco puede excluirse el síndrome de Cushing con valores en el rango normal 2. Hipocortisolismo (valores de cortisol en repetidas determinaciones por debajo de valores basales) es comprobable en insuficiencia primaria y secundaria de la corteza suprarrenal, la cual debe confirmarse efectuando una determinación de ACTH 3. La determinación de cortisol por sí sola es insuficiente para un diagnóstico. La anamnesis así como exámenes clínicos adicionales, especialmente parámetros diagnósticos (hormonales), deben tenerse en cuenta.
Resultados Niveles de estradiol --------------------------- fuera del rango normal Discusión de resultados El manejo y realización de esta práctica que es la ELISA competitivo se tiene que realizar con las medidas correctas, el tiempo establecido y con cuidado a l lavarlo ya que no se deben tocar en la parte de bajo ya que dejan grasa de las yemas de los dedos, este da resultados alterado de la muestra. Pero si este resultado estuviera dentro de los valores normales no tiene ninguna alteración pero eso va dependiendo también de la hora en que se tome la muestra
ya que por lo regular en la madrugada estas tienden a aumentar para preparar al cuerpo el resto del día que es de 50 a 250 ng/ml. Si los valores están por encima de lo normal puede que el cuerpo este en situaciones de estrés o esté sufriendo de una enfermedad de Cushing síndrome de Cushing ectópico o un feocromocitoma. O un nivel bajo de cortisol en la sangre puede que la persona este sufriendo de enfermedad de Addison hipopituitarismo ya sea primario o secundario donde la hipófisis le da la señal a la glándula para que este libere más síntesis y secreción de cortisol; o inhibición del funcionamiento normal de la hipófisis o de las glándulas suprarrenales por causa de medicamentos
Conclusiones
Al realizar una Prueba de ELISA esta debe ser controlada muy bien en lo que se refiere al tiempo, en los reactivos que se utilizan como también en las medidas ya que pueden ocasionar un falso positivo y alterar el diagnostico. Los niveles de cortisol en suero nos ayudan a controlar el funcionamiento de la glándula suprarrenal en el cual podemos detectar si hay o no, una hipersecreción o hiposecreción. El eje hipotálamo hipófisis adrenal debe funcionar correctamente una alteración en estos podría causar que estos no actúen correctamente en el cuerpo y no puedan ejercer un adecuado funcionamiento a nivel fisiológico.
Anexos Anexo
Investigue lo siguiente: 1. Investigue brevemente qué condiciones médicas pueden dar origen a niveles alterados de cortisol - Estrés - Problemas en la hipófisis - Consumo de esteroides y bebidas alchololicas - Problemas en glándulas suprarrenales - Hipercortisolismo - Síndrome de Cushing - Enfermedad de addison 2. ¿Qué pruebas complementarias deben acompañar al cortisol para dar un diagnóstico más certero? Niveles de ACTH a nivel hipofisiario Niveles de CRH hormona liberadora de cortiotropina a nivel hipotalamo 3. Menciones los efectos que tiene el cortisol sobre: a. El metabolismo de los carbohidratos Estimulación de la gluconeogénesis Reducción del consumo de glucosa en las células
Elevación de la glucemia y diabetes suprarrenal b. El metabolismo de las proteínas Disminución de las reservas en casi todas las células, excepto las hepáticas. Incremento en las proteínas plasmáticas y hepáticas c. El metabolismo de las grasas Movilización de ácidos grasos 4. Investigue la función del cortisol en el estrés y la inflamación Se eleva su producción en situaciones de estrés: siempre que hay estrés se libera cortisol, así como con las infecciones, los traumatismos y el ejercicio.
Bibliografía
nora, f. (2007). Obtenido de http://www.higiene.edu.uy/parasito/trabajos/elisa.pdf worldwide, H. d. (s.f.).
Human . Obtenido
de http://www.human-de.com/data/gb/vr/el.estra.pdf
Área Endocrinología, Departamento de Bioquímica Clínica, INFIBIOC, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Human, cortisol análisis de ELISA para la determinación cuantitativa de cortisol en suero o plasma humano Human Gesellschaft für Biochemica und Diagnostica mbH, Germany
Índice Resumen o sumario
1
Marco teórico
1
Datos, cálculos y resultados
2
Discusión de resultados
2
Conclusiones
3
Anexos
3
Bibliografía
4
Universidad Mariano Gálvez de Guatemala Facultad de ciencias médicas y de la salud Campus Huehuetenango Bioquímica III Lic. María Reneé Aguilar
Reporte: PRÁCTICA NO. 9 DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE CORTISOL POR EL MÉTODO DE ELISA
Estefany Veliz 6200-15-99 Karla Castillo 6200-15-244 Boris Recinos 6200-15-271 Brandon Galindo 6200-15-779 Fecha: 25 de abril de 2017