Práctica 4. Determinación de acetaminofén en tabletas por HPLC
Objetivo •
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Llevar a cabo la identificación el principio activo Paracetamol en una forma farmacéutica comercial sólida, mediante el tiempo de retención obtenido en HPLC. Determinar la concentración del principio activo presente en la forma farmacéutica proporcionada, lo cual se utilizarás las áreas bajo la curva obtenidas con la sustancia de referencia muestra.
Resultados
Concentración teórica final de paracetamol en la solución de referencia en la solución de la muestra Peso promedio de !" tabletas # $44.% m& (l)cuota de ! mL (l)cuota * mL 'stándar !".+ m& !" mL -./ -./ !" mL -./ -./ *" mL ! m&# ".001 m& pureza/ "."!""% m& < mL Concentraciones teóricas de muestras uestra !# 2+.! m& (l)cuota ! mL $20.!* m& 333333333 *"" m& 2+.! m& 33333333333 # +*.!! m& *" mL -../ -../ *" mL -../ -../ # 0.010044mg/mL uestra + #2+.! m& $20.!* m& 3333333 *"" m& 2+.! m& 33333333 3333 333333 # +*.!! m&
ETA!"AR
%&ETRA 1
%&ETRA '
(l)cuota ! mL
*" mL -../ -../
*" mL -../ -../ # 0.0100044 mg/mL
RÉPLICA a/ b/ c/ a/
Tr 2.2*2 2.2*2 2.21% 2.2
%$ (5'( 6(78 6(78 L( C95:( !%*1**% !%$"+!* !%$"4"" !%2*$""
b/
2.2
%$!%20+41
"ER$
a/
2.2%2
!%"1*1*
#$ !%"$2$".*
b/
2.2
%$!%"4!2$
"ER$
Para cada porción de muestra tomada;
mg de (ara)etamol$ "C *Am /Are+ , Para la muestra ! +
mg (ara)etamol$ 10-1 .0100 *14'4 / 12'4, %g (ara)etamol$ 2.24 10 -4 mg
#$ !%*0%+4 "ER$ #$ !%2%4+4
"is)usi3 Co)lusioes La cromato&raf)a de l)=uidos de alta resolución HPLC/ puede llevar a cabo con una alta reproducibilidad en tiempos de retención área bajo la curva, la determinación de la concentración practica del paracetamol acetaminofem/. •
Cuestioario !. Defina los si&uientes términos; :olumen de elusión; 's el volumen de eluente re=uerido para causar la elusión. 6ajo condiciones normales de una mezcla conocida de los solutos en una cierta técnica, el volumen de elución puede ser suficiente información para identificar los solutos. •
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:olumen de columna; :olumen cero o muerto V0 o Vm/. 's el volumen de eluente =ue se consume sin =ue se detecte nin&>n componente. ?e define i&ual =ue el volumen de retención, pero el tiempo utilizado es el tiempo muerto;
@iempo muerto t " o tm/; 's el tiempo de retención del componente inerte o &as portador. @iempo de retención t r /; 's el tiempo transcurrido entre el instante en =ue se introduce la mezcla el instante en =ue se detecta la seAal propia del componente en su máima intensidad. Los tiempos de retención no son reproducibles, ni si=uiera en una misma columna cromato&ráfica. @iempo de retención relativo; 's la razón entre los tiempos de retención corre&idos del componente considerado, i, de otro, p, =ue se toma como patrón de referencia;
L)nea base; 's la porción del cromato&rama =ue re&istra la respuesta del detector cuando solo sale de la columna el &as portador. 5esolución; 's el parámetro =ue epresa el &rado de separación =ue se puede obtener en un sistema cromato&ráfico para dos componentes dados. 5elaciona la capacidad separadora de un sistema cromato&ráfico para dos componentes. ?e define como;
Donde Rs es la resolución,
t RA t RB son
los tiempos de retención de los componentes
A B,
a a son las ancBuras de los picos del cromato&rama de los anteriores componentes. A
B
La resolución puede observarse directamente sobre el cromato&rama de picos. ?e tendrá una buena resolución si los picos no se solapan, está perfectamente delimitado cada pico, sin =ue coincida el final de uno con el principio del si&uiente.
9na pobre resolución es debida principalmente a; o
o
o
o
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Ha demasiada muestra en la columna. La columna o placa es corta. La fase móvil no discrimina entre los componentes. La columna es demasiado &ruesa.
'ficiencia; Para definir la eficacia se utiliza el concepto de piso teórico, se define éste como la sección teórico3transversal en la cual se realiza el e=uilibrio de partición durante el flujo de fase móvil. Cuanto maor es el n>mero de platos teórico N / maor será la eficiencia de la columna. 'l n>mero de platos teóricos mide la capacidad de la columna para separar los componentes, no la retención de los mismos. La eficiencia o el n>mero de platos se puede observar directamente a partir del cromato&rama, observando la a&udeza de los picos. La eficiencia de una
columna
puede
determinarse
a
partir
de
un
pico
del
cromato&rama
mediante la si&uiente ecuación; Donde t5 es el tiempo de retención del pico !<+ es ancBo del pico medido a la mitad de la altura del mismo. +. Proporcione ejemplos de otros 2 fármacos =ue puedan determinarse por HPLC. (minofilina Dipropionato de 6etametasona -enobarbital • • •
2. Eué sensibilidad de detección puede alcanzar este métodoF 00.0G •
4. Eué contaminante puede encontrarse presente en Paracetamol acetaminofén/ materia prima como producto de de&radaciónF (demás de paracetamol, los demás componentes ecipientes/ son celulosa polvo, celulosa microcristalina, estearato ma&nésico, almidón de ma)z dióido de silicio, estos pueden ser contaminantes en la muestra. Los ecipientes son los componentes del medicamento diferentes del principio activo sustancia responsable de la actividad farmacoló&ica/. stos se utilizan para conse&uir la forma farmacéutica deseada cápsulas, comprimidos, soluciones, etc./ facilitan la preparación, conservación administración de los medicamentos. 's el >nico componente =ue puede diferir cuando comparamos un medicamento &enérico su e=uivalente de marca. *. Por =ué se re=uieren disolventes de alta pureza &rado HPLC, en cromato&raf)a de l)=uidos de alta resoluciónF Por=ue es un método mu sensible para obtener buenos cromato&ramas para =ue sea compatible con el detector, el &rado de pureza en el disolvente es importante para =ue este no modifi=ue su sensibilidad ni contamine la muestra a =ue si está contaminada puede producir picos indeseables. •
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$. Eué se entiende por un sistema isocrático uno en &radienteF Isocrático, el solvente conserva la misma concentración durante todo el tiempo de corrida muestreo o análisis/, sea =ue se trate de un solvente puro o de mezclas de solventes. Jradiente, lo cual si&nifica =ue la concentración del solvente utilizado var)a durante la corrida. 'sto depende del tipo de muestra, de columna de la necesidad del análisis de mejorar al&una separación depende del analista o investi&ador/. •
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