NORMA TÉCNICA COLOMBIANA
NTC 719 1994-10-19
ALIMENTO PARA ANIMALES. DETERMINACIÓN DE LA DIGESTIBILIDAD CON PEPSINA DE LA PROTEÍNA DE ORIGEN ANIMAL
E:
ANIMAL FOOD. DETERMINATION OF PEPSIN DIGESTIBILITY OF ANIMAL PROTEIN.
CORRESPONDENCIA: DESCRIPTORES: DESCRIPTORES:
alimento para animales; pepsina; proteína animal.
I.C.S.: 65.120.00 Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435 Prohibida su reproducción
Segunda actualización
PRÓLOGO
El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general. La NTC 719 (Segunda actualización) actualización) fue ratificada por el Consejo Directivo de 1994-10-19. 1994-10-19. Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación participación en el Comité Técnico 312201 Alimentos para animales. AGROINDUSTRIAS U.V.E. S.A. BASF QUÍMICA COLOMBIANA S.A. CONYCAL DE COLOMBIA FINCA S.A. GRASAS S.A. INDUSTRIA ARROCERA DE LA SABANA ITALCOL S.C.A.
INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO INSTITUTO DE MERCADEO AGROPECUARIO LLOREDA GRASAS S.A. MINISTERIO DE AGRICULTURA AGRICULTURA NUTRIANÁLISIS SOLLA S.A.
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales. DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
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NTC 719 (Segunda actualización) actuali zación)
ALIMENTO PARA ANIMALES. DETERMINACIÓN DE LA DIGESTIBILIDAD CON PEPSINA DE LA PROTEÍNA DE ORIGEN ANIMAL
1.
OBJETO
Esta norma establece un método cuantitativo para la determinación de la digestibilidad 1.1 con pepsina de la proteína de origen animal. El método por filtración que se describe en la presente norma es aplicable a toda proteína 1.2 de origen animal, pero no para proteínas vegetales o mezcla de ambos tipos.
2.
ENSAYOS
2.1
PRINCIPIO DEL MÉTODO
Consiste en someter la muestra previamente desengrasada a digestión durante 16 h con una solución ácida y caliente de pepsina, agitando constantemente. El residuo insoluble se separa por filtración, se seca y se le determina la masa, bien sea para calcular el porcentaje de residuo o bien para determinar el contenido de proteína no digerible; en el filtrado se cuantifica la proteína digerible.
2.2
APARATOS
Agitador Agitador mecán mecánico ico Microscopio (opcional) Tamiz ICONTEC de 1 mm (No.18) Embudo Gooch No. 4 Equipo para filtración al vacío Papel de filtro tipo Whatman No.2 o su equivalente Estufa con control de temperatura Erlenmeyer de 250 cm 3 de boca esmerilada con tapa. 1
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 2.3
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REACTIVOS
2.3.1 Solución al 0,002 % de pepsina Se disuelve pepsina de actividad 1:10 000 en ácido clorhídrico a 0,075 N y se calienta a una temperatura entre 42 oC y 45 oC. La solución debe agitarse suavemente hasta asegurar la completa disolución de la pepsina. Debe prepararse justamente antes de emplearse.
2.3.2 Alcohol etílico 2.4
PROCEDIMIENTO
2.4.1 Extracción La muestra se muele de forma que pase a través de un tamiz de 1 mm (No.18) y se somete a extracción por el siguiente método: a)
Se prepara un dedal extractor con papel de filtro tipo Whatman No. 2 o su equivalente
b)
Se determina una masa de 1,0 g ± 0,001 g de muestra, se coloca dentro del dedal y se extrae durante 1 h con éter a una velocidad de 3 gotas a 4 gotas por segundo. Si se utiliza un extractor tipo Soxhlet, la parte superior del dedal debe extenderse sobre el tubo de sifoneamiento para evitar la pérdida de partículas sólidas. Si el papel que contiene la muestra está totalmente sumergido en el sifón del extractor, la muestra debe estar completamente envuelta en el papel. Debe observarse que el solvente no arrastre partículas sólidas. Cuando se quiera calcular aproximadamente el contenido de grasa, se evapora el éter, se seca y se determina la masa del residuo
c)
Se retira del extractor el papel de filtro que contiene la muestra y se deja secar a la temperatura ambiente; se desenvuelve y mediante un pincel se transfiere cuantitativamente la muestra desengrasada al erlenmeyer de digestión (véase el numeral 2.2), evitando contaminaciones con las cerdas del pincel o las fibras del papel de filtro. Luego se continúa como se indica en el numeral 2.4.2.
2.4.2 Digestión con pepsina A la muestra muestra desengr desengrasada asada una una vez transfe transferida rida al frasco frasco agitad agitador or o erlenmeye erlenmeyerr de 250 cm cm 3, se le agregan 150 cm 3 de la solución de pepsina-ácido clorhídrico (véase el numeral 2.3.1) recién preparada y previamente calentada a temperatura de 42 oC a 45 oC; se tapa el frasco agitador o erlenmeyer, se coloca dentro del agitador a una baja velocidad para mantener una suave agitación y se incuba durante 16 h a una temperatura de 45 oC.
2.4.3 Determinación del residuo no digerible a)
Una vez finalizada la incubación, el contenido del frasco o erlenmeyer se filtra cuantitativamente a través de un papel de filtro tipo Whatman No.2 o su equivalente (previamente pesado), mediante un equipo para filtración al vacío. El residuo se lava con 3 porciones de 10 cm 3 de agua caliente. El filtrado se completa a un volumen de 250 cm 3 con agua destilada y se conserva para determinar la proteína digerible. 2
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA b)
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El residuo retenido en el filtro se lava con etanol y se succiona hasta sequedad. Se retira el papel de filtro con el residuo y se introduce en la estufa, que se ha calentado previamente a una temperatura de 105 oC ± 5 oC durante 30 min. Posteriormente se saca, se enfría, se determina la masa y se calcula el residuo no digerible. Nota. El residuo seco se puede observar al microscopio si se desea.
2.4.4 Determinación de la proteína digerible. Del filtrado obtenido en el numeral 2.4.3.a), se toma una alícuota, se deposita en el balón de kjeldahl y se determina la proteína digerida según el procedimiento descrito en la NTC 282. En forma paralela debe cuantificarse el contenido de proteína en un blanco de enzimas. 2.5
CÁLCULOS
2.5.1 La digestibilidad se calcula mediante la siguiente ecuación: A
% D =
B
x 100
Donde: =
porcentaje de proteína digerible
A
=
proteína digerida
B
=
proteína total
%D
2.5.2 El residuo no digerible se calcula mediante la siguiente ecuación:
% ND =
C E
x 100
Donde: % ND ND
=
porcentaje de residuo no digerible
C
=
residuo no digerido, en gramos
E
=
masa de la muestra, en gramos
Nota. Para el cálculo de la digestibilidad debe tenerse en cuenta el blanco de la proteína de la enzima.
3
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3.
APÉNDICE
3.1
NORMA QUE DEBE CONSULTARSE
La siguiente norma contiene disposiciones que, mediante la referencia dentro de este texto, constituye disposiciones de esta norma. En el momento de la publicación era válida la edición indicada. Todas las normas están sujetas a actualización; los participantes, mediante acuerdos basados en esta norma, deben investigar la posibilidad de aplicar la última versión de la norma mencionada a continuación: NTC 282: 1986, Métodos de ensayo para la harina de trigo.
3.2
DOCUMENTO DE REFERENCIA
AMER AMERIC ICAN AN OFFIC OFFICIA IAL L ANAL ANALITI ITICA CAL L CHEM CHEMIST ISTRY RY.. Peps Pepsin in dige digest stib ibilility ity of anim animal al prot protei ein n feed feeds. s. Filtr Filtrat atio ion n method final action. USA. AOAC Official Methods of Analysis 1990, 15 th Edition (AOAC 971, 09).
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