• En la Histotecnología se
denomina impregnación a toda coloración especial en la que se utiliza sales metálicas (cloruro de oro, nitrato de plata sales de cromo, etc.). Para originar precipitados metálicos en las estructuras que van hacer teñidas
• En la Histotecnología se
denomina impregnación a toda coloración especial en la que se utiliza sales metálicas (cloruro de oro, nitrato de plata sales de cromo, etc.). Para originar precipitados metálicos en las estructuras que van hacer teñidas
• El objetivo de impregnación
argéntica es precipitar plata metálica a partir de sus sales para conseguir que se deposite sobre los tejidos. • La sal argéntica más utilizada es el nitrato de plata que tiene la propiedad de ser muy soluble en el agua.
Corteza cerebral (sustancia gris; neuronas piramidales, granulosas, estrelladas)
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y físico químico.
En ellas se produce fenómenos de tipo físico y físico químico y no reacciones químicas concretas entre los tejidos y la sal de plata utilizada. COLORACION DE LAS ESTRUCTURAS HISTOLOGICAS POR UN MECANISMO PURO DE IMPREGNACION.
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y físico químico.
DETERMINADAS ESTRUCTURAS HISTOLOGICAS ELECTRONEGATIAS ATRAEN, POR UN MECANISMO ELECTROSTATICO, A IONES DE PLATA CARGADOS POSITIVAMENTE POSITIV AMENTE Ag + QUE EXISTE EN LA SOLUCIO SOLUCION N DE IMPREGNACION.
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y físico químico.
POSTERIORMENTE ESTOS IONES SE HACEN PRECIPITAR COMO PLATA METALICA SOBRE LAS ESTRUCTURAS HISTICAS MEDIANTE REDUCCION EXTERNA. LA PLATA METALICA EN FORMA DE FINOS PRECIPITADOS TIENE ESPECIAL APETENCIA POR DEPOSITARSE SOBRE ESTRUCTURAS FIBRILARES FINAS Y POR SUPERFICIES CELUALRES DOTADAS DE DELGADAS PROLONGACIONES TALES COMO CELULAS GLIA, NEURONAS, FIBRAS RETICULARES DEL TEJIDO CONJUNTIVO.
1.-Impregnación argéntica por mecanismos predominante físico y físico químico.
ARGIROFILIA: PROPIEDAD QUE POSEE DETERMINADAS ESTRUCTURAS TISULARES EN UNIRSE A LOS IONES DE PLATA DERIVADOS DEL NITRATO DE PLATA O PLATA AMONIACAL. FIBRAS DE RETICULINA GRANULACIONES INTRACITOPLASMATICA (GRIMELIUS)
• El tejido no interviene activamente en el mecanismo
de liberación de plata metálica a partir de su sal soluble. • No todos los tejidos tienen idéntica apetencia por la
plata; como en todo impregnación, tanto la carga eléctrica como la textura de las células para teñir (rugosidad superficial, presencia de prolongaciones o vellosidades etc.). Intervienen de manera decisiva.
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos.
Se basa en la actuación de un componente de tejido sobre el nitrato o sus derivados a raíz de la cual ocurre una precipitación de plata metálica a partir de sus correspondientes iones. Por tanto el tejido interviene activamente en el deposito de plata a través de una reacción química de reducción.
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos.
ARGENTAFINIDAD: ES LA PROPIEDAD QUE TIENEN ALGUNOS TEJIDOS DE REDUCIR EL NITRATO DE PLATA AMONIACAL A PLATA METALICA SIN INTERVENCION DE AGENTES REDUCTORES EXTERNOS.
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos. ARGENTAFINIDAD: PROPIEDAD CARACTERISTICO PARA DETERMINAR GRANULACIONES CITOPLASMATICOS PRESENTES EN LAS CELULAS CUTANEAS COMO LOS MELANOCITOS, QUE SECRETAN MELANINA, Y EN CIERTAS SECRECIONES ENDOCRINAS PRESENTES EN EL TUBO DIGESTIVO
2.- impregnación argéntica por mecanismos histoquímicos. ARGENTAFINIDAD: EN CIERTAS SECRECIONES ENDOCRINAS PRESENTES EN EL TUBO DIGESTIVO Y QUE RECIBEN EL NOMBRE DE ARGENTALINES, ENTERO CROMAFINES O CELULAS KULTSHITZKY. ESTAS CELULAS SE ENCUENTRAN SOBRE TODO EN LAS GLANDULAS PILORICAS DEL ESTOMAGO, CRIPTAS LIEBERKUN Y MUCOSA DEL APENDICE. MASSON FONTANA
3.- impregnación argéntica no histoquimica o por métodos predominantemente fisicos – físico químicos.
Los aspectos esenciales en este tipo de impregnación son las siguientes: 1.-La fijación se hace fundamentalmente con formol como también se puede utilizar Bouin que actúa como mordiente. 2.- La impregnación argéntica se divide en: a).- Impregnación argéntica en un tiempo. b).- Impregnación argéntica en dos tiempos
• En ella se suele a partir de nitrato de plata (AgNo3). • Esta impregnación se fundamenta en el uso de un
reductor severa directa de la sal de plata a plata metálica a través de un agente reductor potente como pirogalol ó hidroquinona. AgNo3 + agente reductor= Ag + prod. oxidaci ón
• Impregnar el tejido con nitrato de plata • Reducir con un reductor fuerte como el pirogalol o la
hidroquinona • EJ: Técnica de Bodian para neurofibrillas. • Ej: Técnica de Grimelius para argirofilia • Ej: Técnica de Wartin Starry H. pylori.(argentafinidad)
• Utiliza procedimientos químicos para obtener plata
metálica a partir del Nitrato de plata mediante varias reacciones sucesivas. • En una primera fase es necesario tratar en Nitrato de plata con bases fuertes como en hidróxido de sódico, hidróxido potásico, hidróxido amónico etc. Con la cual se obtiene oxido de plata que precipita en granulaciones parduzcas.
• Mediante la adición el amoniaco con la solución anterior
se obtiene un complejo iónico de plata y amonio el denominado óxido de diamino-argéntico o plata amoniacal soluble en agua aunque muy inestable. • Ag2O +
4
NH3= [(AgNH3 ) 2 ] 2O
• El óxido de diamino-argéntico o plata amoniacal se reduce al
añadirse formol 10% el cual tiene capacidad de captar oxigeno hasta precipitar la plata dando como producto plata metálica, ácido fórmico y amoníaco.
2
4
[(AgNH3 ) 2 ]2O+CHOOH= Ag+ NH3+HCOOH
• Esta plata metálica es la que se deposita sobre el tejido en
forma molecular muy estable. • Las técnicas de coloración para fibras de reticulina son el ejemplo más característicos de esta forma de impregnación
• Matriz extracelular o MEC. • La MEC está constituida por la sustancia fundamental por
fibras (colágenas, reticulares y elásticas) • III: Se conocen también como fibras reticulares porque se
creía que difería de la colágena. En la actualidad se sabe que la fibra reticular es un tipo de colágena que se glucosilla en grado elevado y forma fibras delgadas o redes.
• Se encuentran como un reticulado fino muy. • Rodean a los adipocitos, a las células del músculo
liso, se encuentran por debajo del endotelio de los capilares a los que dan cierta rigidez. • Forman el retículo del tejido linfoide y de la médula ósea y rodean a las células parenquimatosas de las glándulas. • A causa del gran contenido de grupos carbohidratos las fibras de colágena tipo III se tiñen de manera preferencial con sales argénticas o por medio de la reacción del ácido peryódico de Schiff (PAS).
Fibras reticulares negro. Fibras colágenas amarillento Fibras reticulares del bazo p = reticulina del parénquima sv = reticulina de los senos venosos
Fibras reticulares de hígado EP = espacios porta V = vena terminal del lobulillo
• Un tiempo • Demuestran
granulaciones intracitoplasmaticas • Células argirófilas : negro
Demostración de oncocitos en una metástasis hepática Oncocitos tienen su origen en células endocrinas del sistema digestivo (intestino delgado).
• Un tiempo • Células argirófilas : negro
demostración de células neuroendocrinas y de los tumores derivados se ellas.
• Impregnación argéntica en
dos tiempos • Se impregna con plata amonialcal • La segunda reducción la realiza el tejido • Demuestra granulaciones de melanocitos, células argentafines intestinales.
Helicobacter pylori colonizado en la superficie del
epitelio regenerativo, teñidas con el método de WarthinStarry
• En contraste con la escasez de fibras de reticulina en la piel
normal vemos abundancia en condiciones patológicas en las cuales la actividad fibroblástica forma nuevo colágeno. Así vemos numerosas fibras de reticulina en granulomas tales como Lepra, Tuberculosis, Sarcoidosis, tumores fibroblásticos como dermatofibroma, fibrosarcomas y queloides. • Ayudan a reconocer ciertas patologías renales tales como glomeruloesclerosis, glomerulonefritis lobular crónica.
• Retículo es una función de apoyo del cuerpo y es abundante en
hígado, el bazo y el riñón. • En un hígado normal de las fibras se va a definir líneas, pero el hígado necrótico y cirróticos muestran patrones discontinuos. • Retículo también forma patrones característicos en relación con ciertas las células tumorales.
En estas técnicas la sal de plata más empleada es el nitrato de plata, de allí que esta operación se denomina también nitratación. Con esta técnica se impregnan dos tipos de elementos: • Las fibras reticulares de la MEC que rodean células y vasos
para poner en evidencia los límites de los elementos celulares obteniéndose una imagen negativa de estos últimos. • Los elementos citológicos (núcleo, aparato de Golgi) y
elementos nerviosos los cuales dan una imagen positiva
• Las técnicas para fibras reticulares esencialmente son de
dos tipos: 1) En cortes congelados, los cuales derivan del método tanno-argéntico de Achucarro (1911) y 2) Las derivadas de la técnica de Bielchowsky (1904) para cortes congelados o en parafina. •
El número de variantes derivadas de las técnicas madres son numerosas
• Los métodos modernos de impregnación argéntica,
pueden ser clasificados en dos grandes grupos, partiendo del tipo de solución al que se exponen los tejidos para lograr la impregnación. De esta manera, tenemos métodos de plata amoniacal y de metenamina plata.
• 1) Métodos de Plata Amoniacal: Todos los métodos de plata
amoniacal, tienen los siguientes pasos principales:
• Oxidación, sensibilización, exposición a la solución de plata,
reducción, tonificación, remoción de la plata que no ha reaccionado y la coloración de contraste.
• Muchos de los métodos de plata amoniacal tienen mecanismos
similares. Todos utilizan como base la solución de Bielchowsky que se prepara precipitando 5cc de nitrato de plata al 5% con gotas de amoniaco para el equilibrio ionico luego de agrega 5 cc de hidróxido de sodio al 3%. Luego se redisuelve el precipitado resultante añadiendo gota a gota amoníaco y se completa con agua destilada hasta obtener un volumen total de 40cc.
• La Oxidación de los tejidos sirve para amplificar la
subsecuente tinción de las fibras reticulares. Los oxidantes pueden variar de acuerdo a las técnicas. Los lavados, luego de la oxidación sirven para remover el exceso de reactivo.
Oxidación: • Permanganato de potasio, KMnO4 –. Se trata de sustancias de un intenso color violeta y alto poder oxidante que contienen el anión. • Las manchas generadas por el permanganato suelen ser debidas a la formación de óxidos de manganeso y se eliminan fácilmente con disoluciones ligeramente aciduladas de sulfito o tiosulfato. Sin embargo estas sustancias pueden generar en los tejidos, tras la exposición al sol, manchas amarillas, por lo que se prefiere usar ácido oxálico.
Oxidación: • El ácido oxálico es un reductor del permanganato y neutralizante de los óxidos de manganeso que generan manchas. • es un ácido carboxílico H2C2O4. • ácido orgánico relativamente fuerte. • es tanto un agente reductor como un elemento de conexión en la química. • Reacciona con permanganato (MnO4-) reduciéndolo a manganeso y oxidándose a carbonato o CO2:
• El
paso de sensibilización es básicamente una impregnación con una sal metálica que forma compuestos orgánico-metálicos con el tejido y luego este metal sensibilizado es reemplazado por la plata de la solución de nitrato de plata.
• Posteriormente, los tejidos son tratados con la solución de
plata amoniacal. Usualmente, no hay cambios de color hasta que las secciones realmente se hayan reducido. • Este proceso de reducción es comúnmente denominado revelado, y las técnicas de plata-diamina requieren concentraciones variables de formalina (formaldehido HCHO) como agente reductor.
• La plata metálica visible que resulta del proceso de
reducción puede ser marrón o negra, dependiendo de la cantidad de plata y del tamaño de las partículas. Estos depósitos pueden ser tonalizados convirtiéndolos en depósitos de oro metálico que son púrpura negros, al tratarlos con cloruro de oro (AuCl3). El oro metálico es mucho más estable que la plata metálica, y los cortes tratados con esta solución muestran un mejor contraste y claridad que los que no han sido tratados con la solución.
• Reforzamiento. Con cloruro de oro amarillo
es un paso de gran utilidad el reforzamiento consiste en eliminar esta plata y substituirla por cloruro de oro.
• El tratamiento final de la sección para su contraste es la
inmersión de las láminas en una solución de tiosulfato de sodio que forma complejos solubles con la plata iónica que no ha reaccionado con el tejido. Esta remoción de la plata no reactiva previene una tardía reducción no específica de la plata con la luz, al igual que remueve el exceso de cloruro de oro que pueda estar presente en el tejido.
GRIDLEY Oxidación
WILDER
SNOOK
GOMORI
Ácido Peryódico Ácido Permanganato Ácido 0,5% Fosfomolíbdico de Periódico 0,5% 10% Potasio 0,25% Ácido Oxálico al 5%
Sensibilización Nitrato de Plata
al 2% Exposición a Solución de plata
Nitrato de Uranio al 1%
Nitrato de Uranio al 1%
——
Nitrato de plata Nitrato de plata Nitrato de plata Solución al 5% al 10,2% al 5% metenamina=20ml + =5ml + =20ml nitrato de plata Hidróxido de Sodio 10% = 20 gotas.
Hidróxido de amonio
Hidróxido de Sodio +
Metenamine al 3%=
10%=20 gotas
Nitrato de Plata al 5%
Hidróxido de amonio
= Borax al 1%
Reducción
GRIDLEY
WILDER
SNOOK
GOMORI
Formalina al 30%
Formalina al Formalina al 1% —— 40%= 0,5ml Nitrato de Uranio 1%=1,5ml Agua destilada=50ml
Tonificación
Cloruro de Oro 1%
Remoción de la Tiosulfato de Sodio al 1% plata no reactiva Contraste
Kernechtrot
Cloruro de Oro 1%
Cloruro de Oro al Cloruro de Oro 1% al 1%
Tiosulfato de Sodio al 1%
Tiosulfato de sodio al 1%
Tiosulfato de sodio al 1%
Kernechtrot
Kernechtrot
Kernechtrot
• 2) Métodos de metenamina de plata: Los métodos de
metenamina de plata de Jones y Gomori, están basados en la producción de grupos aldehidos a partir de los grupos aglicol de los carbohidratos presentes en las fibras reticulares y en las membranas basales luego de la exposición de los tejidos a una solución de ácido peryódico. Estos aldehidos se reducen con los complejos de metenamina de plata dando como resultado plata metálica visible. El cloruro de oro y el tiosulfato de sodio, son usados en estos métodos y cumplen las mismas funciones que en las impregnaciones de plata amoniacal
Métodos de metenamina de plata GROCOTT : Ampliamente utilizada para revelar microorganismo fúngicos. Tinción de JONES: Tinción Metenamina de plata y Acido periódico de Shiff.
PARED CELULAR • Esta formada por capas de polisacáridos• Glucanos (polímeros β -1,6, ramificados de glucosa)• Mananos (polímeros α – 1,6, ramificados de manosa)- Polímeros de glucosamina• Proteínas• Lípidos (ergosterol)• Quitina (polímero β-1,4 de N-acetilglucosamina)
• 2) Métodos de metenamina de plata: • ACIDO CROMICO 5 % (1 hora) • OXIDACION: Los aldehídos se oxidan con relativa facilidad
para dar ácidos carboxílicos, y es suficiente el empleo de agentes oxidantes suaves.
• BISULFITO SODIO 1% (1 minuto) • Remueve todos los residuos de la solución de ácido crómico
retira las estructuras que no han sido
• 2) Métodos de metenamina de plata:
SOLUCION MATRIZ DE NITRATO DE PLATA Y METENAMINA Solución nitrato de plata al 5% 5 cc Solución metenamina al 3% 100 cc SOLUCION DIARIA DE NITRATO DE PLATA Y METENAMINA Solución matriz 25cc Agua destilada 25cc Borax 5% 2cc
• 2) Métodos de metenamina de plata:
CLORURO DE ORO TISULFATO (HIPO) DE SODIO AL 5% SOLUCION VERDE CLARO 0.2%
