METODOLOGÍA
Lo primero que realizamos para llevar a cabo el experimento era ordenar el espacio donde debíamos trabajar y organizar el procedimiento y materiales que íbamos a utilizar. Luego, leímos la guía y anotamos los datos importantes para el experimento, entre ésos datos se encuentra los diferentes reactivos y el tiempo en que se realizaba cada procedimiento. Establecimos el objetivo del experimento que es extraer la nucleoproteína de la levadura a través de ciertos métodos de separación. El procedimiento se llevó a cabo así !. "samos una esp#tula esp#tula met#lica met#lica peque$a peque$a para extraer extraer la masa de la levadura indicada. indicada. %a %arareamos la balanza con el mortero que íbamos a utilizar. & le a$adimos levadura 'asta que alcanzara ( gramos. )espués trituramos la levadura 'asta alcanzar una textura m#s polvosa. *. En otro mortero mortero agregamos agregamos de !+ a !* portaobjet portaobjetos os y los trituramos trituramos 'asta 'asta lograr lograr un polvo de vidrio. vidrio. . -$adimos -$adimos !+ gotas gotas de éter y !+ gotas gotas de agua con un gotero gotero y adem#s adem#s le a$adimos a$adimos una cuc'aradita de arena de vidrio, y trituramos durante !( minutos. /. -gregamos -gregamos + ml de la solución solución 0'idróxido 0'idróxido de sodio concentrado concentrado al +,/12. +,/12. 3eguimos 3eguimos triturando triturando la mezcla con el pilón durante !( minutos m#s. (. -l terminar terminar de triturar, triturar, observamo observamoss que la textura de la mezcla mezcla era m#s uniforme. uniforme. 4epartimos 4epartimos la mezcla en tubos de ensayo, y lo colocamos en la gradilla para movilizarlo a la m#quina de centrifugación. 5. -l movilizarnos movilizarnos y localizar localizar la m#quina, m#quina, seguimos seguimos el consejo consejo de la profesora de labo laboratori ratorio, o, que consistía en mantener estable el soporte en donde colocamos los tubos de ensayos junto a otro grupo, es decir 'abían 5 tubos de ensayo y lo alineamos de manera que consigamos estabilidad en el soporte. -justamos el tiempo en !+ minutos a *(++ r.p.m y esperamos. 6ientras algunos miembros del grupo esperamos 'asta que se finalizara de centrifugar, el resto del grupo preparaba !*ml de solución de #cido acético al (1 con ayuda de una probeta graduada. 7. -l pasar los !+ !+ minutos minutos de centrifugació centrifugación, n, con ayuda ayuda de un gotero se extrajo extrajo de los tres tres tubos de ensayo, el sobrenadante 8la fase superior de la mezcla, la m#s liviana9 y se colocó en un vaso químico. :. 3e vertió vertió el #cido acético acético al (1 preparado preparado anterior anteriormente mente en el vaso vaso químico químico y con ayuda de un policial agitamos constantemente durante ( minutos 'asta observar un precipitado. ;. La mezcla dentro dentro del vaso vaso químico se se reparte nuevament nuevamente e en tubos de ensayo ensayo y se lleva a cabo otra centrifugación de !+ minutos a *(++ r.p.m. !+.
rico al (1 medido con una probeta graduada.
ricas. !. -gregamos * ml del 'idrolizado en un tubo de ensayo y por consiguiente con ayuda de otro papel p' tornasol lo neutralizamos a$adiendo de ( a 5 gotas de amoníaco concentrado.
*. )espués le agregamos +,( ml de solución de nitrato medidos con una pipeta graduada de plata en amoniaco al 1. )ebemos observar la formación de un precipitado blanco en forma de copos, éstos estar#n constituidos de nitrato de plata en amoniaco al 1. =inalmente, como >ltimo objetivo identificaremos el #cido fosfórico. 3e lograría al realizar por consiguiente éste paso !. En un tubo de ensayo se verter# * ml de 'idrolizado, lo cual se a$adir# ml de molibdato de amonio medidos con una probeta graduada o pipeta graduada y ! ml de #cido ascórbico medidos con los mismos instrumentos pero limpiados anteriormente. Luego se mezcla con un policial y se lleva a ba$o 6aría. 3e debe observar una coloración azul que nos indicar# la presencia de fosfatos.
RESULTADOS Aarte D )urante el experimento se llevaron a cabo varios procesos los cuales produjeron algunos resultados bastante favorables con respecto a la guía.
rico para 'acer una mezcla m#s diluida y poder transferirlo al Erlenmeyer. Aarte DD GGGLos resultados descritos a continuación son los posibles resultados de la DD parte del laboratorio de los nucleótidos ya que a>n no se 'an 'ec'oGGG Aara 'idrolizar las nucleoproteínas se divide la sustancia en varias partes y se 'acen varias pruebas, donde en el primero, se arma un equipo de reflujo donde se coloca la mezcla anterior que fue guardada y luego fue 'ervido, dejando una sustancia reducida el cual se dejó enfriar y luego se filtró para su an#lisis. 3e utilizó la prueba de ?iuret para el an#lisis de los péptidos y otra prueba de 6illon que se utiliza para el reconocimiento de la tirosina, ambas dan resultados positivos.
La prueba de ?iuret la conocimos en experimentos anteriores y este nos da un color violeta y la prueba de 6illon da un resultado de color amarillo. 3e da otra prueba conocida como =e'ling que también da positiva a un color amarillo óxido, el cual es utilizado para identificar las pentosas. En otra prueba utilizando amoníaco concentrado y se forma un precipitado blanco en forma de copitas. Este se da para la identificación de bases p>ricas. & se da una >ltima prueba con el objetivo de identificar el #cido fosfórico, en el cual se utiliza molibdato de amonio y acido ascórbico. -l indicar la presencia del acido fosfórico o fosfatos, este se torna un color azul.
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"%DLD-)C3 E@ L- D A-4%E
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ACLHC =D@C )E L- LEH-)"4-
DISCUSIÓN
D.
El éter m#s la arena de vidrio rompe los enlaces de 'idrógeno de las macromoléculas, para la posterior desnaturalización de las proteínas.
DD.
El 'idróxido de sodio no tiene parte en la reacción de la primera fase 8no se coagula9, pero permite que se realice posteriormente la prueba de ?iuret.
DDD.
En la primera parte de la centrifugación se obtiene en el sobrenadante
DH.
En este proceso la proteína no est# completamente desnaturalizada, por lo que se le agrega #cido acético y se agita.
H. HD.
3e centrifuga una vez m#s para obtener sólo la parte coagulada 8precipitado9 rico y el precipitado se inicia la 'idrólisis de la proteína, se calienta durante una 'ora. Kracias a estos dos factores comunes de desnaturalización juntos 8#cido, y calor9 podemos estar seguros que 'emos 'idrolizado las proteínas.
HDD.
La prueba de ?iuret, esta reacción se caracteriza por un color p>rpura, cuando los iones c>pricos son unidos por los enlaces peptídicos a pB alcalino.
HDDD.
La prueba de 6illon 8parte de mercurio en #cido nítrico9 lo cual produce nitrato de mercurio el cual en un medio fuertemente #cido reacciona con el CB de la tirosina8amino#cido9 produciendo una coloración roja intensa.
DM.
El reactivo de =e'ling 8sulfato c>prico m#s agua destilada9, se da en un medio alcalino para reconocer la existencia de az>cares reductores, dando una coloración roja amarilla de óxido cuproso.
M.
-l agregarle a la proteína 'idrolizada m#s nitrato de plata y amonio, en un medio alcalino, se forma un precipitado de color blanco 8sales de plata y bases p>ricas9.
MD.
El grupo fosfato se identifica por la reacción para fósforo inorg#nico, en medio #cido, con el molibdato da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el #cido ascórbico a azul de molibdeno, todo esto en un ba$o maría.
1. Explique en qué consise l! "esco#posici$n %i"&ol'ic! "e l!s nucleop&oe'n!s.
(. )*ué c!&!ce&'sic!s qu'#ic!s p&esen!n l!s %ison!s + l!s p&o!#in!s, Bistonas se unen iónicamente a los grupos fosfato del -)@ cargados negativamente. Dn vitro, •
•
esta interacción, se puede romper con +.( 6 de @a
-. )*ué c!&!ce&'sic!s qu'#ic!s p&esen!n l!s !l/#in!s + 0loulin!s, -lbuminas Aosee un pNa de :.( tiene un pB de : tiene un pD de /,;. Klobulina son un grupo de 'oloproteínas insolubles en agua, solubles en disoluciones • •
salinas, que se encuentran en todos los animales y vegetales.
. )C$#o explic!&'! use" un! p&ue! posii2! con el &e!ci2o Millon, )Cu3les 4ue&on sus &esul!"os con ese &e!ci2o, )C$#o explic! use" ese &esul!"o, "na prueba positiva con el reactivo 6illon me demuestra que la proteína se 'a descompuesto en su forma m#s simple, los amino#cidos. Los resultados con este reactivo en el filtrado 8proteína 'idrolizada9 fueron positivos. Este resultado se explica porque el reactivo reconoce la tirosina 8amino#cido9 ya que estos son los monómeros de las proteínas.
5. Mencion! !l #enos &es "i4e&enci!s "e l! es&ucu&! qu'#ic! en&e el DNA + el RNA !6 La pentosa del -)@ es desoxirribosa y la del -4@ es ribosa. 6 El -)@ y -4@ contienen tres bases nitrogenadas en com>n 8adenina, guanina, citosina9, difiriendo en timina 8-)@9 y uracilo 8-4@9. c6 La estructura del -)@ es de doble cadena 8mayor protección de la información genética9 y el -4@ es monocatenaria aunque puede ser lineal -4@m o plegada -4@t y -4@r. 86eza9
7. Con l!s p&ue!s &e!li8!"!s9 po"&'! use" i"eni4ic!& el ipo "e 3ci"o nucleico ex&!'"o "e l! le2!"u&!. Explique su &espues!. Si su &espues! es ne0!i2!9 &!e "e i"e!& un #éo"o que nos pe&#i! i"eni4ic!& el 3ci"o nucleico. @o podría identificarlo ya que solo se 'icieron an#lisis de proteínas sencillas, pentosas, bases p>ricas y #cidos fosfóricos. @inguna de estas pruebas discrimina alguno de los dos #cidos nucleicos. "na forma para identificarlo sería guelo y utilice el sobrenadante para identificar por medio de cromatografía descendente en papel O'atman no.! de un día para otro.
:. )C$#o explic!&'! use" l! si0uiene !4i&#!ci$n;
>. In2esi0ue l!s c!&!ce&'sic!s qu'#ic!s "e l! &ios! + "esoxi&&ios!. )?o& qué se "ice que son !8uc!&es &e"uco&es, La ribosa y la desoxirribosa son monosac#ridos, es decir, un 'idrato de carbono que no se puede descomponer en otros m#s simples por 'idrólisis. 3on alde'ídos con cuatro grupos 'idróxido 8CB9, que suele presentar estructura cíclica formando un anillo pentagonal 8forma PfuranosaQ9. El término R*SdesoxirribosaR puede referirse igualmente a dos enantiomeros el de importancia biológica )S*Sdesoxirribosa y a su inusual imagen especular LS*Sdeoxyribose.! La )S*S )esoxirribosa es un precursor del #cido nucléico -)@. La *S)esoxirribosa es una aldopentosa, eso es, un monosac#rido con cinco #tomos de carbono y conteniendo a un grupo funcional alde'ído. En solución acuosa, la desoxirribosa consiste primariamente de una mezcla de tres estructuras la forma linear BS8cares reductores, ya que al menos tienen un SCB 'emiacet#lico libre, por lo que dan positivo a la reacción con reactivo de =e'ling, a la reacción con reactivo de %ollens, a la 4eacción de 6aillard y la 4eacción de ?enedict. El 4eactivo de 6illon es un Ensayo químico que sirve para saber si existe tirosina en la solución, si esto es así se genera un co#gulo blanco que por calentamiento pasa al rojo carne. El reactivo de =e'ling, es una solución que se utiliza como reactivo para la determinación de az>cares reductores.
@. In2esi0ue l!s c!&!ce&'sic!s qu'#ic!s "e l!s !ses ni&o0en!"!s &el!cion!"!s con los 3ci"os nucleicos. Las bases nitrogenadas son compuestos org#nicos cíclicos, tienen dos o m#s #tomos de nitrógeno. Ustas forman la parte esencial de los nucleósidos, los nucleótidos, los nucleótidos cíclicos 8mensajeros intracelulares9, los dinucleótidos 8poderes reductores9 y adem#s los #cidos nucleicos.
?iológicamente existen seis bases nitrogenadas primordiales, las cuales se clasifican en tres grupos bases isoaloxazínicas 8derivadas de la estructura de la isoaloxazina9, como la flavina 8=9 bases p>ricas o purinas 8derivadas de la estructura de la purina9, como la adenina 8-9 y la guanina 8K9 y bases pirimidinas 8derivadas de la estructura de la pirimidina9, como la timina 8%9, la citosina 8<9 y el uracilo 8"9.
1.)Cu3l es el co#ponene no o&03nico "e los #ononucle$i"os, El componente no org#nico del mononucleótido es el #cido fosfórico, B AC/, debido a que no tiene enlace carbonoS'idrógeno.
