UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA Unidad Xochimilco
División de Ciencias ioló!icas " de la Sal#d T$onco Com%n Divisional Mód#lo& P$ocesos Cel#la$es '#ndamen(ales
Métodos básicos para el aislamiento e identifcación de entero-bacterias del agua. A#$a Ram)$e* Ram)$e* Ve!a Ve!a Ca$los Ma$()ne* Ma$()ne* Cla#dia La$ios A"ala I$vin! +#i$o* Ma$()ne* ,#lia Ma$)a T#$cio ,#lia Ma$)a
Docen(e& D$- ,o$!e An(onio Am.*/#i(a Lande$os 0$#1o& 23A
In($od#cción Conside$ando /#e es(#dio de las en4e$medades ($ansmisi5les ocasionadas 1o$ mic$oo$!anismos 1a(ó!enosCons(i(#"e el o56e(o de ($ans4o$mación del mód#lo P$ocesos Cel#la$es '#ndamen(ales 7PCE8 del T$onco Com%n Divisional de Ciencias ioló!icas " de la Sal#d 7TCD de CS8-
O56e(ivo •
El O56e(ivo del 1$esen(e (e9(o es in($od#ci$ a los al#mnos de es(e mód#lo en el mane6o de los m.(odos 5:sicos em1leados en el la5o$a(o$io de mic$o5iolo!)a; (omando como modelo el aislamien(o e iden(i4icación de en(e$o<5ac(e$ias a 1a$(i$ de m#es($as de a!#a-
O56e(ivos Es1ec)4icos•
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•
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El al#mno a1$enda a 1$e1a$a$ la m#es($a " a sem5$a$la 1o$ es($)a c$#*ada 1a$a o5(ene$ colonias aisladasEl al#mno a1$enda a 1$e1a$a$ la m#es($a " a sem5$a$la es($)a c$#*ada 1a(a O5(ene$ colonias aisladasEl al#mno a1$enda a o5se$va$ " de(e$mina$ las ca$ac(e$)s(icas mac$oscó1icas " mic$oscó1icas de las colonias aisladas- As) como; o5(ene$ c#l(ivos 1#$osEl al#mno cono*ca los 4#ndamen(os de las 1$#e5as 5io/#)micas " $ealice las /#e se $e/#ie$en 1a$a iden(i4ica$ a las en(e$o<5ac(e$ias-
P$inci1ios (eó$icos Las En(e$o5ac(e$iaceae son 5acilos !$amne!a(ivos; dis($i5#idas en la na(#$ale*a en 4o$ma am1lia- Se enc#en($an en el s#elo; en el a!#a; so5$e las 1lan(as " como s# nom5$ nom5$e e lo indi indica ca se enc# enc#en en($ ($an an den( den($o $o del del ($ac ($acio io in(e in(es( s(in inal al dc los los se$e se$ess h#manos " de los animales- Se a)slan con m#cha 4$ec#encia de cl)nicas; La 4amilia En(e$o5ac(e$iaceae es(: 4o$mada 1o$ a1$o9imadamen(e =2 !.ne$o " 2=> es1ecies " miles de se$o(i1os- Al!#nos miem5$os de la 4amilia siem1$e se asocia asocian n a en4e$me en4e$medad dades es c#ando c#ando se a)slan a)slan en el hom5$e; hom5$e; 1o$ e6em1l e6em1lo& o& Shigella Salmonella; Yersinia pestis- Mien($as /#e o($os son miem5$os de la 4lo$a no$mal /#e 1$od#cen in4ecciones in4ecciones o1o$(#nis(as; o1o$(#nis(as; 1o$ e6em1lo& Escherichia coli ; Klebsiella pneumomiae ; Proteus mirabilisLas Las en(e en(e$o $o<5a <5ac( c(e$i e$ias as son ca#sa ca#san( n(es es de #n !$an !$an n%me$ n%me$o o de en4e en4e$m $med edad ades es in4ecciosas en el h#mano; en($e las m:s com#nes se enc#en($an los s)nd$omes
dia$$ei dia$$eicos cos " dis.n( dis.n($ic $icos; os; ca#sados ca#sados 1o$ ce1as de Escherichia coli, Salmonella " (i4oidea; ca#sada ca#sada 1o$ es1ecies de Salmonella. Se (ienen (ienen casos Shigella. La 4ie5$e (i4oidea; de ne#mon)a ca#sados 1o$ Klebsiella pneumomiae Klebsiella pneumomiae- Es1ecies de Proteus mirabilis; va$ios miem5$os miem5$os del !$#1o !$#1o Klebsiella Enterobacteriaceae se a)slan de E. coli " va$ios he$idas ($a#m:(icas; con(aminadas con (ie$$a o ma(e$ial ve!e(al o de incisiones a5dominales des1#.s de #na ci$#!)a- El shoc? endo(ó9ico es #na mani4es(ación 1o(encialmen(e le(al de la in4ección 1a$ en(e$o<5ac(e$ia-
Me(odolo!)a " Res#l(adosLa me(odolo!)a desc$i(a cons(a de c#a($o sesiones& 2- P$e1a$ación P$e1a$ación de de las m#es($a m#es($ass " c#l(ivo c#l(ivo en #n medio medio selec(iv selec(ivo o 3- Aisla islami mien en(o (o " o5se o5se$v $vac ació ión n de las las ca$a ca$ac( c(e$ e$)s )s((icas icas mac$ mac$os osccó1ic ó1icas as " mic$oscó1icas de las en(e$o5ac(e$ias =- P$#e5a P$#e5ass 5io/#)mi 5io/#)micas cas 1a$a 1a$a en(e$o5ac en(e$o5ac(e$ (e$ias ias @- Iden(i Iden(i4ic 4icaci ación ón de las en(e$o5 en(e$o5ac( ac(.$i .$ias as O5(ención de la m#es($a& La (.cnica em1leada 1a$a o5(ene$ la m#es($a con la /#e se ($a5a6a$)a en el la5o$a(o$io; 4#e la misma /#e se em1leó en el $es(o s(o de las #nidad dades 1e$(enecien(es a la Unive$sidad A#(ónoma Me($o1oli(ana 7UAM8Es deci$; se a1licó la (.cnica de medio cho$$o 1a$a la (oma de m#es($a en #n 4$asc 4$asco o es(. es(.$i $ill de 2m 2mLL- Las Las m#es m#es($ ($as as (o(a (o(ale less $ecol $ecolec ec(a (ada dass 4#e$ 4#e$on on c#a( c#a($o $o;; 1e$( 1e$(ene eneci cien( en(es es a dis( dis(in in(o (oss medi medios os dond donde e se enc#e enc#en( n($a $a a!#a a!#a en di4e di4e$en $en(e (ess condiciones condiciones 7cha$co 7cha$co de a!#a s#cia; c#5e(a con a!#a a!#a de ll#via; a!#a de la llave llave " a!#a es(ancada del $io Le$ma8; 1os(e$io$men(e las m#es($as $ecolec(adas 4#e$on $o(#l $o(#lad adas as con con la 4ina 4inalilidad dad de man( man(en ene$ e$ cie$ cie$(o (o o$den o$den con con los los 4$as 4$ascos cos-- Ca5e Ca5e menciona$ /#e d#$an(e la (oma de m#es($a; se ($a(ó de $eali*a$ de la mane$a m:s es(.$il es(.$il 1osi5le; es(o con la 4inalidad 4inalidad de no con(amina$ con(amina$ el a!#a " /#e al(e$a$a al(e$a$a a los $es#l(adosB adem:s la (oma de m#es($a se $eali*ó el mismo d)a en el /#e se $eali*a$)a la 1a$(e e91e$imen(al de la inves(i!aciónPRIMERA SESIÓN&
An(es de comen*a$ a ($a5a6a$ 4#e im1o$(an(e $eali*a$ la es(e$ili*ación de :$ea de ($a5a6o 1a$a evi(a$ c#al/#ie$ (i1o de con(aminaciónPa$a el c#l(ivo de la m#es($a es(as 4#e$on ($a(adas de dos mane$as& 2- Dil# Dil#ci ción ón de la m#es( m#es($a $a 2&2; 2&2; /#e consis consis(e (e en (oma (oma$$ 2ml 2ml de la m#es m#es($ ($a a " dil#i$la en >ml de Sol#ción Salina Iso(ónica es(.$il 7SSI8 3- M#es($a M#es($a di$ec(a; di$ec(a; sin nin!%n (i1o de dil#ción dil#ción En am5os casos el c#l(ivo se $eali*ó de la misma mane$a& Con a"#da de #n el asa 5ac(e$ioló!i 5ac(e$ioló!ica ca es(.$il se (omó #na 1e/#ea can(idad can(idad de la m#es($a de a!#a " se 1$ocede a es($ia$ el inoc#lo en la ca6a de Pe($i so5$e el a!a$ si!#iendo #n 1a($ón de c#a($o c#ad$an(es " #na es($)a a5ie$(aCada a!a$ se selló con #n 1eda*o de mas?in! " se e(i/#e(ó con los da(os $e/#e$idosB es1eci4icando el n%me$o de m#es($a " si e$a dil#ida o no dil#ida- Las ca6as de a!a$ MacCon?e" se lleva$on a inc#5a$ d#$an(e 3@ ho$asSE0UNDA SESION& Des1 Des1#. #.ss de /#e /#e las las m#es m#es($ ($a a inc# inc#5a$ 5a$on on d#$an d#$an(e (e 3@ ho$as ho$as se 1$oce 1$ocedi dió ó a la selección de colonias desa$$olladas de a!a$ MacCon?e"- En el caso de las m#es($as o5(enidas de& cha$co de a!#a s#cia; c#5e(a con a!#a de ll#via; a!#a de la llave " a!#a es(ancada del $io Le$ma se encon($ó #n c$ecimien(o o desa$$ollo de #na colonia 5ac(e$iana o5se$vando ma"o$ desa$$ollo en el c#l(ivo no dil#ido a com1a$ación con el c#l(ivo dil#ido- Se 1$ocedió a $eali*a$ la $esiem5$a de las colonias desa$$olladas en a!a$ MacCon?e" 1a$a o5(ene$ c#l(ivo 1#$o de 5ac(e$iasPos( Pos(e$ e$io io$m $men en(e (e se $eal $eali* i*ó ó la o5se o5se$v $vac ació ión n mic$ mic$os oscó có1i 1ica ca de los los c#l( c#l(iv ivos os seleccionados 1o$ Tinción de 0$am- Si!#iendo la me(odolo!)a de la 1$:c(ica se 1$e1a$ó el 4$o(is 4$o(is " la (inción (inción 1a$a 1a$a la o5se$vac o5se$vación ión mic$oscó1i mic$oscó1ica ca de las las colonias colonias c#l(ivadas " as) de(e$mina$ si las en(e$o5ac(e$ias 1$esen(es e$an de ca$:c(e$ 0$am o 0$am <
Al o5se$va$ las (inciones al mic$osco1io se de(e$minó /#e las en(e$o5ac(e$ias 1$esen(es en dicha m#es($a e$an de ca$:c(e$ 0$am de5ido a /#e 1$esen(a5an #na colo$ación a*#l viole(a-
TERCERA SESION& P$#e5a Ca(alasa& En*ima /#e descom1one el 1e$ó9ido de hid$o!eno en o9)!eno " a!#a o9i!enadaLas 5ac(e$ias /#e con Ca(alasa 1osi(iva li5e$an o9i!eno /#e se mani4ies(a con la li5e$ación de 1e/#eas 5#$5#6as-
P$#e5a O9idasa& Todas las en(e$o5ac(e$i en(e$o5ac(e$ias as dan #na $eacción $eacción ne!a(iva- Pseudomona " Neisseria son 1osi(ivasLas 5ac(e$ias o9idasa o9idasa 1osi(ivas 1$od#cen #n colo$ ne!$o o a*#l in(enso en 2se!La $eacción se conside$a 1osi(iva si oc#$$e en($e los 2 " se!#ndos 1os(e$io$esSi el desa$$ollo de colo$ se da des1#.s de se!#ndos la 1$#e5a se conside$a Ne!a(iva-
P$#e5a Ca(alasa O9idasa
M#es($a 2
M#es($a 3
M#es($a =
M#es($a @
Siem5$a en medios 1a$a 1$#e5as 5io/#)micas& 2- P$#e5a P$#e5a Vo! Vo!es es F P$os?a# P$os?a#e$ e$ G Ro6o Ro6o de me(ilo me(ilo Con el asa 5ac(e$ioló!ica (oma$ #n inoc#lo li!e$o del c#l(ivo 1#$o de 5ac(e$ias " s#s1ende$lo en #n (#5o con caldo VP
@- Cald aldo U$ U$ea Con Con el asa asa 5ac(e 5ac(e$i $iol oló! ó!ic ica a (oma (oma$$ #n inoc# inoc#lo lo 1oco 1oco denso denso del del c#l( c#l(iv ivo o 1#$o 1#$o de 5ac(e$ias " si.m5$alo en el caldo #$eaH- A!a$ A!a$ ie$$o ie$$o T$i1 T$i1le le A*%ca A*%ca$$ 7TSI8 7TSI8 Con el asa 5ac(e$ioló!ica se (oma #n inoc#lo 1oco denso del c#l(ivo 1#$o de 5ac(e$ias " si.m5$alo 1o$ 1icad#$a en el 4ondo " en 4o$ma de #na es($)a en la s#1e$4icie •
Se $eali*a$on los mismos 1asos en c#a($o ocasiones; #na con cada m#es($a
•
di4e$en(eTodos los (#5os se de6a$on inc#5a$ d#$an(e 3@ ho$as
CUARTA SESIÓN& In(e$1$e(ación de las 1$#e5as de iden(i4icación 5io/#)mica 28 Vo!es< Vo!es
Ro6o Ro6o de Me(il e(ilo o P$#e P$#e5a 5a 1osi 1osi(i(iva va&& Col Colo$ o$ $o6o $o6o en el medi medio o P$#e P$#e5a 5a $e(a $e(a$d $dada ada&& Colo Colo$$ ana$ ana$an an6a 6ado do P$#e P$#e5a 5a ne! ne!a( a(iv iva& a& Col Colo$ o$ ama ama$i $illllo o en el el medi medio o
JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva =8 Ci($ Ci($a( a(o o de de Sim Simmo mons ns < P$#e5a P$#e5a 1osi( 1osi(iva iva&& C$ecimi C$ecimien( en(o o con colo$ colo$ a*#l a*#l in(ens in(enso o en la *ona *ona inclina inclinada da del <
1ico de 4la#(a P$#e5a P$#e5a ne!a ne!a(iv (iva& a& No No se o5se$ o5se$va va c$eci c$ecimie mien(o n(o ni ni cam5i cam5io o de colo colo$$
JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva @8 Indol < P$#e5a P$#e5a 1osi 1osi(iv (iva& a& Colo Colo$$ ne!$o ne!$o en la 1ica 1icad#$a d#$a o en (odo (odo el el (#5o (#5o
<
P$#e5a P$#e5a ne!a(i ne!a(iva& va& A#senc A#sencia ia de de colo$ colo$ ne!$o ne!$o en (odo (odo el (#5o (#5o
JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva H8 Kcid Kcido o S#l4 S#l4h) h)d$ d$ic ico o 73S8 < P$#e P$#e5a 5a 1osi( 1osi(iv iva& a& A1a A1a$i $ici cion on de #n colo$ colo$ $o6o $o6o 2 o = min# min#(o (oss des1 des1#. #.ss de <
adiciona$ el $eac(ivo P$#e P$#e5a 5a ne! ne!a( a(iv iva& a& Col Colo$ o$ ama ama$i $illllo o
JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 8 Movili Movilidad& dad& O5seva$ O5seva$ medio medio SIM SIM < P$#e5a P$#e5a 1osi(i 1osi(iva& va& El medio medio SIM de5e de5e encon encon($a ($a$se $se (#$5io (#$5io < P$#e5a P$#e5a ne!a( ne!a(iva& iva& solo solo de5e de5e e9is(i e9is(i$$ c$ecimi c$ecimien( en(o o a lo la$!o la$!o de la 1ica 1icad#$a d#$a JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 8 U$easa < P$#e5a P$#e5a 1osi(i 1osi(iva& va& Colo$ Colo$ $osa $osa 4#e$(e 4#e$(e en el el cald caldo o #$ea #$ea < P$#e5a P$#e5a ne!a ne!a(iv (iva& a& Colo Colo$$ ama$il ama$illo lo o sin sin cam5 cam5io io en el caldo caldo #$ea JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 8 A!a$ A!a$ ie$$o ie$$o T$i1 T$i1le le A*%c A*%ca$ a$ 7TSI8 7TSI8 < Pico Pico de 4la# 4la#(a (a $o6o $o6oGP GP$o $o4# 4#nd ndid idad ad ama$ ama$ilillo lo&& Medi Medio o Alcal lcalin inoG oGKc Kcid ido o 7Alc 7AlcGA GA88<
0l#cosa 4e$men(adaB lac(osa o saca$osa no 4e$men(adaPico Pico de 4la# 4la#(a (a ama$ ama$ilillo loGP GP$o $o4# 4#nd ndid idad ad ama$ ama$ilillo lo&& Medio edio Kcid KcidoG oGKc Kcid ido o 7AGA 7AGA880l#cosa; lac(osa "Go saca$osa 4e$men(ada-
Res#l(ados& P$#e5a Vo!es P$os?ae#$ Ro6o de Me(ilo
Ci($a(o de Simmons
M#es($a 2
M#es($a 3
M#es($a =
M#es($a @
Ne!a(iva Ne!a(iva Posi(iva P$esen(a c$ecimien(o con li!e$o cam5io de colo$ación hacia #n (ono a*#l
Ne!a(iva Posi(iva Posi(iva P$esen(a li!e$o c$ecimien(o con cam5io de colo$ación hacia #n
Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva P$esen(a li!e$o c$ecimien(o con cam5io de colo$ación hacia #n
Posi(iva Ne!a(iva Posi(iva P$esen(a li!e$o c$ecimien(o con cam5io de colo$ación hacia #n
ve$doso Indol Kcido S#l4h)d$ico 73S8 Movilidad U$easa
TSI 7hie$$o ($i1le a*%ca$8
Ne!a(iva Posi(iva
(ono a*#l in(enso Ne!a(iva Ne!a(iva
(ono a*#l in(enso Ne!a(iva Ne!a(iva
(ono a*#l in(enso Posi(iva Posi(iva
Posi(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Posi(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Posi(iva Ne!a(iva Posi(iva Ne!a(iva Posi(iva Pico de Pico de Pico de Pico de 4la#(a $o6o " 4la#(a $o6o " 4la#(a $o6o " 4la#(a $o6o " P$o4#ndidad P$o4#ndidad P$o4#ndidad P$o4#ndidad ama$illoama$illoama$illoama$illoMedio Medio Medio Medio AlcalinoGKcid AlcalinoGKcid AlcalinoGKcid AlcalinoGKcid o 7AlcGA8o 7AlcGA8o 7AlcGA8o 7AlcGA8-
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA Unidad Xochimilco División de Ciencias ioló!icas " de la Sal#d T$onco Com%n Divisional Mód#lo& P$ocesos Cel#la$es '#ndamen(ales
Análisis de las muestras recolectas de Rectoría
Po$& Alicia Ma$i5el C#$iel Ro6o Del4ina 0a$c)a e(an*o L#ce$o Edi(h 0on*:le* C$#* 0$isel Loe*a Coa(*o*on Melina T$e6o La$a Docen(e&D$- ,o$!e An(onio Am.*/#i(a Lande$os 0$#1o& 23A
Recolección de la m#es($a
El 1$o1ósi(o de es(a inves(i!ación es evidencia$ la 1$esencia de En(e$o5ac(e$ias en el a!#a de los 5e5ede$os de las dis(in(as #nidades de la UAM 7Unive$sidad A#(ónoma Me($o1oli(ana8 Ca5e $esal(a$ /#e en la Rec(o$)a de la UAM no ha" 5e5ede$os como en la UAM F X sin em5a$!o c#en(an con dosi4icado$es de a!#a; de los c#ales 4#e$on seleccionados H al a*a$ 1a$a la (oma de m#es($aEn cada #no de los dosi4icado$es seleccionados se a1licó la (.cnica de medio cho$$o 1a$a la (oma de m#es($a en #n 4$asco es(.$il ma$cado 1a$a iden(i4ica$ el dosi4icado$ seleccionado " dicho 4$asco se man(#vo en #n medio $e4$i!e$an(e has(a el momen(o /#e se #só en el la5o$a(o$io; la1so /#e no 4#e ma"o$ a 2 ho$aDis1ensado$es seleccionados& 28 Dosi4icado$ Dosi4icado$ de Coo$dina Coo$dinación ción !ene$al !ene$al de adminis($a adminis($ación ción " $elaciones $elaciones la5o$ales 73do 1iso8
38 Dosi4icado$ Dosi4icado$ de Te Teso$e$)a ad6#n(a ad6#n(a de con($ol con($ol 1a($imonial 1a($imonial 7=e$ 7=e$ 1iso8
=8 Dosi4icado$ Dosi4icado$ de Di$ección Di$ección de $ec#$so $ec#$so h#manos h#manos 73do 1iso8
@8 Dosi4icado$ Dosi4icado$ de Di$ección Di$ección de Tec Tecnolo!) nolo!)as as de la in4o$mación in4o$mación 72e$ 1iso8
H8 Dosi4icado$ Dosi4icado$ de la la case(a de vi!ilanc vi!ilancia ia en la en($ada en($ada 1$inci1al 1$inci1al 71lan(a 71lan(a 5a6a8 5a6a8
T$a5a6o en la5o$a(o$io
•
PRIMERA SESIÓN& SESIÓN& Sem5$ado en e n A!a$ MacCon?e"
An(es de comen*a$ a ($a5a6a$ 4#e im1o$(an(e $eali*a$ la es(e$ili*ación de :$ea de ($a5a6o 1a$a evi(a$ c#al/#ie$ (i1o de con(aminaciónPa$a el c#l(ivo de la m#es($a es(as 4#e$on ($a(adas de dos mane$as& 28 Dil#ción Dil#ción de la m#es($a m#es($a 2&2; 2&2; /#e /#e consis(e consis(e en (oma$ (oma$ 2ml de de la m#es($a m#es($a " dil#i$la en >ml de Sol#ción Salina Iso(ónica es(.$il 7SSI8 38 M#es($a M#es($a di$ec(a; di$ec(a; sin nin!%n nin!%n (i1o (i1o de dil#ción dil#ción En am5os casos el c#l(ivo se $eali*ó de la misma mane$a& <
Con a"#da a"#da de de #n el asa asa 5ac( 5ac(e$io e$ioló! ló!ica ica es(.$i es(.$ill se (omó (omó #na 1e/#e 1e/#ea a can(idad de la m#es($a de a!#a " se 1$ocede a es($ia$ el inoc#o en la ca6a de Pe($i so5$e el a!a$ si!#iendo #n 1a($ón de c#a($o c#ad$an(es " #na es($)a a5ie$(a-
<
Cada Cada a!a$ a!a$ se selló selló con con #n 1eda* 1eda*o o de mas?i mas?in! n! " se e(i/ e(i/#e( #e(ó ó con los los da(os da(os solici(adosB es1eci4icando el n%me$o de m#es($a " si e$a dil#ida o 1#$a-
<
Las ca6as ca6as de a!a$ a!a$ MacCo MacCon?e" n?e" se lleva lleva$on $on a la la es(#4a es(#4a 1a$a 1a$a de6a$ de6a$las las inc#5 inc#5a$ a$ a = C d#$an(e 3@ ho$asSE0UNDA SESIÓN& Aislamien(o " o5se$vación de las ca$ac(e$)s(icas ca$ ac(e$)s(icas mac$oscó1icas " mic$oscó1icas de las En(e$o5ac(e$ias-
•
Des1#.s de /#e las m#es($a inc#5a$on d#$an(e 3@ ho$as se 1$ocedió a la selección de colonias desa$$olladas de a!a$ MacCon?e"- En el caso de las m#es($as de Rec(o$)a de los 2 c#l(ivos (o(ales solo 3 1$esen(a$on desa$$ollo de colonias 5ac(e$ianas; am5as co$$es1ondie$on a la m#es($a n%me$o H 7Dosi4icado$ de la case(a de vi!ilancia en la en($ada 1$inci1al8 o5se$vando ma"o$ desa$$ollo en el c#l(ivo 1#$o a com1a$ación con el c#l(ivo dil#idoLas colonias o5se$vadas 1$esen(a$on las si!#ien(es ca$ac(e$)s(icas& COLONIA 2 M#es($a P#$a
COLONIA 3 M#es($a 2&2
'o$ma
MOR'OLO0IA COLONIAL Ci$c#la$ Ci$c#la$
Colo$
Ama$illo G Do$ado
Ama$illo G do$ado
Elevación
Um5ilicada con $#!osidad
Um5ilicada con $#!osidad
o$de
Inde4inido
Inde4inido
Consis(encia
Viscosa
Viscosa
Tamao
0$ande " 1#n(i4o$me
0$ande " 1#n(i4o$me
O1acidad
A#sen(e
A#sen(e
S#1e$4icie
I$$e!#la$
I$$e!#la$
De las dos m#es($as sealadas se 1$ocedió a $eali*a$ la $esiem5$a de las colonias desa$$olladas en a!a$ MacCon?e" 1a$a o5(ene$ c#l(ivo 1#$o de 5ac(e$ias-
O5se$vación mic$oscó1ica de los c#l(ivos seleccionados 1o$ Tinción de 0$am-
Si!#iendo la me(odolo!)a me(odolo!)a de la la 1$:c(ica se 1$e1a$ó el 4$o(is " la (inción (inción 1a$a la o5se$vación mic$oscó1ica de las colonias c#l(ivadas " as) de(e$mina$ si las en(e$o5ac(e$ias 1$esen(es e$an de ca$:c(e$ 0$am o 0$am<
Al o5se$va$ las (inciones al mic$osco1io se de(e$minó /#e las en(e$o5ac(e$ias 1$esen(es en dicha m#es($a e$an de ca$:c(e$ 0$am de5ido a /#e 1$esen(a5an #na colo$ación a*#l viole(a-
Tam5i.n Tam5i.n se o5se$vó la 1$esencia de #n hon!o en se!#ndo se! #ndo 1lano
•
TERCERA SESIÓN& SESIÓN& P$#e5as 5io/#)micas 1a$a En(e$o5ac(e$ias-
Pruebas de identificación bioquímica de los cultivos puros seleccionados
P$#e5a Ca(alasa& En*ima /#e descom1one el 1e$ó9ido de hid$o!eno en o9)!eno " a!#a o9i!enadaLas 5ac(e$ias /#e con Ca(alasa 1osi(iva li5e$an o9i!eno /#e se mani4ies(a con la li5e$ación de 1e/#eas 5#$5#6asP$#e5a O9idasa& Todas Todas las en(e$o5ac(e$ias dan #na $eacción ne!a(iva- Pseudomona " Neisseria son 1osi(ivasLas 5ac(e$ias o9idasa 1osi(ivas 1$od#cen #n colo$ ne!$o o a*#l in(enso en 2se!La $eacción se conside$a ne!a(iva si oc#$$e en($e los 2 " se!#ndos 1os(e$io$es- Si el desa$$ollo de colo$ se da des1#es de se!#ndos la 1$#e5a se conside$a Ne!a(ivaRes#l(ados o5(enidos en las m#es($as de $ec(o$)a&
CATALASA OXIDASA
COLONIA 2 M#es($a P#$a PRUEAS IO+UIMICAS
COLONIA 3 M#es($a 2&2
P$#e5a Ca(alasa en m#es($a 1#$a
P$#e5a Ca(alasa en m#es($a dil#ida 2&2
P$#e5a O9idasa en m#es($a 1#$a
P$#e5a O9idasa en m#es($a dil#ida 2&2
Siembra en medios para pruebas bioquímicas!
28 P$#e5a Vo!es Vo!es F P$os?a#e$ P$os?a#e$ G Ro6o de me(ilo me(ilo Con el asa 5ac(e$ioló!ica (oma$ #n inoc#lo li!e$o del c#l(ivo 1#$o de 5ac(e$ias " s#s1ende$lo en #n (#5o con caldo VP
Con el asa 5ac(e$ioló!ica se (oma #n inoc#lo 1oco denso del c#l(ivo 1#$o de 5ac(e$ias " si.m5$alo 1o$ 1icad#$a en el 4ondo " en 4o$ma de #na es($)a en la s#1e$4icie
•
Se $eali*a$on los mismos 1asos en ($es ocasiones; la 1$ime$a sin 5ac(e$ias 1a$a los (#5o de con($ol; la se!#nda 1a$a los (#5os con la m#es($a 1#$a " la (e$ce$a 1a$a los (#5os con las m#es($a dil#ida 2&2 Todos los (#5os se de6a$on inc#5a$ a = C d#$an(e d#$a n(e 3@ ho$as
•
CUARTA CUARTA SESIÓN& SESIÓN& Lec(#$a de 1$#e5as 5io/#)micas
•
In(e$1$e(ación de las 1$#e5as de iden(i4icación 5io/#)mica >8 Vo!es< Vo!es
< <
P$#e5a P$#e5a 1osi( 1osi(iva iva&& C$ecimi C$ecimien( en(o o con colo$ colo$ a*#l a*#l in(enso in(enso en la *ona *ona inclin inclinada ada del del 1ico de 4la#(a P$#e5a P$#e5a ne!a ne!a(iv (iva& a& No No se o5se$ o5se$va va c$eci c$ecimie mien(o n(o ni ni cam5i cam5io o de colo colo$$
JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 238Indol < P$#e5a P$#e5a 1osi 1osi(iv (iva& a& Colo Colo$$ ne!$o ne!$o en la 1ica 1icad#$a d#$a o en (odo (odo el el (#5o (#5o < P$#e5a P$#e5a ne!a(i ne!a(iva& va& A#senc A#sencia ia de de colo$ colo$ ne!$o ne!$o en (odo (odo el (#5o (#5o JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 2=8Kcido S#l4h)d$ico 7 3S8 < P$#e5a P$#e5a 1osi 1osi(iv (iva& a& A1a$i A1a$icio cion n de #n colo$ colo$ $o6o $o6o 2 o = min#(o min#(oss des1#.s des1#.s de de adiciona$ el $eac(ivo < P$#e P$#e5a 5a ne! ne!a( a(iv iva& a& Col Colo$ o$ ama ama$i $illllo o JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 2@8Movilidad& O5seva$ medio SIM < P$#e5a P$#e5a 1osi(i 1osi(iva& va& El medio medio SIM de5e de5e encon encon($a ($a$se $se (#$5io (#$5io < P$#e5a P$#e5a ne!a( ne!a(iva& iva& solo solo de5e de5e e9is(i e9is(i$$ c$ecimi c$ecimien( en(o o a lo la$!o la$!o de la 1ica 1icad#$a d#$a JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 2H8U$easa < P$#e5a P$#e5a 1osi(i 1osi(iva& va& Colo$ Colo$ $osa $osa 4#e$(e 4#e$(e en el el cald caldo o #$ea #$ea < P$#e5a P$#e5a ne!a ne!a(iv (iva& a& Colo Colo$$ ama$il ama$illo lo o sin sin cam5 cam5io io en el caldo caldo #$ea JEl (#5o con($ol de5e da$ #na $eacción ne!a(iva 28A!a$ 28 A!a$ ie$$o T$i1le A*%ca$ 7TSI8 < Pico de 4la#(a 4la#(a $o6oGP$o4 $o6oGP$o4#ndidad #ndidad ama$illo& ama$illo& Medio AlcalinoG AlcalinoGKcido Kcido 7AlcGA87AlcGA80l#cosa 4e$men(adaB lac(osa o saca$osa no 4e$men(ada< Pico Pico de 4la#(a 4la#(a ama$illo ama$illoGP$ GP$o4# o4#ndi ndidad dad ama$i ama$illo llo&& Medio Medio KcidoGK KcidoGKcid cido o 7AGA87AGA80l#cosa; lac(osa "Go saca$osa 4e$men(ada< Pico de 4la#(a 4la#(a $o6oGP$o4 $o6oGP$o4#ndidad #ndidad $o6o& Medio AlcalinoG AlcalinoGAlcali Alcalino no 7AlcGAlc87AlcGAlc8Reacción ne!a(iva; no ha" 4e$men(ación de nin!#no de los ca$5ohid$a(os-
Vo!es P$os?ae#$ Ro6o de Me(ilo
Ci($a(o de Simmons Indol Kcido S#l4h)d$ico 7 3S8 Movilidad U$easa
TSI 7hie$$o ($i1le a*%ca$8
COLONIA 2 COLONIA 3 M#es($a P#$a M#es($a 2&2 PRUEAS IO+UIMICAS Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Posi(iva Posi(iva P$esen(a c$ecimien(o con P$esen(a li!e$o li!e$o cam5io de c$ecimien(o con cam5io colo$ación hacia #n (ono de colo$ación hacia #n a*#l ve$doso (ono a*#l in(enso Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Posi(iva Posi(iva Posi(iva Posi(iva Posi(iva Posi(iva Pico de 4la#(a $o6o " Pico de 4la#(a $o6o " P$o4#ndidad ama$illoP$o4#ndidad ama$illoMedio AlcalinoGKcido Medio AlcalinoGKcido 7AlcGA87AlcGA8-
TSI
0A S
3S
AlcGA AlcGA
-
-
RM
VP
IND
-
- G -
CIT
U RE
MO V
TRIBUTO I: Escherichiae
GÉNERO : Escherichia E.coli GÉNERO: Shigella "rupos! #,$,% S.Sonnei
TRIBU II: Ed&arsiellae
GÉNERO: Ed&arsiella E.'arda
AlcGA
-
AlcGA
-
TRIBU III: Salmonelleae
GENERO: Salmonelleae
TRIBU IV& %itrobactereae
-
GENERO: %itrobacter %.freundii %.(oseri
AlcGA
-
AlcGA
-
- G
-
-
- G
- G
G -
-
- G
-
-
G -
TRIBU V: Klebsielleae GENERO: Klebsiella K.pneumoniae (.a)*toca
GENERO: Enterobacter E.aerogenes E.cloacae GENERO: +afnia +. #lves GENERO: Pantoea P.agglomerans GENERO: Serratia S. marcescens TRIBU VI: Proteeae GENERO: Proteus P. vulgaris vulga ris P.mirabilis
AlcGA
- G
AlcGA AlcGA AlcGA
-
G -
G
GENERO: organella .morganii
AlcGA
-
-
GENERO: Providencia P.rettgeri P.stuartii P.alcalifaciens
AlcGA AlcGA AlcGA
-
-
-
AlcGA
-
-
-
TRIBU VII: Yersinieae
GENERO: Yersinieae Y. enterocolitica • • •
Las :$eas som5$eadas indican las Reacciones clave G - del H al > de las ce1as ositivas - G del H al > de las ce1as Ne!ativas
Análisis de resultados
Clasi4icación de
N#me$o de
Reacciones Posi(ivas
G -
En(e$o5ac(e$ias
Reacciones Posi(ivas
TRIBUTO I: GÉNERO: Shigella "rupos! #,$,%
H
S.Sonnei
H
J TSI AlcGA " GA# J TSI AlcGA " GA#
J 3S J VP J 3S J VP
J IND J IND
TRIBU II: Ed&arsiellae GÉNERO: Ed&arsiella J TSI AlcGA J VP
J MOV
J TSI AlcGA J IND J VP J CIT
J URE J MOV
J TSI AlcGA J VP J 3S J CIT
J URE J MOV
H
J TSI AlcGA J RM J 3S J IND
J MOV
J TSI AlcGA J RM J 0AS J IND J 3S J CIT
J MOV
J TSI AlcGA J RM J 3S J IND
J CIT J MOV
P. vulgaris vulgar is
@
J MOV
P.mirabilis
H
J TSI AlcGA " URE J VP J TSI AlcGA J CIT J IND " URE
H
J TSI AlcGA J VP J 3S " URE
J MOV
P.rettgeri
J MOV
P.stuartii
J TSI AlcGA J 0AS J 3S J TSI AlcGA J 0AS
E.'arda
=
TRIBU III: Salmonelleae H GENERO: Salmonelleae TRIBU IV& %itrobactereae GENERO: %itrobacter %.(oseri
TRIBU V: Klebsielleae GENERO: +afnia +. #lves
GENERO: Pantoea P.agglomerans
GENERO: Serratia S. marcescens
TRIBU VI: Proteeae GENERO: Proteus J MOV
GENERO: organella .morganii
GENERO: Providencia J VP J CIT " URE J 3S J VP
J CIT J MOV
P.alcalifaciens
H
J TSI AlcGA J VP J 3S J CIT
J MOV
H
J TSI AlcGA J 3S J 0AS J VP
J URE
TRIBU VII: Yersinieae GENERO: Yersinieae Y. enterocolitica
• • • • • • • • •
TSI AlcGA& A!a$ hie$$o ($i1le a*%ca$; AlcalinoGKcido 3S& S#l4#$o de id$o!eno RM& Ro6o de Me(ilo VP& Vo!es F P$os?a#e$ IND& Indol CIT& Ci($a(o de Simmons URE& U$easa 7Caldo #$ea8 MOV& Movilidad N 7ne!$i(as " s#5$a"ado8& Reacciones Clave
Des1#.s de $eali*a$ las 1$#e5as necesa$ias se 1#do de(e$mina$ la 1$esencia de En(e$o5ac(e$ias en las m#es($as del a!#a $ecolec(adas en #no de los dis1ensado$es de la Rec(o$)a de la UAM /#e es(: locali*ado en la case(a de vi!ilancia de la en($ada 1$inci1al " en 5ase a la iden(i4icación 5io/#)mica las 1osi5les 5ac(e$ias 1$esen(es en dicha m#es($a 1od$)an se$& -
Shi!ella; 0$#1os A; ; C Shi!ella; S- Sonnei Eda$siella; E- Ta$da Salmonelleae Ci($o5ac(e$; C- Qose$i a4nia; - Alves Pan(oea; P- A!!lome$ans Se$$a(ia; S- Ma$cescens P$o(e#s; P- V#l!a$is P$o(e#s; P- Mi$ia5ilis Mo$!anello; M- Mo$!anii P$ovidencia; P- Re((!e$i P$ovidencia; P- S(#a$(ii P$ovidencia; P- Alcali4aciens
Es im1o$(an(e $esal(a$ /#e le o56e(ivo de es(a inves(i!ación es solo evidencia$ la 1$esencia de las En(e$o5ac(e$ias; "a /#e si se desea es1eci4ica$ c#:l es el o$!anismo 1$esen(e en dichas m#es($as se (end$)a /#e 1$ocede$ a $eali*a$ las 1$#e5as es1ec)4icas co$$es1ondien(es-
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA Unidad Xochimilco División de Ciencias ioló!icas " de la Sal#d T$onco Com%n Divisional Mód#lo& P$ocesos Cel#la$es '#ndamen(ales
RA$TI$A RA$TI$ A %E &ABORATORIO'
Klva$e* Rom:n Thania Sa$ahi A$:o* V:s/#e* Al5e$(o Al5e$(o Co$$ales And$ade Tania 0a5$iela Nava$$e(e 0on*:le* Diana Ale6and$a Vale$io Vale$io O$d#a So4)a So 4)a Li*e(h Docen(e& D$- ,o$!e An(onio Am.*/#i(a Lande$os
0$#1o& 23A
Resultados Pa$a es(as sesiones se ($a5a6ó %nicamen(e con las m#es($as de a!#a de los 5e5ede$os de la UAM
rimera #esi(n P$e1a$ación de las m#es($as " c#l(ivo en #n medio selec(ivo IIIIIIIIII-
P$e1 P$e1a$ a$ac ació ión n de de la la *on *ona a es( es(.$ .$ilil 1a$a 1a$a ($a5 ($a5a6 a6o o mic mic$o $o5i 5iol oló! ó!ic ico o C#l( C#l(iv ivo o de de la la m#e m#es( s($a $a de a!#a a!#a en el medi medio o Mac MacCo Con? n?e" e" Mane6 ane6o o de ma( ma(e$ia e$iall con( con(am amin inad ado o
En la 1$ime$a sesión se $eali*ó los c#l(ivos de las m#es($as de a!#a de los 5e5ede$os de la UAM
#e!unda #esi(n Aislamien(o " o5se$vación de las ca$ac(e$)s(icas mac$oscó1icas " mic$oscó1icas de en(e$o5ac(e$ias IIIII-
Sol# Sol#ci ción ón de las las col colon onia iass des desa$ a$$o $ollllad adas as en el a!a$ a!a$ MacC MacCon on?e ?e"" Resi Resiem em5$ 5$a a de las las col colon onia iass desa desa$$ $$ol olla lada dass de a!a$ a!a$ en en MacC MacCon on?e ?e"" 1a$a 1a$a
IIIIII-
o5(ene$ c#l(ivo 1#$o de 5ac(e$ias O5se$ O5se$va vaci ción ón mic$ mic$osc oscó1 ó1ic ica a de de los los c#l( c#l(iv ivos os sele selecc ccio iona nado doss
En es(a sesión no h#5o desa$$ollo de colonias en 3@ ho$as; de los medio de c#l(ivo MacCon?e" de las m#es($as de a!#a de los 5e5ede$os de la UAM
Se $eal $eali* i*ó ó de i!#al !#al modo modo la $esi $esiem em5$ 5$a a de las las colo coloni nias as sel selecci eccion onad adas as desa$$ollado$as del a!a$ MacCon?e" " se hi*o la o5se$vación mic$oscó1ica con la Tinción
de
0$am-
En es(e c#ad$o se m#es($a /#e es($#c(#$a (ie cada #no de los colo$an(es #(ili*ados-
Colo$an(e L#!ol Ve$de $:1ido 0iemsa Ace(oca$m)n A*#l alciano
Es($#c(#$a /#e (ie Almidón; !licó!eno; cilios; 4la!elosCi(o1lasma; n%cleo0$:n#los ci(o1lasm:(icos; n%cleoC$omosomas en c.l#las mi(ó(icas Teido de es($#c(#$as con 1$o1o$ción
Ama$illo de Me(anilo
de ca$5ohid$a(osMicelios " levad#$as-
Ta)la Ta)la *' Resultados Ca$ac(e$)s(icas de las 5ac(e$ias o5se$vadas COLONIA 2
COLONIA 3
Rec(o$)a
Rec(o$)a dil#ido
+or,olo!ía $olonial 'ORMA COLOR ELEVACIÓN ORDE CONSISTENCIA TAMAO OPACIDAD SUPER'ICIE
Tinci(n de Gram CATALASA OXIDASA UREA 0LUCOSA LACTOSA SACAROSA MOVILIDAD Ac- SUL'IDRICO INDOL RO,O DE METILO
I$$e!#la$ I$$e!#la$ Ma$$ón Ro6a Plana Plana E$osionado Con(in#o M#cosa M#cosa Mediana Mediana O1aco O1aco Lisa Lisa +or,olo!ía +icrosc(ica Ne!a(ivas Ne!a(ivas rue)as Bio.uímicas Posi(ivo Posi(iva Posi(ivo Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva Ne!a(iva
VO0ES PROSQAUER Ne!a(iva CITRATO DE SIMMONS Posi(iva
Ne!a(iva Ne!a(iva
Tercera #esi(n P$#e5as 5io/#)micas 1a$a en(e$o5ac(e$iasI-
P$#e5as
de
iden(i4icación
5io/#)mica
de
los
c#l(ivos
IIII-
seleccionadosO5se$ O5se$va vaci ción ón mic$ mic$osc oscó1 ó1ic ica a de los los c#l( c#l(iv ivos os 1#$os 1#$os selec selecci cion onado adoss-
1#$os
En la (e$c (e$ce$ e$a a sesi sesión ón se $eali $eali*a$ *a$on on las las 1$#e 1$#e5a 5ass 1a$a 1a$a la iden iden(i(i4i4ica caci ción ón de las en(e$o5ac(e$ias de los c#l(ivos en los (#5os de ensa"oReali* Reali*amos amos di4e$e di4e$en(e n(ess 1$#e5as 1$#e5as con dis(in( dis(in(as as (.cnic (.cnicas as 1a$a 1ode$ 1ode$ o5se$va o5se$va$ $ 1os(e$io$men(e los $es#l(ados; las c#ales 4#e$on&
a8 P$#e P$#e5a 5a de ca(a ca(ala lasa& sa& Colocamos so5$e el 1o$(ao56e(o con el asa 5ac(e$ioló!ica #na 1e/#ea 1o$ción del c#l(ivo 1#$o de las 5ac(e$ias del medio Mac< Con?e" " des1#.s a!$e!amos #na !o(i(a de a!#a o9i!enada so5$e la m#es($a; las m#es($as $es#l(a$on 1osi(ivas; li5e$a$on o9)!eno-
58 P$#e5a Con el
de asa
o9idasa& 5ac(e$ioló!ica colocamos
#na 1o$ción del
c#l(ivo
e9(endimos so5$e
el
1#$o
1a1el
"
lo
4il($o-
Le
a!$e!amos 3 !o(as de $eac(ivo- Las 5ac(e$ias $es#l(a$on 1osi(ivas 1a$a la m#es($a de $ec(o$)a " se hi*o lo mismo con las m#es($as de $ec(o$)a dil#ida 72&28 " s#s $es#l(ados 4#e$on ne!a(ivos-
c8 P$#e5a
Vo!es<
P$os?a#e$ G Ro6o de
as a
5ac(e$ioló!ica (omamos
me(ilo& Con el
#n inoc#lo denso
del
s#s1endimos
el (#5o de caldo- Las dos
en
m#es($as $es#l(a$on ne!a(ivas-
c#l(ivo
"
lo
d8 Ci($a(o Con el
de asa
Simmons& 5ac(e$ioló!ica (omamos #n
inoc#lo li!e$o del
c#l(ivo " lo sem5$amos en
4o$ma de es($)a
a5ie$(a- Se sem5$a$on dos
m#es($as m#es($as #na de $ec(o$)a dil#ida dil#ida 72&28 " la o($a 4#e de $ec(o$)a $ec(o$)a no dil#idaLa m#es($a de $ec(o$)a $ec(o$)a dil#ida $es#l(o ne!a(iva ne!a(iva " La m#es($a m#es($a de $ec(o$)a no dil#ida
e8 Indol Con
$e $es#l(o
el
asa
1osi(iva-
5ac(e$ioló!ica
colec(amos
#n
inoc#lo
c#l(ivo
lo
sem5$amos
"
1icad#$as en el
denso
del 1o$
medio SIM a = mm del
4ondo del (#5o- Las dos m#es($as $es#l(a$os ne!a(ivas-
48 Caldo #$ea Con el #n
inoc#lo
as a
5ac(e$ioló!ica colocamos
1oco
denso del c#l(ivo " los
sem5$amos den el
caldo
#$ea-
Las
dos
m#es($as $es#l(a$on ne!a(ivas-
!8 A! A !a$
hi hie$$o
($ ($i1le
a*%ca$
inoc#lo 1o 1 oco de d enso
del c#l(ivo " lo sem5$amos
1o$ 1i 1icad#$a en en el el
4ondo " en 4o$ma de es($)a
1o$ la s#1e$4icie- Las
dos
ne!a(ivas-
m#es($as
$es#l(a$on
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA Unidad Xochimilco
División de Ciencias ioló!icas " de la Sal#d
T$onco Com%n Divisional
Mód#lo& P$ocesos Cel#la$es '#ndamen(ales
REORTE %E &ABORATORIO
Po$& C$#* e$n:nde* $enda Dimas 0#*m:n C$is(ian e$n:nde* Acos(a ,#an Ca$los ,e$ónimo e$n:nde* Ed#a$do Ven(#$a Ma/#eda Diana Docen(e& D$- ,o$!e An(onio Am.*/#i(a Lande$os
0$#1o& 23A
INTRO%U$$I/N La mic$o5iolo!)a se oc#1a !ene$almen(e de o$!anismos (an 1e/#eos /#e no 1#eden se$ vis(os a sim1le vis(a 1o$ el o6o h#mano- De5ido a la na(#$ale*a de es(a disci1lina; el mic$osco1io (iene #na im1o$(ancia c$#cialB la ma"o$ 1a$(e de los conocimien(os so5$e los mic$oo$!anismos se han desc#5ie$(o con mic$osco1io- 2La ma"o$)a ma"o$)a de mic$oo$ mic$oo$!an !anism ismos os 1a(ó!en 1a(ó!enos os 1$esen( 1$esen(an an ca$ac(e ca$ac(e$)s $)s(ic (icas as 4)sico 4)sico<< /#)m /#)mic icas; as; es(a es(ass ca$a ca$ac( c(e$ e$)s( )s(ic icas as son im1o im1o$( $(an( an(es es 1a$a 1a$a la de(ec de(ecci ción ón de es(o es(oss mic$oo$!anis mic$oo$!anismosmos- Los m.(odos em1leados em1leados en el la5o$a(o$io la5o$a(o$io son los si!#ien(es si!#ien(es 21$e1a$ación de las m#es($as " c#l(ivo en #n medio selec(ivo; 3- Aislamien(o " o5se$ o5se$va vaci ción ón de las las ca$a ca$ac( c(e$) e$)s( s(ic icas as mac$ mac$os oscó1 có1ic icas as " mic$o mic$osc scó1 ó1ic icas as de las las en(e$o5ac(e$ias; =- P$#e5as 5io/#)micas 1a$a en(e$o5ac(e$ias; @- Iden(i4icación de las en(e$o5ac(e$iasLas 5ac(e$ias 1e$(enecien(es a la 4amilia En(e$o5ac(e$iaceae son los aislamien(os 5ac(e$ianos $ec#1e$ados con m:s 4$ec#encia de m#es($a cl)nicasB 3 como al#mnos del :$ea de ciencias 5ioló!icas " de la sal#d; es im1$escindi5le /#e es(emos 4amilia$i*ados con la (eo$)a " 1$:c(ica /#e im1lica el 1$oceso de aislamien(o e iden(i4icación de en(e$o5ac(e$ias-
OB0ETIVO GENERA&
OB0ETIVO# ARTI$U&ARE#' ARTI$U&ARE#'
1 Lansing M. Prescott, John P. Harle, !onald ". #lein, Microbiolog$a, %uinta edición, editorial Mc &ra' Hill, ()1*, página 1+.
( #oneman et al., 1+++, p. 1(
+AR$O TE/RI$O' Preparación * tinción de las muestras
A#n/#e los mic$oo$!anismos vivos se 1#eden e9amina$ di$ec(amen(e con #n mic$ mic$os osco1 co1io io ó1(i ó1(ico co;; a men# men#do do ha" /#e /#e 4i6a 4i6a$l $los os " (ei (ei$l $los os 1a$a 1a$a a#men a#men(a (a$$ la $esol#ción " acen(#a$ las ca$ac(e$)s(icas mo$4oló!icas 1a$a s# es(#dio en el 4#(#$o-iación
Las c.l#las (eidas /#e se o5se$van en el mic$osco1io de5en 1a$ece$se lo m:s 1osi5le a las c.l#las vivas- La 4i6ación es #n 1$oceso 1o$ el c#al se conse$van " 4i6an en s# 1osición las es($#c(#$as in(e$nas " e9(e$nas de las c.l#las de los mic$oo$!anismos%olorantes * tinción simple!
Los n#me$osos (i1os de colo$an(es em1leados 1a$a (ei$ mic$oo$!anismos 1oseen dos ca$ac(e$)s(icas en com%n& 2- Todos 1oseen !$#1os c$omó4o5os 7!$#1os con do5les enlaces con6#!ados /#e dan el colo$ al colo$an(e8; 3- P#eden #ni$se a las c.l#la c.l#lass median median(e (e enlace enlacess iónico iónicos; s; covale covalen(e n(ess o hid$ó4 hid$ó4o5o o5oss- Po$ e6em1l e6em1lo; o; #n colo$an(e ca$!ado 1osi(ivamen(e se #ne a es($#c(#$as ca$!adas ne!a(ivamen(e de la c.l#la- Los colo$an(es ioni*a5les se 1#eden dividi$ en dos clases !ene$ales (omando como 5ase la na(#$ale*a de s# !$#1o ca$!ado Colo$an(e Colo$an(e 5:sico& 5:sico& A*#l A*#l de me(ilen me(ileno; o; 4#csina 4#csina 5:sica; 5:sica; c$is(al c$is(al viole(a; viole(a; sa4$ani sa4$anina; na; ve$de ve$de mala/#i(a Colo$a Colo$an(e n(e :cid :cido& o& Eosina Eosina;; $osa $osa de 5en!al 5en!ala a " 4#csina 4#csina :cida :cida-'inción diferencial.
Los m.(odos de (inción di4e$encial clasi4ican a las 5ac(e$ias en !$#1os di4e$en(es se!%n s#s 1$o1iedades de (inción- La (inción de 0$am; desa$$ollada 1o$ el m.dico Dan.s Dan.s Ch$i Ch$is( s(ia ian n 0$am 0$am;; en 2@; 2@; es el m.(o m.(odo do de (inc (inció ión n m:s m:s am1l am1lia iame men( n(e e #(ili*ado en 5ac(e$iolo!)a- Se ($a(a de #n m.(odo de (inción di4e$encial 1o$/#e divide a las 5ac(e$ias en dos clases 0$am ne!a(ivas ivas 0$am 1osi(ivas
#gar ac%on(e*
E9is(en n#me$osos medios de c#l(ivo con c#alidades " #sos dis(in(os; en es(a 1$:c(ica; 1o$ las $a*ones e91#es(as a con(in#ación; se #sa$: el A!a$ MacCon?e"; el c#al es #n medio de c#l(ivo selec(ivo 1a$a el aislamien(o; $ec#1e$ación "
di4e$enciación de En(e$o5ac(e$iaceae- Po$ s# con(enido de sales 5ilia$es " c$is(al viole(a $es#l(a inhi5i(o$ia de 5ac(e$ias 0$am<1osi(ivo " de al!#nas 5ac(e$ias 0$am< ne!a(ivas e9i!en(esB 1#es (ales sales son sec$e(adas al in(es(ino 1a$a la di!es(ión de l)1idos; l)1idos; siendo as) #n medio 1$o1icio 1a$a en(e$o5ac(e$i en(e$o5ac(e$iasas- Con(iene; adem:s; lac(osa como %nica 4#en(e de ca$5onoB 4e$men(ado$es 4#e$(es de lac(osa; como Esche$ichia; Qlei5siella " En(e$o5ac(e$; 1$od#cen colonias $o6asB 4e$men(ado$es len(os; como Ci($o5ac(e$; P$ovidencia; Se$$a(ia " a4nia; 1#eden a1a$ece$ sin colo$ des1#.s de 3@h o $osa 1:lido en 3@<@hB P$o(e#s; Eda$siella; Salmonela " Shi!ella; 1$od#cen colonias ($ans1a$en(es; al no 4e$men(a$ lac(osa- = Pruebas bioquímicas para identificación de Enterobacteriaceae
En 5ase a las ca$ac(e$)s(icas mac$oscó1icas o5se$vadas en medios de c#l(ivo " a la (inc (inció ión n de 0$am 0$am;; se 1#ed 1#ede e hace hace$$ #na #na iden( den(ii4ica 4icaci ción ón 1$i 1$ima$i ma$ia a de las ca$ac ca$ac(e (e$) $)s(i s(ica cass mo$4 mo$4ol oló! ó!ic icas as de las las colo coloni nias as sem5$ sem5$ad adasas- Sin Sin em5a$ em5a$!o !o;; #na #na iden(i4icación concl#"en(e se 5asa$: en la 1$esencia o a#sencia de di4e$en(es en*imas; las c#ales di$i!en el me(a5olismo de las 5ac(e$ias a lo la$!o de #no o m:s caminos /#e 1#eden se$ de(ec(ados 1o$ medios es1eciales #sados en las (.cnicas de c#l(ivo in vi($o @ Tales medios son las 1$#e5as 5io/#)micas; s#s($a(os con indicado$es so5$e los c#ales $eaccionan es(as en*imas; de1endiendo de la en*ima a de(ec(a$ se$: la 1$#e5a a1licadaB !$acias a es(o se 1#ede de(e$mina$ #n 1e$4il 5io/#)mico /#e 1e$mi(i$: hace$ #na clasi4icación de la es1ecie 5ac(e$ianaLas 1$#e5as U(ili*adas en la 1$esen(e 1$:c(ica son- H W P$#e P$#e5a 5a ca(a ca(ala lasa sa&& De(e De(ec( c(a a la en*im en*ima a ca(a ca(ala lasa sa con con el #so #so de O /#e se descom1one en o9)!eno " a!#aB 1o$ lo /#e ha" des1$endimien(o de 5#$5#6asW P$#e5a o9idasa& De(ec(a la en*ima ci(oc$omo o9idasa; /#e se enc#en($a en o$!anismos anae$o5ios " anae$o5ios 4ac#l(a(ivosW Vo!es>>
* #oneman et al. 1+++, p 1 / 0ustos at al. ()).
+ETO%O&OG1A Pa$a lleva$ a ca5o la 1$:c(ica es necesa$io (ene$ con(em1lados va$ios as1ec(os como lo son&
RI+ERA #E#I/N& Sem5$ado en A!a$ MacCon?e" 2- Es(e$ili*ac Es(e$ili*ación& ión& es(e$ili*aci es(e$ili*ación ón de :$ea de de ($a5a6o ($a5a6o 2' $ultivo $ultivo de la muestra muestra de a!ua a!ua de los )e)ederos )e)ederos de la UA+ UA+ $ua3imala $ua3imala 4 UA+ UA+ &erma En la rimera sesi(n se rocede a cultivar muestras de a!ua en el a!ar +ac$on5e46 la muestra 7 O * la o)tuvimos de los )e)ederos de la UA+ $ua3imala8 la muestra 7 O 2 se o)tuvo de los !arra,ones de la UA+ &erma' ₂
₂
Se 1$oc 1$ocedi edió ó a c#l( c#l(iv iva$ a$ las las m#es m#es($ ($as as de a!#a a!#a;; de las las c#al c#ales es se hic hicie$o ie$on n 3 c#l c#l(ivo (ivoss de cada cada #no #no de los los 5e5ed 5e5ede$o e$oss 7#no 7#no dil# dil#ido ido " o($o o($o sin sin dil# dil#i$ i$8; 8; en (o(a (o(all se hicie$on 2 c#l(ivos de cada #na de las #nidades de la UAMLa mane$a de c#l(iva$ las m#es($as 4#e la si!#ien(e& 28 Se es(e$ili*ó el asa 5ac(e$ioló!ica al $o6o vivo en la 4lama del meche$o " 1a$a en4$ia$ se s#me$!ió en el a!a$ 7.s(o se $eali*ó cada ve* /#e se i5a a hace$ #n c#l(ivo8- 38 Se (oma la m#es($a de a!#a con el asa " se 1$ocede a es($ia$ la misma en el a!a$=8 Cada a!a$ se selló con #n 1eda*o de mas?in! " se e(i/#e(ó con los da(os solici(ados- @8 Las m#es($as se lleva$on a la es(#4a 1a$a de6a$las inc#5a$-
#EGUN%A #E#I/N& Tinción de 0$am " Resem5$ado2- Selección Selección de colonias colonias desa$$olla desa$$olladas das de de a!a$ MacCon?e" MacCon?e" 3- Resiem5$a Resiem5$a de las colonia coloniass desa$$olladas desa$$olladas en en a!a$ MacCon?e" MacCon?e" 1a$a 1a$a o5(ene$ c#l(iv c#l(ivo o 1#$o de 5ac(e$ias=- O5se$vación O5se$vación mic$oscó1i mic$oscó1ica ca de los c#l(ivos c#l(ivos selecciona seleccionados dos 1o$ Tinci Tinción ón de 0$am-
29 oras desu;s de la siem)ra de las muestras de a!ua de los )e)ederos de las unidades &erma 4 $ua3imala de la UA+ en el a!ar +ac$on5e48 no se resent( desarrollo de las )acterias' De5ido a .s(o; 1a$a $eali*a$ la $esiem5$a de las colonias; se (#vo /#e 1edi$ m#es($as en las c#ales s) h#5o desa$$ollo de las colonias de 5ac(e$ias 7a!#a del $)o Le$ma8Se $esem5$a$on las colonias /#e (en)an las si!#ien(es ca$ac(e$)s(icas& 28 Colonias $o6asB 38 Colonias $osadas " =8 Colonias 5lancas- Se dividió #n n#evo a!a$ MacCon?e" en = secciones " en cada #no se $esem5$ó cada #na de las coloniasPa$a $esem5$a$ la colonia se es(e$ili*ó el asa 5ac(e$ioló!ica al $o6o vivo " 1a$a en4$ia$la se s#me$!ió en el a!a$; se!#ido de .s(o se colec(o la colonia " se de1osi(ó de1osi(ó en la sección /#e le co$$es1ond)a co$$es1ond)a en el n#evo a!a$ 7es(o se $eali*ó $eali*ó 1a$a cada #na de las $esiem5$as8- Al 4inali*a$ la $esiem5$a se sella$on los a!a$ con mas?in! " se lleva$on a la es(#4a 1a$a la inc#5aciónPa$a 1$e1a$a$ el 4$o(is se lava$on 7con a!#a " 6a5ón8 " desen!$asa$on 7con !o(as de alcohol
TER$ERA #E#I/N& P$#e5as 5io/#)micas 1a$a en(e$o5ac(e$ias Pruebas de identificación bioquímica de los cultivos puros seleccionados seleccionados
Prueba Catalasa : rocedimiento.
2- Colo Coloca ca$$ #na #na !o(a !o(a de a!#a o9i!en o9i!enad ada a so5$e so5$e #n 1o$( 1o$(ao ao56 56e( e(os os con a"#da a"#da de #na #na 1i1e(a Pas(e#$ 3- S#s1en S#s1ende de$$ la la 5ac( 5ac(e$i e$ia a =- De(ec( De(ec(a$ a$ la 4o$mac 4o$mación ión de 5#$5# 5#$5#6as 6as Prueba Oxidasa: rocedimiento'
*' Pone$ #n ($o*o de 1a1el de 4il($o so5$e #n 1o$(ao56e(os3- De1osi(a$ De1osi(a$ #na 1o$ción 1o$ción del del c#l(ivo c#l(ivo " e9(ende$lo e9(ende$lo so5$e so5$e el 1a1el 1a1el 4il($o 4il($o =- Aadi$ Aadi$ 3 !o(a !o(a del del $eac( $eac(ivo ivo de de o9idasa o9idasa-Siembra en medios para pruebas bioquímicas:
*' Siem5$a en TSI 7medio inclinado colo$ ana$an6ado8 Con el asa 5ac(e$ioló!ica se (oma #n inoc#lo li!e$o del c#l(ivo 1#$o " se siem5$a en 4o$ma de #na es($)a a5ie$(a so5$e el :$ea inclinada del medio " se de6a inc#5a$2' Siem5$a en caldo #$ea 7caldo de colo$ $osa8& Con el asa 5ac(e$ioló!ica (oma$ #n inoc#lo li!e$o del c#l(ivo c#l(ivo 1#$o ; se s#s1ende en el caldo " se a!i(a el asa den($o de es(e- De6a$ inc#5a$ el (#5oSiem5$a 5$a en Ci($ Ci($a( a(o o de Simm Simmon onss 7Med 7Medio io incl inclin inad ado o colo colo$$ ve$de ve$de8& 8& Con Con el asa asa <' Siem 5ac(e$ioló!ica (oma$ #n inoc#lo li!e$o del c#l(ivo 1#$o " si.m5$alo en 4o$ma de #na es($)a a5ie$(a so5$e el :$ea inclinada del medio " de6a$ inc#5a$9' Siem5$a en caldo semisólido de SIM 7colo$ am5a$8& Con el asa 5ac(e$ioló!ica (oma$ #n inoc#lo li!e$o de c#l(ivo 1#$o " sem5$a$lo 1o$ 1icad#$a en el caldo semisólido " de6a$ inc#5a$ el (#5oH- Siem Siem5$a 5$a en cald caldo o Vo!es Vo!es P$os?a P$os?a#e #e$G $GRo6 Ro6o o de me(i me(ilo lo 7Col 7Colo$ o$ am5a am5a$8& $8& Con el asa 5ac(e$ioló!ica (oma$ #n inoc#lo li!e$o del c#l(ivo 1#$o; s#s1ende$lo en el caldo " a!i(a$ el asa den($o de es(e- De6a$ inc#5a$ el (#5o En la (e$ce$ sesión 1#dimos o5se$va$ el $e
En relaci(n a las muestras de las unidades $ua3imala 4 &erma de la UA+8 nuevamente no u)o desarrollo de )acterias 9= oras desu;s del cultivo' $UARTA #E#I/N& Lec(#$a de 1$#e5as 5io/#)micas 2- In(e In(e$1 $1$e $e(a (aci ción ón de las las 1$#e 1$#e5a 5ass de iden iden(i(i4i4ica caci ción ón 5io/ 5io/#) #)mi mica ca&& de(e de(e$m $min ina$ a$ los los $es#l(ados de las 1$#e5as 5io/#)micas 1a$a sa5e$ el me(a5olismo de la 5ac(e$ia iden(i4icada " as) sa5e$ s# 4amilia " es1ecie 3- Mane6o Mane6o de ma(e$ ma(e$ial ial con(am con(amina inado do
COLONIA 2
COLONIA 3
MOR'OLO0IA COLONIAL 'ORMA
LOULADO
ONDULADO
COLOR
LANCA
RO,O
ELEVACION
PLANA
PLANA
ORDE
INDE'INIDO
LANCO DEL0ADO
CONSISTENCIA
VISCOSA
VISCOSA
TAMAO
0RANDE
0RANDE
OPACIDAD
OPACO
<<<<<<<<<<<<<
SUPER'ICIE
IRRE0ULAR
IRRE0ULAR
MOR'OLO0A MICROSCÓPICA TINCIÓN 0RAM NE0ATIVA NE0ATIVA PRUEAS IO+UIMICAS CATALASA Posi(iva Posi(iva OXIDASA Posi(iva Ne!a(iva UREA Posi(iva Posi(iva Posi(iva Posi(iva Pico de 4la#(a $o6o " Pico de 4la#(a $o6o " TSI 7hie$$o ($i1le a*%ca$8 P$o4#ndidad ama$illoP$o4#ndidad ama$illoMedio AlcalinoGKcido Medio AlcalinoGKcido 7AlcGA87AlcGA8MOVILIDAD Posi(iva Posi(iva Ac- SUL'IDRICO Ne!a(iva Ne!a(iva INDOL Posi(iva Posi(iva RO,O DE METILO Ne!a(iva Ne!a(iva VO0ES PROSQAEUR Ne!a(iva Ne!a(iva CITRATO DE SIMMONS Posi(iva Posi(iva P$esen(a c$ecimien(o con P$esen(a li!e$o li!e$o cam5io de c$ecimien(o con cam5io colo$ación hacia #n (ono de colo$ación hacia #n a*#l ve$doso (ono a*#l in(enso
COLONIA = MOR'OLO0IA COLONIAL 'ORMA
LOULADO
COLOR
ROSA
ELEVACION
CONVEXA
ORDE
IRRE0ULAR
CONSISTENCIA
VISCOSA
TAMAO
MEDIANA
OPACIDAD
SI
SUPER'ICIE
IRRE0ULAR MOR'OLO0A MICROSCÓPICA
TINCIÓN 0RAM CATALASA
NE0ATIVA PRUEAS IO+UIMICAS POSITIVA
OXIDASA
POSITIVA
UREA 0LUCOSA
NE0ATIVA POSITIVO
LACTOSA
POSITIVO
SACAROSA MOVILIDAD
POSITIVO POSITIVO
Ac- SUL'IDRICO
NE0ATIVO NE0ATIVO
INDOL RO,O DE METILO
NE0ATIVO POSITIVO
VO0ES PROSQAEUR
NE0ATIVO
CITRATO DE DE SI SIMMONS
POSITIVO
TSI
0AS
3S
RM
VP
IND
AlcG A AlcG A
-
-
-
- G
-
-
-
-
C IT
URE
TRIBUTO I: GÉNERO : E.coli
GÉNERO:#i!ella "rupos! #,$,% S.Sonnei
TRIBU Ed&arsiellae
2: AlcG A
-
AlcG A
-
GÉNERO: Ed&arsiella E.'arda
TRIBU
-
<:
Salmonelleae
GENERO: Salmonelleae
TRIBU
9&
%itrobactereae
GENERO: %itrobacter %.freundii %.(oseri
TRIBU
AlcG A
-
AlcG
-
-
>:
Klebsielleae
GENERO: Klebsiella K.pneumoniae (.a)*toca
GENERO: nterobacter E.aerogenes E.cloacae
- G
-
G -
MOV
A
GENERO: !afnia AlcG A
+.alves
- G
-
- G
- G
G -
-
- G
-
GENERO: Pantoea AlcG A
P.agglomerans
GENERO: Serratia S. marcescens TRIBU ?: Proteeae
GENERO: Proteus
-
AlcG A AlcG A
-
G -
P. vulgaris vulga ris P.mirabilis
-
AlcG A
-
GENERO: "or#anella .morganii
AlcG A AlcG A AlcG A
GENERO: Providencia P.rettgeri
-
-
-
-
-
-
-
-
P.stuartii P.alcalifaciens
TRIBU $ersinieae
@: AlcG A
-
-
-
G -
GENERO: $ersinieae Y. enterocolitica
RE#U&TA%O#:
AlcG A
<
<
<
G<
CITRATO DE SIMMONS CRECIMIENTO OSERVACIÓN DE ACILOS A @9
DE
OSERVACION DE @X CALDO UREA
IERRO TRIPLE AYZCAR 7CRECIMIENTO DE LA ACTERIA8
LA
ACTERIA
COCOS
A
VP
CALDO SEMISOLIDO SIM CULTIVO ACTERIANO
RESIEMRA DEL
