TEMA: INHIBICION DE LA HEMOAGLUTINACIÓN (IHA) CATEDRA:
VIROLOGÍA
ESTUDIANTE:
LEON MARTIN, OMAR RAMOS PACHECO JOHN CAMARENA INGAROCA CARLA SUAREZ MEZA FREDDY
CATEDRÁTICO:
LIC.TM. JUAN CORTEZ ALEJANDRO
CICLO:
VI
HUANCAYO - 2013
OBJETIVO
1. Aprender a desarrollar la técnica de Inhibición de la Hemaglutinación Hemaglutinac ión para determinar el título de un suero problema.
2. Aprender a interpretar los resultados resultados obtenidos obtenidos al realizarla realizarla prueba de IHA
INTRODUCCIÓN
Para realizar un diagnóstico definitivo se debe realizar una prueba que demuestre
una respuesta específica del huésped hacia este virus, virus, dicha dicha respuesta
está representada por la presencia de anticuerpos y la prueba empleada para ello se conoce como Inhibición de la Hemaglutinación Hemaglutinación (IHA). Esta prueba se basa en la unión de un anticuerpo específico hacia la hemaglutinina del virión que impida la formación de puentes entre el ligando viral y el receptor celular. celular. Este hecho permite permite identificar plenamente al virus virus y se conoce como neutralización vírica.
INHIBICION DE HEMAGLUTINACION
FUNDAMENTO Estas pruebas se basan en la capacidad de algunos patógenos (p.ej. el virus de la influenza) para causar la aglutinación de los eritrocitos. Pueden utilizarse para detectar el patógeno (pruebas de hemaglutinación) o los anticuerpos dirigidos contra las hemaglutininas del microorganismo (inhibición de la hemaglutinación). Suelen ser pruebas específicas de serotipo o subtipo y bastante sensibles. La inhibición de la aglutinación de los eritrocitos recubiertos con antígeno por el antígeno homólogo es un método sensible y específico para la identificación de pequeñas cantidades de antígeno soluble en la sangre o en otros líquidos de los tejidos. El principio de este análisis es que, el anticuerpo incubado previamente con antígenos homólogos solubles o de reacción cruzada, es «inactivada» cuando se incuba con eritrocitos recubiertos de antígeno.
APLICACIONES
Diagnostico presuntivo Catalogar cualitativamente la patogenicidad viral
MATERIALES
Solución salina fisiológica una tri av iar
Sangre total de pollo 2%-3%
Tubos 12 x 75 o 13 x 100(26 tubos por grupo)
Suero o plasma de pollo
Vacuna tri aviar
Espejo
Micro pipetas 10-100ml y de 100ml - 1000ml con sus respectivos punteros
Solución de hipoclorito de sodio 10000ppm
Guantes de látex
Guardapolvo
Mascarilla
Lentes
PROCEDIMIENTO 1.- Prepara dilución de la vacuna tri aviar que contenga 4UHA en volumen superficie para realizar la prueba (por duplicado).
Tubo:
½
Dilución:
¼
1/8
C1 . V1 = C2 . V2 X = 262.5ml
vacuna tri aviar + 5625ml de Na Cl
1/16
4UHA
2.-Realizar diluciones al doble del suero de pollo desde ½ hasta 1/1024 (obs. No agregar suero al tubo control) a. Agregar 300ul de SSF a todos los tubos incluyendo el tubo control. b. Dispensar en el pozo N º 1,300 ul de suero de de pollo y mezclar por aspersión y dispersión de 2-3 veces. c. Transferir 300 ul de esta dilución al pozo N º 2 mezclar de la misma manera que el paso b. d. Repetir sucesivamente este procedimiento hasta el tubo N º 10 que corresponderá una dilución 1/1024 desechar los 300 ul del tubo N 10.
300ul suero de ollo
300ul DECANTAR
300ul suero de ollo
300ul SSF
½
¼1/8
. . . . . . . . . .. . .
1/16
1/1024
Volumen dé cada Reactivo para realizar las diluciones Pozo a)SSF( µl) Dilución 2)4UHA
3 .Dispensar 300ul de agente viral Uha (vacuna a todos los tubos a excepción de tubo control. Homogenizar y dejar reposar x 10 min. 4. Agregar 300ul de GR. De pollo al 2-3% a todos los tubos sin excepción. Dejar en reposo a temperatura ambiente y lecturar cuando el tubo de control. Se produce en patrón de sedimentación.
La sangre sangre utilizada utilizada en la práctica fue de humano resultando la prueba prueba de titulación negativa en el doble procedimiento.
La cuarta unidad hemaglutinante (4 UHA) salió negativa.
Se dispenso dispenso el agente agente viral en seis de los 10 tubos
CONCLUSIÓN
La prueba salió negativa negativa por que una de las causas falta de tiempo en la práctica que no se pudo esperar el tiempo adecuado que repose el antígeno viral.
Tanto el 4 UHA como los demás salieron negativa.
Se dispenso dispenso 6 de los 10 tubos por falta de de contenido de agente agente viral en el envase.
PREGUNTAS 1. ¿Por qué usamos para para esta práctica práctica 4UHA de antígeno viral? ES IMPORTANTE LA CONCENTRACION VIRAL 2. ¿Por qué realizamos realizamos dilución seriada seriada del suero suero y no del Ag. Viral? POR LA CARGA VIRAL 3. ¿Por qué después después de dispensar dispensar el Ag. Ag. viral se deja reposar reposar a 10 min? PARA QUE HAYA UNA POSIBLE REACCION ENTRE EL Ag. VIRAL Y LOS ANTICUERPOS.
4. ¿la prueba es específica, sensible, específica específica y sensible, ninguna? ninguna? ES ESPECÍFICA
5. H.A se usa usa glóbulos rojos rojos humanos grupo o ?
ES POR QUE EL GRUPO O NO PRESENTA ANTIGENOS COMO LOS DEL GRUPO A, A, B, AB; QUE PODRIAN DAR DAR INTERFERENCIAS INTERFERENCI AS CON LOS ANTIGENOS DE LA PRUEBA DE IHA
