UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Perú, DECANA DE AMERICA) FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS DINÁMICAS SECCIÓN BIOQUÍMICA CURSO: BIOQUÍMICA INFORME DE PRÁCTICA Nº 9: DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SUERO Y ORINA GRUPO:
B2
MESA:
6
ALUMNOS:
34 76 160 202
CASTILLO RAMOS, DIEGO ALEXIS GARIBAY YALAN RAUL EDUARDO QUISPE SOLIS, JUDITH SHERLY TAMARIZ DIAZ, GILDA CLAVELINA
SAN FERNANDO, 2013
INTRODUCCIÓN El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y nucleoproteínas. Habitualmente la concentración del ácido úrico en suero varia de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores tales como la edad, sexo, dieta, origen étnico, constitución genética, embarazo. Niveles anormales de ácido úrico en suero son Índice de desorden en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de defectos de eliminación. La hiperuricemia es típica, aunque no exclusiva, en la enfermedad de la gota; estudios epidemiológicos indican un alto porcentaje (alrededor del 83%) de pacientes con niveles de ácido úrico mayores de 90 mg/1 desarrollan artritis gotosa. En tales pacientes, se observan cristalizaciones del ácido úrico y sus sales en las membranas sinoviales de las articulaciones y en los tendones, causantes de las manifestaciones reumatológicas características. En menor proporción (10 a 25% de los casos) es posible encontrar depósitos de uratos en los túbulos o en el tejido intersticial del parénquima renal, con el consecuente riesgo de una insuficiencia renal irreversible en caso de persistir la hiperuricemia. También existen otros desórdenes que transcurren acompañados de hiperuricemia, tales como leucemia, policitemia, mi el orna múltiple, intoxicación plúmbica, incluyendo alteraciones medicamentosas en los tratamientos con citostáticos o con tiazidas. Mientras que otros medicamentos (drogas uricosúricas tales como salicilatos y la fenilbutazona) aumentan la excreción del ácido úrico, disminuyendo los niveles séricos del mismo.
OBJETIVO Al finalizar esta práctica, el alumno será capaz de: • Determinar experimentalmente la concentración de ácido úrico en suero y orina
MATERIALES REACTIVOS 4-amino antipirina 0.5 mM, 3-5-dicloro-2hidroxibenceno Sulfónico 1.75 mM, Uricasa > 32 U/L, Peroxidasa > 1300 U/L, Azida de sodio 0.05 %. Buffer fosfato 0.05 M pH 7.4 Estándar de ácido úrico 1 mg% MUESTRA SUERO: Hacer una dilución al 1/10 (0.1 ml de suero y agua csp 1 ml) ORINA DE 24 HORAS: Diluir la orina 1 /20 (0.5 ml orina y agua csp 10 ml)
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PARTE EXPERIMENTAL Se recolectó la orina de un participante de la mesa durante 24 horas desechando la primera orina de la mañana inicial. Asimismo se extrajo una muestra de sangre, la cual fue sometida a centrifugación para sedimentar los elementos formes y separarlos del suero mientras que se procuró evitar la hemólisis en la muestra. A partir de aquí se obtuvieron las muestras de sangre para ambos procedimientos. Luego se preparó una batería de tubos para la determinación de ácido úrico en suero y orina. a.
Determinación de ácido úrico en suero y orina:
Al suero se le aplicó una dilución de 1 en 10 (0.1 ml de suero y agua csp 1ml). Asimismo, se diluyó la orina de 24 horas 20 veces con agua destilada (0.5 ml de orina y agua csp 10 ml) El método se basó en lo siguiente: La enzima Uricasa catalizaría la oxidación del ácido úrico para producir el peróxido de hidrógeno y alantoína. El peróxido de hidrógeno con el 4-amino antipirina y 3-5-dicloro-2-hidroxibenceno Sulfónico formaría el complejo Quinoneimina en presencia de la enzima peroxidasa y el complejo se podría leer a 505 nm Se preparó una batería de cuatro tubos: Blanco, estándar, muestra problema suero y muestra problema orina. •
Blanco: 0.5 ml de agua destilada, 1 ml de reactivo enzimático.
•
Estándar: 0.1 ml de solución estándar de ácido úrico cuya concentración era de 1 mg%, 0.4 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo enzimático.
•
Muestra problema suero: 0.1 ml del suero diluido inicialmente, 0.4 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo enzimático.
•
Muestra problema orina: 0.1 ml de orina diluida, 0.4 ml de agua destilada y 1 ml de reactivo enzimático
Se mezclaron e incubaron durante 5 minutos a 37ºC. Posteriormente se leyeron las absorbancias a 505 nm en el espectrofotómetro.
i.
Luego de realizar los pipeteos respectivos, lo llevamos al espectofotometro para la medición de las absorbancias. Este resultado sale adecuado ya que en general la muestra problema de la orina debe ser mayor que el del suero.
TUBO Blanco Estándar
ii.
Ahora mediante la fórmula corta, vamos a calcular la muestra problema de la orina y el suero. [
iii.
ABSORBANCIA 0.026 0.108 0.082 0.136
[
]
]
De los datos podemos inferir que los volúmenes de los tubos St y MP son iguales, por tanto este factor se excluye. = 1; por ello este factor se excluye en los cálculos.
iv.
Para la muestra problema SUERO: [
[ ]
] [
v.
]
)
6,82 mg/dl
Para la muestra problema ORINA: [
[ ]
]
[
vi.
(
]
(
)
6,82 mg/dl
Posteriormente calculamos la excreción de urea en orina de 24 horas: 26,8 mg --------- > 100 ml X mg
---------- > 2 195 ml
X = 588,26 mg/ 24h
CONCLUSIONES
Como se pudo observar algunos de los grupos presentes en la práctica hallaron valores de ácido úrico en orina elevados, al igual que los valores de excreción, lo que podría traducirse en una infección o hasta en una leucemia, como también error al momento de tomar la muestra por no haber homogenizado la orina, debido a que supera por muchísimo los valores normales de 250 – 750 mg / 24 h, el valor obtenido en práctica fue de 1800 mg/ 24 h.
El principal método para encontrar la concentración de ácido úrico es el método enzimático, donde intervienen diversas enzimas como la uricasa y la peróxidasa, para formar el compuesto coloreado rosado llamado QUINONAIMINA, el cual es proporcional a la concentración del producto del metabolismo purínico.
Se podría descartar alguna alteración o patología a nivel renal, debido a que los valores de ácido úrico en suero se encuentran dentro del rango normal, por lo tanto no padece de hiperuricemia.
COMENTARIOS Los valores de concentración de ácido úrico en la mayoría de las mesas fueron normales pero los valores “anormales” se pudieron dar por los siguientes motivos: Errores en cuanto a la medición, debido a que la pipeta tiene un elevado margen de error, esto podría disminuir si se hace uso de una micropipeta. También puede ser debido a una mala dilución hecha por los alumnos. Otro motivo puede ser porque no se agitó la muestra de orina antes de comenzar a hacer las diluciones ya que el ácido úrico tiende a sedimentar, lo cual puede llevar a obtener una elevada concentración de ácido úrico.
CUESTIONARIO
1.
Porqué se le conoce como ácido úrico, si no tiene la función acida COOH?
Acidez 5.6 pKa Alcalinidad 8.4 pKb Es decir, si bien no es un compuesto que tenga grupos funcionales ácidos como los carboxílicos, su misma propiedad de pKa o sea de tener una constante de acidez 5.6, hace que pueda donar protones muy fácilmente y AQUELLAS SUSTANCIA CAPAZ DE DONAR PROTONES SE LES CONSIDERA ÁCIDOS. 2. Expresar los valores de referencia en términos de mmol/L Los valores normales están entre 3.5 y 7.2 mg/dL; pasando a moles se divide entre el P.M. (Peso molecular) del compuesto que corresponde a 168 g/mol y para pasar a litros multiplicamos por 10; por lo cual tendríamos: (3.5 mg/dL)(10)/168 = 0.208 mmol/L (7.2 mg/dL)(10)/168 = 0429 mmol/L Obteniendo el rango entre: (0.208-0.429) mmol/L En el caso de los valores para una mujer serían: (2.6 mg/dL)(10)/168 = 0.155 mmol/L (6.0 mg/dL)(10)/168 = 0.357 mmol/L Obteniendo el rango entre: (0.155-0.357) mmol/L 3. Describa brevemente la enfermedad de la gota. La gota es una enfermedad producida por una acumulación de cristales de sales de urato (ácido úrico) en distintas partes del cuerpo, sobre todo en las articulaciones, tejidos blandos y riñones. El ataque agudo de gota típico consiste en una artritis que causa intenso dolor y enrojecimiento de inicio nocturno en la articulación metatarso falángica del dedo gordo del pie. La gota es uno de los tipos de artritis por micro cristales. El factor fundamental que causa la gota es la hiperuricemia (elevación de los niveles de ácido úrico en sangre). Los dos motivos principales por los que son demasiado altos los niveles de ácido úrico en sangre son el aumento de su producción por el organismo y la disminución de su eliminación por el riñón. Los estilos de vida poco saludables, la obesidad, la ingesta excesiva de alcohol o alimentos ricos en purinas, como las carnes rojas, vísceras, pescado azul o mariscos, actúan como desencadenante de las crisis gotosa, pero no son la causa de la enfermedad que está condicionada por factores de origen genético en la mayor parte de los casos.
TRATAMIENTO Fármacos antiinflamatorios no esteroideos. Son los medicamentos más empleados para el tratamiento de la crisis aguda de gota y su eficacia ha quedado demostrado en diferentes ensayos clínicos, pueden administrarse por vía oral y son también útiles para el alivio del dolor. No se aconseja sin embargo la utilización de aspirina Colchicina. Es un medicamento muy utilizado para el tratamiento de la crisis aguda y es especialmente útil si se administra precozmente. Tiene sin embargo el inconveniente de una vida media muy corta y debe evitarse si existe diarrea, insuficiencia hepática o insuficiencia renal. También se emplea a bajas dosis, de entre 0.5 y 1 mg diarios, como medicación preventiva. Fármacos hipouricemiantes. Tienen la propiedad de reducir los niveles de ácido úrico en sangre, por lo que facilitan la desaturación y la disolución de los depósitos de esta sustancia que se forman en los tejidos. El medicamento más empleado de este grupo terapéutico es el alopurinol que actúa mediante la inhibición de la enzima xantina oxidasa y se administra a una dosis comprendida entre 100 y 300 mg diarios. Uricosúricos. Son medicamentos que aumentan la expulsión de ácido úrico por la orina. Glucocorticoides. Se ha demostrado que los glucocorticoides son tan efectivos como los AINE y se pueden usar si existen contraindicaciones para los AINE. También provocan mejoría cuando se inyectan en la articulación; sin embargo, se debe excluir una artritis infecciosa ya que los esteroides empeoran esta enfermedad.
4. Mencione los fármacos que varía los niveles de uricemia. Medicamentos o tratamientos que el médico puede recetar para tratar la hiperuricemia: Si tiene niveles altos de ácido úrico en sangre, su médico podrá recetarle ciertos medicamentos, entre ellos: Agentes antiinflamatorios no esteroides (AINE) y Tylenol® como naproxeno de sodio e ibuprofeno, brindan alivio al dolor relacionado con la gota. La gota puede ser el resultado de un nivel alto de ácido úrico. Si debe evitar los medicamentos AINE debido a su tipo de cáncer o a la quimioterapia que está recibiendo, el acetaminofén (Tylenol) de 400 mg, dos tabletas cada 6 horas, puede ayudar. Es importante que no exceda la dosis diaria recomendada de Tylenol, ya que puede dañar al hígado. Consulte a su médico.
Fármacos uricosúricos: estos fármacos bloquean la absorción de urato, que puede prevenir que los cristales de ácido úrico en los tejidos. Ejemplos de fármacos uricosúricos incluyen probenecid y sulfinpirazona. Los inhibidores de la xantina-oxidasa, como el alopurinol, previenen la gota. Sin embargo, los síntomas de gota podrán empeorar si se lo toma durante un episodio de inflamación dolorosa de las articulaciones. Existen dos tipos de fármacos que se pueden utilizar en este caso: uricosúricos e inhibidores de la xantino-oxidasa (Alopurinol). Ambos deben emplearse pasadas dos semanas del ataque agudo de gota. Los fármacos uricosúricos aumentan la excreción urinaria de urato. Son criterios de exclusión los siguientes: edad mayor de 60 años, Acl-Cr < 50 ml/m, flujo de orina < 1ml/min y antecedentes de nefrolitiasis. El principal riesgo de este grupo de fármacos es la formación de cristales de urato y su depósito en los túbulos renales, pelvis y uréter, produciendo cólicos renales y deterioro de la función renal. Los fármacos más usados son el Probenecid (1-2g/día) y Sulfinpirazona (100-200 mg /12h). Por otra parte, los inhibidores de la xantio-oxidasa disminuyen la producción de ácido úrico bloqueando el paso final en la síntesis de urato mientras que se elevan las oxypurinas (xantina e hipoxantina). El Alopurinol es una pyrazolopyrimidina, análogo de la hipoxantina, y es el único inhibidor de la xantino-oxidasa utilizado en la clínica. Aunque su vida media es corta se metaboliza a oxypurinol de vida media larga y similar acción terapéutica. Está indicado en pacientes con gota intercrítica o gota crónica por sobreproducción de uratos y en pacientes con criterios de exclusión para tratamiento uricosúrico. La dosis habitual es de 100-300 mg/día según respuesta clínica y función renal. -Tratamiento de la Nefrolitiasis: El tratamiento de la crisis renoureteral aguda no difiere del tratamiento general de este tipo de cuadros salvo por la asociación de soluciones alcalinizantes (bicarbonato/citrato) que ayudan a la disolución del cálculo si es de urato puro. El tratamiento profiláctico de la recurrencia de la litiasis renal tanto de urato como de oxalato cálcico incluye las medidas generales de la hiperuricemia y el tratamiento farmacológico con inhbidores de la XO, estando contraindicados los uricosúricos. -Nefropatía tubular aguda por ácido úrico: Su tratamiento incluye hidratación, alcalinización, acetazolamida y alopurinol en dosis únicas que pueden ser repetidas según evolución y grado de insuficiencia renal. También, ante ciertas formas de leucemia o linfoma, le podrán recetar alopurinol para prevenir complicaciones de la quimioterapia y del síndrome de lisis tumoral, y no necesariamente para prevenir la gota. Con niveles altos de
ácido úrico en la sangre, como resultado de su enfermedad, el ácido úrico se acumulará y formará cristales en los riñones. Esto puede causar que los riñones dejen de funcionar.
