Gallegos et al. / Ingeniería Biotecnológica 1 (2015) 1-3
Ingeniería Biotecnológica
PROPAGACIÓN in vitro DE Echinocactus grusonii ESPECIE EN PELIGRO DE EXTINCIÓN Gallegos Porfirio, Rodríguez Alexia, Conejo Flor, Rocha Edson, Ramírez Jessica Instituto Politécnico Nacional. Unidad Profesional Interdisciplinaria de Ingeniería campus Guanajuato (IPN-UPIIG) Av. Mineral de Valenciana No. 200 Col. Fracc. Industrial Puerto Interior, C.P. 36275 Silao de la Victoria, Guanajuato, México
Tópicos selectos de Biotecnología I RESUMEN El cultivo in vitro consiste en cultivar asépticamente asépticamente
Palabras clave In vitro E. grusonii
Peligro de extinción Desinfección
una porción aislada aislada de la planta planta bajo condiciones de ambiente controlado. El propósito del presente trabajo es la propagación in vitro, a partir de semillas , de la cactácea endémica de México E. grusonni debido debido a que está en la categoría de peligro de extinción. En la primera etapa se estableció el método de desinfección, evaluándose a los 5 días el número de contaminación, contaminación, necrosis y germinación. germinación.
Objetivo General:
- Lograr la propagación in vitro de la cactácea E. grusonni
Objetivos Particulares:
-Determinar el método de desinfección más viable para las semillas de este ejemplar -Inducir la germinación de semillas para la obtención de plántulas de E. grusonni -Establecer un protocolo para la propagación in vitro de E. grusonni
1. Introducción Echinocactus grusonii , cactácea endémica de México está en
la categoría de peligro de extinción “P”, según la NOM debido principalmente a la sobrecolecta y destrucción de su hábitat; por lo anterior es necesario desarrollar estrategias para su conservación. Las técnicas del Cultivo de Tejidos Vegetales (CTV), son una opción viable de conservación ex situ [Rodríguez, 2006]. La planta se le encuentra en climas áridos áridos con escasa lluvia a lo largo del año. La propagación se realiza generalmente mediante semillas [Ávila, 2004]. La cactácea presenta tallo globular y generalmente solitario, aunque los ejemplares adultos pueden emitir vástagos basales. En estado silvestre, puede llegar a medir más de 1 m. de altura. El tallo es de color verde brillante, tiene la parte superior aplastada y puede presentar lanosidad en esa zona. Tiene entre 20 y 27 costillas rectilíneas y prominentes, que no llegan a apreciarse en los ejemplares más jóvenes, que las
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Materiales y Métodos
tienen divididas en tubérculos cónicos. Las aréolas presentan lanosidad amarilla, cuando la planta es joven, luego blanquecina y por último grisácea. Son grandes y están separadas 1 ó 2 cm. entre sí. Las espinas radiales se disponen en número de entre 8 y 10, y miden más de 3 cm. de longitud. Las centrales, entre 3 y 5, miden unos 5 cm. Son fuertes, estriadas y rectas, aunque las centrales pueden presentarse ligeramente curvadas hacia abajo. Su color es dorado o rojizo al principio, pero se va debilitando con la edad hasta volverse casi blanco. Las flores aparecen en las aréolas superiores de los ejemplares adultos en la época cálida. Surgen entre la lanosidad y duran 3 días. Miden entre 4 y 7 cm de longitud y 5 cm. de diámetro. Los pétalos externos son de color amarillo por dentro y castaño por fuera. Los internos son de color amarillo brillante [Ávila, 2004].
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2.1 Material Vegetal Se emplearon semillas del ejemplar E. grusonii obtenidas de la División de Ciencias de la Vida de la Universidad de Guanajuato. 2.2 Tratamiento de desinfección Se utilizaron 30 semillas las cuales, dentro de la campana de flujo laminar, se escarificaron en ácido sulfúrico concentrado por 15s, luego se enjuagaron con agua destilada estéril. Seguidamente se sumergieron 30 min en 50 ml de agua estéril con 3 gotas de detergente líquido acción y se realizó otro enjuague finalizado el tiempo. Luego se transfirió a alcohol al 70% por dos minutos, se enjuagaron y finalmente se colocaron en 50 ml de cloro al 20% (cloro activo final: 1.08%, tomando en cuenta que el cloro comercial contiene 5.4% de cloro activo de acuerdo a lo que reporte Cárdenas et. al) por 15 s y se realizó un último enjuague. 2.3 Medio de cultivo
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Se prepararon 100 mL de medio, el cual estuvo compuesto por las sales y vitaminas de Murashige y Skoog, 2.215 g/L, 15 g/L de sacarosa y 8 g/L de agar como gel gelificante. Antes de adicionar el agar al medio de cultivo se ajustó el pH a 5.8. Luego se llevó a ebullición durante 10 min y distribuyó en frascos gerber etapa 3 a razón de 20 mL por frasco. Finalmente se esterilizó a 121°C y 15 psi por 15 min. 2.4 Siembra de las semillas y condiciones de cultivo
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Las semillas se tomaron con ayuda de unas pinzas estériles y se colocaron 6 semillas por frasco procurando que quedaran separadas y en contacto con el medio de cultivo, se sellaron y etiquetaron. Los frascos con las semillas se colocaron, a temperatura ambiente, en un stante, el cual permite el contacto directo con la luz natural. 3.
Resultados
El efecto del método de desinfección sobre las semillas del ejemplar Echinocactus grusonii se evaluó a los 6 días en todos los frascos, a los cuales se les determinó el número de contaminaciones, necrosis, germinación y las que estaban hinchadas (Tabla I). Tabla I. Evaluación de los 5 frascos a los 5 días de haber sido cultivadas las semillas
Frasco
Contaminación
1 2 3 4 5
No No No No No
Necrosis
Hinchadas
No 5 No 6 No 3 No 4 No 3 % de germinación 13.79%
Germinación 0 0 1 2 1
Figura 1. Semillas después de 6 días de siembra. El número corresponde al fue asignado a cada frasco. En los círculos de color rojo se señalan las semillas que ya germinaron (se consideró que la semilla germinó cuando la radícula había emergido)
En la Figura 1 se muestras las semillas de cada frasco, las cuales en su mayoría se están preparando para germinar. De acuerdo a lo observado hasta el día 6 se puede decir que el método de desinfección es exitoso, ya que ha permitido la germinación de algunas semillas sin problemas de contaminación y necrosis hasta el m omento; además también es reproducible, pues los resultados coinciden con lo reportado por Rodríguez (2006), quien empleo el mismo método de desinfección y concentración de medio, en donde se observó germinación al sexto día, tal como ocurrió en el presente trabajo. También reporta que a los 19 días logró un porcentaje del 94 % de germinación, por lo que se espera un resultado similar.
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Referencias
[I]. Ávila J. (2004). “Programa de Rescate, Protección y Conservación de Flora y Fauna Silvestre para L.T. Santa Fe entronque la
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Fragua-Jurica. Universidad Autónoma Metropolitana. Unidad Iztapalapa. México. [II]. Rodríguez M. (2006). Propagación in vitro de Echinocactus grusonii hild, (Cactaceae) Especie en peligro de extinción. Tesis para título: Licenciado en Biología. Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo. Pachuca de Soto, Hidalgo [III]. Manual de prácticas, 2012] Manual de prácticas. Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales. Curso Intersemestral. Instituto Politécnico Nacional Campus Guanajuato. [IV]. Cárdenas, A., Sánchez, S.,Tinajero C., González, V. & Baires-, L. (2012). Hipoclorito de sodio en irrigación de conductos radiculares: Sondeo de opinión y concentración en productos comerciales. Revista Odontológica Mexicana, Vol. 16, 7.
