INFORME LABORATORIO BIOQUIMICA
PRESENTADO POR: Laura Gutiérrez Vargas C! "#$%&'&' ()*+ (air) M)g),,-+ M)g),,-+ CC .$$'%/./ E01i+ Le-+ Ma+za+)
PRESENTADO A: DIEGO ALBARRACIN ALBARRACIN
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA 2 A DISTANCIA BOGOTA
PRÁCTICA 1
pH Y SOLUCIONES BUFFER
Resumen.
En el presente informe se encuentran contenidos los pasos y procedimientos seguidos en la preparación de soluciones Buffer ácidas y básicas, con el fin de determ determinar inar de manera manera experim experiment ental al el ph para estas estas soluci soluciones ones en distint distintas as concentraciones, los resultados obtenidos fueron comparados con el ph teórico y así poder deducir los posibles inconvenientes y errores que se cometieron durante el calculo calculo experimental experimental y establecer establecer el por que de la variación variación de los ph de estas soluciones.Introducción.
En esta esta pract practic ica a de labo laborat ratori orio, o, se trab trabaj ajo o con solu soluci cion ones es buffe buffer, r, tamb tambi in n conocidas conocidas como tampón, tampón, las cuales son sustancias sustancias que afectan la concentración concentración de los iones de hidrogeno !o hidronios" en el agua. #as #as soluci solucion ones es buff buffer er o tampó tampón, n, son son diso disolu luci cione oness que que por por el agreg agregad ado o de cantida cantidades des moderad moderadora orass de ácidos ácidos o bases bases fuerte fuertess mantie mantienen nen práctic prácticame amente nte constante el ph. $ambin se dice que una solución es amortiguadora, reguladora o tampón si la concentración de protones %&, es decir el ph de una solución no se ve afectada significativamente por la adición de peque'as cantidades o vol(menes de ácidos y bases.
#os buffer consisten en sales hidroliticamente activas que se disuelven en el agua. #os #os ione ioness de esta estass sale saless se comb combin inan an con con ácid ácidos os y álca álcalilis. s. Esta Estass sale saless hidroliticamente activas son los productos que resultan de la reacción entre los ácidos dbiles y los álcalis fuertes como el carbono de calcio !a partir del acido carbónico e hidróxido de calcio" o entre ácidos fuertes y álcalis dbiles como el cloruro de amonio !a partir del acido clorhídrico e hidróxido de amonio". )n acido buffer reacciona cuando un acido dbil o base dbil se combina con su correspondiente sal hidrolitica en una solución de agua, se forma un sistema amortiguador denominado buffer.
En el presente informe se encuentran contenidos los pasos y procedimientos seguidos en la preparación de soluciones Buffer ácidas y básicas, con el fin de determ determinar inar de manera manera experim experiment ental al el ph para estas estas soluci soluciones ones en distint distintas as concentraciones, los resultados obtenidos fueron comparados con el ph teórico y así poder deducir los posibles inconvenientes y errores que se cometieron durante el calculo calculo experimental experimental y establecer establecer el por que de la variación variación de los ph de estas soluciones.Introducción.
En esta esta pract practic ica a de labo laborat ratori orio, o, se trab trabaj ajo o con solu soluci cion ones es buffe buffer, r, tamb tambi in n conocidas conocidas como tampón, tampón, las cuales son sustancias sustancias que afectan la concentración concentración de los iones de hidrogeno !o hidronios" en el agua. #as #as soluci solucion ones es buff buffer er o tampó tampón, n, son son diso disolu luci cione oness que que por por el agreg agregad ado o de cantida cantidades des moderad moderadora orass de ácidos ácidos o bases bases fuerte fuertess mantie mantienen nen práctic prácticame amente nte constante el ph. $ambin se dice que una solución es amortiguadora, reguladora o tampón si la concentración de protones %&, es decir el ph de una solución no se ve afectada significativamente por la adición de peque'as cantidades o vol(menes de ácidos y bases.
#os buffer consisten en sales hidroliticamente activas que se disuelven en el agua. #os #os ione ioness de esta estass sale saless se comb combin inan an con con ácid ácidos os y álca álcalilis. s. Esta Estass sale saless hidroliticamente activas son los productos que resultan de la reacción entre los ácidos dbiles y los álcalis fuertes como el carbono de calcio !a partir del acido carbónico e hidróxido de calcio" o entre ácidos fuertes y álcalis dbiles como el cloruro de amonio !a partir del acido clorhídrico e hidróxido de amonio". )n acido buffer reacciona cuando un acido dbil o base dbil se combina con su correspondiente sal hidrolitica en una solución de agua, se forma un sistema amortiguador denominado buffer.
*o siempre un sistema buffer es apropiado, por que los iones de algunas sales hidroliticas pueden, por ejemplo, da'ar a los organismos que entran en contacto con el.
#uego de haber obtenido las disoluciones necesarias para reali+ar la practica, procedimos a hallar de manera experimental los ph de estas disoluciones. El ph no es otra cosa que el potencial de hidrogeniones !o peso de hidrogeno", que es regulado por un buffer o amortiguador. uando un buffer es a'adido al agua, el primer cambio que se produce es que el ph del agua se vuelve constante. El ph obtenido experimentalmente se comparo con el ph teórico, el cual se obtiene mediante mediante el desarrollo del balance de masa y balance de carga para una solución regul regulado adora ra típi típica ca,, lleg llegan ando do a una una ecuac ecuació ión n c(bi c(bica ca donde donde la incó incógn gnitita a es la concentración de iones hidronio u oxhidrilo. El p% de las disoluciones amortiguadoras depende de la proporción de stas entre ácido y sal, y a una proporción dada será siempre invariable. -e aquí que, cuando se preparan las disoluciones amortiguadoras, se puede calcular teóricamente el p% seg(n la fórmula
[ H ] +
-onde C base
C ácido
=
C ácido C sal sal
× K
o
[OH ] −
=
C base C sal
×
K
es la concentración del ácido, C es la concentración de la sal, sal
es la concentración de la base y / es la constante de disociación electrolítica del del áci ácido o base base seg seg(n el caso caso.. -e aquí aquí se dedu deduce ce que que al camb cambia iarr las propo proporc rcion iones es entr entre e las las conce concent ntrac racio iones nes de los los comp compon onen ente tess de la me+c me+cla la amortiguadora amortiguadora,, es posible preparar disoluciones con diferentes p%s dentro de los límites determinados por la constante de disociación de los ácidos o bases. #a
proporción de los componentes que constituyen la me+cla amortiguadora se quedan invariables. ada disolución amortiguadora se caracteri+a por una capacidad amortiguadora determinada. Esta capacidad es la medida de la acción amortiguadora de la disolución y se expresa por el n(mero de equivalentes gramo de ácido o de base que deben ser agregados a 0 # de disolución amortiguadora para despla+ar su p% en una unidad. #a capacidad amortiguadora de las disoluciones depende de su concentración absoluta y con la dilución disminuye de una manera directamente proporcional al grado de dilución.
Metodología.
Reactivos y materiales 1 2 3ipetas graduadas de 04 ml 1 0 5oporte para tubos de ensayo 1 06 tubos de ensayo
1 74 ml de disolución 4.089 de fosfato potásico monosustituido 1 :4 ml de disolución 4.089 de fosfato potásico disustituido 1 2; ml de disolución 4.0 * de ácido actico 1 :8 ml de disolución 4.0 * de acetato sódico 1 p% metro
Procedimiento
0. 3reparación soluciones buffer ácidas
En 7 tubos de ensayo previamente numerados, verter las disoluciones de ácido actico y acetato sódico en las proporciones dadas en la tabla 0
Disolución
Número del tubo de ensayo 1
2
3
!
"
antidad de ácido actico 4.0 * !ml"
<
;
8
:
2
0
antidad de acetato sódico 4.0 * !ml"
0
2
8
=
;
<
p% calculado p% experimental
$abla 0. 5oluciones Buffer ácidas
on la ayuda del p% metro, determine el p% experimental de cada muestra.
2. 3reparación de soluciones buffer básicas En ocho tubos de ensayo previamente numerados, verter las disoluciones de fosfato potásico monosustituido y fosfato sódico disustituido en las proporciones dadas en la tabla 2.
Disolución
Número del tubo de ensayo 1
2
3
!
"
antidad de *a%23>6 4.08 9 !ml"
<.8
<
;
=
7
8
antidad de *a2%3>6 4.08 9 !ml"
4.8
0
2
:
6
8
# 6
7
ph calculado ph experimental
$abla 2. 5oluciones Buffer Básicas
on la ayuda de un p% metro, determine el p% experimental de cada muestra.
Resultados.
-iagrama de flujo
$ : =
Nu3erar ,)s tu4)s 0e e+sa5) Me0ir 5 a6a0ir e, 7),u3e+ 0e 8!i0) ) 0e 4ase !)rres9)+0ie+te Me0ir 5 a6a0ir e, 7),u3e+ 0e sa, !)rres9)+0ie+te Deter3i+ar e, 9 0e ,a s),u!i-+
$ablas.
Disolución
Número del tubo de ensayo 1
2
3
!
"
antidad de ácido actico 4.0 * !ml"
<
;
8
:
2
0
antidad de acetato sódico 4.0 * !ml"
0
2
8
=
;
<
p% calculado
3.
%$.1!
.#"
!.12
!.3"
!.#1
p% experimental
3&$
&11
&#%
!&2$
&'!
"&32
$abla :. p% calculado y p% experimental para cada solución preparada !acidas"
Disolución
Número del tubo de ensayo 1
2
3
!
"
#
antidad de *a%23>6 4.08 9 !ml"
<.8
<
;
=
7
8
antidad de *a2%3>6 4.08 9 !ml"
4.8
0
2
:
6
8
7
=
p% calculado
!.!$
!.'%
".2!
".'
"."$
".$"
#.%3
#.23
p% experimental(
!&"$
!
"&%
"&3%
"&
%$"&#%
6
$ :
$abla 6. p% calculado y p% experimental para cada solución preparada !básicas"
álculos.
p% calculado !acidas"
[ H ] +
/ ? 1.74
×10
-5
=
C ácido C sal
× K
9
C ácido
? 4.0 * x < m# @ 04 m# ? 4.< meqAgr x !0mmol@0meqAgr" @ 04 m#
C ácido
? 4.4< 9
C sal
? 4.0 * x 0 m#@04 m# ? 4.0 meqAgr x !0mmol@0meqAgr" @ 04 m#
C sal
? 4.40 9
[ H ] +
0.09 =
0.01
×1.74 ×10
p% ? A#og
H
+
−5
= 1.566 ×10
−4
? :.;
p% calculado !básicas"
[ H ] +
/ ? 1.38
×10
-7
=
C ácido C sal
× K
9
C ácido
? 4.08 9 x <.8 m# @ 04 m# ? 0.628 mmol @ 04 m#
C ácido
? 4.0628 9
C sal
? 4.08 9 x 4.8 m#@04 m# ? 4.4=8 mmol @ 04 m#
C sal
? 4.44=8
[ H ] +
0.1425 =
0.0075
×1.38 ×10
−7
=
2.622
×10
−6
p% ? A#og
H
+
? 8.8;
)n*lisis de resultados.
0. 3ara el cálculo del p% de las soluciones buffer básicas, se hace necesario aclarar que las soluciones preparadas son dbilmente ácidas debido a que las sales utili+adas para su elaboración son ácidos dbiles, las especies mono y di sustituidas del fosfato sódico tienen carácter ácido ya que provienen del ácido fosfórico, el cual tiene tres hidrógenos capaces de protonarse. -ebido a lo anterior, el cálculo se hace con la ecuación para p% ácidos. 2. En la mayoría de los casos el p% calculado estuvo un poco por encima del p% experimental, lo que se puede explicar por el valor de la constante o por del n(mero de cifras significativas que se usaron en los cálculos. En general, los p% calculados coincidieron !en un rango aceptable" con los p% medidos experimentalmente.
:. 3ara un mismo tipo de solución amortiguadora, por qu varía el p% de las diferentes soluciones preparadasC El p% varía de acuerdo a la proporción entre la concentración del ácido y la concentración de la sal
+onclusiones.
5e lograron preparar dos soluciones buffer, una con p% entre : y 7 y otra con un p% entre 8 y =. Due posible determinar el p% experimental usando un p% metro El p% teórico fue calculado a partir de la constante de disociación del ácido actico y del fosfato monosustituído. l comparar los valores del p% teórico y experimental se encontró que son muy cercanos y que siguen una misma tendencia.
,ibliogra-ía.
http@@dta.utalca.cl@quimica@profesor@ur+ua@cap<@
[email protected] http@@laguna.fmedic.unam.mx@Feva+que+@464:@constantes de disociacion.html
RESUMEN (USTIFICACION
La 4i);u<3i!a es u+a !ie+!ia ;ue estu0ia t)0as ,as =)r3as 0e 7i0a> ,) ;ue 9rete+0e3)s es a0;uirir !)+)!i3ie+t)s 48si!)s a!er!a 0e ,as 4i)3),e!u,as 5 su 3eta4),is3) !)39re+0ie+0) ,a i+tera!!i-+ e+tre e,,as> ,as 9r)9ie0a0es estru!tura,es 5 =u+!i)+a,es 0e ,as 9ri+!i9a,es 3),é!u,as ;ue i+ter7ie+e+ e+ ,a a,i3e+ta!i-+ 5 e, 9a9e, ;ue ?uega+ e+ ,e 3eta4),is3) 0e ,)s 3e0i!a3e+t)s> esta es ,a !,a7e 9ara ,a !)rre!ta i+ter9reta!i-+ 5 u+ 9re0i!!i-+ a!erta0a 0e ,a
D/RMIN)+I0N D I/)MIN) + N R/)4 5 RDR)4
6,7/I648 •
•
-eterminar la cantidad de vitamina o acido cítrico contenida en una muestra dada. -eterminar si los conservadores o aditivos químicos de productos procesados afectan la vitamina .
Reactivos 2Anitroanilina 4.07G en actico H %I *itrito de sodio 4,4;G en % 2> Etanol <7G cido oxálico 4.08G 5olución de vitamina , recin preparada !4.2 mg@mI"
1. Procedimiento
En este grupo tomamos la pulpa de un mandarina, 3ara obtener el extracto problema se procede de la siguiente manera En el caso de las frutas cítricas se toma 0 ml de jugo, se
pesa y luego se agregan 6 ml de ácido oxálico al 4,08G, se me+cla bien y se filtra, el filtrado se conserva para hacer la determinación colorimtrica. Jotular ; tubos de ensayo y adicionar los siguientes reactivos Druta problema 0gr &6ml acido oxálico !4.08G" filtrar completar filtrado con 8 ml tomar 0 ml
/ubos +ondiciones
B
0
2
2Anitroanilina, ml
4.0
4.0
*itrito de sodio, ml
4.0
:
6
8
7
Druta Kerdura -0 -2
4.0
4.0 4.0
4.0
4.0
4.0
4.0
4.0
4.0
4.0 4.0
4.0
4.0
4.0
4.0
9e+clar y esperar la decoloración Etanol <7G, ml
:.;
:.;
:.;
:.; :.;
:.;
:.;
:.;
:.;
3atrón vitamina , ml
HH
4.0
4.2
4.6
4.7
4.;
0.4
HH
HH
Lcido oxálico, ml
0.4
4.<
4.;
4.7
4.6
4.2
HH
HH
HH
Extracto problema, ml
HH
HH
HH
HH
HH
HH
HH
0.4
0.4
9e+clar bien y dejar en reposo cinco minutos *a>% 04G, ml
0.2
0.2
0.2
0.2 0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
gua destilada, ml
:.;
:.;
:.;
:.; :.;
:.;
:.;
:.;
:.;
5e me+cla bien el contenido de cada tubo y se lee en el espectrofotómetro las bsorbancias correspondientes a una longitud de onda de 864 nm. Elabore la curva de calibración e interpole las bsorbancias de sus muestras.
JE5)#$->5
G @
G
G #
G &
G "
T u 4 ) @
@ #@ '
@ #. /
@ @# &
@ @ &
@ $. /
T u 4 )
@ @. "
@ &@ '
@ #$ '
@ ## /
@ $. '
T u 4 ) #
@ @. $
@ & &
@ &. #
@ % '
$ %# #
T u 4 ) &
@ % /
@ @" .
@ ## &
@ #$ @
@ @ @
T u 4 ) "
@ @ #
@ ' $
@ & $
@ @/ .
@ @# #
T u 4 ) '
@ % @
@ && #
$ %$ %
@ #/ .
$ %/ '
T u 4 ) M
$ $@ '
$ $@ &
$ $# '
$ $# @
$ $$ #
PROM EDIO
B5>JB*I es la cantidad de intensidad de lu+ que absorbe una muestra esta varia de acuerdo a la lu+ el tiempo que pasa antes de llevarla a l espectrofotómetro ya que los componentes se sientan y los resultados varían E53E$J>D>$>9E$J> es un instrumento que tiene la capacidad de manejar un ha+ de Jadiación Electromagntica !JE9", com(nmente denominado #u+, separándolo en facilitar la identificación, calificación y cuantificación de su energía. Mste tiene la capacidad de proyectar un ha+ de lu+ monocromática !de una longitud de onda particular" a travs de una muestra y medir la cantidad de lu+ que es absorbida por dicha muestra. Esto permite obtener información sobre la naturale+a de la sustancia en la muestraN midiendo la absorbancia !bs" a distintos largos de onda !l" y graficar estos valores en función del largo de onda, formando un espectrograma uando se hace pasar un rayo de lu+ por una probeta !habitualmente un tubo transparente estandari+ado para el aparato en uso" con una solución que se desea anali+ar, algo de la lu+ lo atravesará y otra parte quedará OretenidaO por la muestra. lo OretenidoO se lo denomina bsorbancia, y a lo que pasa $ransmitancia, existiendo una relación entre ambas. onocida una tabla de valores, es posible calcular la concentración de la solución en análisis. Esto se puede reali+ar con el Dotocolorímetro !se colocan filtros específicos de lu+, para que pase sólo una determinada frecuencia" o con el Espectrofotómetro !tiene un prisma que descompone la lu+ y permite utili+ar una frecuencia específica que es la más (til para anali+ar la sustancia en cuestión".
>B5EJKI>*E5 •
•
-urante el proceso hubieron interferencias que pudieron haber sido contaminación u alg(n otro factor como la lu+ el tiempo que transcurrió antes llevar la muestra al espectrofotómetro, los componentes pudieron sentarse y al tomar los resultados se alteraron. Jeali+amos titulaciones para determinar la concentración de ácido existente.
>*#)5I>*E5 •
•
-eterminamos la cantidad de vitamina o ácido cítrico >bservamos si los conservadores o el proceso de elaboración no afectan a la vitamina
3. +uestionario 0. ompare el mtodo que utili+ó con otro mtodo de determinación de la misma vitamina. -eterminación de vitamina El ácido ascórbico o vitamina !7%;>7" se puede determinar por medio de una titulación yodomtrica. #a vitamina es un agente reductor suave que reacciona rápidamente con el ión triyoduro, en esta práctica se genera un exceso conocido de ion triyoduro !I: A " por reacción de yodato con yoduro, se deja reaccionar y luego el exceso de I: A se titula por retroceso con una solución de tiosulfato. El mtodo se basa en las siguientes reacciones ;IA & I>: A & 7%& :I: A & :%2> 7%;>7 & I: A & %2> P 7%;>= & 2%& & :ILcido ascórbico ácido deshidroascórbico I: A & 2!52>:"A2 :IA & !56>7"A2 $iosulfato tetrationato 2Qu ocurriría si no se decolora por completo la solución de 2Anitroanilina al adicionar nitrito de sodioC El *a*>2 !nitrito de sodio" lo estas utili+ando como un agente oxidante para formal la sal de dia+onio en la amina.
la reacción es 2Anitroanilina & *a*>2 AAR 2A*itroAben+enedia+onio hay varias causas por las cuales no se decoloro 0. lo que puede haber pasado es que tu *a*>2, lo hallas preparado mucho tiempo antes y haya perdido su poder oxidante !cosa q es poco com(n... la 2 es mpas com(n". 2. otra causa es que el medio no sea lo suficientemente ácido se necesita al menos una concentración tres veces superior a la del nitrito de sodio en protones en el medio para
que se genre el agente que permite la reacción *> !generalmente se hace en un medio con exceso de ácido %25>6 generalmente esto es porque se debe generar el *> in situ en el medio %& & *a*>2 AAR %*>2 & *a& !primer equivalente gastado" %& & %*>2 AAR %2> & *>& !segundo equivalente gastado" !y el tercero es para mantener el equilibrio" esto se puede saber colocando una gota del medio en papel de almidon iodulado , si cambia a negro inmediatamente está bien !hay poder óxidante *>". :. #a nitroanilina puede haberse oxidado antes produciendo un 0,2Adinitrobenceno, el cual genera *Anitroso derivados.
2. uál es la función del hidróxido de sodio en la determinación de la vitamina C #a vitamina es el ácido ascórbico y el hidróxido de sodio una base, por tanto este act(a como titulante de la vitamina .
:. ómo se afectaría la determinación si la muestra ha sido tratada previamente con calorC #a vitamina se oxida rápidamente y por tanto requiere de cuidados al momento de exponerla al aire, calor y agua. 3or tanto cuanto menos calor se aplique, menor será la prdida de contenido. #as frutas envasadas por haber sido expuestas al calor, ya han perdido gran contenido vitamínico, lo mismo ocurre con los productos deshidratados. En los jugos, la oxidación afecta por exposición prolongada con el aire y por no conservarlos en recipientes oscuros
%IDRLISIS DE POLIACARIDOS ALMIDON ST#)>5
B s+ a,3 i0) + 3,
$
@
#
&
"
'
$ &
$ &
$ &
$ &
$ &
$ &
$ &
$ '
$ '
$ '
$ '
$ '
$ '
Ag ua 0es ti,a 0a
$ @
Na ) &N
@
@
N!, &N
$ '
$ '
COLOCAR LOS TUVOS @' EN BAHO DE MARIA A EBULLICION 2 DE(ARLOS EN EL SIGUIENTE TIEMPO Tie3 9) 0e
$
$
#
'
%
@
@
i+!u4 a!i-+
"
"
Fi+a,iza0) e, tie39) 0e i+!u4a!i-+ sa!ar !a0a tu4) 5 0ete+er ,a *i0r-,isis agrega+0) Na) & N 3,
$
$
@
@
@
@
@
@
Rea!ti 7)#"
@
@
@
@
@
@
@
@
0i+itris i,at)
I+tr)0u!ir t)0)s ,)s tu4)s e+ 4a6) 0e Mar
#
&
"
$
$$ $
$@. .
$$" @
$$# $
$$@ '
@
$$ '
$#& .
$@& .
$% &
$@' '
$@" $
$#' @
$' '
$&' '
$#. "
#
$@ "
$@ &
$&# #
$'
$"# &
&
$&
$'$ @
$/. "
$/'
$/$ '
"
$' &
$.& @
$.
$.& @
$"# /
gru9 ) tu4)
'
$#& %
$%$ &
@#@
$'& /
IDRLISIS DE CELULOSA i0r-,isis a!i0a e+ +CL @
#
&
"
@
@$ ./
@ "&
$ @$
.
$$ @
@" .#
@ %$
# &%
@ #@
. $
#
@. /
#'
# $$
%&
## "
@
#
S+ a,3i0-+
$@
$@
$@
CL &N
$
$
$
Ca,e+tar 3i+ut)s
$
@$
$
Na) &N
$#
$#
$#
#" 0i+itr)
$#
$#
$#
!)+0i!)+ SD+ tatr)+ =ra!!i)+ a,4u3i+a =ra!!i)+ g,)4u,i+a =ra+!!i)+ 9r),a3i+a =ra!!i)+ g,ute,i+as :AO0esti,a0a rea!ti7)
B
@ $>@
A
#
&
"
'
/
.
$>"
@
%
@$
@@
@A @# @&
$># $>" $>/ $>% @>A $>" $>@ $>" $>@
A @>% & &
@>/ @>" @># @>@ $>. @>" & & & & & &
@ @>" & &
@ &
@>" &
$>> $>@ @ A @ & & &
Te39eratura i+i!ia, J! #$J! K @$ 3i+ut)s G@
G
G#
G&
G"
Tu4) @
$$# @
$$# &
$$ '
$@
$$# .
Tu4)
$$/ "
$$/
$$' @
$$'
$$' .
Tu4) #
$@ '
$@$ %
$@@ "
$@/ "
$@ "
Tu4) &
$@" &
$@" '
$@/ @
$# @
$@' #
Tu4) "
$$ &
$@% @
$$ "
$#$ '
$@% .
Tu4) '
$% .
$/ .
$/ "
$$ #
$' %
Tu4) /
$$ @
$$$ '
$$& "
$$@ "
Tu4) .
$$@ #
$$$ &
$$$ &
$$# #
Tu4) %
$$$ '
$@# .
$@$ %
$$"
$
Tu4) @$
$$ %
$% #
$
$$$ "
$&$ %
Tu4)
$$#
$"
$
$$$
$@$
@"
@@
@
&
&
"
'
Tu4) @
$$@ '
$$% @
$& $
$$#
$@% #
Tu4) @#
$$# .
$$ @
$@$
$$ '
$$/ .
Tu4) @&
$$ %
$$@ $
$$$ @
$$# '
$$&
Tu4) @"
PR)+/I+) 9 ! :/R)++I6N D PR6/IN)4 N 4MI;;)4 D ;<MIN64)4 5 +R);4 P6R 46;,I;ID)D.
JE5)9E* -e la siguiente practica de laboratorio podemos encontrar los diferentes pasos para la extracción de proteínas de una sustancia determinada en este caso de la harina de soya en las cuales encontramos albuminas, globulinas, prolaminas y glutelinas. El rendimiento de estas extracciones los cuales se deducen de los porcentajes de proteína total #a solubilidad de una buena cantidad de proteína es función de la fuer+a ionica, el ph y la concentración de solvente orgánico.
>BUE$IK>5 •
•
Identificación de la solubilidad de los diferentes tipos de proteínaV ompara los resultados de la literatura consultada con los obtenidos en la practica
I*$J>-)I>*
#a extracción de proteínas es considerada a menudo como un paso preliminar para una subsiguiente purificación o para un estudio electrofortico, pero de hecho constituye un paso crucial para el estudio de proteínas vegetales, ya que el procedimiento de extracción determina la naturale+a y la estabilidad de las proteínas extraídas, lo que a su ve+ determina la calidad y la valide+ de los resultados. #a extracción con buffers acuosos de baja fuer+a iónica nos permite recuperar las proteínas solubles citoplásmicas y de los espacios intercelulares, mientras que con buffers de alta fuer+a iónica tambin extraemos las proteínas ligadas a la pared celular. continuacion explicaremos algo sobre los materiales que vamos a utili+ar en el laboratorio Jeactivo Biuret El Reactivo de ,iuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico !/>%" y sulfato c(prico !u5>6", junto con tartrato de sodio y potasio !/*a6>7W6%2>". El reactivo, de color a+ul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El %idróxido de 3otasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.
5e usa normalmente en el ensayo de Biuret, un mtodo colorimtrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioletaAvisible a una longitud de onda de 874 nm !para detectar el ión u2&".
Procedimiento @ 5e toma un tubo de ensayo y se colocan tres centímetros c(bicos de
alb(mina de huevo, es decir la parte transparente. 5e a'aden 2 centímetros c(bicos de solución de hidróxido de sodio al 24G. # 9ás adelante se agregan 6 ó 8 gotas de solución de sulfato c(prico diluida al 0G. 6. El resultado es que la me+cla se torna de color violeta, indicando la presencia de proteínas.
9E$>->#>TI •
%2> desminerali+ada
•
*al al 0 G
•
Etanol al =8G
•
*aoh al 4.0 *
•
Jeactivo de Biuret
•
5olución de concentración conocida
3rocedimiento en -iagrama de flujo
JE5)#$->5
$B# ondicione B 0 s
=
;
<
04 00 02 0: 06
A 4.0 4.: 4.8 4.= 4.< 0.2 A
A
A
A
5ol patrón albumina
A
Dracción albumina, ml
A
Dracción globulinas
A
Dracción prolaminas
A
2
:
6
8
7
A
A
4.8 0.4
4.8 0.4
4.8 0.4
A
A
Dracción glutelinas
A
%2> destilada, ml
2 0.< 0.= 0.8 0.: 0.0 4.; 0.8 0.4 0.8 0.4 0.8 0.4 0.8 0.4
4.8 0.4
R)+/I6 D ,IR/ N /6D64 ;64 /,64 M;
TJ) 3> 0
2
:
6
8
4,4:0 4,4=8 4,028 4,086 4,246 4,2<; 4,420 4,40: 4,447 4,42< 4,4:0 4,407
4,4:6 4,4=2 4,04< 4,087 4,0<0 4,2=; 4,447 4,446 4,0:; 4,2<: 4,486 4,4<0
4,427 4,470 4,008 4.40=0 4,248 4,2=8 4,468 4,446 4,04< 4,222 4,226 4.624
4,022 4,477 4,4=2 4,2:0 4,:47 4,42: 4 4,4:: 4,482 4,448 4,4:2 4,427
4,4:2 4,47; 4,028 4,07: 4,4<; 4,2<7 4.408 4 4.222 4,64< 4,047 4,0<:
$)B> 0 2 : 6 8 7 = ; < 04 00 02
0: 06
4.4:; 4,42<
TJDI -E JE5)#$->5
4,420 4,404
4,042 4,470
4,4:7 4,47:
4,4=; 4,46;
>#>J -E #>5 $)B>5 -E53)E5 -E )* BX> -E :4 Y
*#I5I5 -E JE5)#$->5 En el resultado de la practica determinamos la concentración de proteínas en la harina de soya y el nivel de absorbancia atraves de un fotómetro. $ambin los diferentes tipos de proteína que en ella se encuentra como la albumina, globulinas prolaminas y glutelinas, dando respuesta de su solubilidad. 3or medio de la grafica anterior se pudo determinar la cuantificación de las fracciones obtenidas por muestra.
BIB#I>TJDI
•
http@@ZZZ.dclmexico.com@[email protected]
•
9>-)#> Q)I9I >JT*I )*-
PR)+/I+) D ;),6R)/6RI6 NMR6 " 4/DI6 +IN/I+6 D ;) R)4)
JE5)9E* #a ureasa es una en+ima que se utili+a como agente catalítico y en este trabajo se pretende determinar varios factores característicos de la ureasa como su temperatura y ph característico en este caso nos permite el estudio sobre la temperatura y la comparación de micromoles de urasa vs temperatura. >bjetivos •
-eterminar la concentración de ureasa y la temperatura sobre la velocidad de reacción
I*$J>-)I>* #as reacciones químicas que ocurren en los sistemas vivientes son tan variadas como complejas. 5in embargo, la naturale+a provee velocidades de reacción en condiciones por demás suaves, que harían avergon+ar al mejor químico. #a mayoría de las reacciones que ocurren en los sistemas vivos son catali+adas por proteínas conocidas con el nombre de enzimas . ientos de en+imas han sido aisladas y probablemente existen cientos de miles en la naturale+a. 5u estructura es muy compleja, y puede ser representada como se muestra en la figura 6. #as en+imas reciben su nombre en función de su actividad específica, así, por ejemplo, la en+ima OureasaO catali+a con eficiencia la hidrólisis de la urea, las proteasas act(an sobre las proteínas, las amidasas sobre las amidas, etc. $odas las en+imas desde el punto de vista químico son proteínas, pero pueden asociarse con substancias no proteínicas, llamadas coen+imas o grupos prostticos, que son esenciales para la acción de la en+ima. veces las en+imas son inactivas catalíticamente, si no se encuentran en presencia de ciertos iones metálicos.
la lu+ de muchos estudios se ha logrado establecer que no toda la molcula de proteína presenta actividad catalítica, sino (nicamente una región relativamente peque'a, la cual se denomina centro activo. #os mecanismos de reacción de las en+imas son muy complejos, implicando un n(mero de etapas elementales cada una de las cuales puede incluir interacciones complejas entre varios grupos de las molculas de la en+ima y el sustrato. En las reacciones catali+adas por en+imas las velocidades de reacción, así como los mecanismos se ven afectados por cambios en la concentración, el p% y la temperatura.
9E$>->#>TI -ITJ9 -E D#)U>
+ondiciones )rea 4.28 9, ml Buffer de fosfato p% óptimo, ml
/ubos B
0
2
:
6
8
8
8
8
8
8
8
6.8 6.8
6.8
6.8
6.8
6.8
%gl2, gotas
6
HH
HH
HH
HH
HH
$emperatura de incubación, [
07
4
07
:=
74
<2
olocar cada tubo en ba'o de agua a la temperatura indicada por cinco minutos y sin sacarlos agregar. 5olución de ureasa, ml
4.8
4.8 4.8
4.8
4.8
4.8
gitar e incubar por 28 minutos a la temperatura correspondiente %gl2 0G, gotas
HH
6
6
79 #
89 #
6
6
6
$itular con %l !normalidad conocida" Jesultados, ml de %l 89 #
79# 89 79# #
$itulación con acido clorhídrico
B
0
2
:
6
8
7
=
0
:.<
:.6
4,6
0
0.7
2
0.2
2.8
4,:
0.0
0.7
:
4.8
4.7
4.8
4.=
4.:
4.:
4.8
4.6
6
8ml
7ml
8ml
7ml
8ml
7ml
8
0ml
0.:ml
0,2ml
2ml
2,;ml
oncentración del acido clorhídrico es de 4,02 *
*#I5I5 -E JE5)#$->5
•
5egun los resultados obtenidos la ureasa tiene un comportamiento optimo a los 74Y ya que a otras temperaturas es inestable y no se puede determinar su función adecuada y no permite neutrali+ar el acido que se agrega.
BIB#I>TJDI
•
•
9odulo de bioquímica http@@ZZZ.utadeo.edu.co@comunidades@estudiantes@cienciasPbasicas@bioqui [email protected]
