FAGEMIDOS
Vectores utilizados en biología molecular
Definición
Un fagémido o fagómido es un tipo de Vector de clonación empleado en biotecnología, compuesto por un plásmido al que se le ha incorporado el origen de replicación de un fago filamentoso (fagos de ácido desoxirribonucleico (ADN) monocatenario), tales como el fago M13 o F1. De este modo mantiene todas las utilidades de los plásmidos pero además tiene la capacidad de producir ADN monocatenario
fagémido o fagómido
Los fagémidos son plásmidos que contienen origen del fago f1 de replicación para la producción de ADN monocatenario . Por lo general son pequeños plásmidos de modo que tengan la capacidad de aceptar insertos de ADN más grandes que los vectores basados en M13. Se desarrolló originalmente en la década de 1980 años , cuando se descubrió que la inserción del origen f1 de replicación podría ser clonado en pBR322 para conducir la producción de ADN monocatenario ( Dotto y Horiuchi ( Dotto y Horiuchi 1981 ; Dotto y col . , 1981 )
1981 ; Dotto y col . , 1981 ) . El origen de replicación f1 no era suficiente para dirigir la producción de ADN monocatenario , pero si una bacteria que lleva un fagémido fue super infec
El origen de replicación f1 no era suficiente para dirigir la producción de ADN monocatenario , pero si una bacteria que lleva un fagémido fue super infectada con un tipo salvaje funcional M13 o fago auxiliar f1 , a continuación, la producción de una sola hebra ocurriría ADN fagémido . Fagémidos tienen varias características atractivas que supere los problemas más frecuentes con la clonación en bacteriófago ( Sambrook y Russel , 2001) y se enumeran en la tabla 6
Las características atractivas de fagémidos Table: 6 Las características atractivas de fagémidos que superen los problemas más frecuentes con la clonación en bacteriófago S.No 1
Attractive features of phagemids Un marcador seleccionable positivo que se puede utilizar para seleccionar bacterias transformadas por el fagémido
2
Mayor rendimiento de ADN de doble cadena
3
Eliminación del tiempo de proceso de l a subclonación de fragmentos de ADN a partir de los plásmidos vectores bacteriófagos filamentosos que consume.
4
Una reducción significativa en la frecuencia y extensión de las deleciones y reordenamientos en el ADN monocatenario .
5
La capacidad de permitir que los segmentos de ADN de varios kilobases de longitud para ser aislado en forma de cadena sencilla .
Región f1
Esta región f1 origin se emplea cuando se quiere replicar un ADN en forma de monohebra. No obstante, la replicación sólo se puede hacer por coinfección con un virus auxiliar (helper) que aporte los genes que codifican las enzimas necesarias para la replicación. Este procedimiento ha sido muy utilizado para secuenciar el ADN, puesto que para esta tarea debe pasarse de ADN duplexo a ADN simplexo
Vectores basados en el genoma del fago λ
El bacteriófago lambda es un virus que infecta a la bacteria Escherichia coli. Se trata de un virus complejo de ADN lineal bicatenario. Los extremos de su material genético son cohesivos y complementarios (extremos cos) y ello hace que tras la infección su genoma se circularice, comportándose, en caso de seguir un ciclo lisogénico, como un plásmido y aprovechando las enzimas recombinantes de la bacteria para integrarse en el genoma de ésta. El fago no tiene por qué integrarse, y de hecho es más habitual que se comporte como un virus de ciclo lítico.
Vectores basados en el genoma del fago λ
En el ciclo lisogénico, el virus se inserta en un punto concreto del genoma de la bacteria. En este estado, el virus se replica cuando lo hace la bacteria, pasando su genoma a las réplicas de E. coli. El ciclo lítico es la forma más habitual de actuación del virus al infectar la célula, y también es la vía que sigue al final del ciclo lisogénico. En ella se producen partículas virales que son liberadas al medio una vez que la bacteria hospedadora es lisada, matando a la célula en el proceso
Vectores basados en el genoma del fago λ
El virus replica su genoma circular empezando por un punto de éste, y desenrollando sólo una de las dos hebras. El resultado es un genoma lineal muy largo, consistente en una gran cantidad de repeticiones del genoma original de forma seguida, lo que se conoce como concatámero (o concatémero). La enzima terminasa es una endonucleasa que corta el concatámero mediante sucesivos cortes en escalera (en las regiones cos). El virus también sintetiza las proteínas de su cápside, y se ensambla en el citoplasma de la bacteria. Dentro de la cápside sólo cabe, prácticamente, el genoma de un virus. Finalmente, la célula es lisada, liberando los viriones al medio.
Vectores basados en el genoma del fago λ
El genoma del fago lambda se ha cartografiado y secuenciado completamente. Para ser utilizado como vector, el tercio central de su cromosoma puede ser reemplazado por ADN foráneo, sin que ello afecte a la capacidad del fago de infectar células y formar calvas. Antes de introducir el ADN exógeno hay que eliminar partes no útiles del genoma del virus, para, de este modo, dejar espacio, pues en la cápside sólo hay hueco para 50 kb, y el genoma del virus tiene 48.502 pb. Las regiones prescindibles corresponden a los genes que controlan el ciclo lisogénico.
