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PRACTICA 2 “REACCIONE !E A"INO#CI!O $ PROTE%NA& PRI"ERA PARTE' #L= L=@;&= L=@;&= &ELLF &ELLF =#DEE
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Introducción Las proteí proteínas nas son compon component entes es princi principale paless de todas todas nues nuestr tras as célu célula las, s, esta estass está están n conf confor orma mada dass por por aminoácidos. Los aminoácidos se agrupan de acuerdo a su comportamiento químico. La síntesis de proteínas ocurre mediante la unión entre sí de las las cade cadenas nas de amin aminoá oáci cido dos, s, son son dist distin into toss e imparten imparten diferentes diferentes comportamientos comportamientos químicos químicos en las estructuras de las proteínas. Debido a la presencia de diferentes aminoácidos en las uniones peptídicas de las proteínas reaccionan con una variedad de compuestos formando formando compuestos compuestos coloreados. coloreados. Las reacciones reacciones de colora coloració ción n que son especí específic ficas as para para aminoá aminoácid cidos os de esas proteínas y son importantes para la detección como el dopaje de aminoácidos y proteínas. Eisten también reacciones generales por que sirven para caracteri!ar grupos grupos comune comuness a todas todas las prote proteína ínass como como grupos grupos "amino" o "uniones peptídicas".
Objetivos •
#dent #dentifific icar ar la eis eiste tenc ncia ia de amin aminoá oáci cidos dos en distintas proteínas a través de reacciones que los ponen en manifiesto.
Análisis de la técnica $ar $ara el proc proce edimi dimien entto de la prác prácttica, ica, pri primero mero etiq etique ueta tamo moss todo todoss los los tubo tuboss y les les colo coloca camo moss las las solu soluci cion ones es que que íbam íbamos os a anal anali! i!ar ar,, post poster erior iorme ment nte e comen!amos las diferentes reacciones.
En prim primer era a instancia se colocó &a'( al )*+ en cada uno de los tubos correspondientes, para propiciar el medio alcalino y posteriormente se agregaron gotas de acetato de plomo al -+ y se calentó a bao maría, esto para que el a!ufre a!ufre presente presente reaccione reaccione para formar formar sulfuros. sulfuros. Este sulf sulfur uro o pued puede e dete detect ctar arse se por por la form formac ació ión n de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adición de acetato de plomo. Reac Reacci ción ón del del
plom plomo o
para para cist cisteí eína na%
Reacci Reacción ón de la Ninhid Ninhidrin rina a% La &in/ &in/id idri rina na es un
poder poderos oso o agen agente te y reac reactitivo vo para para la dete determ rmin inac ació ión n general de aminoácidos. En este caso se agregó a los tubo tuboss corr corres espo pond ndie ient ntes es gota gotass del del reac reacti tivo vo de &in/idrina, esta reacciona con todos los aminoácidos alfa alfa cuyo cuyo p( se encu encuen entr tra a entr entre e 0 y 1, dand dando o una una coloración que varía de a!ul a violeta intenso. $ara esta esta reac reacci ción ón se Reacción de Hopkins-Cole: $ara agre agregó gó )* gota gotass del reac reactitivo vo de (op2i (op2ins ns34 34ole ole y se me!cló bien, después se estratifico con ácido sulf5rico, esta esta reacci reacción ón es positiv positiva a sólo sólo para para las proteí proteínas nas que contienen 6riptófano. El ácido concentrado /idroli!a las proteínas en la interfase liberando el 6riptófano para dar el producto violeta. Reacción de Millon % $ara esta reacción, se agregó
gotas del reactivo de 7illon a los tubos correspondientes, posteriormente se llevó a calentar a bao maría, el primer paso de la reacción de 7illon consiste en la nitración del anillo fenólico de la tirosina, por el ácido nítrico del reactivo. La tirosina nitrada forma complejos con los iones 7ercurioso (g8#9 y 7erc5rico (g8##9 del reactivo produciendo un precipitado rojo o una
solución roja, ambos resultados positivos. =lgunas proteínas pueden formar el precipitado rojo desde el inicio, mientras que otras primero forman un precipitado blanco, que se debe calentar para dar el color rojo indicativo de la presencia de tirosina, por ello se llevó a calentamiento. Reacción Xantoproteica% :e colocó ) mL de ácido
nítrico a los tubos correspondientes, posteriormente se calentó la me!cla y después se enfrió, de inmediato se estratifico con ) mL de /idróido de amonio concentrado, la reacción dio positiva para la aparición de un color amarillo o naranja en la interfase, los anillos benceno de tirosina y triptófano están activados y reaccionan fácilmente, mientras que el benceno de la fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y reacciona con más dificultad. El color amarillo se intensifica en medio alcalino por ello la aplicación del /idróido de amonio.
Figura 1.1 Reacción de Hopkins-Cole Figura 1.2 Reacción de Millón
Reacción de Biuret % $ara el procedimiento primero se
colocaron H mL de &a'( al )* + para dar el medio alcalino necesario para que se lleve a cabo la reacción y después se agregó gotas del reactivo de >iuret 8solución de 4u:'0 al *.-+9 y me!clo muy bien, la
formación de un color violáceo o la precipitación de /idróido c5prico significa que la prueba fue positiva. La prueba consiste en la formación de un complejo entre al menos dos enlaces peptídicos consecutivos con un ion c5prico 4u8##9 en medio alcalino. El complejo es de color violeta y la intensidad depende del n5mero de enlaces presentes.
RE()TA!O Tabla 1. Resultados de las reacciones llevadas a cabo en proteínas, aminoácidos y agua
Figura 1. Reacción del plomo para Cisteína
!iscusión De las pruebas reali!adas en el laboratorio, dos de ellas fueron pruebas generales para aminoácidos la prueba de &in/idrina y la de >iuret, mientras que las otras cuatro fueron específicas para ciertos aminoácidos dependiendo del grupo C que contenían.
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Reacción del plomo para Cisteína% Esta
prueba es específica para detectar grupos sulf/ídricos y en específico para la cisteína, en este caso se obtuvieron cuatro tubos positivos, se utili!ó la técnica de cruces para denotar que tanto se presentó positiva la prueba, en primera instancia la cisteína fue la que principalmente dio la prueba positiva 8precipitado negro9, siguen con la alb5mina, la peptona y después la gelatina, para estos 5ltimos, que son proteínas, se puede corroborar con la bibliografía, que la alb5mina contiene muc/a más cisteína 8grupos a!ufrados9 que la peptona y la gelatina, que lo tienen en menor proporción, pero a pesar de ello dieron la prueba positiva. Reacción de la Ninhidrina% Esta prueba fue general, debido a que identifica los grupos amino libres y reacciona con ellos, todos los aminoácidos y proteínas que se utili!aron dieron la prueba positiva, por obviedad a que todos ellos contienen en su estructura un amino libre. Esta prueba también fue específica, ya que se lleva a cabo para la identificación de aminoácidos que en su grupo C contengan un anillo indol que reacciona con el ácido glioílico formando un compuesto color violeta, por ende, el triptófano al ser el 5nico aminoácido que contiene este grupo, fue el 5nico que nos dio positivoI por parte de las proteínas, la alb5mina también fue positivo, esto debido a que en su composición, aparte de tener la cisteína que se vio anteriormente, también contiene triptófano y en el caso de la peptona que ocurrió lo mismo, así una ve! más corroboramos los datos encontrados en la bibliografía. Reacción de Millón: Esta prueba específica consistió en la identificación del grupo fenólico como grupo C en la estructura de un amino acido, en este caso la tirosina fue el 5nico aminoácido que dio la prueba positiva, así como las tres proteínas que se utili!aron, gelatina, peptona y alb5mina, comprobando que en su estructura contienen este aminoácido. Reacción
de
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Reacción Xantoproteica: 4on esta prueba
logramos identificar aminoácidos aromáticos activados, en este caso el triptófano, tirosina y fenilalanina dieron la prueba positiva, además de las proteínas utili!adas, como /abíamos visto en pruebas pasadas como la de 7illon y la de grupos sulf/ídricos, las proteínas utili!adas contenían los aminoácidos que dan la prueba positiva, gracias a ello también dieron esta prueba positiva. Reacción de Biuret% Esta fue la segunda prueba general que llevamos a cabo, en la cual identificamos, en general, proteínas y péptidos de cadena no menor a tres aminoácidos, de esta manera todos los aminoácidos y proteínas nos dieron la prueba positiva, debido a que claramente todos contiene más de tres aminoácidos en su estructura.
Conclusiones •
Hopkins-Cole%
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Reacción de Nin*idrina: $ermite identificar la presencia de grupos amino libres. El grupo J3 amino de los aminoácidos al reaccionar con la nin/idrina forma complejos de color a!ul3violeta. Cesultados 8K9, ecepto el agua. Reacción de Plo+o ,ara Ciste-na: Los =minoácidos a!ufrados como 4isteína se reconocen por la formación de precipitados de :ulfuro de $lomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con =cetato de $lomo en medio alcalino. Cesultados 8K9 ecepto agua. Reacción de "illón: El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las sales de 7ercurio a p( ácido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico y las proteínas que lo contienen. Cesultados 8K9, eceptoI enilalanina y agua. prueba Reacción .anto,roteica: Esta caracteri!a a los aminoácidos aromáticos activados y proteínas en solución. Los aminoácidos reaccionan con ácido nítrico concentrado y forman nitrocompuestos de color amarillo. Cesultados 8K9, eceptoI enilalanina y agua. Reacción de /o,0ins Cole: El anillo indólico presente en la cadena lateral de los alfa3 aminoácidos libres o /aciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer mediante reacción con el ácido glioílico a p( ácido, puesto que formo complejos de coloración violeta3roji!o, permitiendo así identificar al 6riptófano, siendo este el 5nico de contener al anillo. Cesultados 8K9, eceptoI enilalanina, agua y @elatina. Reacción de 1iuret: Es una prueba general para proteínas y péptido no menor de
unidades de aminoácidos. Determino la presencia de enlaces peptídicos en una muestra debido a la formación de un compuesto de coordinación de color violeta. Cesultados 8K9.
Re4erencias •
Preunta e3tra #nvestigar )- ejemplos de proteínas
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7ena, 4.. 8H**09. unciones y clasificación de las proteínas. ebrero H, H*)M, de 4onsejería de la educación, junta de etremadura :itio Neb% /ttp%OOe3 ducativa.catedu.esO00M**)P-OaulaOarc/ivosOrepo sitorioOH-*OM0O/tmlO)0QfuncionesQyQclasificac inQdeQlasQproteinas./tml /ttp%OONNN.bioquimica.dogsleep.netO6eoriaOarc/iv osO;nidad*.pdf. 4onsultado ebrero H de H*)M.
