ICTIOPATOLOGIA

2011

DOCENTE

PRESENTADO POR: Y

SEMESTRE:

H

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

ICTIOPATO LOGIA Y PARASITOLOGI A

RESUMEN

La práctica se llevó a cabo el día 07 del mes de octubre a horas horas 9:30 am. en el laboratorio de Microbiología de la Facultad de Ciencias Biológicas en donde se realizó la preparación de medios de cultivo para posteriormente realizar aislamientos de bacterias y hongos, para tal fin se utilizaron cuatro agares diferentes, teniendo los siguientes agares: Caldo Brain Heart Broth ó Caldo Cerebro Corazón (BHI) se preparo en 6 tubos de ensayo cada uno de 10ml. el cual nos servirá para poder identificar Estreptococos, Meningococos, entre otros. Agar Mc Conkey preparado en 2 placas petri, este medio fue preparado con la finalidad de poder obtener coliformes. Agar Salmonella Shigella (SS) que fue preparado en 2 placas petri, este medio fue preparado para obtener Salmonellas y Shigellas. y finalmente se tubo la preparación de Agar Saboraud (AS) en 3 placas petri, este medio de cultivo se preparo para obtener el crecimiento de hongos. Todos los medios de cultivo fueron preparados con agua destilada.

YENY R. ALIAGA H.

2



1. INTRODUCCION INTRODUCCION

El reconocimiento de la nutrición microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. En general todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro nutrientes, aunque la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, asi como la cantidad relativa de cada nutriente. Un medio de cultivo es una solución acuosa en las que están presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento y multiplicación de los microorganismos en el laboratorio; con el objeto de aislar las diferentes especies bacterianas u hongos, para luego proceder a su identificación y llevar a cabo una serie de estudios complementarios. En los medios de cultivo empleados para la propagación de microorganismos deben prevalecer condiciones adecuadas de humedad. Son necesarios un medio húmedo y una atmosfera húmeda para un buen crecimiento de células vegetativas. De igual manera el pH o la reacción del medio de cultivo es extremadamente importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de estos prefieren medios que sean aproximadamente neutros, mientras que otros prefieren un medio que sea más o menos ácidos. La temperatura normalmente adecuada para el crecimiento de microorganismos mesofilos esta entre los 15 y 43 ºC. En cambio los microorganismos psicrofilos se desarrollan a 0ºC; y otros como los termófilos pueden crecer a 80 ºC. Los microorganismos patógenos en general, están limitados por una escala de temperaturas, comparativamente estrecha, alrededor de los 37 ºC, mientras que los saprofitos normalmente la tienen mucho mas ancha. Los medios de cultivo deben siempre almacenarse en atmosfera fría y humeda (refrigeracion) para evitar su deterioro y su deshidratación, preferentemente preferentemente en tubos con tapon de rosca o en botellas. Los tubos con medios que se han mantenido durante cualquier periodo de tiempo, de deben de calentar un poco antes de su uso. El medio liquido debe calentarse en un baño de agua hirviendo, o por corriente de vapor, durante unos minutos para que desaparezcan los gases disueltos, y después enfriarse rápidamente en agua fría, sin agitación, un momento antes de la inoculación. Los tubos de agar deben derretirse y dejarse solidificar a fin de asegurar una superficie humeda. Es recomendable guardar los medios en placas o en tubos dentro de bolsas de plástico selladas, asi es posible conservarlos entre 2 semanas y hasta 4 meses.

YENY R. ALIAGA H.

3



2. OBJETIVOS



Preparar medios de cultivo para la siembra de diversos microorganismos.

3. MATERIALES

3.1. MATERIALES DE BIOSEGURIDAD 







Mandil blanco: para poder proteger la vestimenta de cualquier reactivo o microorganismos que puedan impregnarse en ellos. Guantes de latex: para proteger la piel y evitar la contaminación por el contacto directo de las manos con los medios de cultivos. Gorro blanco: utilizado para evitar la contaminación del ambiente de trabajo por medio del cabello. Barbijo: para protegernos y proteger los medios de cultivo con diversos microorganismos.

3.2. MATERIALES DE LABORATORIO   









Agua destilada: empleada en la disolución del agar en el matraz. Matraz: utilizado para contener el agar y su disolución en él. Tubos de ensayo: con una capacidad de 10ml. los cuales fueron empleados para contener al medio de cultivo BHI. Placas petri: utilizados para contener medios de cultivo después de su disolución en el matraz. Balanza analítica: para pesar la cantidad en gramos de los medios de cultivo a preparar. Cocinilla eléctrica: empleado en la disolución del medio de cultivo ene l matraz al ser calentado mediante movimientos suaves. Cajita de papel: para pesar dentro de éste la cantidad de medio de cultivo a utilizarse.

3.3. MEDIOS DE CULTIVO 

  

Caldo Infusión Cerebro Corazón (BHI): ideal para el crecimiento de Estreptococoa, Neumococos, Neumococos, Meningococos. Medio selectivo para hongos. Agar Mac Conkey: ideal para el crecimiento de organismos coliformes. Agar Salmonella Shigella (SS): para el crecimiento de Salmonellas y Shigellas. Agar Sabouraud (AS): para el cultivo de hongos y levaduras.

4. REVISION BIBLIOGRAFICA

Según MENDO RUBIO, un medio de cultivo adecuado es aquel que contenga los elementos nutricios esenciales en concentraciones adecuadas, la cantidad necesaria de sal y el adecuado volumen de agua, se encuentra exento de sustancias inhibidoras del YENY R. ALIAGA H.

4



organismo que se va a cultivar, tenga la consistencia deseada, la reacción (pH) conveniente para el metabolismo del cultivo, y ser estéril. Hoy en di se dispone comercialmente de muchos medios de cultivos deshidratados, que son estables y se adaptan perfectamente a su empleo en el laboratorio, las recomendaciones básicas antes de preparar un medio de cultivo son: 











Los ingredientes deberán ser medidos en cantidad exacta y en un recipiente adecuado. Agregar el volumen de agua necesario, preferentemente preferentemente en dos partes. Agregar primero aproximadamente la mitad del volumen necesario para disolver los ingredientes, y se añade después el resto. El agua debe ser destilada o desmineralizada, de reaccion neutra. Si se trata de disolver un medio que contiene agar, será necesario el calor. No se recomienda el calentamiento sobre la llama, se debe preferir el empleo del baño María o de vapor. Una disolución completa se reconoce por la ausencia de granulos de agar en las paredes del recipiente. Para evitar la formación de agua de condensación, no deben verterse demasiado calientes los medios de cultivo a las placas sino después de enfriarlos a Tº entre 50 y 45ºC, en baño de agua. Los medios de cultivo deshidratados se fabrican de tal manera que, si se siguen las normas de preparación, no necesitan clarificarse clarificarse por filtración ni corregir de pH después de su esterilización. Pero es oportuno que después de su preparación listos para su uso, se compruebe su pH final. La esterilización de los medios de cultivo se pueden efectuar por calor, filtración o medios químicos.

El método normal para la inmediata esterilización de los medios de cultivo es utilizando el autoclave, en el cual el vapor de agua a presión es el agente esterilizante. La esterilización por autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presión (121ºC). se recomienda para medio liquido en cantidades superiores a 1 litro. El medio se prepara de acuerdo a su formula, se distribuyen en frascos que se tapan con algodón no absorbente o tapón tapón poco apretado y se colocan estos en autoclave.los autoclave.los tubos deben deben ponerse en gradillas o canastas. Los frascos nunca deben contener mas de dos tercios de su capacidad total. Según PANREAC (2002), El AGAR Mac Conkey: Historia

Este medio se basa en la fórmula original de MacConkey a base de sales biliares, rojo neutro y lactosa para el aislamiento de bacilos entéricos Gram-negativos. El medio ha YENY R. ALIAGA H.

5



sufrido múltiples variaciones en el transcurso del tiempo, ya sea por la adición de otros ingredientes o por la modificación de las proporciones entre ellos. Actualmente corresponde a las recomendaciones de la USP y la Ph. Eur. Fundamento

Por la presencia de las sales biliares y el cristal violeta se inhibe el crecimiento de las bacterias Gram-positivas. Por la presencia de la lactosa, las bacterias capaces de fermentarla acidifican el medio, cambiando el color del rojo neutro y formando colonias rojas o rosadas, pudiendo presentar un halo turbio correspondiente al precipitado biliar. Las bacterias lactosa-negativas dan colonias incoloras. INFUSION CEREBRO CORAZON, AGAR (BHI) Historia

Este medio se basa en el caldo de Rosenow. Los primeros estudios demostraron que el medio era más eficaz que otros como base glucosada en el aislamiento de determinadas bacterias. Si además se le añadía antibiótico el medio se hacía selectivo para el cultivo de levaduras y hongos, sobre todo en muestras altamente contaminadas por bacterias. Fundamento

Por la presencia de peptona, infusión de cerebro de ternera e infusión de corazón de res, se tienen los componentes necesarios para nutrir microorganismos exigentes. La glucosa se emplea para la fermentación y el fosfato como tampón. Por la adición de antibiótico es un medio adecuado para el estudio de hongos patógenos. Debido a su contenido de glucosa es menos indicado para la caracterización de hemólisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre. AGAR SALMONELLA SHIGELLA (SS) Historia

Hormaeche, Surraco, Hardy y otros han encontrado que la formulación de este medio es la mejor para el aislamiento de Salmonella y Shigella. Una de las principales aplicaciones es el diagnóstico de las enfermedades diarreicas debidas a estos gérmenes. La composición del medio permite detectar también la producción de Hidrógeno Sulfuro. Su formulación corresponde a las recomendaciones de la APHA para análisis de alimentos. Fundamento

Por la presencia de las sales biliares, verde brillante y citrato se consigue la inhibición de las bacterias Gram-positivas. Por el mismo citrato conjuntamente con el tiosulfato YENY R. ALIAGA H.

6



se frena notablemente el desarrollo de Coliformes y Proteus que podrían acabar cubriendo todo el cultivo. Las bacterias que no fermentan la lactosa dan colonias incoloras, mientras que las que la fermentan hacen virar el rojo neutro por la producción de ácido y quedan claramente diferenciadas. También se diferencian los microorganismos productores de Hidrógeno Sulfuro que da un precipitado negro de Hierro(II) Sulfuro, que se observa en el centro de la colonia. La peptona y el extracto de carne son aportes nutritivos suficientes para estas especies patógenas, aunque algunas Shigellas muy exigentes se desarrollen lentamente. AGAR SABOURAUD (AS) Fundamento

En estos medios la peptona es la fuente nitrogenada para el crecimiento de hongos y levaduras, el carbohidrato (glucosa o maltosa) es la fuente energética. La maltosa, cumple con los requerimientos nutritivos, de forma general, de hongos y levaduras patógenas y no patógenas. El medio Agar Maltosa Sabouraud también permite la diferenciación de Pseudomonas en poblaciones mixtas, ya que potencia la producción de piocianina. El Agar de Glucosa Sabouraud corresponde a las recomendaciones de la USP y de la Ph. Eur. para recuento de hongos y levaduras, ya que se trata de un medio que suministra todos los requerimiento nutritivos necesarios. El medio líquido de Sabouraud se prepara según los procedimientos oficiales para realizar pruebas de esterilidad. El crecimiento selectivo que se da en los medios Sabouraud que no contienen antibiótico, depende por completo del pH ácido de estos medios. Sin embargo, se recomienda la utilización de antibióticos de amplio espectro en muestras muy contaminadas. El Cloranfenicol inhibe la mayor parte de contaminantes bacterianos y la Cicloheximida inhibe el desarrollo de hongos saprofitos. Los medios de Sabouraud pueden ser adicionados con otros productos, para mejorar su selectividad: - Potasio telurito al 0,015% concentración final, inhibe el crecimiento bacteriano. - 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro a 100 mg/l, permite diferenciar Candida albicans de las otras Candidas. - Penicilina a razón de 20.000 UI/l, inhibe la mayor parte de bacterias. Pueden utilizarse otros antimicrobianos, así como indicadores que puedan hacer que el medio sea selectivo y/o diferencial. 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES RESULTADOS

Para la preparación de medios de cultivos primeramente se procede a pesar la cantidad que indica en el rotulo de cara frasco de agar. Naturalmente las indicaciones que se ven están indicadas en cantidades de gramos para la preparación en 1L de agua YENY R. ALIAGA H.

7



destilada, es asi que se realiza un calculo de regla de tres simple de acuerdo a los mililitros a utilizarse de agua destilada. PREPARACION DE MEDIOS: CALDO BRAIN HEART BROTH (CALDO CEREBRO CORAZON - BHI)

Para 1L de agua destilada se requieren 36.6 g. del medio BHI, el medio preparado se colocara en 6 tubos de 10ml cada uno haciendo un total de 60ml. entonces sólo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usará; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 

36.6 g. de BHI ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de BHI ------------- 60 ml. de agua destilada

36.6 x 60 X= ------------------1000

X= 2.2 g. de BHI en 60ml de agua destilada Se debe de pesar 2.2 g. de BHI y en una probeta medir la cantidad de 60ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla eléctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfríe un poco para luego distribuir en tubos de 10ml. en cada uno. Tapar con pequeños tapones (hechos de algodón, cubiertos con gasa y atados con pabilo), pabilo) , envolver los tubos con papel craft y autoclavar. AGAR MacCONKEY MacCONKEY

Para 1L de agua destilada se requieren 55.0 g. del medio Agar MacConkey, el medio preparado se colocara en 2 placas petri. entonces sólo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usará que será de 40ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 

55.0 g. de Agar MacConkey ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de Agar MacConkey ------------- 40 ml. de agua destilada

55.0 x 40 X= ------------------1000

X= 2.2 g. de Agar MacConkey en 40ml de agua destilada YENY R. ALIAGA H.

8



Se debe de pesar 2.2 g. de Agar MacConkey y en una probeta medir la cantidad de 40ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla eléctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfríe un poco para luego distribuir en 2 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar. AGAR SALMONELLA SALMONELLA SHIGELLA SHIGELLA (SS)

Para 1L de agua destilada se requieren 62.5 g. del medio SS, el medio preparado se colocara en 2 placas petri. entonces sólo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usará que será de 40ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 

62.5 g. de Medio SS ------------ 1000 ml. de agua destilada X g. de Medio SS ------------- 40 ml. de agua destilada

62.5 x 40 X= ------------------1000

X= 2.5 g. de Medio SS en 40ml de agua destilada Se debe de pesar 2.5 g. de Medio SS y en una probeta medir la cantidad de 40ml. de agua destilada y agregar agregar al matraz seguidamente seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver en una cocinilla eléctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfríe un poco para luego distribuir en 2 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar. AGAR SABOURAUD SABOURAUD (AS)

Para 1L de agua destilada se requieren 3.3 g. de glucosa (maltosa), 10.0g. de peptona y 16.6 g de agar; el medio preparado se colocara en 3 placas petri. entonces sólo se necesita una cierta cantidad en gramos del medio para la cantidad de agua que se usará que será de 60ml de agua destilada; para esto se realiza un calculo por regla de tres simple: 

3.3 g. de Glucosa (maltosa) --------- 1000 ml. de agua destilada  0.2 g./60 ml. 10.0 g. de peptona --------- 1000 ml. de agua destilada  0.6 g./60 ml. 16.6 g. de agar --------- 1000 ml. de agua destilada  1.0 g./60 ml. En total se deben de pesar pesar 1.8 g. de Medio AS en 60ml de agua destilada

Se debe de pesar 1.8 g. de Medio AS y en una probeta medir la cantidad de 60ml. de agua destilada y agregar al matraz seguidamente agregar el medio de cultivo, disolver YENY R. ALIAGA H.

9



en una cocinilla eléctrica y una vez disuelto el medio esperar a que enfríe un poco para luego distribuir en 3 placas petri, dejar enfriar un momento y plaquear. Tapar la placa, envolverla con papel craft y autoclavar.

YENY R. ALIAGA H.

10


YENY R. ALIAGA H.


11



DISCUSION

PANREAC, (2003) indica que el pH de los medios de cultivo se ajusta durante su fabricación a los valores descritos en cada uno de ellos. Sin embargo, la calidad del agua que se utiliza en su hidratación, la utilización de medios no recientes etc., pueden modificar este parámetro por lo que es aconsejable verificarlo y reajustarlo si fuera necesario. En algunos casos se puede ajustar el pH después de la esterilización de forma aséptica y utilizando soluciones ácidas (Acido Clorhídrico) o básicas (Sodio Hidróxido) estériles. En los medios sólidos la medida se hace a 45-50ºC (el agar todavía no ha gelificado) mientras que en los líquidos se hace a temperatura ambiente. Los medios ácidos (pH<5) pueden presentar malas gelificaciones debido a la posible hidrólisis del Agar con la temperatura. Son medios que no es aconsejable refundirlos, y si es imprescindible, es aconsejable añadirles agar. El método más comúnmente utilizado para la esterilización es el Autoclavado. Sin embargo, hay ingredientes en algunos medios que no mantienen sus propiedades si se someten a altas temperaturas. Para ellos existen diferentes procesos de esterilización. BAILON, et al., (2003) Un medio de cultivo es cualquier sustancia que puede ser usada para el cultivo de microorganismos, puede ser llamado un medio o dicho con mayor precisión un medio de cultivo. Los medios sirven para dos propósitos propósitos principales: Para fomentar el crecimiento microbiano en forma que puedan comprobarse las características de cultivo cultivo y. Facilitar algunas reacciones bioquímicas bioquímicas que luego pueden ser demostrables por observación directa, o bien, indirectamente por la reacción en presencia de algunos reactivos adicionales. Todas las reacciones de cultivo asi como las bioquímicas, dependen dela composición del medio y de la naturaleza de cultivo que se estudie. Los medios de cultivo pueden clasificarse en: medios de cultivo básicos; medios enriquecidos; medios selectivos, diferenciales y de enriquecimiento y los medios especiales. 6. CONCLUSIONES



Para la preparación de medios de cultivo se deben de tener en cuenta las indicaciones del rotulo que se encuentra en el frasco contenedor del medio de cultivo. Es asi que de acuerdo a las indicaciones y la cantidad de agua destilada que menciona en todos los rotulos que ha de ser 1L. por los gramos indicados, se procederá a preparar el medio de cultivo de acuerdo a la cantidad de agua destilada con la que se quiere trabajar realizando previamente un calculo de regla de tres simple para poder saber la cantidad de medio de cultivo que se ha de preparar.

YENY R. ALIAGA H.

12



7. RECOMENDACIONES RECOMENDACIONES



Es recomendable trabajar con medios de cultivo que aun no hayan caducado en la fecha de vencimiento, como también es muy importante tener en cuenta que en el momento de preparar los medios de cultivo se debe de trabajar con todas las normas de bioseguridad tanto para no contaminarnos ni contaminar los medios a prepararse con alguna sustancia o microorganismo que no se desee.

8. BIBLIOGRAFIA

BAILÓN L, L., GONZALES M, R. C. y CERVANTES S, A. 2003. 2003 . Atlas de pruebas bioquímicas para identificar bacterias. Universidad Autónoma de México. Facultad de Estudios Superiores de Zaragoza. 175 pág. PANREAC. 2003. Manual básico de microbiología. Editorial Panreac Quimica S.A. Cultimed. Madrid – España. 267 pág.

YENY R. ALIAGA H.

13



RESUMEN

La práctica se llevó llevó a cabo el día 12 del mes de octubre a horas 9:30 am. en el CIPPChucuito en donde se realizo el aislamiento de bacterias por el método de frotis en la superficie corporal de trucha arco iris mediante un isopo, el cual fue posteriormente introducido en tubos de ensayo con medio de cultivo BHI, luego estas muestras fueron llevadas al laboratorio de Microbiología de la Facultad de Ciencias Biológicas en donde se realizó la siembra en medios de cultivo selectivo Agar MacConkey para posteriormente realizar aislamientos de bacterias, se seleccionaron las colonias después de haber sembrado en Agar Mc Conkey por el método de estrias después de 48 horas de incubación para ser llevadas a incubar en medios bioquímicos diferenciales: TSI, LIA, CS e INDOL, pasadas las 48 horas de incubación se harán las lecturas correspondientes para identificar las especies de bacterias que se lograron obtener.

YENY R. ALIAGA H.

14



1. INTRODUCCION INTRODUCCION

Desde su producción hasta su consumo, los pescados y mariscos transitan por una serie de etapas en las cuales existe la posibilidad de que accedan diferentes microorganismos a la matriz alimenticia. La calidad y cantidad de los mismos definen las modificaciones que tienen lugar en el producto y sobre todo las consecuencias de su consumo por parte del hombre. Estas modificaciones pueden ir desde cambios inofensivos en las características organolépticas del alimento, hasta consecuencias graves causadas por las Enfermedades Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA). La carga microbiana de los peces vivos es un reflejo de la microflora de su entorno en el momento de su pesca o captura pero se modifica de acuerdo con la capacidad de los distintos microorganismos de multiplicarse en los subambientes que constituyen las superficies de la piel, las agallas y el tracto digestivo. El tejido muscular y los órganos internos de los peces sanos recién capturados son normalmente estériles, pero suelen encontrarse bacterias en la piel, caparazón quitinoso y agallas, así como en el tracto intestinal. El sistema circulatorio de algunos crustáceos no es cerrado, como la hemolinfa de los cangrejos, y puede albergar concentraciones elevadas de bacterias, especialmente del género Vibrio. La microflora del pescado de agua dulce en aguas sin contaminación aparente se compone principalmente de bacterias Gram negativas como Moraxella, Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, Micrococcus, Staphylococcus, Bacillus y Corynebacterium. Poseen una mayor proporción de bacterias Gram positivas que los pescados de mar. Aeromonas spp. constituye la especie predominante de la microflora. El pescado procedente de aguas dulces más contaminadas presenta mayores recuentos de esta especie y de enterobacterias. Los patógenos varían con la especie del pescado y la condición del agua. Se ha visto que Cl. botulinum se encuentra en truchas y salmones criados en balsas, de los cuales también se aislaron Salmonella, Listeria, Shigella y otros patógenos potenciales. Campylobacter jejuni se aisló de la superficie del pescado de agua dulce.

YENY R. ALIAGA H.

15



2. OBJETIVOS



Aislar bacterias patógenas en trucha arco iris ( Oncorhynchus mykiss) del CIPPChucuito

3. MATERIALES

3.1. MATERIALES DE BIOSEGURIDAD BIOSEGURIDAD 







Mandil blanco: para poder proteger la vestimenta de cualquier reactivo o microorganismos que puedan impregnarse en ellos. Guantes de latex: para proteger la piel y evitar la contaminación por el contacto directo de las manos con los medios de cultivos. Gorro blanco: utilizado para evitar la contaminación del ambiente de trabajo por medio del cabello. Barbijo: para protegernos y proteger los medios de cultivo con diversos microorganismos.

3.2. MATERIALES DE LABORATORIO      

Mechero Isopos Gradillas o canastillas Bisturí Asas de siembra Lapicero indelebre

3.2. MEDIOS DE CULTIVO 

 

Caldo Infusión Cerebro Corazón (BHI): ideal para el crecimiento de Estreptococoa, Neumococos, Meningococos. Medio selectivo para hongos. Agar Mac Conkey: ideal para el crecimiento de organismos coliformes. Pruebas diferenciales: TSI, LIA, CS, INDOL.

4. REVISION BIBLIOGRAFICA

Según CAMACHO, et al . (2009) indica que la definición generalmente aceptada para el término “coliformes” describe a estos microor ganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios facultativos que fermentan la lactosa con producción de ácido y gas, aunque algunos pueden ser fermentadores tardíos o no fermentadores, como Citrobacter y Serratia, respectivamente. La mayoría de los coliformes pueden encontrarse en la flora normal del tracto digestivo del hombre o animales, por lo cual son expulsados especialmente en las heces, por ejemplo Escherichia coli . Por esta razón, su presencia constante en la YENY R. ALIAGA H.

16



materia fecal, los coliformes son el grupo más ampliamente utilizado en la microbiología de alimentos como indicador de prácticas higiénicas inadecuadas. Como los coliformes también pueden vivir en otros ambientes, se distingue entre coliformes totales y coliformes fecales. Esta práctica se refiere a coliformes totales. Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44º C en vez de 37 ºC como lo hacen los totales. Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces están formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal. Éstos últimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas más elevadas. Esta es la característica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotérmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgánica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminación fecal. Su presencia se interpreta como una indicación de que los organismos patógenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades. 5. RESULTADOS Y DISCUSIONES

Para el aislamiento de bacterias primeramente se selecciono de un estanque un ejemplar un pez que presente heridas, se colocó al ejemplar en una tina las zonas muestreadas fueron la aleta caudal y aleta dorsal, se realizo un frotis con isopos y estos fueron colocados en los tubos de ensayo contenidos con el medio de cultivo agar MacConkey.

YENY R. ALIAGA H.

17



Posteriormente el isopo con la muestra obtenida se introdujo al tubo de ensayo, conteniendo 10ml. de Caldo BHI (caldo cerebro corazon), éstas fueron trasladadas al laboratorio.

Los tubos con el contenido; se llevan a la estufa d incubación a una temperatura de 20ºC x 24 a 48 horas. Terminado el tiempo de incubación se procede a la siembre en agares o medios selectivos: agar MacConkey; agar Salmonella Shigella. En condiciones de esterilidad (cerca del mechero) se realiza el isopado y se procede a realizar la siembre en placas en superficie por agotamiento o estrias en los agares.

YENY R. ALIAGA H.

18



Las placas sembradas se incuban a un temperatura temperatura de 25ºC x 48 horas

Se seleccionan las colonias trancurrido el tiempo de incubación y se incuban en medios bioquímicos y/o diferenciales: TSI, LIA, CS, INDOL y se incuban a 25ºC x 48 horas.

YENY R. ALIAGA H.

19



Transcurridas las 48 horas se procedió a identificar en generos y/o especies de bacterias

Muestra de aleta dorsal TSI: muestra una coloración amarilla en toda la estructura del tubo de ensayo por lo tanto hubo producción de acido: A/A LIA: ocurrió la descarboxilacion de la lisina (LIA (+)): K/K CS: presenta una coloración verde hubo utilización del citrato CS(-) INDOL: presenta un halo rojo en la parte superior después de la adicion del reactivo de kovacs, esto indica que es INDOL (+). 

Viendo las tablas para identificación de bacterias de determino que la bacteria aislada fue E. coli , teniendo las siguientes lecturas TSI LIA CS INDOL A/A K/K (-) (+)

Muestra de aleta dorsal TSI: hubo producción alcalina y acida K/A YENY R. ALIAGA H.

20



LIA: coloración roja y en la parte inferior producción de acido: R/A CS: hubo producción de gas (+) e hidrogeno sulfurado (+) por la coloración oscura en la parte inferior de tubo. INDOL: presenta un halo rojo en la parte superior por lo tanto se considera Indol (+). Recurriendo con los resultados a las tablas de identificación para poder determinar la bacteria encontrad encontrad se se tuvo es: Proteus vulgaris Teniendo: TSI K/A

LIA R/K

CS (+)

INDOL (+)

Muestra de aleta caudal TSI: hubo producción alcalina y acida K/A LIA: K/A con hidrogeno sulfurado (-) CS: (+) INDOL: no presenta un halo rojo en la parte parte superior por lo tanto se considera considera Indol (-) Recurriendo con los resultados a las tablas de identificación para poder determinar la bacteria encontrad encontrad se se tuvo es: Enterobacter sakasakii Teniendo: TSI K/A

YENY R. ALIAGA H.

LIA K/A

CS (+)

INDOL (-)

21



6. CONCLUSIONES



Las bacterias encontradas al realizar el muestreo por el método de frotis en los peces de la piscicultura del CIPP-Chucuito presentan contaminación fecal puesto que se encontró aparte de E.coli , bacteria del genero Enterobacter, especie Enterobacter sakasakii , el cual es un indicador de gran contaminación fecal que usualmente no debería encontrarse en un piscicultura que cuenta con la sanidad necesaria.

7. BIBLIOGRAFIA

AGURTO S, T. 2009. Microbiología. Bioquímica bacteriana. Enterobacteriaceae. Primera edición. Editorial Imprenta Union. Lima – Perú. 314 pág. CAMACHO A., GILES M., PALAO M., SERRANO B., y VELAZQUEZ O. 2009. Técnicas para el análisis microbiológico de alimentos. Segunda edición. Facultad de Quimica, UNAM. Mexico. Microbiología de pescados y mariscos. 2009. Microbiología de los alimentos. 31 pág.

YENY R. ALIAGA H.

22

ICTIOPATOLOGIA

Recommend Documents