Guía Bioquímica II 2014-I

MANUAL DE PRÁCTICA - BIOQUÍMICA II BIOQUÍMICA

FAC. FARMACIA Y

UNIVERSIDA NACIONAL “SAN LUIS GONZAGA”

FACULTAD FARMACIA Y BIOQUIMICA

A C I M I U Q O I B : A R D E T A C

GUIA DE PRATICA

AUTORAS: Dra. CHACALTANA RAMOS, Luz Dra. PARI OLARTE, Bertha Q.F. CHUMBES HUAMAN

ICA – PERÚ

Andrea.

FAC. FARMACIA Y BIOQUÍMICA

GUÍA DE PRÁCTICA - BIOQUÍMICA II

Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioquímica práctica son cada vez más estrechas y se complementan de una forma más evidente cada día, como se pone de manifiesto en esta “Guía Práctica de Bioquímica”. En este contexto de continuos avances en la bioquímica y por la patogenia de las enfermedades; que existe una amplia evidencia de la importancia que puede jugar la inflamación en el inicio y progresión de la enfermedad, así como los datos de “ recientes ” publicaciones que sugieren que ciertas infecciones

bacterianas o víricas podrían dar lugar al mencionado proceso inflamatorio. De aquí la importancia de las determinaciones analíticas, que el laboratorio nos puede proporcionar en la detección precoz y el estudio y conocimiento de la misma. Todo esto ha conducido a una nueva terminología para los avances de las fases aguadas de las enfermedades hoy en día. Esta es la novedad que aporta esta “guía de práctica ”, avalada por los trabajos

químicos y bioquímicos más recientes de la literatura médica. Se prosigue a un protocolo analítico simple y a unas determinaciones bioquímicas séricas rápidas y precisas. Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de un laboratorio de bioquímica en continua evolución y que incorpora en todo momento los últimos avances en determinaciones analíticas. Estos hechos benefician a nuestros alumnos siendo este nuestro objetivo desde siempre.

Las Autoras

Autores: L.CH.R / B.P.O. / A.CH.H

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Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioquímica práctica son cada vez más estrechas y se complementan de una forma más evidente cada día, como se pone de manifiesto en esta “Guía Práctica de Bioquímica”. En este contexto de continuos avances en la bioquímica y por la patogenia de las enfermedades; que existe una amplia evidencia de la importancia que puede jugar la inflamación en el inicio y progresión de la enfermedad, así como los datos de “ recientes ” publicaciones que sugieren que ciertas infecciones

bacterianas o víricas podrían dar lugar al mencionado proceso inflamatorio. De aquí la importancia de las determinaciones analíticas, que el laboratorio nos puede proporcionar en la detección precoz y el estudio y conocimiento de la misma. Todo esto ha conducido a una nueva terminología para los avances de las fases aguadas de las enfermedades hoy en día. Esta es la novedad que aporta esta “guía de práctica ”, avalada por los trabajos

químicos y bioquímicos más recientes de la literatura médica. Se prosigue a un protocolo analítico simple y a unas determinaciones bioquímicas séricas rápidas y precisas. Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de un laboratorio de bioquímica en continua evolución y que incorpora en todo momento los últimos avances en determinaciones analíticas. Estos hechos benefician a nuestros alumnos siendo este nuestro objetivo desde siempre.

Las Autoras


2



Al final de semestre del curso práctico el estudiante será capaz de explicar cómo funcionan los principales procesos metabólicos y los mecanismos moleculares que le subyacen a la función fisiológica de células, tejidos, y órganos del cuerpo humano, bajo distintas condiciones fisiológicas.

-

Se busca contribuir al logro de adecuadas condiciones del aprendizaje al estudiante en el área de bioquímica II perteneciente a la Facultad de Farmacia y Bioquímica.

-

Que el estudiante entienda los fenómenos fisiológico desde el punto de vista bioquímico y que sea capaz de integrar este conocimiento en la estructura fisiológica de la célula, del tejido y del organismo.

-

Que

el

estudiante

conozca

funcionamiento del organismo integral y,

los

mecanismos

bioquímico

del

humano de de una manera dinámica e

al mismo tiempo, comprenda cómo esos

mecanismos se

encuentran alterados en la enfermedad. -

Que el estudiante demuestre, mediante actividades, que ha podido integrar

el conocimiento a nivel bioquímico como una

herramienta

fundamental para la comprensión de los procesos fisiológicos y de la fisiopatología y con ello entienda los principios en los que se apoya la tecnología empleada en el diagnóstico de enfermedades. -

Que el estudiante aplique el método científico como una herramienta en la identificación, el análisis y la solución de problemas médicos.


3



Las prácticas de Bioquímica son una parte esencial en la formación de un alumno en esta materia. Para el buen aprovechamiento de las mismas es necesario leer con atención estas notas y en particular, cada práctica antes de entrar en el laboratorio.

1. Realizar las prácticas de Laboratorio con el debido interés y responsabilidad. 2. Lea cuidadosamente la Guía de Práctica y tenga en cuenta las indicaciones de los Profesores sobre el uso del material y equipo de Laboratorio, así como el orden, limpieza y seguridad que debe mantenerse. 3. El o la estudiante deberá acudir a todas las Prácticas de Laboratorio provisto de mandil blanco con su respectivo logo de la facultad. 4. Por cada Práctica de Laboratorio, cada mesa de Trabajo presentará un único informe, el cual consta de las siguientes partes: Introducción, objetivos, resultados, discusión de los resultados, conclusiones, cuestionario y bibliografía. Debiéndose presentar a la semana siguiente en el horario y grupo respectivo que le corresponda; ò ciertos informes de práctica puede ser entregados en el mismo

día de la práctica

realizada. La presentación del informe será con letra clara y legible desarrollado a mano. 5. El inicio de la práctica es en la hora exacta programada. Se tendrá una tolerancia de 5 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se tendrá derecho a Nota de informe de prácticas. 6. Las

inasistencias

a

las

Prácticas

de

Laboratorio

NO

SON

RECUPERABLES EN NINGUNO DE LOS GRUPOS, por lo tanto dichas faltas deberán de ser justificadas con un máximo de una (01) semana.


4



7. Cada Alumno será integrante de una Mesa de Trabajo, a la cual pertenecerá a lo largo del Semestre Académico. 8. Por mesa de trabajo, será nombrado un responsable del material y equipo recibido. 9. Al iniciarse la práctica, el responsable de mesa canjeará su Carnet Universitario, por el material y reactivos a utilizarse en la práctica. 10.En caso de daño, deterioro o pérdida del material y equipo, el responsable de mesa informará del hecho al Profesor. TODO EL GRUPO ES RESPONSABLE DEL Daño CAUSADO y deberá repararlo en la brevedad posible, no máximo de una (01) semana después del incidente, con la detención de sus Carnet Universitarios. 11.Al final de la Práctica, se procederá a limpiar el material usado, con el fin de entregarlo en las mismas condiciones en las que fueron recibidos. 12.Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolverá a la persona encargada de laboratorio y procederá a recibir su Carnet. 13.El laboratorio deberá quedar completamente limpio, las mesas secas y limpias, debiendo arrojar todos los desechos al tacho de basura.


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El carbohidrato más importante en la alimentación es la glucosa, la cual ingerimos bajo la forma de disacáridos (maltosa, sacarosa y lactosa) o de almidón, polisacáridos formados por muchas moléculas de glucosa. El almidón es el constituyente esencial de cereales, leguminoso, tubérculos y raíces. La digestión de los carbohidratos se produce gracias a las enzimas digestivas producidas por la glándula salivares, el páncreas y la pared intestinal. Estas enzimas son: o

La alfa amilasa salivar

o

La alfa amilasa pancreática

o

La amilo 1,6 glucosidasa de la pared intestinal

Las alfa amilasas son enzimas que actúan a pH neutro y en presencia de iones cloro. Rompen los enlaces amilo 1,4 dando como resultado oligosacáridos y glucosa. Los carbohidratos se comienzan a digerir en la boca por acción de la α-amilasa de la saliva líquido orgánico segregado de modo reflejo ante la

presencia de la comida.

La α-amilasa también llamada ptialina, cataliza la

hidrólisis de las unidades glucosa a nivel del enlace glucosidico α-1,4. Existen dos formas de evaluar la actividad enzimática e la amilasa: o

Por desaparición de sustrato: forma como desaparece el almidón el que se aprecia por la reacción del lugol.

o

Por formación de producto: forma como desaparece carbohidratos reductores (glucosa) en el medio, los que se aprecian por reducción del cobre.

En nuestra practica evaluaremos la actividad enzimática de la amilasa obre el almidón mediante la reacción del remanente de almidón frente al yodo a mayor decoloración, mayor actividad enzimática.


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-

Comprender la importancia de la acción de la α -amilasa

-

Interpreta la acción de la α-amilasa

-

Comprender la importancia de la digestión de carbohidratos

-

Determinar cuantitativamente la actividad amilasa

- Baño de agua o baño maría - Espectrofotómetro

- Probetas de 100m - Probetas de 50 ml - Pipetas de 2 ml - Pipetas de 1 ml - Pipetas de 5 ml - Pipeta de 10 ml - Fiola 100 ml - Vaso de precipitado 250 ml - Gradilla para tubos de ensayo - Tubos de ensayo - Propipetas - Celda para espectrofotómetro - Vasos descartables - Materiales de limpieza

- Almidón - Buffer fosfato pH 6,6 - HCl - Suero fisiológico - Agua destilada


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: Digestión del almidón por la amilasa salivar. 

Para la experiencia preparar cuatro tubos de ensayo de acuerdo al siguiente esquema:

TUBO

1

2

3

4

ml Almidón 1%

2

2

2

2

6,6

1

1

1

0

ml HCl 0,3 N

0

0

0

3,4

ml Suero Fisiológico

3

2,4

0

0

ml Agua Destilada

0

0

2,4

0

ml Buffer fosfato pH

Colocar en baño maría a 37°C por 5 minutos. Luego agregar:

ml solución de saliva

0

0,6

0,6

0,6

Colocar en baño maría a 37 °C por 20 minutos.



Pasado este tiempo tomar 0,5 ml de cada tubo y preparar cuarto tubos más de acuerdo al esquema:

TUBO

1

2

3

4

ml digestión tubo 1

O,5

0

0

0


O

0,5

0

0


0

0

0,5

0


0

0

0

0.5

ml HCl 0,05N

5

5

5

5

0,5

0,5

0,5

0,5

ml solución de yodada



Dejar en reposo por 15 minutos, luego leer al fotocolorímetro con filtro rojo (660nm).


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-


Grafique la curva de calibración de A490 nm vs [azúcar] M.

COMENTARIO: …………………………………………


9



1. Realizar los cálculos para las soluciones utilizadas en prácticas. o

Almidón 1%

o

HCl 0,3 N

o

HCl 0,05 N

2. Dibujar un esquema sobre la Digestión de los Carbohidratos


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La glucosa es la principal fuente de energía en los seres vivos. Por tal razón es un metabolito fundamental en los procesos biológicos. La determinación cuantitativa de este compuesto, ha sido objeto de muchos estudios y la literatura ofrece diversas técnicas de análisis que varían de acuerdo con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los contenidos de glucosa y la viabilidad experimental. El Método enzimático para la determinación de glucosa en sangre y otros líquidos biológicos Fundamento del método: El esquema de reacción es el siguiente:        ⃗                ⃗ 


     

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Determinar por espectrofotometría el contenido de la glucosa en

-

suero y/o en plasma sanguíneo humano. -

Comprender la importancia de la glucosa

-

Determinar cuantitativamente la determinación de la glucosa

Espectrofotómetro Centrifugas Micropipetas Baño maría Materiales

-

Tubos de ensayos

Propipetas

Tubos de centrifugación

Jeringa de 5 cc

Pipetas graduadas 5 ml

Aguja de 21

Pipetas graduadas 2 ml

Ligadura

Gradilla para tubos ensayos

Algodón y alcohol

Varilla de vidrio y/o baguete

Materiales de limpieza

Kit de glucosa: o

Estándar: solución de glucosa 1gr/l

o

Enzima: viales conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF).

o

Buffer: buffer fosfatos pH 7.0 conteniendo hidroxibenzoato.

o

Concentraciones finales: 

GOD ≥ 10 KU/L



POD ≥ 1 KU/L



4-AF : 0.5 mM



Fosfatos: 100 mM, pH 7.0



Hidroxibenzoato: 12 mM


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-


RECOLECCIÓN DE MUESTRA: Se debe obtener suero o plasma de la manera usual. También es posible realizar la determinación en líquido cefalorraquídeo. Además, cuando no es posible extraer sangre venosa o en casos de extrema urgencia, la determinación se puede realizar en sangre capilar. o

Aditivos: En caso de que la muestra a emplear sea plasma, se recomienda el uso de anticoagulante G.

o

Estabilidad e instrucciones de almacenamientos: los hematíes y leucocitos son los responsables de la destrucción enzimática de la glucosa sanguínea, siendo máxima a 37°C, razón por la debe centrifugarse la sangre dentro de las dos horas posteriores a la extracción, hasta obtener un sobrenadante límpido y trasferir a otro tubo para su conservación. En estas condiciones la glucosa es estable 4 horas a temperatura ambiente o 24 horas refrigeradas (210 ° C). En caso de no poder procesarse la muestra de la forma antes indicada, deberá adicionarse un conservador en el momento de la extracción para inhibir la glucolisis.

-

Luego de obtener la muestra (plasma o suero).

-

En tres tubos de ensayos marcados con B (blanco), S (Standard)

y D

(desconocido o muestra), colocar según el siguiente esquema:

B

S

D

STANDARD

-

2oul

-

MUESTRA

-

-

20ul

2 ml

2ml

2ml

REACTIVO DE TRABAJO -

Incubar minutos en baño de agua a 37°C. luego leer en espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde (490 -530 nm) llevando el aparato a cero con el blanco.


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-


CONDICIONES DE REACCIÓN: o

longitud de onda: 505 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde (490 – 530 nm).

-

o

Temperatura de reacción : 37°C

o

Tiempo de reacción: 10 minutos

o

Volumen de muestra: 20ul

o

Volumen de reactivo de trabajo: 2 ml.

o

Volumen final de reacción: 2,02 ml.

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIÓN FINAL: el color de reacción final es estable 1 hora, por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de este lapso.

-

El Tubo B se emplea para la calibración.

-

El tubo S nos da la lectura del reactivo de trabajo y del factor.

-

El tubo D nos da la lectura de las muestras.

GLICEMIA = D x f

Dónde: D= es la absorbancia de la muestra (desconocido) f= Concentración de estándar x 100 Absorbancia del estándar

-

Suero o plasma: 0,70 – 1,10 g/L

-

En los niños péqueños se aceptan valores de 40 a 100 mg/ L.


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DIAGNOSTICO POSIBLES EN VALORES ANORMALES DE GLUCEMIA: -

Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglicemia) en: o

Diabetes Mellitus

o

Enfermedades Renales

o

Feocromocitoma

o

Hipertiroidismo

o

Gkucagonona

o

Pancreatitis aguda

o

Síndrome de Cushing

o

o

Tumores páncreas Estrés por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco, anestesia general).

o

Los tratamiento con sueros en vena, ya que contiene dextrosa (azúcar).

o

Embarazo

o

Medicamentos

(antidepresivos,

antihipertensivos,

hormonas

femeninas, etc.). -

Pueden aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en: o

Dieta excesivas

o

Enfermedades hepáticas

o

Enfermedades de Addison

o

Exceso de insulina en diabéticos

o

Hipotiroidismo

o

Hipotituarismo

o

Insulinoma

o

Alcohol y analgésico puede disminuirla


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1) ¿cuáles son los valores de referencia de glucosa en la sangre, orina, suero? 2) Como interviene la glucolisis en la muestra problema (sangre). En el suero y líquidos biológicos. 3) Que objeto tiene el diagnostico precoz y el control de los pacientes diabéticos. 4) Enumere las 3 categorías principales de diabetes mellitus (DM) y cuál es la más común. 5) Realice las características diferenciales de la DM tipo 1 y la DM tipo 2. 6) Mencionar y explicar la triada diabética 7) Dibuje un gráfico señalando el mecanismo de acción de la glucosa, atreves de sus hormonas catabólicas y anabólicas.


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Los seres vivos almacenan con frecuencia carbohidratos que aparentemente sirven de materiales de reserva, se almacenan en forma de polisacáridos como el almidón y la insulina en los vegetales y el glucógeno en los animales las propiedades físicas y químicas de mucho polisacáridos neutros difieren lo bastante de la otras sustancias naturales, para permitir su fácil aislamiento. Al homogenizar. Hígado de rata o conejo en ac. Tricloroacético (TCA), precipitan numerosas sustancias de peso molecular elevado, como las proteínas y el ácidos nucleicos, mientras que el polisacárido glucógeno continua disuelto. El glucógeno puede separarse de los azucares y otros compuestos hidrosolubles por precipitación con alcohol, porque los polisacáridos son muchos menos solubles en alcohol acuosos que los azucares. Luego el glucógeno puede purificarse a partir de soluciones acuosa por precipitación con alcohol. : -

Recordar la importancia del glucógeno

-

Recordar las fuentes de glucógeno

-

Es la extracción del glucógeno hepático

-

Ser capaz de realizar la hidrolisis ácidas enzimática

Un pollo bien alimentado durante unas semanas antes

Centrifuga Balanza analítica Autores: L.CH.R / B.P.O. / A.CH.H

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Pipetas de 5 ml Pipetas de 10 ml Tubos de ensayo Tubos de centrifuga Mortero con pitón Varilla de vidrio Probeta de 100 ml Vasos de precipitación de 250 ml Luna de reloj Fiola de 100 ml Gradilla para tubos de ensayo

Ácido tricloroacético al 5% Ácido tricloroacéitico al 10% Etanol Arena lavada Cloruro de sodio solido Éter etílico Hielo Solución de lugol

-

Prepare el ácido tricloroacetico al 5% y al 10% en la fiola.

-

Decapitar un pollo bien alimentado con una dieta alta en carbohidratos (una semana antes).

-

Extraiga el hígado con sumo cuidado.

-

Inmediatamente colocar el hígado en una luna de reloj bien helada y pesar (previamente realizar pesada de la luna de reloj para obtener el peso del material biológico por diferencia)

-

Cortar el hígado en trozos pequeños y dejarlo caer en un mortero muy frio, y adicionar 1 ml de TCA al 5 % por cada gramo de hígado.


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-


Pesar 0,5g de arena lavada y agregarlo al mortero para iniciar la trituración (mantener el mortero en hielo) hasta obtener una masa liquida homogénea.

-

Trasvasar el preparado a los tubos de ensayo equitativamente hasta las dos cuartas partes de la capacidad.

-

Llevar los tubos a centrifugar durante 5 minutos a 2000 RPM

-

Decantar el líquido sobrenadante opalescente en la probeta de 1000ml

-

Enjuagar el mortero con un volumen mayor de TCA al 10% con el objetivo de conseguir una extracción más completa del glucógeno hepático.

-

Verter el líquido de los lavados en los tubos y llevar a centrifugar durante 5 minutos a 2000 RPM

-

Decantar el sobrenadante uniendo al primer extracto TCA en la probeta y anotar el volumen total.

-

Repetir los pasos anteriores para mayor rendimiento

-

Añadir con agitación a los extractos TCA, 2 volúmenes de etanol por cada volumen de extracto.

-

Agitar la mezcla y dejar en reposo hasta que el precipitado flocule.

-

Una vez observada la floculación agitar energéticamente y trasvasar el contenido en el número mayor posible de tubos de ensayos, para llevar a la centrifuga por 5 minutos a 2000 RPM

-

Eliminar el sobrenadante trasparente

-

Aislar en la luna de reloj el glucógeno de cada tubo de ensayo para su posterior secado. RECONCIMIENTO DEL GLUCOGENO: o

Tome una pequeña cantidad del glucógeno y disuélvalo en 2 ml de agua destilada en un tubo de ensayo, agregue unas gotas de reactivo de lugol. Observe el color.

o

Repita lo anterior pero emplee 2 ml de glucosa en lugar de glucógeno disuelto en agua destilada.


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1. Indique el rendimiento total del glucógeno y calcule el contenido del glucógeno obtenido en el hígado, expresándolo en gramos del glucógeno por 100 gr de tejido fresco, compare los resultados obtenidos con los otros grupos de mesa y vea si el tamaño del hígado afecta el contenido de glucógeno, Informe de los resultados obtenidos en el reconocimiento con lugol.


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1. Compare las características del almidón, glucógeno, celulosa y quitina 2. Que factores pueden influir sobre el porcentaje del glucógeno en el hígado 3. Qué importancia tiene la saliva en la hidrolisis enzimática 4. Cuáles son las enzimas claves que participan en el metabolismo de los carbohidratos.


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El término shock insulínico se utiliza para describir la hipoglicemia severa que produce pérdida del conocimiento y otros trastornos. La hipoglicemia se produce cuando la glucosa del cuerpo se gasta con demasiada rapidez, cuando ésta es liberada en el torrente sanguíneo con mayor lentitud que lo requerido por el cuerpo, o cuando se libera demasiada insulina en el torrente sanguíneo. La insulina es una hormona producida por el páncreas en respuesta a mayores niveles de glucosa en sangre, cuya función es reducir estos altos niveles de glucosa. La hipoglicemia es relativamente común en las personas diabéticas. Se presenta por un exceso de insulina oral o de medicamento oral antidiabético, cuando no se come lo suficiente, o por un incremento repentino del ejercicio sin compensarlo con una mayor ingesta de alimentos. La hipoglicemia relativa, es decir, cuando la glucosa en la sangre de un recién nacido está baja, es bastante común. Un bebé nacido de una madre diabética o con diabetes gestacional (causada por el embarazo) puede presentar hipoglicemia severa. En estos casos el niño es llamado "bebé de madre diabética". Si durante el embarazo el nivel de azúcar en la sangre de la madre es persistentemente alto, el páncreas del feto interviene en el control del exceso de azúcar produciendo insulina adicional. Cuando el niño nace, ya no recibe más glucosa de la madre, pero aún produce mayor cantidad de insulina, y este exceso hace que el azúcar en la sangre del bebé descienda a niveles peligrosos. Esto es una emergencia médica que de no tratarsepuede provocar convulsiones y daños al sistema nervioso del bebé. Algunas veces, se desconoce la causa de la hipoglicemia (idiopática). En estos casos, personas que no son diabéticas y que no tienen otras causas conocidas de hipoglicemia pueden presentar síntomas de este trastorno. La hipoglucemia puede ocurrir a causa de un tumor secretor de insulina del páncreas, por enfermedad Autores: L.CH.R / B.P.O. / A.CH.H

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-


Demostrar lo que pasa cuando se administra glucosa al conejo que se encuentra en estado de shock.

-

Ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren como resultado de la administración de la insulina.

-

Observar los efectos de un exceso de insulina en los conejos

-

Recordar los procesos bioquímicos que ocurren durante dicho proceso y relacionarlo con episodios de la diabetes

-

-

Balanza analítica

1 conejos en ayunas durante 24 horas

Fiola de 100 ml

Jeringa de tuberculina

Tubos de ensayo

Algodón y alcohol

Vaso de precipitación 100 ml

Materiales de limpieza

Agitadores de vidrio

Jeringa de 10 cc

Gradillas para tubos de ensayo

Glucosa anhidra Insulina de acción rápida Agua destilada Adrenalina


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-


El conejo es un animal muy sensible a la acción de la insulina, cuya respuesta a esta hormona es muy diferente de la del perro. Por esta razón, el conejo es el animal de elección en el ensayo biológico oficial de estandarización de las preparaciones insulínicas. Efectivamente, la definición de la unidad estándar de insulina está basada en la respuesta observada con este animal.

-

En base a estas consideraciones, usaremos conejos en este experimento, uno de los más dramáticos de la Bioquímica. La cantidad de trabajo físico requerida en el experimento será muy pequeña. En su lugar, una observación muy cuidadosa del animal y de su conducta durante la primera parte del experimento, será la principal preocupación del estudiante, haciendo ojalá una revisión mental de aquellos aspectos del metabolismo intermedio que pueden sufrir cambios en el animal entero. Durante este periodo los integrantes del grupo deben tratar de disminuir cualquier causa de excitación para el animal. ¿Por qué?

-

El conejo deberá estar en ayunas 24 horas antes del experimento. Se inyectan 0.3ml de insulina por vía subcutánea al comenzar la sesión de laboratorio. No deben usarse preparados de insulina de absorción lenta (Insulina-Zn, Insulina-Zinc-portaminas).

-

Luego de media hora se le inyectan también por vía subcutánea de 0,2ml de insulina.

-

Mientras usted espera los dramáticos efectos de la insulina, prepare una solución al 10 % de glucosa que se le administrará al animal y tenga lista también una jeringa de 10 ml. Después de un tiempo variable, pero seguramente cerca de una hora después de la segunda inyección de insulina, el animal entrará en convulsiones. Antes de que esto ocurra el animal habrá pasado por una serie de cambios característicos, los cuales recuerdan los cambios que experimenta un individuo con shock insulínico.

-

Si al animal no se le presta atención posterior, puede ocurrir que no se observe el período de convulsiones sino el periodo en el cual, el conejo en estado comatoso permanece tranquilo. Algunas veces la muerte sobreviene durante este primer ciclo de convulsiones. Muy pronto sin embargo, se


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establece otro período de convulsiones, durante el cual el animal parece encontrarse al borde de la muerte. El animal puede sobrevivir sin embargo a esta nueva crisis. -

Una vez que el animal ha superado esta primera crisis y estando, aún en estado comatoso, se le administran 10 ml de la solución al 10% de glucosa por vía intraperitoneal.

-

Como el animal había sido sobrecargado de insulina, la inyección de la solución de glucosa sólo lo protegerá en una forma temporal. En las horas siguientes es seguro que el animal caerá de nuevo en shock más de una vez. Usted tendrá entonces la responsabilidad de protegerlo de la muerte. Asegúrese de que haya alimento en la jaula del animal. Dos inspecciones deben hacerse del animal, la primera a las 2 ó 3 horas y la segunda a las 6 horas. En cada una de estas visitas, como medida de protección, se inyectan intraperitonealmente 10 ml de solución al 10% de glucosa.

SÍNTOMAS DE HIPOGLICEMIA:


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1. Defina el concepto de : shock, shock hipo glicémico 2. ¿Qué cambios observó usted en la conducta del animal a medida que los niveles de glucosa se acercaban al nivel del shock? 3. ¿A qué nivel estaba la glucosa sanguínea cuando el animal cayó en shock? 4. A cierto tipo de pacientes (esquizofrénicos) se les provoca shock insulínico de un modo similar al que usted ha provocado en el conejo y parece que estos pacientes son beneficiados por este tratamiento. ¿Cree usted que es el efecto sobre los músculos y sus correspondientes conclusiones lo que busca el psiquiatra? ¿Será acaso el efecto sobre el sistema nervioso lo cual conduce a cambios en la conducta aún de un conejo? 5. Describa qué es lo que pasa cuando usted administra glucosa al animal que se encuentra en estado de shock. 6. Usted debe ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren en un animal como resultado de la inyección de insulina. 7. ¿Para que utilizamos la adrenalina? ¿Cuál es su mecanismo de acción?


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Todos los compuestos orgánicos son combustibles, es decir si se calientan suficientemente en presencia de oxigeno, se produce bióxido de carbono, agua y calor de acuerdo con la siguiente reacción: Compuesto orgánico + O2 + Calor → CO2 + H2O + Energía

Si el agente oxidante es moderado en su acción se puede observar en forma gradual los productos de las acciones sucesivas, por ejemplo: -

Si un alcohol primario se oxida, el producto será un aldehído R-CH2OH + O2 → R-OH

-

Si uno de los aldehídos se oxida será un acido carboxílico R-CH + O2 → R-COOH

-

En cambio un alcohol secundario al oxidarse produce una cetona. R-CH-OH + O2 → R-C=O

Una cetona al oxidarse, no da un acido carboxílico como lo hace el aldehído. S utilizamos como agente oxidante un reactivo que cambe de color al reducirse mediante este cambio podemos comprobar si la reacción es positiva o no; además una prueba organoléptica como lo es el olor nos ayuda a comprobar si se lleva la reacción o no. En general estos reactivos son sales que contienen un metal, que al cambiar su número de oxidación cambia el color tales como: las sales de cobre cúprico (Cu++) que son azules cambian a cobre cuproso (Cu+) que son rojas, otros ejemplos son el reactivos Fehling (azul) que al oxidarse orig ina………… Autores: L.CH.R / B.P.O. / A.CH.H

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Al término de la práctica, el alumno establecerá mediante reacciones químicas cual es el producto de oxidación de: -

Un alcohol primario

-

Un alcohol secundario

-

Un aldehído

Gradilla para tubos de ensayos Tubos de ensayos Soporte universal completo Vaso de precipitado de 100ml Pinza para tubos de ensayo Pipetas de 5 ml Pipetas de 2 ml Goteros Matraz de 100ml.

Reactivo de Fehling A y B Solución de glucosa 1% Solución de sacarosa 1% Solución de maltosa 1% Solución de lactosa al 1 % Formaldehido Acetona Solución de bicromato de potasio al 3% Acido sulfúrico concentrado Autores: L.CH.R / B.P.O. / A.CH.H

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1. Oxidación de un aldehído y una cetona con bicromato de potasio. En dos tubos de ensayos A Y B: a. En el tubo A colocar 1 ml de formaldehido y en el B 1 ml de cetona agregar a ambos tubos 1ml de bicromato de potasio y 2 gotas de ácido sulfúrico. b. Anotar las observaciones hechas y las reacciones que se llevan a cabo en cada tubo. c. ¿Cuál es el agente oxidante y cuál es el reductor? d. En el tubo B ¿hubo reacción? ¿por qué?

2. Oxidación de un aldehído (glucosa) con el reactivo de Fehling: a. Marcar cuatro tubos con las letras A, B, C, D respectivamente. b. En el tubo de ensayo marcado como A, colocar 2ml de solución de glucosa. c. En el tubo marcado como B, colocar 2ml de solución de sacarosa. d. En el tubo marcado como C, colocar 2ml de solución de maltosa. e. En el tubo marcado como d, colocar 2ml de solución de lactosa. f. Agregar a cada tubo 1 ml del reactivo de fehling A y 1ml de Fehling B g. Calentar los cuatros tubos a baño maría de 5 a 10 minutos. h. Hacer observaciones, comparando las reacciones de los cuatro tubos. i. ¿Cuál es el agente oxidante y reductor en este caso?


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1. ¿Qué es oxidación? Y ¿Qué es un agente oxidante? 2. ¿Qué es reducción? y ¿Qué es un agente reductor? 3. ¿Qué papel juega el reactivo de fehling? 4. ¿Los aldehídos y las cetonas son reductores? 5. Dibuje el ciclo de kress e identifique los intermediarios que intervienen en la fosforilacion oxidativa. 6. ¿Qué implica las reacciones de óxido - reducción? 7. Las reacciones que siguen según el grafico, implican oxidación y reducción, complete la tabla: Autores: L.CH.R / B.P.O. / A.CH.H

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LAS PAREJAS


QUE MOLÉCULAS SE HALLAN EN LAS MOLÉCULAS

REDO QUE

ESTADO REDUCIDO Y CUALES

DE

INTERVIENEN

EN ESTADO OXIDADO

TRANSFERENCIA

REDUCIDO

OXIDADO

DE GRUPOS QUE PARTICIPAN

8. Completar, Aceptores de electrones en la respiración anaeróbica. TIPO DE

ACEPTOR DE

PRODUCTO

RESPIRACIÓN

ELECTRONES

REDUCIDO

Respiración de azufre Respiración de sulfato Respiración de carbonato (bacteria acetogenicas) Respiración de carbonato (bacteria metanogenicas) Respiración de nitrato Respiración de hierro Compuestos orgánicos 9. Llene los espacios en blancos, complete los enunciados que siguen


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a. Los ácidos grasos, las hexosas y los_______________ son las principales moléculas que sirven como combustibles para los heterótrofos. b. En vegetales y animales, el NADPH se genera catabólicamente en la vía ________________. c. Los tres productos principales que se generan en el catabolismo completo de la glucosa son _________________, _____________ y ___________________. 10.De las transformaciones bioquímicas que siguen, ¿Cuáles generan y no generan NADH, NADPH, ATP? a. Glucosa →piruvato (en la glicolisis) i. Genera: _________________ ii.

No genera: ______________

b. Piruvato →dióxido de carbono i. Genera: _________________ ii.

No genera: ______________

c. Glucosa- 6 fosfato →fructuosa-6-fosfato (en la vía de las pentosas fosfato). i. Genera: _________________ ii.

No genera: ______________

d. Glucosa → etanol i. Genera: _________________ ii.

No genera: ______________

e. NADH→NAD+ (en el transporte de electrones) i. Genera: _________________ ii.

No genera: ______________

f. Electrones del agua → ferredoxina.


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i. Genera: _________________ ii.

No genera: ______________

11.Diga si los enunciados son verdaderos o falsos, si son falsos diga cuál es la respuesta correcta. a. El NADH es una forma de potencial reductor que se emplea en la biosíntesis reductiva.

( ____________)

b. La fotosíntesis es la única fuente de ATP y NADPH en las plantas verdes.

(____________).

c. El ATP se genera en el catabolismo exclusivamente por fosforilacion de ADP vinculada a transferencia de electrones (_____________).

d. El metano es una forma altamente reducida de carbono, de modo que pueda actuar como fuente de electrones del entorno para los autótrofos.

(____________).

e. Todos los autótrofos generan NAPDH durante los transportes de electrones


(____________).

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Guía Bioquímica II 2014-I

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