densitometri

Kromatograf Lapis Tipis-Densitometri A. PENDAHULUAN Pada perkembangan perkembangan metode Kromatograf saat ini pemakaian "Thin Layer hromato !anner" yang #ebih dikena# dengan nama densitometer makin banyak dipakai seara #$as o#eh pene#iti%i#m$&an. pene#iti%i#m$&an. Densitometri ada#ah metode ana#isi instr$menta# yang berdasarkan interaksi radiasi e#ektromagnetik dengan ana#it yang mer$pakan berak ata$ noda pada #empeng KLT. 'nteraksi radiasi e#ektromagnetik dengan noda pada #empeng KLT yang ditent$kan ada#ah adsorpsi( transmisi( pant$#an )re*eksi+ pendar *$or ata$ pemadaman pendar *$or dari radiasi sem$#a. Ke$ngg$#annya ada#ah dititikberatkan $nt$k ana#isis ana#it-ana#it dengan kadar sangat kei# yang per#$ di#ak$kan pemisahan ter#ebih dah$#$ dengan KLT. ,etode ini yang banyak dig$anak da#am ana#isis k$a#itati ma$p$n k$antitati di bidang armasi ter$tama di bidang ana#isis obat bahan a#am. . TE/0' DA!A0 Kromatograf Lapis Tips )KLT+ mer$pakan metode pemisahan komponen-komponen atas dasar perbedaan adsorpsi ata$ partisi o#eh ase diam di ba&ah ngerakan pe#ar$t pengembang%pengembang amp$r. 1ase Diam ahan padat pada penyangga 2 pe#at e#as%#ogam ata$ p#astik dengan keteba#an 3(45 mm. 1ase diam yang banyak dipakai 2 si#ika ge# yang diamp$r a!/6 7 adsorben #ain yang 8$ga banyak banyak dipakai 2 a#$mnia( a#$mnia( kiese#g$hr( e#ite( serb$k serb$k se#$#ose( serb$k serb$k po#iamida( kan8i dan sephade9.  :enis ase diam diam 2 sama seperti pada KK KKT T dikena# dikena# beberapa maam maam siat po#aritas. po#aritas. !i#ika# ge# dikena# sebagai ase diam po#ar( yang dapat dib$at men8adi non po#ar )0P ; 0e=. ,ekanisme pemisahan ada#ah 2 adsorpsi(partisi( pen$kar pen$kar ion ata$ ase terba#ik )adsorpsi-partisi+. )adsorpsi-partisi+. Apabi#a sampe# bersiat non po#ar maka pe#ar$t pengembangnya non po#ar. !edangkan bi#a samp#e bersiat po#ar( maka pe#ar$t pengembangnya bersiat po#ar. Uk$ran ase diam >-45 mi##ion da#am keadaan $niorm%seragam( akan menghasi#kan

pemisahan baik dan a#iran ase gerak epat dan merata. Pada prinsipnya pemisahan KLT di$sahakan di#ak$kan da#am keadaan netra#.

'mage > 2 KLT

'mage 4 2 Thin Layer hromatography

Prof# Kromatogram

Kromatogram KLT akan tampak sete#ah
'mage ? 2 Kromatograf Kertas ,enaik

'mage 6 2 Kromatogram

1aktor retardasi 2 0 ada#ah 8arak migrasi komponen )berak+ dibagi 8arak migrasi ase gerak

0 ; d0 % d, ; h0 % >33

Desintometri

!. Le
testosterone da#am airan bio#ogis pada rentang kadar >-453 ng( dan ko#estero# 6 ->53 ng dengan pendar *$or pada noda )kromatogram+KLT.

Prinsip penent$an dengan metode desintometri hampir sama dengan metode spektrootometri. Penet$an kadar ana#it yang dikore#asikan dengan area % #$as noda pada KLT akan #ebih ter8amin kesahihannya dibanding dengan metode KKT ata$ K@( sebab area noda kromatogram di$k$r pada posisi diam ata$ "ig-ag" menye#$r$h.

Persamaan K$be#ka-,$nk

!eara teoritis K$be#ka dan ,$nk te#ah berhasi# menerangkan mengapa h$b$ngan antara kadar ana#it yang dira8ah terhadap area % #$as kromatogram tidak mer$pakan garis #$r$s. ,en$r$t ked$a i#m$&an terseb$t( apabi#a radiasi e#ektromagnetik )0E,+ dengan intensitas sem$#a )'+ 8at$h pada perm$kaan #apis tipis yang tidak homogen dengan arah rambatan tegak #$r$s( maka sebagian dari 0E, terseb$t dire*esikan )'s+ dan sebagian diserap o#eh ana#it #apisan tipis )'3+ dan sebagian #agi diter$skan )'t+.

' ; '3 B 's B 't

'ntensitas 0E, yang dire*eksikan tergant$ng pada koefsien perm$kaan #apis tips )E+ yang dinyatakan sebagai 's ; '. E

Harga E sangat dipengar$hi o#eh 8enis #apisan tipis yang dipakai. !e#an8$tnya akan didapat 2

'3 ; ' -'s '3 ; ' - '.E ; )>-E+ Apabi#a #apisan tipis terseb$t mer$pakan #apisan tipis yang homogen maka akan ber#ak$ h$k$mLambert-eer seperti pada spektrootmetri.

't ; '3.e-K.9 9 ; teba# medi$m #apis tipis ( K ; koefsien adsorpsi. Harga e-K.9 menyatakan berk$rangnya intensitas 0E, yang me#e&ati medi$m. Harga terseb$t dikena# 8$ga sebagai kerapatan optik ata$ "optia# density" dan medi$m yang di#e&ati 0E,. Pada sem$a pe#at KLT tidak memberikan homogenitas ase diam karena keitdaksamaan partike#-partike# ase diamnya disamping ker8a penyerapan 0E, 8$ga ter8adi perikan radiasi o#eh partike# ase diam.

Pada metode !pektrootodensitometri % densitometri dikena# parameter 2 K ; )Koefsien penyerapan+ ! ; )Koefsien penghamb$ran+ Karena parameter ! it$#ah ter8adi pen$r$nan intensitas radiasi yang mas$k ke medi$m #apis tipis karena hi#angnya intenstitas radiasi )dihamb$rkan+ o#eh partike#partike# ase diam. Di sini#ah #etaknya mengapa ter8adi #engk$ng pada K$r
'mage 5 2 K$r3 !pektro densitometer )Thin Layer hromato !anner+ modern di#engkapi mikro komp$ter dengan harga operasiona# !C ; 3-? $nt$k me#inearkan k$r
. 'N!T0U,ENTA!' Komponen penting dari densitometer antara #ain 2

>. !$mber radiasi )!o$re+( pengat$r pan8ang ge#ombang ) se#etor+( beam sp#iter( thin #ayer p#ate )end
,onokromator dengan $ngsi yang sama seperti pada spektrootometri UF-Fis yang diper#$kan pada densitometer. iasanya dipakai monokromator kisi diraksi >433 garis%mm.

Detektor P,T Photo ,$#tip#ier T$be ; Tab$ng Penggandaan 1oto+ mer$pakan detektor $m$m yang dipakai pada densitometer.

D. APL'KA!'

,etode KLT-Densitometri dig$nakan $nt$k ana#isis k$a#itati dan k$antitati.

Ana#isis K$a#itati

Ana#isis k$a#itati dengan KLT-Densitometri pada prinsipnya menga$ kepada ni#ai 0)0etardation ator+ ata$ 1aktor retardasi yait$ 2 membandingkan 0 ana#it dengan 0 bak$ pembanding ata$ membandingkan berak kromatogram samp#e dengan kromatogram"0eerene !tandart" yang dikena# dengan 2 1atro 0etensi 0e#ati )09+ Unt$k penent$an k$a#itati dengan 0s har$s di#ak$kan bersamaan dengan samp#e pada pe#atyang sama.

Ana#isis K$antitati

Ana#isis k$antitati hampir sama dengan spektrootometri( penent$an kadar ana#it dikore#asikan dengan area berak pada pe#at KLT. ara penetapan kadar dapat di#ak$kan dengan 2 >. ,embandingkan area berak ana#it dengan area berak bak$ pembanding yang diketah$i konsentrasinya. 9 ; A9 % Ap 9 p 9 ; konsentrasi ana#it A9 ; area ana#it Ap ; area bak$ pembanding p ; konsentrasi bak$ pembanding

4. K$r
Pen8e#asan KLt ,antap

PENDAHULUAN 1.1. TUJUAN 1. Untuk memperoleh panjang gelombang maksimum dari setiap noda atau bercak pada lempeng KLT. 2. Untuk memperoleh panjang gelombang optimum dari seluruh noda atau bercak pada lempeng KLT yang akan dianalisis.

1.2. DASAR TEORI Densitometri adalah metode analisis instrumental yang berdasarkan interaksi radio elektromagnetik dengan analit yang merupakan noda pada KLT. Interaksi radiasi elektromagnetik dengan noda pada KLT yang ditentukan adalah absorbsi,transmisi,pantulan re!leksi" pendar !luor atau pemadaman pendar !luor dari radiasi semula. Densitometri lebih di titik beratkan untuk analisis kuantitati! analit#analit dengan kadar yang sangat kecil yang perlu dilakukan pemisahan terlebih dahulu dengan KLT. Pr i ns i panal i s i sk u ant i t at i fdeng anme t odedens i t ome t r i hampi rs amade ng anme t ode s pe k t r o f o t ome t r i .Pe ne nt ua nk ad ara na l i ty a ngd i k o r e l a si k and en gana r e an od ap ad aKL Ta ka nl e bi h t e r j a mi nk e s a hi h an n y adi b an di n gme t o deKCKTa t a uKGC, s e b abar e an od ak r o ma t o gr a md i u k u r p ad ap os i s i d i am a t auz i g z agme ny e l u r u h.

Teknik ini di kembangkan pda tahun 1$%& oleh ismallo! dan schldber,adsorben di lapiskan pada lempeng kaca yang bertindak sebagai penunjang !ase diam. 'ase gerak akan merayap sepanjang !ase diem dan terbentuklah kromatogram penotolan cuplikan berganda dan tersedianya berbagai metode seperti K(),K((, dan kromatogra!i ekslusi. Kromatografi lapis tipis merupakan salah satu kromatogra!i yang berdasarkan adsorbsi, tahapan analisis dengan kromatogra!i lapis tipis sama seperti pada kromatogra!i kertas. Kelebihan kromatogra!i lapis tipis di bandingkan dengan kromatogra!i kertas adalah *aktu elusi yang relati! lebih pendekdan dapat digunakan untuk analisis kuantitati!. +i!at umum penyerap#penyerap untuk kromatogra!i lapis tipis adalah mirip dengan si!at# si!at penyerap untuk kromatogra!i kolom. Dua si!at penting dalam

penyerap adalah besar partikel dan homogenitasnya karena adhesi terhadap penyokong sangat tergantung kepada keduanya. arga -! merupakan karateristik kromatogra!i kertas dan kromatogra!i lapis tipis. arga ini merupakan ukuran kecepatan migrasi suatu senya*a pada kromatogram dan pada kondisi konstan merupakan besaran karakteristik dan reprodusibel. arga -!  dide!inisikan sebagai perbandingan antara jarak senya*a dari titik a*al dan titik tepi muka pelarut dari a*al.  arga -! 

/arak yang digerakkan oleh senya*a dari titik asal /arak yang digerakkan oleh pelarut dari titik asal

 0da beberapa !aktor yang menentukan harga -! yaitu pelarut,suhu,ukuran dari bejana,kertas dan si!at dari campuran.

•

1.3. ALAT a! "AHAN ALAT TL( +canner (+#$%& I)( +himadu

•

"AHAN Lempeng KLT yang telah dielusi dan berisi standar dan campuran sampel

PENUTUP 3.1.PE#"AHASAN )ertama#tama perlu membuat plat kromatogra!i,yaitu untuk membentangkan penyerap dalam lapisan tipis yang berkelakuan sebagai penyokong yang inert.)enyerap padat yang berbentuk bubukan halus biasanya pertama#tama dibuat menjadi buburslurry" dengan air kurang umum dengan at cair organik yang mudah menguap" dan dibentangkan diatas plat gelas.)embuatan lapisan tipis diatas kaca ada beberapa cara yaitu dengan jalan penyemprotan atau pencelupan, disamping dikerjakan dengan tangan dapat juga dengan mesin.)lat yang telah dilapisi dipanaskan atau diakti!kan dengan jalan memanaskannya pada suhu kira#kira 1&&&( selama beberapa *aktu lamanya. Kromatogra!i lapisan tipis perlu dibandingkan pertama#tama dengan kromatogra!i kolom serapan, karena mempunyai sistem !isika yang bersamaan diantara keduanya dan kedua dengan kromatoga!i partisi kertas karena mempunyai kesamaan dalam teknik eksperimennya. Kromatogra!i kolom merupakan proses yang lambat,yang membutuhkan penyerap relati! dalam jumlah yang besar demikian pula cuplikan yang digunakan.Didalam eksperimen terdapat ketidak untungnya yaitu sukar dalam melokalisir senya*a#senya*a dalam kolom.+edangkan dalam kromatogra!i lapisan tipis hanya membutuhkan penyerap dan cuplikan dalam jumlah yang sedikit dan noda#noda

yang terpisahkan dilokalisir pada plat seperti pada lembaran kertas.+etelah pemisahan mudahh diperoleh senya*a#senya*a yang terpisah secara indiidu yaitu dengan jalan mengeruknya dan mengumpulkan tiap#tiap lapisan dalam mana lapisan tersebut diserap. 3ila dibandingkan dengan kromatogra!i kertas, metoda lapisan tipis mempunyai keuntungan yang utama, yaitu membutuhkan *aktu yang lebih cepat dan diperoleh pemisahan yang lebih baik.4aktu rata#rata untuk kromatogra!i lapisan tipis dengan panjang 1& cm pada silika gel adalah sekitar 2&#%& menit tergantung dari si!at !asa bergerak" sedangkan pemisahan yang sama dengan kertas yang mempunyai jenis cepat memerlukan *aktu dua jam.Untuk pemisahan#pemisahan secara kualitati! pada plat yang kecil memerlukan *aktu sekitar 5 menit. asil pemisahan yang baik ternyata dari kenyataan bah*a penyerap dalam kromatgra!i lapis tipis mempunyai kapasitas yang lebih besar bila dibandingkan dengan kertas.Lebih lanjut dan yang sangat penting keuntungan dari sistem serapan ialaah bah*a dapat digunakan untuk memisahkan senya*a#senya*a yang si!atnya hidro!oi, seperti lipida#lipida dan hidrokarbon, dimana hal ini sukar dikerjakan dengan kertas.+ekarang pemisahan dengan lapisan tipis telah digunakan dalam kebanyakan lapangan#lapangan organik dan beberapa dalam kimia anorganik. Lokasi dari senya*a#senya*a yang terpisah pada lapisan tipis dikerjakan seperti pada kertas, tetapi pereaksi#pereaksi yang lebih reakti! seperti asam sul!at dapat digunakan pada lapisan tipis dengan catatan bah*a materi lapisan tipis adalah senya*a yang tak bereaksi seperti silika gel atau alumina. +i!at#si!at umum dari penyerap#penyerap untuj kromatogra!i lapisan tipis adalah mirip dengan si!at#si!at penyerap untuk kromaatograa!i kolom. Dua si!at yang penting dari penyerap adalah besar partkel dan homogenitasnya, karena adhesi terhadap penyokong sangat tergantung pada mereka. 3esar partikel yang biasa digunakan adalah 1#25 mikron. )artikel yang butirannya sangat kasar tidak akan memberikan hasil yang memuaskan dan salah satu alasan untuk menaikkan hasil pemisahan adalah menggunakan penyerap yang butirannya halus. +edangkan dalam kolom partikel yang sangat halus akan mengakibatkan aliran pelarut menjadi lambat, pada lapisan tipis butiran yang halus memberikan aliran pelarut yang lebih cepat. 'aktor#!aktor yang mempengaruhi gerakan noda dalam kromatogra!i lapisan tipis yang juga mempengaruhi harga - ! 6 1" +tuktur kimia dari senya*a yang sedang dipisahkan. 2" +i!at dari penyerap dan derajat akti!itasnya 3iasanya akti!itas dicapai dengan pemanasan oen, hal ini akan mengeringkan serapan dari penyerap". )erbedaan penyerap akan memberikan perbedaan yang besar terhadap harga#harga -!  meskipun menggunakan !asa bergerak dan solute yang sama, tetapi hasil akan dapat diulang dengan hasil yang sama, hanya akan diperoleh jika menggunakan penyerap yang sama  juga ukuran partikel tetap dan jika pengikat kalau ada" dicampur hingga homogen.

%" Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap. 7eskipun dalam prakteknya tebal lapisan tidak dapat dilihat pengaruhnya, tetapi perlu diusahakan tebal lapisan yang rata. Ketidak rataan akan menyebabkan aliran pelarut menjadi tak rata pula dalam daerah yang kecil dari plat.

3.2.KESI#PULAN

8 8 8 8

3erdasarkan hasil percobaan di atas, diperoleh kesimpulan sebagaiberikut 6 KLT bekerja dengan cara perambatan !ase bergerak pada !ase tidakbrgerak sehingga menimbulkan bercak pada lempeng. Identi!ikasi at tidak dapat dilakukan karena bercak yang dihasilkantidak menyebar. )erhitungan -! juga tidak bisa dilakukan karena bercak yang tidak menyebar. 4arna bercak yang dihasilkan adalah biru samar