FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
dosaje etílico
toxicología i
rojas Villacorta maría elena
VIII
AVALOS mEREGILDO HERMIN
LECCA DEL AGUILA GABRIELA
RICCER CUEVA ROSSMARY
VILLANUEVA YEP KATHERINE
DOSAJE ETÍLICO
I. INTRODUCCION
El alcohol, vocablo derivado del árabe ALKUL significa originariamente lo más fino, el más delicado polvo, el cosmético de ojos. Su nombre químico es el de alcohol etílico (etanol) (C2H5OH). En adelante, siempre que hablemos de alcohol nos referiremos al etanol que se presenta en condiciones normales de presión y temperatura como un líquido incoloro e inflamable con un punto de ebullición de 78ºC. El alcohol es un líquido incoloro, que quema al paladar, con un peso específico de 0.79 (1 vol. % =0.8 gr%), y un punto de ebullición de 78.3º. El alcohol suele obtenerse por fermentación de azúcares, disociados en alcohol y CO2, por acción de levaduras. En su producción técnica, el alcohol se obtiene de la fécula, residuos de carbohidratos de la producción azucarera (melaza) o a partir de sulfuros alcalinos desprendidos en la fabricación de la celulosa. El alcohol es energéticos: 1 gr. Contiene 29,6 Kj. (Kilo joule), que es igual 7,07 Kcal. (1) II.- FARMACOCINÈTICA DEL ALCOHOL .
El alcohol se forma de modo endógeno en el organismo humano, aunque desde luego, en cantidades muy reducidas. Se estima que la máxima alcoholemia basal es de 0,015 0 / 00, estos valores son tan bajos, que caen dentro del espectro del procedimiento y pueden ser, por ello despreciados. El alcohol se absorbe relativamente de prisa por las mucosas, la absorción más lenta ocurre a nivel de la mucosa gástrica y la más rápida a nivel de la mucosa del intestino delgado. Tras su administración oral, el alcohol se absorbe en un 20% aproximadamente a través del estómago y el resto pasa por el intestino delgado. Todo aquello que retrasa el vaciado gástrico demora también la absorción del alcohol ingerido. Pequeñas cantidades de alcohol pueden ser ya absorbidas al cabo de 10 minutos.- Un fuerte consumo de tabaco y determinadas especies fuertes determinan el retraso de la absorción (inhibición de la motilidad gástrica, pilorospasmo.
La absorción depende de la concentración del alcohol: los alcoholes más concentrados se absorben más de prisa que los de menor concentración. En cualquier caso, la pared muscular del estómago ve limitada su función por la acción de líquidos cuya concentración supere 5%, con lo cual se demora el vaciado gástrico. Con el estómago lleno, especialmente después de una comida rica en grasas, desciende considerablemente la velocidad de absorción.-Dosis muy elevadas de alcohol provocan mediante el pilorospasmo, el retraso del vaciado gástrico. III.-DISTRIBUCIÒN DEL ALCOHOL .
Una vez absorbido, el alcohol es distribuido desde la corriente sanguínea y por difusión a través de los tejidos. Cuando todos los tejidos están bien vascularizados, sobreviene la rápida distribución (difusión) dentro del agua total del organismo, lo que determina la caída acelerada de la alcoholemia (caída de difusión). La distribución del alcohol en cada uno de los tejidos individualmente considerados varía mucho, y depende sobre todo de su contenido acuoso. Esto sólo es válido para la fase postabsortiva. Durante la fase de absorción, desempeña un papel considerable el grado de irrigación de cada órgano. La concentración hemática de alcohol alcanza su punto máximo a los 30-60 minutos de su administración oral. A continuación, la distribución se realiza de forma relativamente rápida y regular por todo el organismo. El alcohol atraviesa la placenta, lo que posibilita su paso al torrente circulatorio del feto. A los 60-90 minutos de la última ingesta de alcohol ha terminado su distribución por todo el cuerpo, desde éste momento, la concentración de alcohol en sangre se corresponde ampliamente con la de los tejidos. Esta depende de:
La cantidad de alcohol. La velocidad de absorción. El peso corporal o de la cantidad de agua del organismo. La cantidad de eliminación del alcohol.
El contenido alcohólico del cerebro se corresponde fundamentalmente con la alcoholemia. El ascenso y descenso de la concentración alcohólica en el líquido siguen, con cierta demora, a los correspondientes en sangre, la concentración alcohólica más alta tiene lugar en la corteza cerebral. La concentración enòlica en el hígado es especialmente baja esto se debe al elevado contenido hepático de alcohol deshidrogenasa (ADH). La concentración de alcohol en orina no guarda ninguna relación constante con la alcoholemia. Durante la fase de absorción, es más baja que en sangre. En la
fase de eliminación, el alcohol urinario es superior a la alcoholemia, desempeñando factores adicionales como: la diuresis y en el momento de la última micción. (3) IV.- METABOLISMO DEL ALCOHOL.
El alcohol ingerido produce sobre el organismo una acción DEPRESORA del Sistema Nervioso Central, aunque la opinión corriente sostiene que a pequeñas dosis dicho fármaco es un estimulante nervioso pues aumenta la actividad del sujeto, esa opinión es errónea puesto que estudios cuidadosos han demostrado que el alcohol es un depresor y que la aparente estimulación se debe a la LIBERACIÒN de los Centros Inferiores por depresión de los Centros Corticales superiores, que normalmente ejercen una influencia inhibidora sobre los primeros, en una palabra, se trata de una parálisis del freno. El efecto tóxico del alcohol, está en relación directa por:
Sexo de la persona. Edad de la persona. Cantidad de alcohol ingerido. Presencia de alimentos en el estómago de la persona que ha ingerido. Concentración de alcohol en la bebida que se ha ingerido. Tiempo en consumirse una cantidad específica de etanol.
La ingestión excesiva de alcohol durante periodos prolongados conduce a carencias en la nutrición y en otras necesidades orgánicas, lo cual complica por la aparición de trastornos psíquicos, complicaciones somáticas o la aparición de conflictos en sus relaciones interpersonales, sus funciones sociales y laborales. Desarrollándose un alcoholismo crónico en dicho sujeto, con la diferencia especial que en estos casos pueden llegar a desarrollarse secuelas morbosas tales como:
Hepatopatías. Hepatitis alcohólicas. Cirrosis hepáticas. Pancreatopatìas. Miocardiopatia alcohólica, etc.
V.-DOSAJE ETILICO .- Concepto.
El dosaje etílico es el procedimiento químico que determina concentración de alcohol por litro de sangre, expresada en gr/Lt, conocida como ALCOHOLEMIA. Si se sobrepasa el nivel de alcoholemia, que en el Perú se ha fijado legalmente en 0,5 g/l (cinco decigramos de alcohol por litro de sangre), se infringe la Ley. El dosaje etílico es una pericia toxicológica indispensable para demostrar que los accidentes han ocurrido a consecuencia de la ingesta de alcohol. La toma
de muestras (sangre, orina y otros) debe hacerse en el menor tiempo posible, a fin de obtener resultados que se ajusten a la realidad. Para la prueba de dosaje etílico, se puede utilizar sangre, humor vítreo, vísceras etc. El humor Vítreo es una muestra muy utilizada en la evaluación de la concentración de alcohol en casos de autopsia, por tener una concentración cercana a la sangre. El análisis cuali-cuantitativo de alcohol etílico en sangre constituye en la actualidad una de las prácticas más utilizadas en el ámbito de laboratorios forenses alrededor del mundo. En los últimos decenios el alcohol ha sido investigado en una gran variedad de matrices biológicas, tanto convencionales como no convencionales. Hemos podido confirmar en la literatura internacional su análisis en sangre, orina, contenido estomacal y pared estomacal, humor vítreo, fluido cerebroespinal, saliva, aliento, sudor, músculo, hígado (lóbulo izquierdo y derecho), cerebro, pulmón, corazón, riñón (izquierdo y derecho) bilis, y testículos. Sin embargo, la interpretación de los guarismos hallados permanece aún bajo debate en la mayoría de las muestras mencionadas, cuando debe determinarse si un individuo estuvo bajo los efectos del alcohol previo al óbito. La toma de muestra es, en nuestra opinión, el factor más importante que se debe considerar, habiéndose comprobado en nuestro medio ser fuente de la mayor parte de los errores que se cometen a la hora de interpretar el dato analítico. Muchos toxicólogos forenses continúan repitiendo con insistencia el adagio: “el
resultado de un análisis solo puede ser tan bueno como el tipo y estado de la muestra recibida”.
Probablemente la alcoholemia es la determinación mejor conocida y muchos autores sugieren su determinación inicial. No obstante, en revisiones recientes, algunos expertos opinan que la investigación en otras matrices puede conducir a una mejor interpretación sobre el real grado de impregnación en un individuo, pudiéndose detectar situaciones (especialmente en casos postmortales) que llevarían a una errónea conclusión si solo se dispone de datos de una sola matriz. (4)
II. OBJETIVOS Determinar la presencia de alcohol etílico mediante la prueba cualitativa. Determinar la Alcoholemia, mediante la prueba cuantitativa.
III. MATERIALES Y REACTIVOS PROCEDIMIENTO CUANTITATIVO a)
Material de laboratorio
b)
Baño maría Frascos de vidrio Pipeta semiautomática Tips (puntos de micro pipeta) Soporte para muestras Reactivos
H2SO4 Q.P. KMnO4 K2CrO7 H2O destilada
PROCEDIMIENTO CUALITATIVO a) Materiales de laboratorio
Frasco de 30 ml, de color blanco, con rosca Cañitas de plástico descartable (sorbetes) Pipeta de 10 ml
b) Reactivos
Ácido sulfúrico N/3 Permanganato de potasio N/10
IV. METODO Y FUNDAMENTO CUANTITATIVO Método Schefftel: modificado
Mezcla oxidante: Sulfocromica Oxidante 3C2H5OH + 2K2Cr2O7 + 8H2SO4
H2SO4 CC. Amarillo K2CrO7 Naranja 3CH3COOH + 2Cr2 (SO4)3 + 2K2SO4 + 11H2O Complejo coloreado
Fundamento: El análisis se basa en la acción oxidante de la mezcla sulfocromica (K2Cr2O7--- H2SO4) sobre el alcohol etílico con formación de ácido acético y sulfato crómico, cuyo color varía del amarillo al verde en forma proporcional a la concentración de alcohol etílico presente en la muestra, es medido en el espectrofotómetro o en el fotocolorímetro a 420nm de longitud de onda o con filtro azul respectivamente.
CUALITATIVO Fundamento: Se basa en la oxidación del etanol a ácido acético, por acción de la mezcla oxidante KMnO4 y H2SO4. La reacción se aprecia visualmente por la decoloración de la solución violeta de permanganato debida a la formación de sulfatos de Mn y K. V. PROCEDIMIENTO PROCEDIMIENTO CUANTITATIVO A. Realizar la curva de calibración Curva de calibración Sol. Madre: 4g………100mL
4g/100ml
1mL
X…………1mL
X= 0.04g/100mL
4g………100mL
4g
2mL
100ml
X…………2mL 4g………100mL
3mL
0.04g/1000mL
X= 0.08g/100mL
X= 0.12g/100mL
X…………3mL
0.4g/ 1L 4g………100mL
4mL
X…………4mL 4g………100mL
5mL
1mL
3mL
5mL
X= 0.16g/100mL
X…………5mL
7mL
9mL
10mL
o 0,4 0,8 0,12 0,16 2,0 2,4 2,8 3,2 3,6
4,0 g/L
X= 0.2g/100mL
B. Preparación de la solución madre Densidad del alcohol: D= 0.79/ml D=W V 0.79 = 4g V V = 4g 0.79 V = 5.06mL
5.1mL (Alcohol)
94.9mL (Agua)
Solución Madre
5.1mL (alcohol) C. Preparación Sulfocromica : 1L = 1000mL Pesar: 4.262g de K2CrO7…………. 500mL H2O Agregar: 500mL H2SO4 CC. Solo queremos 10mL de sol. Sulfocromica
0.04262g de K2CrO7 en 5mL de H2O más 5mL de H2SO4
Solución Sulfocromica
1. En 6 fiolas colocar: 1º fiola…………..1mL sol. Madre + 99mL H2O 2º fiola…………..3mL sol. Madre + 97mL H2O 3º fiola…………..5mL sol. Madre + 95mL H2O 4º fiola…………..7mL sol. Madre + 93mL H2O 5º fiola…………..9mL sol. Madre + 91mL H2O 6º fiola…………..10mL sol. Madre + 90mL H2O 2. 3. 4. 5.
En 6 frascos colocar 1mL de sol. Sulfocrómica En un soporte colocar 100ul de muestra de cada fiola Se realiza. 1 frasco blanco + 100ul H2O Luego llevar a baño maría todos los frascos a 90º x 10 – 15min.
PROCEDIMIENTO CUALITATIVO
(a) Ácido sulfúrico N/3 (b) Permanganato de potasio N/10
El reactivo (a) se prepara mezclando lentamente y por partes, 125ml de ácido sulfúrico Q.P. sobre 250ml de agua destilada refrigerada; esto aproximadamente para unas 200 pruebas y una duración de seis meses. El reactivo (b) deber ser de reciente preparación; se hace disolviendo 0.31605 g, en 100 ml de agua destilada, esto para unas 400pruebas aproximadamente, y una duración máxima de dos meses. TECNICA
En un frasco de 30 ml limpio y seco, colocar 2cc. Del reactivo (a) y añadirle II gotas del reactivo (b); agitar el frasco hasta que todo el líquido se torne violáceo. Enseguida hacer soplar por la cañita, burbujeando por un minuto, hasta por tres veces consecutivas. Debe evitarse que se coloque saliva en el frasco, porque puede dar falso el examen.
VI. RESULTADOS PROCEDIMIENTO CUANTITATIVO
Después que se retiró los frascos del baño maría se observó: Blanco
1mL
3mL
5mL
7mL
9mL
10mL
Azul Verdoso
El resultado nos dio una coloración azul verdosa en el frasco donde estuvo más incrementado los valores de alcohol etílico. Esto significa que hay una formación de sulfato cromoso (color azul verdoso), en forma proporcional a la concentración de alcohol existente en la muestra problema, la cual es susceptible de ser medida por cualquiera de los métodos fotométricos.
PROCEDIMIENTO CUALITATIVO
Si la solución de color violeta intensa se decoloro completamente el resultado es positivo, dando indicios que si existe ebriedad en la persona a analizar.
VII. DISCUSIÓN PROCEDIMIENTO CUANTITATIVO.
a.- Ventajas. Esta prueba se caracteriza por su sensibilidad, es decir mediante el Método de Schefftel Modificado se puede medir concentraciones mínimas de alcohol. Esta prueba permite la utilización de cualquier fluido orgánico (saliva, sangre, orina, humor vítreo). Este procedimiento es de bajo costo, comparando con los métodos biológicos para determinar alcohol. b.- Desventajas. Este método tiene el inconveniente de ser un análisis ciego, es decir que no se puede distinguir entre alcohol etílico y otras sustancias con radical OH, como por ejemplo el alcohol metílico. Requiere de profesionales experimentados, porque los resultados pueden dar cantidades excesivas (8 gr/Lt), lo cual demuestra que es una muestra contaminada, porque no existe organismo que pueda tolerar dichas concentraciones de alcohol etílico.
PROCEDIMIENTO CUALITATIVO
La realización de esta prueba es sumamente efectiva y contundente, ha sido demostrada por cromatografía de gases y fotocolorimetria; pero hay que tener cuidado de ciertas consideraciones como son: La de impedir que se introduzca dentro del frasquito saliva, ya que puede decolorar la solución dando lugar a falsos positivos o interpretaciones erróneas.
VIII. CONCLUSIONES Se determinó la presencia de alcohol etílico mediante la prueba cualitativa. Se determinó la presencia de alcohol mediante la prueba cuantitativa.
BIBLIOGRAFIA
1. Wamba Z., Ferrari L.A, Nieto RR, Arado MG, Colangelo CH, Nardo C, Sredcoff N and Stoichevich S. Incidence of drugs of abuse and alcohol in suicides occurred in the province of Buenos Aires in 1994, 1995 and 1996. Proceedings of 35thTIAFT Meeting. University of Padova. Pp.638641 (1997). 2. Ferrari L.A. Alcohol etílico: Aspectos toxicológicos forenses, cálculos retrospectivos y modificaciones postmortem. Bol. Asoc. Toxicol. Argent. 63, 9-15 (2004). 3. The Time Evolution of Drugs in the body, Journal of Chemical Education. 4. Manuel Litter. Tratado de farmacología. 4ta Edición. El Ateneo.1971.
