Práctica Núm. 1 MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN Y DE BARRIDO
1. OBJETIVOS Entender !" ti#!" de micr!"c!#$a %#tica & eectr%nica
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2. MA MAT TERIALES ERIALES Y MÉTOD MÉTODOS OS La #re"ente #ráctica "e e'% a ca(! en a )nidad de Micr!"c!#$a Micr!"c!#$a Eectr%nica* Eectr%nica* en d!nde "e !("er'% a #re#araci%n de m+e"tra" "encia" & e ,+nci!namient! de Micr!"c!#i! Eectr%nic! de Barrid! ! Ra"tre!. Materiae"
-!r -!re" e" de a" a" e"#eci e"#ecie" e" Petun "#. #et #et+ni +nia/* a/* Begonia semperflorens Petunia ia "#. Lin0 Ott! (e2!nia* (e2!nia* ,!r de a3úcar/ & Citrus 4 limon L./ O"(ec0 im%n rea/ -i2+ra 1/. E"tere!"c!#i! Ca5a" Petri Pince Pin3a" P!rta m+e"tra de c!(re Cámara i!ni3ad!ra de A+ I!n S#+tter 6-C711 6-C7 1188 88 6e!/ Micr!"c!#i! Eectr%nic! de Barrid! 6EOL 6SM 9:;8/ Cámara ,!t!2rá,ica de (!"i!
E materia (i!%2ic! ,+e c!ectad! e mi"m! d$a de a reai3aci%n de a #ráctica* &a <+e #ara a !("er'aci%n de #!en e" im#!rtante a"e2+rar"e de <+e e materia "ea ,re"c!.
Petunia "#.
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Citrus 4 limon L./ O"(ec0
Lin0 Ott! Figura 1. Especies manea!as.
Met!d!!2$a De(id! a materia & tiem#! re<+erid!" #ara a #re#araci%n de m+e"tra" en e MEB* en e"ta !ca"i%n & #ara ,ine" #ráctic!" "e decidi% tra(a5ar c!n #!en* &a <+e e"te materia "e #+ede !("er'ar en ,re"c!. Para e!* a #ráctica "e e'% a ca(! en tre" eta#a"= i. Primeramente e encar2ad! de a )ME* n!" di! +na #ática "!(re e ,+nci!namient! de Micr!"c!#i! Eectr%nic! de Barrid! MET/ & e Micr!"c!#i! Eectr%nic! de Tran"mi"i%n MET/* "iend! e #rimer! e <+e act+amente "e enc+entra ,+nci!nand!* mientra" <+e e "e2+nd! e"tará di"#!ni(e >a"ta mar3! de #re"ente a?!. MEB. E"te micr!"c!#i! tiene +n "i"tema de at! 'ac$! & a 2rande" ra"2!" c+enta c!n +n ,iament! de t+n2"ten!* "iend! e"te a ,+ente de eectr!ne" e 7/ #rimari!" cát!d!/* <+e "e caienta & ,!rma +na n+(e e@ctrica aceerada #!r +na di,erencia de #!tencia* e >a3 de eectr!ne" 'ia5a a tra'@" de +na" ente" eectr!ma2n@tica" <+e a a #ar 'an de"'iánd!! #ara a reai3aci%n de e"cane!. A"$* e >a3 de eectr!ne" c>!ca en a m+e"tra & de"'$a eectr!ne" "ec+ndari!" #r!cedente" de e"ta* !" c+ae" "!n canai3ad!" a +n detect!r* "e am#$a a ima2en 2enerada & ,inamente "e #r!&ecta a +na #antaa. MET. E"te micr!"c!#i! tam(i@n c+enta c!n +na cámara a 'ac$! e >a3 de eectr!ne" "e !(tiene caentand! e ,iament! de cát!d!* !" eectr!ne" "e aceeran a#icand! +n '!ta5e entre e cát!d! & e án!d!. E "i"tema %#tic! c!n"i"te en +n c!nden"ad!r <+e c!ncentra & diri2e e >a3 de eectr!ne" >acia e e"#@cimen +na ente !(5eti'! & !tra ente #r!&ect!ra* a" c+ae" en c!n5+nt! #r!d+cen +na ima2en a+mentada <+e "e #r!&ecta en +na #antaa ,+!re"cente ! +na #e$c+a ,!t!2rá,ica. ii.
Pre#araci%n de a m+e"tra a !("er'ar. En e"ta eta#a !" a+mn!" #artici#am!" acti'amente di'idid!" en tre" e<+i#!" & c!n e +"! de e"tere!"c!#i!" "e e4tra5! e materia 'e2eta a !("er'ar #!en de tre" e"#ecie"* +na #!r e<+i#!.
Petunia "#.
Begonia semperflorens Lin0
Ott!
Citrus 4 limon L./ O"(ec0
Se detectar!n !" 2ran!" de #!en #re"ente" en a" ,!re" #r!#!rci!nada"* #!"teri!rmente "e e4tra5! e #!en de a" antera" c!n a&+da de +n #ince & "e #+"! "+,iciente en +n #!rta m+e"tra de c!(re #!r e<+i#!* #!r ! <+e a ,ina "e !(t+'ier!n tre" m+e"tra". En "e2+ida e #!rta m+e"tra ,+e c!!cad! en +na cámara i!ni3ad!ra de !r! A+/ a +na c!rriente de 1 0 #!r 18 mA d+rante 18 min #ara <+e a m+e"tra de #!en <+edara rec+(ierta c!n +na ca#a de A+ de a#r!4imadamente 98 nm de e"#e"!r* & c!n e! "e >iciera c!nd+ct!ra de ener2$a. iii.
)na 'e3 i"ta" a" m+e"tra" de #!en* "e #r!cedi% a c!!cara" en e MEB.
Para e"t!* #rimeramente "e c!!car!n a" m+e"tra" en +na #atina* a c+a e"tá di"e?ada #ara c+atr! m+e"tra". En "e2+ida a #atina "e di"#+"! en e MET #ara e"tar a at! 'ac$! d+rante d!" min+t!"* e ,iament! de t+n2"ten! "e #rendi% & e MET e"t+'! ,+nci!nand! a 18 0* de"tacand! <+e a ma&!r 0i!'!ta5e >a& ma&!r re"!+ci%n. :. Re"+tad!" 1. Imá2ene" !(tenida" c!n e Micr!"c!#i! Eectr%nic! de Barrid! ! Ra"tre!. Petunia sp.
Begonia semperflorens Link & Otto
Citrus 4 limon L./ O"(ec0
. C!m#araci%n entre Micr!"c!#$a Eectr%nica de Tran"mi"i%n & Micr!"c!#$a Eectr%nica de Barrid! ! Ra"tre!. a. Caracter$"tica". La micr!"c!#$a eectr%nica de (arrid! MEB/ e" +na t@cnica <+e "ir'e #ara anai3ar a m!r,!!2$a de materiae" "%id!" de t!d! ti#!* tant! (i!%2ic!" c!m! metae"* c!n e4ce#ci%n de m+e"tra" $<+ida"* mientra" <+e e micr!"c!#i! eectr%nic! de tran"mi"i%n MET/ "ir'e #ara e"t+diar t!d! ti#! de materiae" "iem#re & c+and! c+enten c!n a #re#araci!n adec+ada & ten2an dimen"i!ne" dentr! de ran2! nan!metric! ! inc+"! "+(7micr!metric! )AEM7)NAM* 88/. Ademá"* en e MET "e !("er'a a tra'@" de e"#@cimen tran"7 i+minaci%n/* #!r ! <+e e >a3 de eectr!ne" atra'ie"a a a m+e"tra* acan3and! +na re"!+ci%n de >a"ta 8.:78. nm Nar'áe3* 88; Reimer & F!>* 88/* mientra" <+e en e MEB "e !("er'a a "+#er,icie de +n e"#@cimen "%id! e#i7i+minaci%n/* e"t! e" e >a3 de eectr!ne" n! atra'ie"a a m+e"tra* "i n! <+e !ca"i!na <+e !" eectr!ne" "ec+ndari!" re(!ten & "e #r!&ecten* en e"te micr!"c!#i! "e #+ede !2rar +na re"!+ci%n de >a"ta : nm Nar'áe3* 88; )AEM7)NAM* 88/.
(. Pre#araci%n de a m+e"tra= En e MEB #rimeramente a m+e"tra e" ,i5ada de ac+erd! a m@t!d!" e"tándare"* de"#+@" "e de">idrata mediante 'ari!" m@t!d!"* #er! +n! de !" má" +tii3ad!" e" e de de">idrataci%n #!r #+nt! cr$tic! en CO* en e c+a e a2+a #a"a rá#idamente de e"tad! $<+id! a 'a#!r "in e(+ici%n* n! "e +tii3a ac!>!* !" c!rte" #+eden "er 2r+e"!"* n! re<+iri@nd!"e en !ca"i!ne" de(id! a <+e ! <+e "e !("er'a e" a t!#!2ra,$a de a m+e"tra ,inamente* a m+e"tra e" re'e"tida #!r +na ca#a de 2ra,it! + !r! Nar'áe3* 88;/. En e MET e te5id! de(e "er ,i5ad!* end+recid! & #re"er'ad! c!n tetra%4id! de !"mi! O"OG/ & 2+tarade>$d!* c!n +n c+idad!"! mane5! de #H c!n cac!diat! de "!di!/* #ara mantener a" mem(rana" & a" #r!te$na" ce+are" en +na maa tridimen"i!na re"i"tente* de"#+@" "e c!ntra"ta c!n tetra%4id! de !"mi!* acetat! de +rani! ! citrat! de #!m!* en "e2+ida "e de">idratan c!n ac!>! a di,erente" c!ncentraci!ne" "e c!!ca en %4id! de #r!#ien! & re"ina" e#%4ica" ! acr$ica"* a" c+ae" "e end+recen & ,!rman +n (!<+e "%id! de #á"tic! m+& d+r! & ,inamente "e >acen !" c!rte" +tramicr%t!m! <+e #ermite re(anar e te5id! en c!rte" +tra,in!" c!n +na c+c>ia de diamante* !2rand! c!rte" de !rden de !" 188 nm Nar'áe3* 88;/. c. enta5a" & de"'enta5a"= La" 'enta5a" <+e !,rece e MEB re"#ect! a MET e" a ra#ide3 de a #re#araci%n de a m+e"tra* &a <+e en e #rimer! a m+e"tra #+ede e"tar i"ta en +n d$a* mientra" <+e a #re#araci%n de a m+e"tra de MET re<+iere >a"ta +na "emana. Ademá"* e MEB #ermite !("er'ar detae" en a t!#!2ra,$a. Mientra" <+e a" 'enta5a" de MET radica en e ni'e de re"!+ci%n <+e "e e2a a !(tener* #ermitiend! reai3ar e"t+di!" a ni'e nan!m@tric! c!n má" detae. :. A#icaci!ne" <+e #+ede tener a Micr!"c!#$a Eectr%nica de Tran"mi"i%n & Micr!"c!#$a Eectr%nica de Barrid! ! Ra"tre! en n+e"tra área de e"t+di! en #artic+ar= En e área de in'e"ti2aci%n de a nan!tecn!!2$a !" micr!"c!#i!" eectr%nic!" tienen 2ran im#!rtancia* &a <+e c!n a a&+da de e!" "e #+eden !("er'ar materiae" a e"caa nan!m@trica* #!r ! <+e en a "$nte"i" a"i"tida #!r #anta" "e +"a e MET #ara a caracteri3aci%n m!r,!%2ica de a" nan!#art$c+a" de metae" /. Ademá"* e MEB #+ede +tii3ar"e #ara e anái"i" de c!ntenid! de metae" en te5id!" 'e2etae"* #!r ! <+e #+ede a#!&ar d+rante +n e"t+di! de t!4icidad & re"i"tencia a metae". G. Otr!" ti#!" de micr!"c!#i!" & "+ a#icaci%n=
Micr!"c!#i! de -+er3a At%mica. E micr!"c!#i! de ,+er3a at%mica "ir'e #ara determinar t!#!2ra,$a anái"i" de "+#er,icie/ de m+e"tra" "%ida" & reati'amente #ana" & determinar #arámetr!" "+#er,iciae" tae" c!m! r+2!"idad. Tam(i@n "ir'e #ara determinar a m!r,!!2$a de a "+#er,icie de a" m+e"tra" )AEM7)NAM* 88/. Micr!"c!#i! c!n,!ca. Si"tema +tii3ad! #ara a ad<+i"ici%n de imá2ene" c!n,!cae" de ata caidad en c!rte" & !r2ani"m!" ,i5ad!" Inm+n!ci!t!<+$mica c!n >a"ta tre" ,+!r%,!r!"/ & en !r2ani"m!" 'i'!" a ca#t+ra "im+tanea de 'ari!" cam#!"* rec!n"tr+cci!ne" tridimen"i!nae"* tran",erencia de ener2$a entre ,+!r%,!r!" -RET/* e"t+di!" tem#!rae" de m!'imient! & e4#re"i%n de #r!te$na" I-C* ".,./. Micr!"c!#i! de ,+!re"cencia. La micr!"c!#$a de ,+!re"cencia e" m+& úti #!r<+e a m!@c+a ,+!re"cente* aún c+and! "ea m+& #e<+e?a* #+ede "er !("er'ada de(id! a a +3 <+e emite. L!" ,+!r!cr!m!" actúan c!m! ,+ente" de +3 de +n c!!r determinad! <+e #+eden "er !cai3ada" en área" e"#ec$,ica" de a m+e"tra <+e "e e"t+dia. E marca5e "eecti'! de m!@c+a" & !tr!" c!m#+e"t!" ce+are" "e reai3a mediante a t@cnica de inm+n!,+!re"cencia Nar'áe3* 88;/. G. C!nc+"i!ne" L!" micr!"c!#i!" eectr%nic!" #ermiten #r!,+ndi3ar c!n!cimient!" "!(re !" materiae" a e"caa" micr!m@trica" & nan!m@trica"* en c!m#araci%n c!n !" micr!"c!#i!" %#tic!"* !" c+ae"* #!r e"tar "+5et!" a !n2it+de" de !nda de a +3 'i"i(e G88788 nm* a#r!4imadamente/ n! #ermiten !("er'ar. L!" micr!"c!#i!" eectr%nic!" "!n de 2ran +tiidad* n! "%! #ara !" e"t+di!"!" de materiae" "%id!" in!r2ánic!"* "in! tam(i@n #ara !" in'e"ti2ad!re" de a" ciencia" a2r$c!a"* de(id! a <+e #ermiten !("er'ar a2+n!" c!ntenid!" de a" c@+a" 'e2etae"* ademá" de micr!!r2ani"m!" #at%2en!" & (en@,ic!" de 2ran im#act! en a a2r!n!m$a.
. Bi(i!2ra,$a In"tit+t! de -i"i!!2$a Ce+ar I-C/ 7 )NAM* ",. )nidad de Ima2en!!2$a. O(tenid! de "m(d.!r2.m4Jmicr!"c!#ia.#>#. 87871 Nar'áe3 Arma"* D. 6. 88;. La micr!"c!#$a >erramienta #ara e"t+diar a c@+a. O(tenid! de >tt#=JJKKK.medic.+a.'eJ>i"t!!2iaJane4!"Jmicr!"c!#Ke(JMONOEBJinici!.>tm. 87871 Reimer L. F!> H. 88. Tran"mi""i!n Eectr!n Micr!"c!#&= P>&"ic" !, Ima2e -!rmati!n. erman&. S#rin2er Science B+"ine"" Media. )AEM7)NAM. 88. Micr!"c!#$a. O(tenid! de CCIS Centr! C!n5+nt! de In'e"ti2aci%n en +$mica S+"tenta(e= >tt#=JJKKK.cci<".+aeme4.m4Jinde4.#># !#ti!nc!mQc!ntent'ieKarticeid;Itemid1. 87871 a'aeta M.* H. A.* ic>i" N.* A. R.* L%#e3 C.* L. M.* Arena" A.* 6.* Hana0! R.* . Cr!"(& .* M.M. 81:. La nan!ciencia & a nan!tect!!2$a= >erramienta" #ara medir ! dimin+t!* Agroproductividad, '!. 9.* n!. G* ##. 17:.
