1. Métodos de extracción Para lograr una concentración adecuada de los principios activos contenidos en las plantas y que su acción sea más efectiva es necesario realizar diversos procedimientos mediantes los cuales sean extraídos aquellos con solventes adecuados que se seleccionan de acuerdo a la solubilidad y la estabilidad que posean las sustancias beneficiosas. Los métodos de extracción permiten obtener los productos en formas farmacéuticas adecuadas para su administración oral o externa de acuerdo al lugar de acción que se recomiende. Estas preparaciones son conocidas como: decocciones, infusiones, extractos fluidos, densos o secos (según su contenido de líquidos) y las tinturas. Son conocidas también como preparados galénicos, en honor a Claudio Galeno precursor de la preparación de medicamentos a partir de los vegetales. A partir de estos procedimientos se han perfeccionado técnicas extractivas que permiten obtener las sustancias activa en forma pura para la elaboración más sofisticada de medicamentos en forma de tabletas, líquidos, ungüentos, cápsulas, etc, pero que no han logrado desplazar las preparaciones originales las cuales han tomado mayor auge en la actualidad, por su inocuidad y menores reacciones no deseadas. Las farmacopeas han incluido dentro de sus especificaciones regulaciones con fundamento científico para garantizar la calidad de estos preparados, los cuales no precisan de un control tan exacto como los medicamentos oficiales, pero deben observarse algunos cuidados en cuanto a la conservación y tiempo de almacenamiento. Es preferible su uso inmediato dado la facilidad de su elaboración y estar disponibles en cualquier momento a partir de la planta medicinal. Previo a los tratamientos de extracción la planta debe limpiarse con cuidado para evitar contaminaciones con otras plantas o partículas mecánicas ajenas al objetivo que es la extracción de las sustancias utilizando un solvente adecuado al cual llamaremos menstruo. Estas extracciones se diferencian de las soluciones verdaderas en que están presentes sustancias en suspensión.
Los principales métodos de extracción son: Maceración Percolación Digestión Infusión Decocción
2. Selección del método de extracción del analito de una manzana
1.
2.
3.
• Se utiliza un método por titulacion yodometrica que permite hallar la cantidad de vitamina c presente en frutas y verduras.
• el metodo de titulacion yodometria es uno de los mas eficazes para la determinacion de acido ascorbico en zumos de frutas y verduras
• hay diferentes meodos para hallar la vitamina c presente en la frutas y verduras.entre los que se encuentran :metodo de mohr,titulacion yodomeria,espectrofometria.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC) Los componentes básicos del sistema de .HPLC. son: la bomba, el inyector, la columna de separación, el detector y el integrador. La bomba sirve para mover la fase móvil en forma controlada y precisa a través del sistema. La muestra es introducida a la fase móvil a través del inyector donde el volumen a ser inyectado depende del tamaño del bucle loop. La columna es la herramienta de separación que se conecta entre el inyector y el detector. El material de empaque de la columna analítica depende del tipo de analito y las condiciones de separación. Hay rellenos basados en sílica y otros basados en polímeros orgánicos. Para la separación de ácidos orgánicos en alimentos se han utilizado resinas sintéticas orgánicas formadas de estireno y divinilbenceno emulsionados. El detector convierte los cambios en concentración del eluyente de la columna en señales eléctricas. Los más utilizados son detectores que se basan en espectrofotometría ultravioletavisible (UV-Vis) y fluorescencia, determinación del índice de refracción y análisis
electroquímico (Rounds y Gregory, 2003). El detector de absorción de rayos ultravioleta-visible mide la absorción de la radiación por compuestos que contengan cromóforos donde la magnitud de la señal es directamente proporcional a la concentración del analito. La señal electrónica provista por el detector pasa al integrador donde permite la cuantificación de los picos en un cromatograma.
3. Otros métodos de cuantificación de vitamina C
En la determinación de vitamina C en zumos de frutas se pueden usar diversas técnicas para la separación de la vitamina C de la muestra. Todas estas técnicas se incluyen en las operaciones previas del proceso analítico y tienen como objetivo: -Mejorar la selectividad, eliminación de interferencias. -Mejorar indirectamente la sensibilidad, preconcentración. Algunas de las técnicas de separación más usadas para la vitamina C son: cromatografía líquida (HPLC), utilizando una titulación con disolución yodo estándar, utilizando ácido metafosfórico y por fase sólida espectrofotométrica.
EXTRACCIÓN DE VITAMINA C CON ÁCIDO METAFOSFÓRICO Se basa en utilizar como extractante una disolución acuosa de ácido metafosfórico al 0,4%. El extracto se filtra y se purifica mediante extracción en fase sólida sobre C18.
SEPARACIÓN DE VITAMINA C UTILIZANDO YODO La vitamina C (ácido ascórbico) es un agente reductor que se puede determinar por medio de una titulación con solución yodo estándar. Como materiales y reactivos se utilizan: - Matraz aforado 250 mL - Pipeta aforada 10 mL - Yoduro potásico. - Pipeta graduada 10 mL - Tiosulfato sódico 0,1 N. (ver anexo) - Erlenmeyer 250 mL (2). - Acido Clorhídrico 37% - Bureta. - Almidón disolución al 1 % (ver anexo) - Mortero - Yodo 0,1N (ver anexo) - Dicromato de Potasio - Ácido Sulfúrico El procedimiento consiste en: Antes de iniciar el práctico se debe estandarizar el yodo •Tomar tres tabletas de vitamina C de 100 mg (Nota 1), y triturarlas con mortero.
•Pesar con exactitud toda la muestra y colocarla en un matraz erlenmeyer de 250 ml. •Disolver las tabletas en cerca de 50 ml de agua, agitar el matraz con movimientos circulares hasta la total disolución de las tabletas (Nota 2). •Agregar 5 ml de indicador de almidón y titular de inmediato (Nota 3) •Repetir dos veces el procedimiento anterior. Nota 1: 300 mg de ácido ascórbico deben necesitar cerca de 34 ml de I2 0,1 N para su titulación. Nota 2: Una cantidad pequeña del excipiente de las tabletas no se va a disolver y permanecerá en suspensión. Nota 3: Una solución de vitamina C se oxida con facilidad con el oxígeno del aire, así que la titulación debe realizar tan pronto como se disuelva la muestra Para los cálculos hay que tener en cuenta que ya que la molécula de vitamina C pierde dos electrones en esta reacción, su peso equivalente es la mitad de su masa molar, 88,07 g/eq. Preparación Solución de Yodo 0,1N: •Pesar en la balanza cerca de 12,7 gramos de yodo colocarlos en un vaso de precipitados de 250 ml. •Agregar en el vaso 40 gramos de yoduro de potasio y 25 ml de agua. •Agitar para disolver todo el yodo y transferir la solución a un matraz aforado de un litro, evitando el traspaso de yodo no disuelto. •Diluir hasta el aforo, y transferirlo a un frasco color ámbar (mantener alejada de la luz tanto como sea posible). Valoración de la Solución de Yodo: •Transferir alícuotas de 25 mL de la solución de Yodo en matraces de 250 mL y diluir hasta 50 mL. •Agregar 1 mL de ácido sulfúrico 3,0 M •Titular con el Sodio Tiosulfato hasta que la solución adquiera un color amarillo. •Añadir 5 mL de Indicador de Almidón. •Proseguir la titulación hasta que el color azul cambie a incoloro. •Calcular la normalidad como el promedio de tres titulaciones que no difieran en más de 0,2 mL. CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA Es una técnica analítica empleada para la separación, identificación y determinación de diversas sustancias basada en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles: -una fase fija o estacionaria (sólida o líquida). -una fase móvil (líquida o gas). Se basa en diferencias existentes en la velocidad de migración de los distintos componentes de
la muestra. Estas diferencias se establecen cuando los componentes de la muestra son arrastrados por la fase móvil a través de un soporte cromatográfico que contiene a la fase estacionaria. La fase movil es líquida. Se trabaja a temperatura ambiente, por lo que es ideal para compuestos inestables térmicamente. Permite realizar de forma sencilla muchas de las determinaciones tanto de macroconstituyentes (carbohidratos, lípidos,...) como microconstituyentes (vitaminas, aditivos, residuos,...). Hay etapas previas que incluyen la determinación del contenido de agua, así como la extracción y purificación de los extractos (muestras sólidas). Los sistemas de detección utilizados son prácticamente todos los disponibles (Absorción molecular UV-Vis (fila de diodos), Fluorescencia molecular, Índice de refracción, Conductividad, Electroquímico y Espectrometría de Masas).
1. De los resultados obtenidos establezca una comparación con la información teórica de contenido de vitamina C en la manzana La vitamina C pertenece al grupo de las vitaminas hidrosolubles, es decir es soluble en agua. Lo que significa que su exceso se elimina a través de la orina. Su más alta concentración en los órganos corporales se halla en las glándulas suprarrenales, partes de los ojos, músculos y grasa corporal. Es la vitamina más vulnerable ya que la destruyen múltiples factores como el contacto con el oxígeno, el agua clorada, el cobre de las tuberías, el contacto con la luz y el humo de los cigarrillos. El exceso de vitamina C no es peligrosa para la salud, pero puede provocar diarrea y ardores de estómago. El ácido ascórbico no es sintetizable por el organismo, por lo que se debe ingerir desde los alimentos que lo proporcionan: vegetales y frutas. Entre los principales alimentos ricos en esta vitamina tenemos los pimientos, y el escaramujo. También son muy ricos los cítricos: naranjas, limones, pomelos, etc... Otras plantas que poseen esta vitamina son: coliflor, rábanos, coles de Bruselas, espinacas, plátanos, manzanas, melones, sandías, zanahorias, piñas, peras, papayas, ajos, moras, apio, guisantes, fresas, frambuesas, grosellas, uvas, arándanos, higos, habas, patata, aguacate, soja, mangos, granadas y cocos. En esta tabla se observa la cantidad de miligramos (mg) de vitamina C presente en una porción de alimentos.
La dosis necesaria de esta vitamina es de 90 mg en hombres y 75 mg en mujeres. Estas dosis pueden variar de acuerdo a otros condicionantes o necesidades especiales. Estas necesidades especiales de ingestión de vitamina C son: - Fumadores activos y fumadores pasivos ( el humo destruye la vitamina C) - Diabéticos. - Alérgicos. - Personas mayores. - Embarazadas o lactantes. - Los que beben alcohol. - Los que toman habitualmente ciertos medicamentos ( cortisona, aspirinas, anticonceptivos, antibiótico.). Esta tabla muestra las dosis diarias recomendadas de vitamina C según la edad y el sexo.
2. Recomendaciones para evitar errores de la lectura de los resultados Extracción Durante todas estas etapas, debe protegerse la muestra de la luz para evitar el deterioro de la vitamina recubriendo los recipientes con papel aluminio.
3. Selección de la columna cromatográfica
4. Selección de la fase móvil
La selección de fase móvil para un sistema de fase reversa comienza con la elección del modificador orgánico. Las diferencias de selectividad y la retención de la muestra varían significativamente entre las fases móviles que contienen acetonitrilo, metanol y tetrahidrofurano (THF). La solubilidad de la muestra suele variar en estos disolventes y dictamina la utilización de disolventes específicos. La detección UV a determinadas longitudes de onda no es posible con algunos modificadores (por ejemplo, metanol a 200 nm).
5. Comparación del cromatograma obtenido con el de vitamina C
Preparación del zumo de fruta Exprimir una naranja o limón. Filtrarlo a través de una gasa. Puede utilizarse también zumos de fruta de venta en establecimientos comerciales. Para determinar el ácido ascórbico de los comprimidos de vitamina C, disolver una tableta que contenga 600 mg de ácido ascórbico en un litro de agua destilada.
solución
ppm
volumen (µL)
1
2
20
2
3
50
3
10
100
4
15
150
5
25
250
300 Y=9.553X + 8.916
250
área
200
150
100
50
0 0
5
10
15 concentraciónn (ppm)
20
25
30
