BCT Lípidos.docx

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA CELULAR Y DE LOS TEJIDOS I

ALUMNOS: Alba Hernández José Guadalupe Díaz Martínez Angélica Guadalupe Guerrero Ibarra Ricardo Sordo Ramírez Alberto Alfredo

GRUPO: 2452 EQUIPO: 3

ASESOR: Rosalba Cervantes

*ANÁLISIS DE LÍPIDOS EN LA YEMA DE HUEVO *CROMATOGRAFÍA DE LÍPIDOS

Objetivos:    

Analizar las propiedades de los lípidos. Extraer los lípidos de la yema de huevo. Cuantificar fosfatos de lípidos fosforilados y no fosforilados. Analizar la importancia biológica de los lípidos presentes en la yema de huevo.

RESULTADOS Tabla1. Concentración de fosforo contenida en cada muestra Matraz 1 2 3 4 5 6 (Lípidos no fosforilados) 7 (Lípidos fosforilados)

Volumen de patrón (ml) 0.2 0.6 1.0 2.0 3.0 _

Absorbancia 0.007 0.045 0.053 0.124 0.144 0

Masa de fosforo (µg) 2 6 10 20 30 0

_

0.10

18.81

Curva estándar para la determinación de fosfato en la yema de huevo. 0.16 0.14 0.12 0.1 Absorbancia

0.08 0.06 0.04 0.02 0 0

5

10

15

20

Masa de fosforo (µg)

25

30

35

Cálculos18.81 µg/ 5mL = (3.762 µg/mL) (50)= 188.81 µg/ mL = 0.18881 g/mL Se pesaron 0.4394 g de fosfato mono potásico para realizar la curva lo cual equivale a 0.1 g de fosforo ya que 136g KPO4

 31 g P

04394g KPO4  0.1 g P Se obtuvo casi el doble de lípidos fosforilados con respecto al valor teórico en la yema de huevo analizada, esto puede ser debido a un error en la preparación de las muestras principalmente en la digestión para eliminar materia orgánica o la concentración en fosforo de la yema de huevo es muy elevada.

Para el trabajo de análisis de rutina, diez o más muestras se pueden aplicar a una placa de 20 x 20 cm y luego la cantidad de lípidos presentes pueden ser cuantificados por carbonizacióndensitometría, que consiste en pulverizar la placa con un oxidante y calefacción para carbonizar los lípidos. Antes de usarlo, se recomienda que las placas se activen con el calor a una temperatura de 110 F por una hora. Los lípidos migran a lo largo de la placa formando manchas únicas e independientes en la placa. Entonces, para la detección de puntos después de una carrera, en la que el disolvente elegido en frente es capaz de migrar hasta la mitad de la placa (aproximadamente 30 minutos) las placas se secan en el aire en una campana de químicos a temperatura ambiente durante 20 minutos. Todos los lípidos pueden ser fácilmente visualizados con un solo medio de contraste soluble en agua.

1

2

Reactivo con yodo: Esta imagen muestra el revelado con yodo en el cual se aprecia todo los tipos de lípidos contenidos en la yema de huevo separados uniformemente sobre toda la placa y de un tono tojo amarillo.

Reactivo con bismuto: En esta imagen se puede apreciar la diferenciación de los diferentes tipos de colinas que preexisten en la yema de huevo como la fosfatidilcolina de color naranja algunos ácidos grasos esparcidos en la toda placa pero en general las manchas muestran los diferentes tipos de colinas que existen en la yema.

3

4

Reactivo con Molibdato: Esta imagen nos muestra el revelado con molibdato en este nos muestra todo los lípidos fosforilados presentes en la yema de huevo divididos en toda la placa de color azul y con algunas manchas transparentes de ácidos grasos.

Reactivo de ninhidrina: Se muestra lípidos que contienen aminoácidos, útiles para la identificación de la fosfatidiletanolamina y la fosfatidilserina de un tono rojo ladrillo.

CONCLUSION Se logró cuantificar los lípidos fosforilados de la yema de huevo, así como su identificación en una cromatografía en capa fina usando como reveladores yodo, bismuto, molibdato y ninhdirina para identificar lípidos fosforilados, lípidos totales, lípidos con aminoácidos, colinas.

Cuestionario: 1 1.     

Menciona 5 funciones de los lípidos en los organismos vivos: Regulación hormonal Aislante eléctrico Protección mecánica Reserva de energía Identificación celular

2. Explica el fundamento del método de Kjeldahl: Separación del nitrógeno contenido en las proteínas y cuantificarlo directamente. 3. Justifica el uso de disolventes como cloroformo-metanol El uso de estos disolventes se justifica por que la polaridad media de la mezcla extrae de manera adecuada los lípidos fosforilados y no fosforilados. 4. Indica en que consiste el método de cuantificación de fosfatos Consiste en cuantificar el fosforo contenido en los lípidos de la muestra formando un complejo de fosfomolibdato de amonio de color azul.

Cuestionario 2 1.   2.

¿Cuáles son los métodos que se utilizaron en el análisis de lípidos? Método de Kjeldahl Fiske –Subbarow ¿Cuáles el método de la cromatografía en capa fina?

Método de identificación que se fundamenta en la diferencia de polaridades entre los eluyentes y el eluato. Es decir la fase móvil que es la mezcla de disolventes y los lípidos a determinar. 3. El reactivo de bismuto, ninhidrina y molibdato par que tipo de fosfolípidos son cada uno y que coloración se observó. Ninhidrina: se utiliza para amino fosfolípidos.

Molibdato: se utiliza para lípidos fosforilados Bismuto: se utiliza para lípidos que contienen colina.

4. ¿Qué clase de lípidos se encuentran en la yema de huevo y en qué proporción? Lípidos fosforilados Lípidos no fosforilados