UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUÍ FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA LABORATORIO DE BIOQUÍMICA MED 300
Informe de Laora!or"o Nº # AISLAMIENTO DEL $LUCÓ$ENO $LUCÓ$ENO
%re&en!ado 'or( C)"**a+ Lo)rde& ,-.,.-/,# C1a2n+ 4a!")&5a ,-.,.-/33 M"randa+ 4aren ,-.,.-/3./
A 2on&"dera2"n de* 'rofe&or( ROBERTO $UEVARA
III A6o de L"2en2"a!)ra en Med"2"na I &eme&!re /007
Experimento Nº 8 AI SLAMI ENTO DEGLUCÓGENO
Objetivos: 1. Extraer el glucógeno presente en una muestra de hígado de pollo. 2. Caracterizar mediante pruebas químicas el glucógeno extraído.
Introducción: El glucógeno es el principal polisacárido de reserva de las células animales al igual que la amilopectina es un polisacárido rami!icado de la "#glucosa con enlaces al!a#1$% al!a# 1$& en los puntos de rami!icación$ pero es mucho más rami!icado compacto que ésta. El glucógeno es abundante en el hígado$ donde puede alcanzar hasta el '( del peso h)medo$ pero también se le halla en m)sculo esquelético. En las células hepáticas el glucógeno se encuentra almacenado en gránulos grandes que contienen además las enzimas responsables de su síntesis degradación. El glucógeno puede hidrolizarse por la acción de al!a#amilasa que se encuentra en la saliva *ugo pancreático$ las cuales rompen los enlaces al!a#1$% en las ramas exteriores del glucógeno para dar glucosa$ una peque+a cantidad de maltosa un n)cleo resistente llamado dextrina limite.
GLUCOGÉNESIS: El glucógeno es la !orma principal de almacenamiento de carbohidratos en los animales corresponde al almidón de las plantas. ,e encuentra en proporción maor en el hígado -hasta &( en el m)sculo$ donde rara vez excede de 1(. /l igual que el almidón$ es un polímero rami!icado de la "#glucosa. 0a !unción del glucógeno muscular es actuar como una !uente de !ácil disponibilidad de unidades de hexosa para la glucólisis dentro del propio m)sculo. El glucógeno hepático sirve en gran parte para exportar unidades de hexosa para la conservación de la glucosa
sanguínea$ particular entre comidas. "espués de 12 a 1 horas de auno$ el hígado casi agota su reserva de glucógeno. El glucógeno muscular sólo disminue de manera signi!icativa después de e*ercicio vigoroso prolongado. uede inducirse en almacena*e maor de glucógeno muscular con dietas ricas en carbohidratos después de la depleción por el e*ercicio. 0as en!ermedades por almacenamiento de glucógeno son un grupo de trastornos hereditarios que se caracterizan por movilización de!iciente del glucógeno depósito de !ormas anormales del mismo.
!teri!"es: • • • • • • • • •
34 hígados de pollo Cuchillo 1 matraz Erlenmeer de 234 5l 344 5l robetas de 23 5l$ 34 5l$ 144 ml 6a+o maría lancha Centri!ugadora 7asos 8uímicos 9ubos de ensao
#e!ctivos: •
:idróxido de otasio
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Etanol
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;eactivo de 5olish
$ropied!des %&sic!s ' (u&mic!s •
)idróxido de $ot!sio ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦
ES*+,O %-SICO: 0íquido +$+#IENCI+: Clara COLO#: C -21? >@ $UN*O ,E CONGEL+CI/N: #? a %>C -#12 a =?>@ $#ESI/N ,E 0+$O#: Ao disponible ,ENSI,+, ,EL 0+$O#: Ao disponible G#+0E,+, ES$EC-%IC+ 1!2u!345: 1$4?#1$32 B 13$&>C ,ENSI,+,: ?$4?#12$&' lbsgal B 13$&>C SOLU.ILI,+, EN +GU+: 144( $): 12#1% 0OL+*ILI,+,: Ao disponible U.#+L ,E OLO#: Ao disponible 0ELOCI,+, ,E E0+$O#+CI/N: Ao disponible COE%ICIEN*E ,E ,IS*#I.UCI/N EN +GU+6+CEI*E: Ao disponible
•
Et!no" ◦
Físicas
unto de ebulliciónD '.= >C. unto de !usiónD #1=4 >C. ndice de re!racción -a 24 >CD1.=&1 "ensidadD 4.'?= a 24 >C. resión de vaporD 3? mm de :g a 24 >C. "ensidad de vaporD 1.3? g m0 9emperatura de igniciónD =&= >C unto de in!lamación -@lash ointD 12 >C - al 144 ($ 1' >C -al ?& ($ 24 >C -al 4($ 21 oC -al '4 ($ 22 >C -al &4 ($ 2% >C -al 34 ($ 2& >C -al %4 ($ 2? oC -al =4 ($ =& oC -al 24 ($ %? oC -al 14 ( &2 oC -al 3 (. 0ímites de explosividadD =.=# 1? ( 9emperatura de autoigniciónD '?= oC. unto de congelaciónD #11%.1 oC Calor especí!icoD-Fg oCD 2.%2 -a 24 oC. Conductividad térmica -Gm HD 4.1' -a 24 oC. 5omento dipolarD 1.&?? debes. Constante dielétricaD 23.' -a 24 oC. ,olubilidadD 5iscible con agua en todas proporciones$ éter$ metanol$ cloro!ormo acetona. 9emperatura críticaD 2%=.1 oC. resión críticaD &=.11& atm. 7olumen críticoD 4.1&' lmol. 9ensión super!icial -dincmD 2=1 -a 23 oC. 7iscosidad -cD 1.1' -a 24oC. Calor de vaporización en el punto normal de ebullición -FgD =?.=1. Calor de combustión -FgD 2?&''.&? -a 23 oC Calor de !usión -FgD 14%.& El etanol es un líquido in!lamable cuos vapores pueden generar mezclas explosivas e
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#e!ctivo de o"is7
rueba de 5olishD es una prueba general para carbohidratos. En presencia de ácidos no oxidantes$ los carbohidratos experimentan deshidratación !orman !ur!ural sus derivados. Estos productos se combinan luego con al!a na!tol sul!onato originando un
color p)rpura.
*oxicid!d •
)idróxido de $ot!sio ◦
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,+*OS ,E *OICI,+,: :idróxido de potasioD "034 =&3 mgIg en rata. 0a gravedad del da+o al te*ido depende de la concentración del producto$ la prolongación del contacto con el te*ido el estado del te*ido local. "espués de la exposición puede pasar un tiempo antes de que aparezca la irritación u otros e!ectos. Este material es un !uerte$ irritante es corrosivo para la piel$ o*os membranas mucosas. Este material puede provocar quemaduras graves da+o permanente al te*ido con el cual entre en contacto. ,u inhalación puede producir irritación grave posibles quemaduras *unto con edema pulmonar que puede producir neumonitis. El contacto de los o*os con este material puede producir irritación grave$ corrosión con posible da+o a la córnea ceguera. ,u ingestión puede producir irritación$ corrosiónulceración$ náuseas vómitos. En general$ los e!ectos crónicos se deben a irritación a largo plazo. Este material puede producir dermatitis en la piel o ulceración recurrente de la córnea alteraciones de la visión. En in!ormes de casos extraordinarios$ se ha observado que la inhalación a largo plazo produce una reacción in!lamatoria de los bronquios dis!unción obstructiva de las vías respiratorias.
Et!no" ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦ ◦
0"34 -oral en ratasD 1= mlHg 5éxicoD C9D 1?44 mgm= -1444 ppm Estados JnidosD 907 -9G/D 1?44 mgm= -1444 ppm ;eino JnidoD 70ED ?344 mgm= -3444 ppm @ranciaD 75ED 1?44 mgm= - 1444 ppm /lemaniaD 5/HD 1?44 mgm= -1444 ppm eriodos largosD 1?44 mgm= -1444 ppm ,ueciaD eriodos largosD 1?44 mgm= -1444 ppm /lcohol desnaturalizadoD 0"0o -oral en humanosD 1%44 mgHg. 0"34 -oral en ratasD '4&4 mgHg. 0C 34 -inhalado en ratasD 24444 ppm 14 h Aiveles de irritación a piel de cone*osD 344 mg 2%h$ severa. Aiveles de irritación a o*os de cone*osD '? mg$ 144 mg2%h$ moderada.
$rocedimiento: 1. Cortamos en trozos peque+os 34 g de hígado de pollo. 2. Calentamos en el Erlenmeer de 234 m0 con mucha precaución usando lentes
de seguridad 24.4 m0 de HK: al 34(. =. "espués adicionamos inmediatamente los trozos de hígado en el Erlenmeer que contiene el HK:. %. Calentamos en ba+o maría durante %3 minutos. /gitamos el matraz de ser necesario. 3. "espués del calentamiento adicionamos =4 m0 de agua. &. /dicionamos '4 m0 de etanol. /gitamos. '. El !loculado es principalmente glucógeno$ tapamos de*amos reposar por 14 minutos. . 0uego adicionamos la mezcla en los tubos de centri!ugación. ?. Centri!ugamos por 3 minutos a velocidad máxima. 14. ;ecogimos el precipitado ensaamos la prueba de 5olish.
#esu"t!dos: EA E0 ;EC<<9/"K "E L0JCMLEAK ,E @K;5K JA /A<00K J;J;/ 5E"
,iscusión: El método de aislamiento utilizado en este laboratorio se basa en las propiedades químicas del glucógeno no compartidas por otras sustancias presentes en el hígado. 0a separación del glucógeno del te*ido se consigue mediante la adición de HK: posteriormente con etanol precipita polisacáridos elimina los monosacáridos soluble . /sí$ se produce un precipitado que contiene una mezcla de glucógeno$ proteínas ácidos nucleicos$ que han resistido el calentamiento anterior. 0uego el tratamiento con el reactivo de molish que contiene :2,K% es un método rápido para la determinación de hexosas alopentosas constituentes de un polisacárido. 5ediante este método$ el glucógeno es hidrolizado por un ácido -:2,K% hasta sus unidades elementales -monosacáridos dando asi la !ormación de un anillo purpura demostrando positiva la presencia del glucógeno en el te*ido. 0a prueba de 5olish es realizada para la identi!icación de carbohidratos$ la cual da positiva cambiando a color morado violeta . 0a coloración producida por el 0ugol se debe a que el odo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón. Ao es por tanto$ una verdadera reacción química$ sino que se !orma un compuesto de inclusión que modi!ica las propiedades !ísicas de esta molécula$ apareciendo la coloración azul violeta OCómo se puri!ica el glucógenoP ;Q El glucógeno se libera de los te*idos que lo contienen por calentamiento con una base !uerte -HK: hasta la destrucción total del te*ido. 0a separación del glucógeno del te*ido se consigue mediante la adición de etanol -precipita polisacáridos elimina los monosacáridos solubles sul!ato de sodio -coprecipitante. /sí$ se produce un precipitado que contiene una mezcla de glucógeno$ proteínas ácidos nucleicos$ que han resistido el calentamiento anterior. El tratamiento posterior con ácido tricloroacético -9C/ hace que precipiten las proteínas
ácidos nucleicos de la mezcla. El glucógeno aislado se vuelve a precipitar con etanol$ obteniéndose una preparación con un alto grado de pureza.
.ib"io2r!9&!: 6ioquímica 6ásica de 5arIsD Jn en!oque clínico. ,mith$ ColleenR 5arIs$ /lan S 0ieberman$ 5ichael. ,egunda edición. EditorialD 5c LraT :ill. httpDTTT.monogra!ias.comtraba*os11glucogglucog.shtml httpDTTT.vivirsalud.com244'4'14(C2(6@que#es#el#glucogeno :arrison rincipios de 5edicina
