034, Parwati (Dengue NS1Ag)

Nama

: Ni Made Parwati

NIM

: P07134014034

Semester

: IV

PEMERIKSAAN SEROLOGI DH !NS1A"#

Hari$ %a&""a': Kamis$ () Mei (01) %em*at %e m*at

I.

: La+,rat,ri-m Im-&,ser,',"i

%//AN Tes kualitatif untuk mendeteksi virus dengue NS1 antigen dalam serum atau plasma

 pasien guna membantu menetapkan diagnosa infeksi virus dengue. II.

PRINSIP

Dengue NS1Ag Rapid test merupakan uji skrining skrining yang menggunakan 2 garis warna yaitu yaitu ontrol !ine "# dan Test Test !ine "T#. Dengue NS1Ag NS1Ag terdapat terdapat dalam serum$ plasma atau w%ole blood sebagai antigen akan bereaksi dengan anti NS1Ag yang yang dila dilapis pisii gold gold &oll &olloi oidal dal pada pada stri strip p test test seba sebagai gai anti antibo bodi di akan akan berg berger erak ak di sepanjang membran se&ara immunokromatografi menuju wilaya% test yang dilapisi ole% antibodi spesifik dari antibodi monoklonal men&it ter%adap dengue yang akan membentuk membentuk garis warna sebagai sebagai kompleks kompleks gold partikel partikel antibodi'ant antibodi'antigen'a igen'antibo ntibodi di  pada &ontrol line.

III.

ME%ODE (etode yang digunakan pada pemeriksaan dengue NS1 antigen dalam serum$

 plasma atau w%ole blood adala% metode )munokromatografi

IV.

DASAR %EORI

*enyakit demam berdara% disebabkan ole% virus dengue "D+N,#$ famili -laviviridae$ yang mempunyai empat serotipe "D+N,'1$ '2$ '$ dan '/# dan beberapa genotipe atau subtipe# dalam setiap serotype. D+N, ditularkan melalui siklus manusia 0 nyamuk ole% vektor nyamuk Aedes aegypti dan Aedes albopictus. enom terdiri dari rantai tunggal RNA'sense dengan tiga protein struktural "apsid$ (embrane$ +nvelope# dan protein tuju% nonstruktural "NS1$ NS2A$ NS2$ NS$  NS/A$ NS/$ NS3# "#. )nfeksi D+N, tetap penyakit virus paling umum pada daera% geografis yang terus tumbu% karena globalisasi dan peruba%an iklim. Diperkirakan 144 juta kasus infeksi dengue terjadi di seluru% dunia setiap ta%un dengan 2$3 miliar orang berisiko. Sampai sekarang$ tidak ada pengobatan dan vaksin yang efektif yang tersedia untuk  infeksi D+N, "5#. eberapa faktor seperti urbanisasi$ pembangunan transportasi$  penyimpanan air yang tidak tepat se%ingga dapat memper&epat pertumbu%an nyamuk   Aedes aegyptit. -aktor'faktor lainnya yaitu demografi$ sosial$ ekonomi$ dan perilaku yang sangat memberikan pengaru% besar ter%adap epidemiologi nyamuk Aedes. ")ndian 6 (ed Res. 2413# Dengue adala% penyakit virus endemik yang tersebar di seluru% dunia terutama di daera% tropis dan subtropis. )nfeksi dengue disertai demam non spesifik  yang mirip dengan penyakit virus lainnya$ seperti demam$ sakit kepala$ retro'orbital$ mialgia$ artralgia$ ruam$ perdara%an dan leukopenia. *ada manusia$ virus ini dapat menyebabkan spektrum penyakit mulai dari infeksi tanpa gejala %ingga dapat mengan&am jiwa yang terkait dengan perdara%an "demam berdara% dengue atau DD#$ yang berpotensi menyebabkan s%o&k vaskular "dengue s%o&k syndrome atau DSS# "7#. Deteksi antigen NS1 dalam dara% adala% metode diagnostik baru dan sangat  populer. *rotein virus ini disekresikan dalam dara% dan dapat dideteksi dengan +!)SA atau tes immuno&%romatograp%i&. NS1Ag pada pasien dengan infeksi dengue dapat dideteksi dari %ari 1 %ingga 8 setela% timbulnya demam. Deteksi maksimum  NS1Ag positif dapat dilakukan dalam 1 sampai 3 %ari setela% imbulnya demam "D%aritri (a%apatra$ dkk. 241/#. V.

ALA%$ AHAN DAN SAMPEL a. A'at

1. (ikropiprt 2. 9ellow tip . Stopwat&% : Timer  +. a2a& 1. SD ioline Dengue NS1Ag ;it Disimpan pada su%u 1 0 4 <$ tidak direkomendasikan disimpan pada free=e. . Sam*e' 1. >%ole lood "dengan antikoagulan +DTA$ ?eparin$ itrate# @ sebaiknya segera diperiksa atau dapat disimpan sampai 2/ jam setela% pengambilan. 2. Serum atau *lasma @ bila tidak segera diperiksa maka serum atau plasma dapat disimpan pada su%u 2 ' o sampai / jam atau su%u '24o sampai / minggu. *enolakan sampel apabila serum lipemik$ %emolisis$ ikterik$ R%eumatoid -aktor. Sebelum diperiksa$ sampel dan alat test diletakkan pada su%u ruang "13'4< selama B 4 menit#

VI.

ARA KERA 1. Disiapkan semua alat dan ba%an yang akan digunakan. 2. Diperiksa tanggal kadaluwarsa alat. . Diletakkan alat tes dan sampel pada su%u ruang "13 0 4o # selama B 4 menit

sebelum digunakan. /. Dibuka alat tes dari pembungkusnya dan diletakkan pada tempat yang datar dan kering. 3. Ditamba%kan  tetes "144 Cl# sampel ke dalam sumur. 5. Dili%at pergerakan warna ungu pada alat. 7. ?asil diinterpretasikan 13 0 24 menit. 6angan memba&a %asil lebi% dari 24 menit$ karena dapat memberikan %asil yang sala%. VII.

IN%ERPRE%ASI HASIL P,siti5  @ Terdapat garis pada ontrol !ine "# dan Test !ine "T#. erarti terdapat •

•

antigen NS1 virus dengue. Ne"ati5 @ ?anya terdapat garis pada ontrol !ine "# saja. erarti tidak terdapat

•

antigen NS1 virus dengue. I&6a'id  @ Tidak terdapat garis pada ontrol !ine "# dan Test !ine "T# atau %anya terdapat garis pada Test !ine "T# saja.

VIII. HASIL PENGAMA%AN Data *robandus  Nama @ ;ode A

6enis ;elamin mur Sampel ?asil

@' @' @ Serum dari RS Siloam @ *ositif "E#

Tabel 1. ?asil pemeriksaan NS1Ag Gam+ar

Ketera&"a&

Sampel

SD ioline Dengue NS1Ag ;it

assete SD ioline Dengue NS1Ag ?asil pemeriksaan probandus dengan %asil positif "E# NS1Ag ;et @ 1. Tempat sampel 2. Test !ine . ontrol !ine

I.

PEMAHASAN

*rotein nonstruktural'1 merupakan tes berbasis Ag "NS1# yang berguna untuk  mendeteksi virus dengue "D+N,#. Frganisasi ;ese%atan Dunia ">?F# pada ta%un 2448 mengidentifikasi tiga tes diagnostik sebagai gold standard untuk diagnosis dengue anatara lain isolasi virus dan identifikasi$ deteksi nukleotida$ dan tes serologi

untuk )g( atau )g. Namun$ metode ini memiliki keterbatasan tertentu. (isalnya$ isolasi virus sulit untuk dilakukan dan memakan waktu yang lama. Deteksi nukleotida seperti RT'*R membutu%kan peralatan laboratorium k%usus. Dan tes serologi untuk  )g( atau )g tidak dapat digunakan untuk diagnosis onset dini. Fle% karena itu$ metode deteksi yang lebi% efisien dan akurat untuk D+N, dibenarkan. Nonstruktural  protein 1 "NS1# adala% glikoprotein yang berlimpa% diproduksi ole% D+N, dalam ta%ap awal infeksi$ dan dapat dideteksi dalam serum G / $ 3 H. erbeda dengan )g($ yang %anya dapat dideteksi pada awal %ari kelima penyakit$ NS1 antigen &apture bisa dilakukan pada awal gejala. *enyakit demam berdara% dapat diklasifikasikan menjadi  jenis demam yaitu D- "Dengue -ever#$ D?- "dengue %emorr%agi& fever# dan DSS "dengue s%o&k  syndrome#. D- "demam dengue# memiliki manifestasi klinis seperti sakit kepala$ nyeri retroorbital$ mialgia$ artralgia$ ruam$ %emoragik$ leukopenia dan serologi  positif. Demam berdara% dengue "DD# memiliki manifestasi klinis demam$ &enderung %emorr%agi&$ trombositopenia$ kebo&oran plasma$ asosiasi %epatomegali$ dan gangguan peredaran dara%. *eningkatan %ematokrit seri diambil sebagai bukti kebo&oran plasma dan S menunjukkan efusi pleura$ asites$ dan kandung empedu edema. Dengue s%o&k syndrome "DSS# memiliki manifestasi klinis seperti gejala DD termasuk nadi &epat dan lema%$ tekanan nadi sempit kurang dari 24 mm?g dan %ipotensi. Terapi pendukung yang dapat dilakukan adala% dengan antipiretik$ %idrasi yang memadai dan transfusi dara% apabila diperlukan ")nfe&t Dis Fbstet yne&ol. 2415#. *emeriksaan

Dengue

NS1Ag

dilakukan

menggunakan

metode

immuno&%romatograp%y yang bertujuan untuk mendeteksi virus dengue NS1 Antigen dalam serum$ plasma atau w%ole blood pasien guna membantu menetapkan diagnose infeksi virus dengue se&ara kualitatif. Adapun prinsip dari pemeriksaan ini yaitu  pembentukkan dua garis warna$ pada garis test terikat antibodi mono&lonal men&it dan pada garis &ontrol terikat antibodi poliklonal NS1 yang terkonjugasi dengan gold &olloid. Apabila pada spesimen terdapat antigen NS1 akan terjadi reaksi antigen dan antibody yang ditunjukkan dengan adanya garis warna. *emeriksaan virus dengue

 NS1 antigen ini mempunyai sensitivitas 82$/I artinya metode ini dapat mendeteksi antigen NS1 dalam jumla% yang sedikit dan spesifisitas 8$/I artinya metode ini dapat mendeteksi antigen NS1 pada pasien sebesar 8$/I sedangkan sisanya bisa saja %asil tidak J.. Sebelum melakukan praktikum digunakan alat pelindung diri "A*D# dengan  baik$ benar dan lengkap untuk melindungi diri dari ba%an yang dapat mengan&am keselamatan didalam laboratorium. Sebelumnya alat dan sampel yang akan digunakan diletakkan dalam su%u ruang "13 0 4o # selama B 4 menit. Sampel yang digunakan dapat berupa serum$ plasma atau w%ole blood. Sampel serum diperole% dengan mengmbil dara% vena pasien menggunakan tabung tanpa antikoagulan kemudian didiamkan selama 4 menit sebelum disentrifuge dan dipisa%kan serum dengan eritrositnya. egitu juga untuk memperole% plasma$ perbedaannya %anya pada tabung yang diguakan. ntuk mendapatkan plasma digunakan tabung dengan antikoagulan +DTA$ %eparin atau &itrate. ntuk pemeriksaan yang ditunda sampel serum atau  plasma dapat disimpan pada su%u 2 0 o  sampai / jam atau su%u '24o  sampai / minggu$ sedangkan untuk sampel w%ole blood %anya dapat disimpan sampai 2/ jam dari waktu pengambilan. Sampel %arus di diletakkkan dalam su%u ruang serta di%omogenkan sebelum digunakan. Sampel tidak bole% %emolisis$ lipemik dan kontaminasi bakteri. *emeriksaan dengue NS1Ag se&ara kualitatif dilakukan dengan meletakkan alat dan ba%an pada su%u ruang "13 0 4o # selama B 4 menit sebelum digunakan$ alat uji dikeluarkan dari pembungkusnya selanjutnya$ sampel serum dipipet sebanyak  144 Cl dengan menggunakan mikopipet$ kemudian diteteskan pada sumur. Alat akan  bekerja dengan terli%at pergerakan warna ungu pada layar %asil alat. ?asil dapat diba&a dalam 13 0 24 menit. *emba&aan %asil tidak bole% lebi% dari 24 menit karena dapat menyebabkan kesala%an akibat dari reaksi yang terlalu lama. ?asil positif  ditunjukkan dengan terbentuk dua garis warna pada ontrol !ine "# dan Test !ine "T#$ negatif apabila %anya terdapat garis pada ontrol !ine "# saja dan %asil invalid apabila tidak tedapat garis pada ontrol !ine "# dan Test !ine "T# atau %anya terdapat garis pada Test !ine "T# saja. ?asil invalid dapat dikarenakan. Dari

 pemeriksaan Dengue NS1Ag yang tela% dilakukan pada serum probandus kode A$ didapatkan %asil positif antigen NS1 dalam serum probandus yang ditunjukkan dengan terbentuknya dua garis warna pada ontrol !ine "# dan Test !ine "T#. ;inerja tes NS1Ag yang dikombinasi dengan deteksi )g( atau )g$ tela% diuji se&ara luas. Sensitivitas tertinggi dapat dideteksi pada infeksi primer$ ketika  pengujian terjadi tidak lama setela% timbulnya gejala dan ketika )g tidak terdeteksi. ,ariasi sensitivitas tergantung pada pembanding yang digunakan dan dari serotipe dengue "!aura !. ?ermann$ dkk. 241/#.  NS1Ag merupakan metode yang efektif dibandingkan dengan (A +!)SA untuk diagnosis infeksi virus dengue$ terutama dalam lima %ari pertama sakit. (orbiditas dan mortalitas demam berdara% dapat dikurangi dengan diagnosis dini dan manajemen gejala. Namun$ dari %ari keenam dan seterusnya kombinasi (A +!)SA dan pemeriksaan NS1Ag akan meningkatkan sensitivitas diagnosis dan setela% 14 %ari )g( +!)SA menjadi metode pili%an untuk menetapkan diagnosis. RT'*R  adala% wajib bagi genotip untuk memastikan penyebab dari waba% saat ini "D%aritri (a%apatra$ 241/#. )nfeksi ole% virus dengue yang ditularkan ole% ve&tor nyamuk Aedes terus meningkat dan mengan&am kese%atan orang di lebi% dari seratus negara di seluru% dunia. ;urangnya kontrol nyamuk yang efektif$ vaksin dengue berlisensi atau terapi k%usus untuk mengobati infeksi dengue merupakan permasala%an dalam menangani  penyakit ini. diagnosis &epat dan akurat dari infeksi dengue sangat penting untuk  mengurangi morbiditas dan mortalitas pasien. Data menunjukkan deteksi D+N, NS1 antigen dalam spesimen yang diuji$ menunjukkan sensitivitas dan spesifisitas tinggi "!aura !. ?ermann$ dkk. 241/#.

.

SIMP/LAN

Dari praktikum pemeriksaan dengue NS1Ag pada serum probandus dengan kode A diperole% %asil positif Antigen Dengue NS1 dalam serum.

DA%AR P/S%AKA

D%aritri (a%apatra$ dkk. 241/. NS1 Antigen apture +!)SA an +ffe&tive (et%od for Diagnosis of +arly Dengue )nfe&tion ' Report of an Futbreak at Angul Distri&t$ Fdis%a$ )ndia. GFnlineH. Tersedia@ %ttp@::www.n&bi.nlm.ni%.gov:pm&:arti&les:*(/184713:. GDiakses @ 24 (ei 2415H.

!aura !. ?ermann$ dkk. 241/. +valuation of a Dengue NS1 Antigen Dete&tion Assay Sensitivity and Spe&ifi&ity for t%e Diagnosis of A&ute Dengue ,irus )nfe&tion. GFnlineH. Tersedia@ %ttp@::www.n&bi.nlm.ni%.gov:pm&:arti&les:*(/1/55:. GDiakses @ 24 (ei 2415H.