Instituto Politécnico Nacional Escuela Superior de Medicina Materia: Bioquímica Médica I Práctica 5: Proteínas Equipo: 6 Integrantes:
Experimento 2. Reacción del Biuret Objetivo: Utilizando la reacción de Biuret, la
cual se realiza mediante una solución de sulfato de cobre (CuSO4) en una solución alcalina, diferenciar las proteínas de los aminoácidos, las soluciones contenedoras de proteínas se teñirán de púrpura o violeta debido al complejo de los átomos de cobre y su unión con los átomos de nitrógeno. Resultados y discusión:
De acuerdo a la coloración obtenida en cada solución, podemos asumir que las cuatro muestras contenían proteínas , lo que afirmamos según el conocimiento teórico. Podemos observar que el tubo que contenía peptona se tiñó más que las demás, el tubo con albúmina además de teñirse de color púrpura se le reconoce un aspecto aspecto turbio. Estos resultados resultados nos demuestran principalmente que en la solución existen enlaces peptídicos y la cantidad cantidad de color producido es proporcional proporcional a la concentración de proteínas.
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Ilustración 1. Reacción del Biuret en proteínas
1) Anote sus resultados en la tabla que se encuentra al final del capítulo
2) ¿Se puede considerar la reacción del Biuret como característica para todas las proteínas? Sí ¿Por qué? Debido a que las proteínas cuentan con dos o más enlaces peptídicos, la presencia de estos se pone de manifiesto al teñirse la solución de púrpura. 3) Escriba la reacción
Ilustración 2. Reacción del Biuret.
Bibliografía:
http://www.scribd.com/doc/62055042/Reaccion-de-Biuret Guarnizo F. A. Martínez Y. P. Experimentos de Química Orgánica. Con enfoque en ciencias de la vida.1ª ed. Ed. Elizcom. Colombia 2009. Pág. 183 Harper H. Química Fisiológica. 1ª reimp. Ed Manual Moderno. México. 1975. Págs.36, 52
Experimento 4.Reacción de aminoácidos azufrados Objetivo: Demostrar la presencia de azufre en las proteínas, es decir en los aminoácidos. Esto se
pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Esta reacción se basa en la separación mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre. Resultados y discusión:
Al realizar el experimento se obtuvo lo siguiente: la peptona, la caseína y la albúmina dieron un resultado positivo, la gelatina no. De acuerdo a los datos teóricos, el resultado de la peptona, caseína y la gelatina son correctos.
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La albúmina presentó un color más obscuro que los demás, debido a la concentración de azufre. 1) Anote sus resultados en la tabla al final del capítulo 2) Escriba la reacción química que se ha efectuado
Ilustración 3 Reacción de aminoácidos azufrados. Experimento
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La rehidrólisis alcalina con hidróxido de sodio. R-SH + 2 NaOHR-OH + Na2S + H2O De esta manera el sulfuro de sodio se encuentra libre para reaccionar con el acetato de plomo Na2S+ (Pb (CH3COO) 2) 2 CH3-COONa + PbS (precipitado) 3) ¿Qué sustancias pueden interferir en esta reacción? La cisteína, cistina y metionina Bibliografía:
http://www.euroschool.lu/prof.montilla/ficheroactivi/actividadesbio4_6/PPROTEINAS.pdf http://www.scribd.com/doc/40512891/A-a-Azufrados Melo V. Cuamatzi O. Bioquímica de los procesos metabólicos. 2ª ed. Ed. Reverté. México. 2007. Pág. 362 Tabla de resultados de algunas propiedades química de las proteínas REACCION Sustancia Biuret Aminoácidos azufrados Peptona
Positivo (+++)
Positivo (+)
Caseína
Positivo
Positivo (++)
Gelatina
Positivo (+)
Negativo
Albúmina
Positivo (++)
Positivo (+++)
Experimento 6.Precipitación de proteínas por metales pesados Objetivo: Observar el
precipitado de las proteínas peptona y gelatina y registrar su turbiedad.
Resultados y discusión:
Se pudo observar que la serie P, tuvo mayor turbiedad en cuanto a la reacción con FeCl 3 y con el acetato de plomo en comparación con la serie G. La peptona en presencia de HgCl 2 no presentó cambios en la Serie P.
Ilustración 4. Serie P
Ilustración 5 Serie G
1) ¿Tiene alguna influencia el pH en el efecto de los metales pesados sobre las proteínas? Si, ya que dependiendo de la proteína que se trate, el pH influirá para que las proteínas estén más allá de si punto isoeléctrico, ya que así son capaces de reaccionar con diferentes metales. 2) ¿Tienen todos los metales pesados el mismo efecto precipitante sobre las proteínas? Si ya que estos se fijan mejor a la proteína formando así los diferentes proteínados, los cuales son insolubles. Observaciones Serie P
Serie G
Tubos:
Metal Pesado Precipitado
Con exceso
Agregar 2 gotas de solución al 2% de:
Serie P
Serie G
Serie P
Serie G
1
1
FeCl3
xxx
x
xxx
xx
2
2
AgNO3
x
x
x
xx
3
3
HgCl2
4
4
Pb(CH3COO)2
xx
x xx
x
xx
xx
Bibliografía:
http://agu.inter.edu/halices/caseina.pdf W. Walter. Curso breve de química orgánica 1ª ed. Ed. Reverté. España. 1979. pag. 416 Harper H. Química Fisiológica. 1ª reimp. Ed Manual Moderno. México. 1975. Págs.36, 52
Experimento 8.Precipitación de proteínas por efecto del alcohol Objetivo: observar la desnaturalización de las proteínas efectuada por el
alcohol. Los alcoholes y la acetona son agentes desnaturalizantes de las proteínas ya que las deshidratan al competir por el agua de solvatación y por lo tanto las precipita Resultados y discusión:
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Ilustración 7
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Ilustración 6 alcohol de 96°
1) ¿Observa turbidez en todos los tubos?
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No se observó turbidez en todos los tubos, se encontró mayor cantidad de ésta en la albúmina con ácido tricloroacético y en la caseína con alcohol de 96°. Ni en la peptona ni en la gelatina se hubo precipitación, esto se puede deber a las condiciones de temperatura, la cantidad de solución o un error humano.
En la caseína se observa turbidez al fondo del tubo, en la gelatina no, en la albúmina y peptona se observa turbidez muy similar 2) Anote sus resultados en la tabla Agente sustancia
Ácido tricloroacético (CCI3COOH) al 5%
Alcohol de 96 ° (CH3CH2OH)
Peptona Caseína
x xx
Gelatina Albumina
xxx xx
xxx
xx
Bibliografía:
Tejión R. Fundamentos de bioquímica estructural. 2ª ed. Ed Tébar. España. 2006. Pág. 77 Vasudevan. D.M. Texto de Bioquímica para estudiantes de Medicina. 6ª ed. Ed. Cuéllar Ayala. México. 2011. Pág. 36 http://www.nutricionnatural.info/tipos/desnaturalizacion-de-las-proteinas.html
