Informe prueba ELISA por inflorescencia indirectaDescripción completa
Inmunofluorescencia JULIETA GUTIERREZ SALOMON
Inmunofluorescencia
La fluorescencia fluorescencia es una propiedad propiedad de ciertas moléculas que, al ser ser irradiadas con energía ele electromagnética lect ctro rom mag agné néti tica ca d de e longitud de onda onda adecua ade adecuada, cuada, da, em emiten emiiten ten ra radi radiac rad diac iación ació ión n de lon longi gitu tud d de onda onda cara rac racterís íst ística peprm rmi erm itie ien itn iednodo susu cuantificación
Inmunofluorescencia
Las mol Las oléécul ulas as de un co col colora lor ora orant an nte te flu fluore fluorescente oresc scent entee absorben luz en una longitud de onda y convierten longitud de onda la luz absorbida de alta energía (longitud más corta más cort co rta a) en luz de menor longit lon gitud ud de menor energía energía (longitud onda más larga). ). Cada fluorocromo tiene tiene un espectro de emisión y excitación característicos característicos;; si se utilizan dos con el mismo espectro de excitación pero pero distinto espectro de emisión, se pueden pueden medir medir dos características al mismo tiempo (fluorescencia de dos colores) colores)..
Inmunofluorescencia Los fluorocromos reciben luz a una determinada longitud de onda, y emiten a otra longitud de onda que podrá ser detectado dentro de un espectro y otra en el rango rang o de un color.
La inmunofluorescencia se se utiliza utiliza esencialmente esencialmente en la detección de de autoanticuerpos autoanticuerpos y anticuerpos contra contra antígenos de superficie de células y tejidos tejidos.. preparados Para ello se emplean anticuerpos preparados fre frente rent ntee a la pr prot proteí pro oteín teína eína na a que quee se des qu desea desea detectar dete de tect ctar ar marcados con moléculas fluorescentes
Técnica
de Inmunofluorescencia
Utiliza Ac marcados (³Con onju jugad gados os´) ´) con colorantes fluoresce cen ntes o fluo uorrocro rom mos (flu (f luor ores esce ceín ínaa [F [FIT ITC] o rodamina) como sistemaa indicador. sistem Cuando se aplica luz ultravioleta en el microscopio de fluorescencia, el fluorocromo emite luz visible verde o naranja.
Inmunofluorescencia Directa:
Se dete teccta antígenos en células, te teji jid dos o cultivos celulares. También se emplea para identificar bacterias. En esta técnica el anticuerpo está marcado directamente con el fluorocromo. Sobre un portaob portaobjetos portaobjetos jetos depos depositamos depositamos itamos una muestra en la que buscamos busca bus cam mos la la pr pres prese pre esen senc enci ncia cia ia a dde e un un de dete determin term rmin rminado inad ado o antígeno. antíge ant ígeno no. Añad Añ Añadimos adim imos os un ssue suero uero ue ro espe específic espec es pecífi cífico ífico co o del antí antígeno antíg an tígeno geno eno problema problem pro blemaa marcado con isotiocinato de fluoresceína (conjugado) (conjugado).. Si el antígeno problema problema se encuentra encuentra presente presente en la muestra, se une el conjugado conjugado.. En caso contrario contrario el conjugado se elimina con un lavado del porta. porta.
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI):
Se uti tili lizza un conj njug ugaado ant ntii-iinm nmu unogl glo obul uliina mar arca cad do con flu luor oro ocr crom omo o par araa det etec ecta tarr los Ac específicos unidos al Ag. Es más sensible que la técnica directa. Se utiliza en diagnóstico de muchas enfermedades enfermedad es infecciosas y parasitarias Si pensamos que el enfermo detecta partes propias (Enf (E nfer erm meda dad des an anttii iinm nmun unes es), ), po pone nem mos tej ejid idos os humanos y añadimos suero del enfermo. El anticuerpo primario será el del suero, y el secundario será frente a inmunoglo inmunoglobulinas bulinas humanas. humanas.
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI):
Sobre u Sobre un n po port portao porta rtaobj aobj objet bjet etos etos os os qu que que e ll lle llev eeva va a pe pega pegad peg gado ado doo un un an antí antígeno tíge geno no conocido, añadim conocido, añadimos añadi añ adimo mos oss el suer suero suero o problema. proble pro blema ma. Si és éste éstte e con contie contiene tiene ne anticuerpos específicos, se unen al antígeno. antígeno. Los anticuerpos anticuerpos del suero no específicos específicos del antígeno del porta se eliminan mediante un lavado. lavado. Post osteriormente osteri eriorm orment entee se se aña ñade de un sue uerro an anti antiti-inmunoglobulina -inmunoglobulina hum hu humana mana mar arc arcad ada ada cco con on is isot otio ioci cian anat ato o de fl fluo fluoresceína uore ressce ceíína (conjugado).. (conjugado) El con conjug jugado ado se u une ne a los los ant anticu anticuerpos antic icuerp uerpos erpos os espe específic especí esp ecífic cíficos ficos os o se elimina mediante lavado había anticuerpos específicos en el suero.. suero
Inmunofluorescencia Indirecta (IFI):
Citómetro
de flujo.
La técnica de inmunofluorescencia se suele utilizar en el estudio de poblaciones de células de sangre periférica. Utiliza Ac monoclonales fluorescentes para la detección de Ag de superficie celular mediante un láser de luz que separa específicamente específicam ente las células marcadas
Citrometro
de flujo
Este aparato pretende analizar una a una todas las células que pasan por una capilar muy fino donde incide in rayo láser, y donde habrá filtros y espejos que nos dirán el tamaño que tiene esa célula, su complejidad y si va rodeada con fluorocromos de un color, otro o ambos. Los resul ulta tad dos sal aleen en una gr gráf áfic icaa tal y co com mo nosotros le indiquemos. Por ejemplo, en una gráfica de tamaño frente a complejidad obtendríamos esta gráfica en una persona sana.
