AISLAMIENTO DE FITONEMATODOS EN RAICES POR EL MÉTODO DE BAERMANN MODIFICADO
INTRODUCCION:
Los nematodos son un grupo de animales pluricelulares de origen acuático que carecen de sistema circulatorio y respiratorio, son vermiformes, no segmentados, más o menos transparentes, cubiertos de una cutícula hialina, la cual está marcada por estrías u otras marcas, transversalmente son redondeados y tienen cavidad oral. Este grupo de organismos forma parte de los componentes más abundantes de la fauna del suelo, puesto que se encuentran en todos los hábitats y ecosistemas de la biósfera. Los nematodos fitoparásitos están ampliamente distribuidos en suelos naturales y cultivados en todo el mundo. El género Meloidogyne es el más importante por su distribución, el rango de hospedantes y los daños que origina en las plantas cultivadas, en las hortalizas frecuentemente muestra altas poblaciones y predomina sobre otros nematodos fitoparásitos. Los nematodos conforme sus hábitos alimenticios pueden ser: especies saprofitas o de vida libre, depredadores y parásitos de vegetales o animales los cuales se dividen en parásitos de vertebrados, invertebrados y de plantas (Hugot et al., 2001). Los nematodos fitoparásitos son organismos biótrofos que se alimentan del citoplasma de las células vivas de su planta hospedante, y secundariamente se convierten en agentes patógenos dependiendo de la población existente, susceptibilidad del cultivar y las condiciones existentes (principalmente la temperatura del suelo). Algunos de ellos están muy especializados en infectar a determinadas especies vegetales, mientras que otras son de amplia polifagia. En su mayoría habitan en el suelo y colonizan las raíces, aunque también algunas pueden parasitar las partes aéreas de las plantas. Los nematodos fitoparásitos inducen enfermedades en forma directa porque ocasionan agallas radicales, necrosis en raíces, deformaciones en tallos y bulbos, entre otros; e indirectamente, por las interacciones con otros agentes fitopatógenos (hongos, bacterias y virus). En el pasado los daños causados por los nematodos a los cultivos, frecuentemente se ignoraron o se atribuyeron a otras causas debido a que los fitonemátodos son todos microscópicos, y a que no se disponía de información clara sobre su poder patógeno. Hoy se sabe que son agentes patogénicos que afectan al rendimiento y calidad de los cultivos con las consiguientes implicaciones económicas. Los ataques de fitonemátodos no manifiestan una sintomatología clara descartando posibles deficiencias de agua y nutrientes en el suelo, cuando se sospecha la presencia de estos fitófagos se procede a la toma de muestras y remisión de las mismas a un laboratorio nematológico para su debido procesamiento.
Las técnicas actuales para el aislamiento de fitonemátodos, a partir de raíces, son múltiples y diversas. En general todas ellas están basadas en las diferentes densidades y tamaños que presentan los distintos componentes de un suelo, y consisten en diferentes de lavado y separación de dichos componentes, hasta extraer los fitonematodos aislados de toda la mezcla del suelo; dichas técnicas podríamos agruparlas en función a la muestra, como en nuestro caso las raíces, del cultivo en cuestión y del nematodo a detectar.
OBJETIVOS:
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Conocer la importancia del estudio de estos organismos para determinar medidas de control. Desarrollar y comprender las principales técnicas que se utilizan para aislar fitonemátodos en raíces. Realizar los procedimientos preliminares de identificación del agente causal de la enfermedad en la planta.
MATERIALES:
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Muestra de raíces de: Yuca Verdolaga Copas de plástico Papel higiénico Coladores pequeños Laminas Laminillas Microscopio óptico
MÉTODOS:
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MÉTODO DE BAERMANN MODIFICADO EN COPA:
1. Homogeneizar la muestra de raíces (y tierra). Adicionar una copa para sedimentación con papel higiénico (o papel filtro). 2. Colocar la muestra sobre la capa de papel higiénico previamente humedecido. 3. Verte por las paredes solución salina fisiológica hasta cubrir la muestra. 4. Dejar reposar 7 días. 5. Extraer el sedimento con una pipeta. 6. Colocar el sedimento sobre una lámina portaobjetos y cubrir con una laminilla.
7. Observar en el microscopio.
DISCUSIÓN:
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En la presente práctica para el aislamiento y detección de fitonemátodos, se recolectaron muestras de raíces, las cuales presentaran nódulos. Debido a que los fitonemátodos se caracterizan por el desarrollo de una sofisticada interacción con las raíces de la planta hospedera donde inducen la formación de células multinucleadas gigantes y agallas, que sólo pueden ser observadas cuando la planta se desecha (Jones et al., 2001; Sánchez, 2007).
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Según Perry & Moens, 2006, “Los nematodos fitoparásitos, según el género, tienen en la región anterior (cabeza) un estilete usado para perforar o penetrar las células de las plantas y a través de él extraer los nutrientes, causando enfermedades en diferentes cultivos”. Por ello, en la presente práctica, se logró encontrar la presencia de nemátodos, sin embargo, todos estos fueron clasificados como saprófitos y no como parásitos (fitonemátodos) por la ausencia del estilete, el cual es considerado un órgano de adaptación al parasitismo.
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La técnica usada denominada “Técnica de Baermann modificada en copa”, se basa en los principios de movilidad de los nemátodos y de mayor densidad de estos que el agua, por lo que este método funciona solamente para nemátodos muy móviles, normalmente los nemátodos parásitos tienen escasa movilidad, siendo los de vida libre los que más se mueven y los que más abundantes resultan en este método de extracción, la técnica de Baermann se fundamenta en sí, en la migración activa o movimiento de las larvas promovida por el ingreso de agua en la muestras, las cuales por filtración y diferencia de densidades, son las que se hunden sobre el fondo, donde pueden ser colectadas para su identificación. Este método se fundamenta en la capacidad de las larvas de migrar hacia el fondo de la copa por el termotropismo e hidrotropismo positivo para concentrarlas biológicamente. La sensibilidad varía entre 59,5% y 80% (Tello R. & Canales M.; 2000).
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Con este método se logró la obtención de larvas de nematodos en 1 de las 3 muestras recolectadas. Sin embargo, los resultados fueron negativos en la detección de fitonemátodos. Esto puede explicarse debido a la realización de una mala técnica, debido a que la técnica de Baermann modificada en copa se usa para muestras de suelos.
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Por ello, lo recomendable para el trabajo de fitonemátodos en raíces, sería la previa incubación de las muestras de raíces con nódulos, adicionándoles agua tibia a unos 25°C, ya que al darle las condiciones ideales para su crecimiento, los nematodos saldrían y a partir de esto continuar con la técnica de Baermann modificada en copa para que por filtración, estos caigan.
CONCLUSIONES
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La detección de fitonemátodos en la presente práctica fue de resultado negativo.
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Es necesaria la presencia del estilete para determinar la detección de un nematodo fitoparásito, debido a que éste es considerado un órgano de adaptación al parasitismo.
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Para trabajar con raíces es necesario la previa incubación de las muestras con nódulos, porque al darle las condiciones ide ales para su crecimiento, saldrán los nematodos y se continúa con la técnica de Baermann modificada en copa.
Referencias Bibliográficas:
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Frapolli Daffari, Elvira. 2000 .Los nematodos fitoparásitos. Junta de And alucía, Consejería de agricultura y pesca. Perry, R. & Moens, M. 2006. Plant nematology. CAB International, London. Tello R, Canales M. 2000. Técnicas de diagnóstico de enfermedades causadas por enteroparásitos. Diagnóstico [en línea] [acceso 23 de Setiembre de 2016]; 39(4): [2 p.] Disponible en: www. fihu -diagnostico.org.pe/revista/numeros/2000/.../197198.html Agrios, G. N. 2005.Plant pathology. 5th ed. Elsevier academic Press. Amsterdam, Boston, Heidelberg, London, New York, Oxford, Paris, San Diego, san Francisco, Singapore, Sydney, Tokyo. 992 pp.
