UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL F M RANCISCO DE M IRANDA
Area Ciencias del Agro y del Mar Programa de Ingeniería Agronómica Dpto. Ambiente y Tecnología Agrícola
PRACTICA No.1
COLECCIÓN Y PRESERVACIÓN DE INSECTOS
OBJETIVO: Practicar algunas técnicas para colectar y preservar insectos que se van a destinar a estudios de clasificación e identificación.
MATERIALES DE TRABAJO: 1. EQUIPOS DE COLECCIÓN * a) Malla o red para la captura (fig.1). b) Bolso para guardar los instrumentos de colección (fig.2). c) Cámaras preparadas con dicloroetano para matar los insectos colectados (fig.3). d) Cajitas o latas con tapa para guardar el material colectado en sobres (fig.4). e) Bolsas plásticas y de papel para recoger muestras de tierra, hojarascas, etc. f) Libreta de notas, papel para etiquetar las colecciones y lápices. g) Estuche con pinzas, tijeras, agujas de disección, regla, lupas, etc. h) Separador de insectos (fig. 5). i) Machete, cuchillo y navaja. j) Aspirador de insectos (fig. 6). k) Trampas de diferentes tipos (fig. 7). * Para mayor información sobre el uso y la descripción de estos equipos se recomienda revisar la literatura especializada.
2. MATERIALES DE LABORATORIO . a) Insectos para montar. b) Papel para etiquetar. c) Alfileres entomológicos y alfileres corrientes con cabeza de plástico. d) Pinzas. e) Banco para fijar la altura del insecto y las etiquetas (fig. 8). f) Papel encerado o glassine. g) Extendedor de alas de mariposa (fig. 9). h) Anime de tres centímetros de espesor. 3. PRODUCTOS QUÍMICOS : a) Alcohol etílico o isopropílico. b) Eter acético. c) Benceno. d) Goma arábiga. e) Hidrato de cloral. f) Glicerina. g) Dicloroetano. Material Preparado y Revisado por: Prof. YANET ZAVALA y BELKYS GÓMEZ
PRÁCTICA 01 1 Entomología/UNEFM
MATERIALES DE TRABAJO Fig. 2. Bolso para Instrumental de Colección de Insectos
Fig. 3. Cámara para matar insectos
Fig. 6. Aspirador de Insectos
Fig. 8. Banco para fijar altura
Fig. 4. Caja para insectos
Fig.5. Separador de insectos
Fig. 7. Trampas para Insectos
Fig. 9. Extendedor de alas de mariposa
MÉTODO DE TRABAJO. 1. Leer cuidadosamente la presente guía. 2. Atender rigurosamente las explicaciones previas. 3. Montar los insectos que se le suministren tomando en consideración las instrucciones dadas en la presente guía. 4. Presentar el trabajo para que le sea calificado. O BSERVACIÓN : No debemos olvidar que cada insecto debe llevar por lo menos una etiqueta, la cual BSERVACIÓN : contendrá los datos de colección: Lugar, fecha, hábitat y nombre del colector.
El Manantial, Sta María. Falcón. 12-VII-1998. Inflorescencia Mango Yanet Zavala Gómez
LA BÚSQUEDA DE LOS INSECTOS. Los insectos se encuentran en todas partes: en el aire, en las aguas corrientes o estancadas, nadando libremente sobre o dentro de éstas o escondidos bajo el fango, debajo de las piedras u otros objetos, sobre las plantas o los animales, encima encima o dentro de la tierra, en productos procesados o almacenados asociados con materia orgánica, etc. Sin embargo, si una persona no desarrolla una habilidad especial para verlos, es difícil diferenciarlos diferenciarlos del medio donde están. La época del año tiene una influencia marcada en el número y la variedad de insectos presentes en una determinada zona. En nuestro medio, en la estación de lluvias es cuando más abundan, especialmente al inicio de la misma. Algunas especies tienen hábitos diurnos, otros crepusculares o nocturnos por lo que la hora de la captura variará en cada caso. Si se colecta durante el día, es preferible hacerlo en la mañana antes de que salga el sol caliente, procure desechar los días nublados, pues no son los mejores.
ALGUNAS ESTRATEGIAS PARA CAPTURAR INSECTOS: 1. Mallas o redes: Instrumento consistente de un mango largo, un anillo de metal y una bolsa de tela tela o metal (fig. (fig. 10-12). Las mallas según al fin que se destinen pueden ser: a) Mallas livianas de tela ligera para capturar insectos voladores. b) Mallas fuertes y más pesadas para pasarlas por sobre la vegetación baja y capturar los insectos que se encuentran allí comiendo o reposando. c) Mallas de metal dedicadas a la captura de especies acuáticas. Fig. 10. Malla Liviana
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Fig. 11. Malla Fuerte
Fig. 12. Malla Acuática
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2. Trampas: Consiste en recipientes y equipos que dejados en el ambiente permiten la captura de los insectos, pemitiendo su entrada más no su salida. Existen variados tipos de trampas entre las cuales se encuentran: a) Trampas con cebo: Se entiende como tal cualquier recipiente al cual se le pone un cebo que hace que el insecto entre y no pueda salir después. Una de las más sencillas consiste en enterrar una lata o botella hasta que el extremo abierto o boca quede al nivel del suelo, dentro de los recipientes se coloca cualquier sustancia atrayente según el insecto que nos interese: melaza, carne, frutas podridas, líquidos azucarados, productos químicos especiales, etc. Los insectos así atraídos, Figura 13 generalmente especies que viven en el suelo, caen dentro del envase y son incapaces de salir (fig. 13). La trampa se puede proteger contra la lluvia o animales grandes con una cubierta. Para atrapar a algunos tipos de moscas y abejas se puede utilizar una trampa en la que los insectos son atraídos por el cebo colocado y al tratar de escapar vuelan hacia arriba quedando atrapados en una cámara sin salida, ésta puede tener o no algún tipo de veneno dependiendo del entomólogo. Algunas especies de mariposas diurnas pueden capturarse con una variante de esta trampa o con una trampa específica tal como se muestra en la figura 14.
Figura 14
b) Trampa de Luz: Consiste en emplear durante horas de la noche la acción atrayente de la luz sobre los insectos. La más sencilla consta de una fuente de luz blanca y una tela blanca extendida junto a ella, para proceder a seleccionar y capturar en forma directa los insectos que atraídos por la luz se lleguen a posar en dicha tela. Otras variantes de trampas de luz para uso continuo, incluyen un recipiente con veneno volátil en donde caen los ejemplares una vez que mueren por efecto de los gases (fig. 15), también pueden variar las Figura 15 fuentes de luz a emplear según las especies de insectos que se quieran capturar, teniéndose luz incandecente, fluorescente, ultravioleta, etc. c) Trampa Malaise: Consiste en una estructura parecida a una carpa (fig. 16), elaborada en tela muy fina y soportada verticalmente por uno o más postes y cuerdas. Esta trampa funciona por la tendencia de muchas especies de insectos voladores de trepar o volar hacia arriba. Al hacer esto y subir dentro de la trampa, termina en un frasco con veneno, de donde se recogen diaria o semanalmente. En esa forma se Figura 16 pueden capturar muchas moscas, avispas y otros insectos de vuelo rápido difíles de atrapar con una malla 3. Separadores: Muchos insectos se encuentran en la hojarasca, residuos vegetales, en el suelo, etc, haciéndose necesario para su colecta dispositivos que permitan separar los Material Preparado y Revisado por: Prof. YANET ZAVALA y BELKYS GÓMEZ
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especímenes del material donde se encuentra. Los separadores son los empleados en esta tarea pues cuentan con bastidores de malla metálica de diferentes diámetros según el tipo de material a separar y el tamaño de los especímenes que se buscan. Entre los separadores el más usado es el embudo de Berlese(fig.17), que consiste en un cono truncado e invertido, hecho de latón, abierto en su base y en su vértice, y con un tamiz metálico para sostener los materiales que se colocan dentro. Sobre el material a separar se coloca una puente de calor (bombillo incandescente) que provoca una reacción de escape de los insectos los cuales bajan Figura 17 atravezando la malla, para luego caer a través del embudo en un recipiente hermético adosado al vértice del embudo. 4. Aspiradores: Es un aparato especial para colectar pequeños Figura 18 insectos, consiste en un frasco o vial, cuya abertura se encuentra tapada con un tapón de corcho o goma doblemente perforado; a través de estos orificios se conectan: un tubo de vidrio doblado por donde el colector succiona con la boca, y en el otro una manguera flexible que termina en un tubo de vidrio por donde entran los insectos violentamente al succionar el colector, quedando de esta manera atrapados en el frasco (fig.18). 5. Tela blanca: Muchos insectos cuando son molestados caen al suelo aparentando estar muertos, si colocamos un trozo de tela blanca extendida en el suelo y movemos las ramas de los árboles que están encima, podemos capturarlos inmediatamente.
MUERTE DE LOS INSECTOS: Para matar los insectos colectados se recomienda usar frascos especialmente preparados con gases obtenidos a partir de la sublimación de sales o a partir de sustancias volátiles. Originalmente se tabajaba con cianuro de potasio, fumigante altamente tóxico para los humanos, razón por la cual debían extremarse al máximo los cuidados al momento de preparar las llamadas cámaras de cianuro, ésto incluía el uso de máscara contra gases tóxicos, guantes, lentes, bata de laboratorio, y realizar el proceso bajo campanas de evacuación de gases. Las cámaras de cianuro consistían en un frasco de cristal en el cual se depositaba según este orden: una cantidad de cianuro de potasio suficiente para cubrir el fondo del frasco, una capa de 1 a 2 cm. de aserrín fino, y finalmente una capa de mortero húmedo de yeso (1 a 3 cm de espesor según el tamaño del frasco), que al secar 2 días después, mantenía al fumigante en su sitio y permitía que sus gases tóxicos percolaran lentamente a través de los poros del yeso hacia el resto del frasco que debía mantenerse herméticamente herméticamente cerrado con su tapa. Dada la peligrosidad del cianuro, el requerimiento de equipos de seguridad y laboratorio, y el riesgo de la liberación repentina del tóxico debido a la rotura del frasco, en la actualidad se trabaja con Dicloroetano, un veneno líquido muy volátil que puede ser manejado Material Preparado y Revisado por: Prof. YANET ZAVALA y BELKYS GÓMEZ
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en forma bastante segura empleando inyectadoras desechables para preparar las cámaras para matar insectos. La cámara de dicloroetano se Veneno prepara colocando en el fondo del frasco un trozo de esponja vegetal de aproximadamente 2 cm de espesor, en la cual se aplica el dicloroetano 9 1 (5 a 10 gotas según tamaño del frasco), inmediatamente después se a r u coloca un tapón bien comprimido de papel absorvente de 2 a 3 cm de i g F espesor y encima de éste una tira de papel absorvente para recoger y separar los insectos (fig. 19). El tapón de papel absorvente se debe retirar con una pinza cada vez que se requiera aplicar el dicloroetano toda vez que este fumigante se evapora muy rápidamente perdiéndose el efecto activo de esta cámara durante poco tiempo de uso (una o dos salidas de colecta). Para mayor seguridad es necesario colocar una etiqueta de advertencia y abrir el frasco en condiciones de aire libre y lo más alejado posible de la cara del colector. Al momento de salir al campo a colectar debemos llevar por lo menos dos cámaras para matar insectos, una para insectos frágiles y otro para los insectos fuertes, ya que si se guardan en el mismo recipiente, los primeros pueden ser dañados por los segundos. Por la misma razón no debemos meter muchos insectos en un mismo frasco, ya que se deterioran unos con otros por efecto de los movimientos de los insectos en agonía dentro de la cámara o bien por los desplazamientos del colector mismo durante sus tareas de captura. Con el fin de obtener insectos limpios debemos asear los frascos por dentro con papel absorbente después de haber sido usados y seguidamente colocarle nuevas tiras de papel absorbente para separar un poco a los insectos que se introducen vivos, de esta manera se amortiguan los movimientos bruscos y en algo el daño a los especímenes colectados. En el caso de las mariposas (Lepidoptera) que son insectos muy delicados y frágiles, se capturan con mallas entomológicas y para matarlas se deben agarrar cuidadosamente por el cuerpo sin tocar las alas, preferiblemente se debe emplear una pinza suave especial para esta actividad, luego se le inyecta una pequeña cantidad de amoniaco por la parte ventral en el punto donde se une el tórax con el abdomen, preferiblemente con inyectadora de aguja subcutánea (ej: para insulina), posteriormente se deben guardar en sobres de papel glassine con las alas plegadas en forma vertical (ver secuencia de imágenes de la fig. 20), para luego montarlas en los extendedores de alas de mariposa lo antes posible pues en nuestro clima estos especímenes se vuelven rígidos en unas pocas horas. Figura 20
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En caso de que no sea posible montar las mariposas en un corto periodo de tiempo, se recomienda guardarlas en el congelador en sus sobres, protegidos dentro de un envase plástico herméticamente herméticamente cerrado. En algunos casos podemos utilizar también líquidos, como alcohol al 60% ó 70% para matar insectos, para ello se prepara un frasco de boca ancha lleno con este líquido, bien cerrado para evitar 1 derrames. Los insectos capturados se introducen dentro del líquido para 2 a r u morir instantes después, permaneciendo en el frasco hasta el momento g i de su montaje (fig. 21). Cabe indicar que este método no debe F emplearse con insectos frágiles pues muchos especímenes se dañan, tal es el caso de las mariposas y las moscas entre otros, además la mayoría de los insectos pierden su coloración natutral si permanecen mucho tiempo sumergidos, por lo que resulta conveniente montarlos a la brevedad posible.
MANIPULACIÓN DE LOS INSECTOS: Se ha comprobado que los insectos adultos de cuerpo duro se conservan montados en alfileres especiales, pues mantienen su forma y se manejan fácilmente sin ser dañados. Se recomienda que se preparen lo más rápido posible, pues de esta manera es más fácil montarlos, en caso contrario se deben guardar en sobres de papel suave, los cuales, a su vez se almacenan en cajas entomológicas cerradas (fig. 22), en espera de que se arreglen; es conveniente colocar dentro de la caja un Figura 22 repelente, anteriormente se usaba naftalina pero, debido a su carácter cancerígeno, se utiliza actualmente pastillas de alcanfor, de manera que se evite la entrada de insectos vivos que pueden destruir el material colectado. Cuando los insectos se guardan por un tiempo sin montarse se vuelven rígidos imposibilitando imposibilitando el correcto montaje de los mismos, por esta razón se hace necesario ablandarlos. La forma más simple de lograrlo es colocándolos en una cámara húmeda, la cual puede ser improvisada con una bandeja con tapa, en una cápsula de petri (fig. 23), etc. En esta cámara se coloca papel absorbente humedecido con agua y un algodón con fenol en una esquina para cortar el desarrollo de Figura 23 hongos. Los insectos secos y duros se colocan dentro de esta cámara, sobre el papel absorvente y se cubren con otra capa de papel, luego se coloca la tapa y se deja por varios días a temperatura ambiente o refrigerado, hasta que pierdan la rigidez, ese es el momento de montarlos. En el caso de las mariposas se puede recuperar la movilidad de sus alas Material Preparado y Revisado por: Prof. YANET ZAVALA y BELKYS GÓMEZ
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con sólo inyectarles agua en el tórax, aunque si se mantienen en sus sobres dentro del congelador conservan la flexibilidad del cuerpo.
LIMPIEZA DE LOS ESPECÍMENES COLECTADOS: En muchos casos, antes de proceder al montaje, es necesario limpiar los insectos que están cubiertos con partículas extrañas. La forma más sencilla para limpiarlos es con un pincel de cerdas finas y suaves impregnadas de agua con cloroformo o líquidos especiales usados para este fin (fig. 24). Debe pasarse el pincel sobre la parte del cuerpo sucia, con delicadeza y suavidad, para evitar que se dañen. Otra forma de limpiarlos es sumergiendo el insecto en alcohol, o en agua a la cual se le ha agregado un detergente especialmente formulado para ello.
Figura 24
MONTAJE DE LOS INSECTOS: Los alfileres entomológicos vienen en diferentes diámetros que se adaptan al tamaño, finura y fragilidad del espécimen que se va a montar, se denominan según los siguientes números: 000, 00 y del 0 al 7 (fig. 25 en tamaño real). La colocación del alfiler en cada caso debe hacerse perpendicularmente con los ejes longitudinal y transversal del insecto (fig. 26) la altura a que se deja también es importante, siempre debe ser la misma en todos los insectos, lo cual se logra con los medidores de altura en el momento de montarlo (fig. 27). Se uniformiza la altura para optimizar la presentación de las colecciones, facilitar su manejo y para dejar espacio suficiente para las etiquetas El sitio por donde penetra el alfiler al cuerpo del insecto, ha sido determinado cuidadosamente cuidadosamente para cada grupo y se detalla en la bibliografía respectiva respectiva (fig. 28). 7
Figura 25
6 5 4 3 2 1 0
Figura 26
Figura 27
Figura 28 Material Preparado y Revisado por: Prof. YANET ZAVALA y BELKYS GÓMEZ
PRÁCTICA 01 8 Entomología/UNEFM
Una vez colocado el alfiler en el insecto se llevan a un trozo de anime, se clava hasta el nivel donde está el insecto y luego se le acomodan las patas y las antenas en la posición que tenía cuando el insecto estaba vivo, para mantenerla se utilizan los alfileres auxiliares los cuales se dejan allí hasta que el insecto adquiera rigidez (fig. 29); en ese momento se retiran los alfileres auxiliares, se colocan las etiquetas y se pasa el insecto montado a la caja de colección (fig. 30).
Figura 29
Figura 30
Las mariposas se montan utilizando una tabla especial llamada extendedor de alas que permite abrirselas, acomodar éstas y las demás estructuras del insecto según se muestra en la secuencia de imágenes de la figura 31, donde se pueden apreciar los siguientes pasos: 1) abrir las alas, 2) introducir el alfiler en la parte media del tórax, 3) fijar este alfiler en el extendedor de alas, 4) las antenas se colocan paralelas al borde anterior del primer par de alas, las cuales deben subirse hasta que el margen posterior forme un ángulo de 90º con el eje longitudinal del cuerpo, asegurando luego las alas con dos tiras finas de papel glassine, 5) las alas posteriores se acomodan de manera que el margen anterior forme un ángulo de 90º con el eje longitudinal del cuerpo, para desplazar las alas se emplearán alfileres finos introducidos cerca de una vena, 6) se fijan las cintas finas y se sostiene el abdomen a nivel de la tabla y 7) se fijan las alas con las cintas anchas rodeando su contorno con alfileres auxiliares a fin de que no se deformen durante el secado.
Figura 31 Material Preparado y Revisado por: Prof. YANET ZAVALA y BELKYS GÓMEZ
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DOBLE MONTAJE: Algunos insectos son tan pequeños que no se pueden atravesar, aún con el alfiler de menor diámetro, sin dañar gravemente sus estructuras. Para ellos se han ideado métodos diferentes de montaje: Ø
CON MICROALFILERES, se toma el microalfiler con una pinza y se le introduce al espécimen en el punto que corresponde según el orden al que pertenezca, tomando en cuenta que quede perpendicular a los ejes longitudinal y transversal del cuerpo (esto se hace bajo la lupa). Luego el microalfiler se Figura 32 monta cerca de un extremo de una base rectangular de goma o silicón diseñado para este fin, mientras que en el otro extremo de esta base se atraviesa un alfiler normal dejando el conjunto a la altura que quedaría un insecto montado directamente (fig. 32). La cabeza del insecto debe quedar orientada en sentido opuesto a la posición del alfiler normal.
Ø
CON TRIÁNGULOS DE CARTULINA, cortados todos del mismo tamaño mediante pinzas especiales, cada triángulo se coloca en un alfiler entomológico penetrándolo por el área cercana a su base y llevándolo a la altura donde normalmente se dejan los insectos de mayor tamaño; en el vértice opuesto al alfiler se pega el espécimen con goma especial de la manera más limpia posible (fig. 33). Es de advertir que con los coleópteros se debe tener cuidado de no taparle la unión del tórax y el abdomen en su parte ventral.
Ø
Figura 33
CON LÁMINAS PORTA OBJETOS , en casos en que los insectos son aún más pequeños por lo que no se pueden montar de las maneras antes descritas; tal es el caso de pio jos, pulgas, trípidos, etc. (mayor información en bibliografía recomendada).
LAS ETIQUETAS : Un insecto debe llevar por lo menos dos etiquetas: La primera con los datos de colección indicando la fecha, sitio de colección, hábitat y hospederos, así como el nombre la persona que lo colectó; y la segunda, con los datos de identificación del insecto mismo, tal como se muestra en el siguiente ejemplo: El Manantial, Sta María. Falcón, 750 msnm 12-VII-1998. Malla Yanet Zavala Gómez
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Diptera Tabanidae
PRÁCTICA 01 10 Entomología/UNEFM
Es recomendable que las etiquetas se hagan en opalina blanca (cartulina en su defecto) cortadas en dimensiones de 1 cm de largo por 0,7 cm de ancho, pudiendo variar el largo hasta 1,5 cm. Si se escriben a mano, la escritura que se utiliza para etiquetar debe ser clara, en letra tipo imprenta y preferiblemente en tinta china; si las etiquetas se imprimen por computadora resulta recomendable el uso de inyección de tinta pues la impresión laser se pierde con los años. Cuando se vayan a etiquetar insectos que se preservan en alcohol o en algunos líquidos especiales es indispensable que se escriba en tinta china o en grafito, ya que de lo contrario se borraría al introducir la etiqueta en el frasco con el líquido.
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PRÁCTICA 01 11 Entomología/UNEFM