Revista Brasileira de Farmacognosia 27 (2017) 297-301
www. Elsevier. com / cari / BJP
Artikel asli
Isolasi alkaloid quinoline dari tiga spesies Choisya oleh kecepatan tinggi kromatografi berlawanan dan penentuan kapasitas antioksidan mereka Gilda G. Leitão
*
Sebuah.. Sebuah
, Joao Paulo B. Pereira
b
Patricia D. Fernandes , Fabio Boylan
Sebuah
b
c
, Patricia R. de Carvalho , Denise R. Ropero ,
c
a
Instituto de Pesquisas de Produtos Naturais, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brasil
b
Laboratorio de Farmacologia da Dor e da Inflamac¸ ao, Instituto de Ciencias Biomédicas, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, RJ, Brasil c Sekolah
Farmasi dan Ilmu Farmasi, Trinity Biomedical Sciences Institute, Trinity College Dublin, Dublin 2, Irlandia
articl ei nfo
abstrak
Pasal sejarah: Menerima 13 Oktober 2016 Diterima 22 Januari 2017 Tersedia online 2 Maret 2017
Choisya ternata Kunth, C. ternata var. Sundance Kunth dan hybrid Choisya 'Aztec-Pearl' tiga spesies terkait milik keluarga Rutaceae. ekstrak etanol dibuat dari daun tiga spesies tersebut dan dievaluasi dalam kaitannya dengan aktivitas antioksidan
Kata kunci: alkaloid quinoline kromatografi arus balik Anhydroevoxine Choisyine ROS
mereka menggunakan in vitro dan ex vivo model. Ekstrak etanol milik tiga spesies menghasilkan profil antioksidan yang sangat tinggi yang dibuktikan dengan DPPH aktivitas antioksidan, penentuan total fenolat dan flavonoid setara. Generasi spesies reaktif oksigen dalam leukosit dirangsang dengan LPS secara dramatis berkurang ketika tiga ekstrak etanol digunakan. Alkaloid anhydroevoxine dan choisyine diisolasi dari ekstrak etanol C. ternata menggunakan HEMWat (4: 6: 5: 5) sebagai sistem pelarut dengan cara berkecepatan tinggi kromatografi lawan. Ini adalah pertama kalinya quinoline alkaloid diisolasi dari spesies ini menggunakan HSCCC. Senyawa ini juga diuji untuk kemampuan mereka untuk menghambat generasi ROS di leukosit dirangsang oleh LPS dan hasilnya juga menyarankan bahwa mereka reaktif inhibitor oxygenase.
© 2017 Sociedade Brasileira de Farmacognosia. Diterbitkan oleh Elsevier Editora Ltda. Ini adalah sebuah artikel akses terbuka di bawah CC BY-NC-ND lisensi (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd / 4.0 /). /).
pengantar
Choisya ternata Kunth, yang dikenal sebagai jeruk Meksiko atau Meksiko bunga jeruk, secara luas dibudidayakan dibudidayakan di Inggris sejak 1825 (Muller, 1940; Benson, 1943 Benson, 1943)). Ada juga berbagai berdaun emas, yang merupakan disebut C. ternata var. Sundance. Choisya dumosa var. arizonica juga dikenal sebagai Meksiko-oranye Meksiko-oranye atau starleaf dan Meksiko sebagai “sorilla” atau “zorillo”. Kedua spesies dianggap beracun untuk live-saham, bantalan senyawa beracun (Dayton, Dayton, 1931) yang yang belum teridentifikasi. C. ternata dan C. dumosa var. arizonica secara buatan menyeberang pada tahun 1982 (Lancaster ,1991) ,1991) untuk menghasilkan Choisya hybrid 'Aztec-Pearl', yang memiliki bunga lebih besar dari orang tua, tetapi tidak sebagai kuat bertubuh seperti mereka. Sebelumnya studi fitokimia pada C. ternata telah menunjukkan pentingnya non-volatile alkaloid Quino-lini. Ada tujuh alkaloid utama yang tersebar luas di keluarga Rutaceae dan yang ditemukan di spesies Choisya: skimmianine, kokusaginine, 7-isopentenyloxy-c-fagarine, evoxine,
*
Penulis yang sesuai. E-mail: E-mail:
[email protected] (GG (GG Leitão).
choisyine, platydesminium methosalt dan balfourodinium methosalt (Johns et al, 1967.; Grundon et al, 1974.; Boyd et al., 2002). 2002 ). Boyd et al. (2007)memiliki (2007)memiliki terisolasi tujuh belas alkaloid quinoline dari C. ter-nata, termasuk beberapa tingkat oksidasi selama biosintesis mereka. spesies yang berbeda dari Rutaceae telah digunakan sebagai tonik, obat penurun panas, terhadap proses inflamasi dan mikroba dan dalam pengobatan malaria (Cruz, 1995; de Moura Moura et et al., 1997; Gonzaga et a l., 2003; Moreira dan Guarim-Neto, 2009; Jullian et al., 2006) 2006 ). Beberapa senyawa kimia yang diisolasi dari spesies yang berbeda dari keluarga ini dapat menjelaskan sifat farmakologi diamati untuk ekstrak tapi satu kelas adalah menonjol. Alkaloid quinoline disebutkan sebelumnya dapat bertanggung jawab untuk beberapa kegiatan diidentifikasi. Sebelumnya kelompok kami telah menunjukkan bahwa ekstrak yang diperoleh dari C. ternata dan dua alkaloid quinoline mereka serta com-pound hadir dalam minyak esensial memiliki aktivitas antinociceptive (Radulovic' et al, 2011.; Pinheiro et al., 2014). 2014). Yowtak et al. (2011) telah menunjukkan hubungan antara nyeri neuropatik tulang belakang dan stres oksidatif. Dalam penelitian ini, metode kecepatan tinggi kromatografi berlawanan (HSCCC) dikembangkan untuk fraksinasi dari etanol
http://dx.doi.org/10.1016/j.bjp.2017.01.003 0102-695X / © 2017 Sociedade Brasileira de Farmacognosia. Diterbitkan oleh Elsevier Editora Ltda. Ini adalah sebuah artikel akses terbuka di bawah CC BY-NC-ND lisensi (http: (http: // creativecommons.org/licenses/by-NC creativecommons.org/licenses/by-N C-nd / 4.0 /) /).
298
GG Leitão et al. / Revista Brasileira de Farmacognosia 27 (2017) 297-301
ekstrak daun tiga spesies Choisya; C. Aztec-Pearl, C. ternata dan C. ternata var. Sundance. kromatografi arus balik (CCC) adalah bentuk kromatografi partisi cair-cair dimana fase diam diadakan di dalam kolom tanpa menggunakan dukungan padat (Conway, 1990). Dalam peralatan CCC modern, kolom dapat memutar dalam satu poros, menghasilkan hidrostatik equi-Librium dari dua fasa cair bercampur (fase diam dan fase gerak), atau dapat memutar dalam gerakan planet (dua sumbu rotasi), menghasilkan keseimbangan hidrodinamik dari dua fase. mesin HSCCC memiliki keseimbangan hidrodinamik dari dua fasa cair dan sebagian besar telah digunakan untuk fraksinasi dan pemurnian produk alami (Leitão et al, 2012.; Friesen et al., 2015). Banyak sistem pelarut yang berbeda telah digunakan untuk pemurnian alkaloid menggunakan peralatan hidrostatik atau hidro-dinamis modern. senyawa terionisasi seperti alkaloid dapat dimurnikan menggunakan teknik yang disebut pH-zona penyulingan CCC, devel-OpEd oleh Ito di tahun 1990-an ( Ito dan ma, 1996), modifikasi dari teknik CCC yang menggunakan asam atau basa sebagai pengikut dan / atau eluters. Dalam sebuah studi dari Fanget al. (2011)k ompilasi dari beberapa sistem sol-ventilasi untuk pemurnian alkaloid dari tumbuh-tumbuhan, oleh kedua HSCCC dan pH-zona-pemurnian CCC disajikan. Dalam review yang dilaporkan pemisahan 94 alkaloid dari lebih dari tiga puluh sumber tanaman yang berbeda dengan HSCCC konvensional menggunakan tiga belas sistem pelarut yang berbeda. Para penulis melaporkan bahwa lebih dari 67% dari alka-loids dimurnikan dengan asetat-metanol-air heksana-etil (yang disebut
ekstraksi tanaman Ekstraksi daun (100 g) C. ternata, C. Aztec-Pearl dan C. ternata var. ◦
Sundance dilakukan dengan menggunakan Soxhlet aparat (80 C) selama 72 jam. Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi Soxhlet adalah etanol. Ekstrak (ca. 40 g setiap tanaman) dikurangi menjadi kering pada tekanan rendah menggunakan rotary evaporator di mandi pemanas. Peralatan HSCCC fractionations dilakukan pada kumparan 98 ml dari Quattro HTPrep kontra-saat kromatografi (AECS, Bridgend, Inggris Raya) dilengkapi dengan dua kumparan yang berisi dua multi-layer kumparan politetrafluoroethylene masing-masing (Bobbin 1 berisi 26 ml dan 224 ml kumparan, 1,0 mm id dan 3,2 mm id masing-masing; gelendong 2 berisi 95 ml dan 98 ml kumparan, baik 2,0 mm id). Kecepatan rotasi disesuaikan hingga 865 rpm. The HSCCC sys-tems yang terhubung ke pompa aliran konstan Jasco PU-2089S Plus (Jepang spektroskopi Corporation, Jepang). Sebuah 5 ml sampel lingkaran (tekanan rendah sampel injeksi valve, Model 5020, Rheodyne) digunakan untuk menyuntikkan sampel. Pemisahan dilakukan pada ruang marah-K arakteristik.
sistem HEMWat) dan CHCl3 MeOH-H2O. Bahkan, sistem pelarut mewakili dua keluarga serbaguna yang dapat digunakan dalam kromatografi lawan. Selain itu, alkaloid quinoline belum diisolasi dari C. ternata dengan cara kromatografi lawan.
Sejak spesies Choisya dan beberapa senyawa terisolasi mereka telah menunjukkan aktivitas terhadap nyeri neuropatik tulang belakang, kami memutuskan untuk mengevaluasi ekstrak etanol dari tiga spesies ini dari Choisya dalam kaitannya dengan kapasitas mereka melindungi terhadap spesies oksigen reac-tive. anhydroevoxine (1), dan choisyine (2), terisolasi dari C. ternata dalam satu langkah analisis HSCCC, juga dievaluasi.
Bahan dan metode
Bahan kimia Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi tanaman yang kelas analitis dan diperoleh dari Hazard Fasilitas Material toko (HMF-Trinity College Dublin) dan orang-orang untuk berlawanan kromatografi September-arations adalah dari HPLC kelas dibeli dari Suntuk Brasil (Rio de Janeiro, Brasil).
bahan tanaman daun segar dari Choisya ternata Kunth, hibrida C. Aztec-Pearl dan C. ternata var. Sundance, Rutaceae, dikumpulkan di Dublin, Irlandia pada September 2013 dan spesimen voucher mereka (ref. TCD Hodkinson & Ropero 01, 02 dan 03) diendapkan di Herbar-ium dari Trinity College, Dublin. Sampel diidentifikasi oleh Dr Trevor Hodkinson dari Departemen Botani, Trinity College, Dublin.
analisis HPLC Sistem HPLC terdiri dari modul Waters Aliansi Talak dilengkapi dengan suhu diprogram sampler auto dan Waters 2996 detektor PDA. Pemisahan LC dilakukan pada fase kolom terbalik C18 (250 mm ×4,6 mm, 5 m) dari Thermo Scientific, menggunakan fase gerak A (air) dan mobile fase B (asetonitril dengan 1% asam format) dalam program gradien dengan aliran 0,8 ml / menit: 0-30 min: 10% B ; 30-32 min: 100% B; 32-35 min: 10% B dan 35-38 min: 10% B. Volume injeksi tunggal adalah 10 l. UV / vis spektrum antara 190 dan 400 nm dicatat.
Pilihan sistem pelarut untuk fractionations CCC jumlah kecil dari ekstrak etanol daun masing-masing spesies Choisya dilarutkan dalam tabung tes terpisah yang berisi heksana-etil asetat-metanolair (HEMWat) sistem pelarut dalam rasio 10: 5: 5: 1, 1: 1: 1: 1, 6: 4: 6: 4 dan 4: 6: 5: 5. Kemudian tabung uji dikocok dan sampel diizinkan untuk par-tition antara dua fase cair. aliquot sama dari setiap tahap yang terlihat berdampingan pada silika gel TLC piring (Merck, Seni 5554, Jerman.) dikembangkan dengan pelarut sistem chloro-bentuk: metanol: air (9: 1: 1). Hasil divisualisasikan di bawah sinar UV (254 dan 365 nm) diikuti dengan penyemprotan TLC piring dengan vanillin (2% dalam metanol) dan asam sulfat (1% dalam metanol).
fractionations HSCCC Penyusunan sistem pelarut dua-fase dan sampel untuk injeksi dipilih sistem pelarut (heksan: etil asetat: metanol: air 6: 4: 5: 5) telah secara menyeluruh disetimbangkan dalam corong pemisah pada suhu kamar. Dua fase yang September-arated tak lama sebelum digunakan dan degassed dengan sonikasi selama 10 menit. Solusi sampel dibuat dengan melarutkan sampel (ca. 500 mg setiap ekstrak Choisya) dalam campuran pelarut dari 2,5 ml fase diam dan 2,5 ml fase gerak dari sistem pelarut yang digunakan untuk pemisahan HSCCC.
Prosedur pemisahan HSCCC 95 ml coil pertama kali sepenuhnya diisi dengan fase berair stasioner yang lebih rendah pada laju alir dari 5 ml / menit. Kemudian fase gerak organik atas dipompa ke dalam kolom pada tingkat aliran
GG Leitão et al. / Revista Brasileira de Farmacognosia 27 (2017) 297-301
2 ml / menit, sedangkan aparat itu diputar di 860 rpm, pada suhu con-stant
299
hasil dan Diskusi
◦
dari 25 C. larutan sampel (ca. 500 mg setiap Choisya ekstrak di 5 ml sistem biphasic) disuntikkan ke dalam col-UMN setelah keseimbangan hidrodinamik dicapai. Stasioner fase retensi Sf untuk sistem pelarut di setiap fraksinasi adalah sekitar 84-87%. Pecahan dari 4 ml dikumpulkan dalam total 80 di masing-masing berjalan.
Penentuan aktivitas antioksidan Aktivitas antioksidan dilakukan pada ekstrak etanol daun Choisya AztecPearl, C. ternata dan C. ternata var. matahari-dance. Aktivitas antioksidan diselidiki menggunakan empat tes yang berbeda: DPPH bebas aktivitas antioksidan uji mikro menggunakan piring 96-baik, kuantifikasi total fenolat dan penentuan isi total flavonoid dan akhirnya produksi spesies oksigen reaktif.
aktivitas antioksidan, penggunaan 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) Efek radikal dari ekstrak tanaman adalah deterditambang menggunakan metodologi DPPH. Di sini, hidrogen radikal bebas kemampuan sumbangan dari ekstrak tanaman diukur dari pemutihan solusi etanol berwarna ungu DPPH. Uji ini didasarkan pada penelitian yang dilakukan olehMensor et al. (2001). Assay total fenolat Kandungan fenol total ekstrak ditentukan fol-melenguh metode FolinCiocalteu dilakukan oleh Gursoy et al. (2009). hanya disesuaikan dengan mikro sebuah (Medina-Remon et al., 2009). Assay total flavonoid Penentuan total kandungan flavonoid dari ekstrak itu dilakukan
kromatografi arus balik (CCC), sebuah parti-tion teknik kromatografi caircair tanpa dukungan solid, sangat ideal untuk pemisahan campuran produk alami yang kompleks dan penggunaannya di daerah ini menarik terus tumbuh setiap hari (Friesen et al., 2015). Tantangan utama dari teknik ini adalah pemilihan sistem pelarut yang benar, yang dapat menjelaskan 90% dari waktu yang dihabiskan untuk analisis (Ito, 2005). Beberapa strategi telah prodiajukan dalam tahun-tahun terakhir untuk pilihan sistem cepat pelarut (Friesen dan Pauli, 2007; Costa dan Leitão, 2010; Yin et al, 2010.; Leitão et al, 2012.; Liang et al., 2015) literatur melaporkan heksana-etil asetat-metanolair, biasanya disebut sebagai HEMWat, sebagai sistem pelarut yang paling digunakan dalam pemisahan CCC (Leitão et al., 2012). Hal ini karena mencakup berbagai macam polaritas, yang berguna dalam pemurnian baik rendah untuk senyawa polaritas menengah serta media untuk orang-orang polaritas tinggi. Jadi, sistem pelarut ini adalah pilihan kita untuk pemurnian tiga ekstrak Choisya: C. Aztec-Pearl, C. ternata dan C. ternata var. Sundance. Beberapa rasio dari sistem pelarut HEMWat diuji untuk fraksinasi ekstrak: HEMWat 10: 5: 5: 1, 1: 1: 1: 1, 6: 4: 6: 4 dan 4: 6: 5: 5, yang yang terakhir salah satu yang memberikan hasil terbaik, affording nilai K senyawa target (alkaloid) dekat 1. Dua alkaloid, anhydroevoxine, 1 (0,5% yield) dan choisyine, 2 (1,1% yield), diisolasi dalam HSCCC tunggal langkah dari daun C. ternata. Choisyine juga diisolasi dari C. Aztec-Pearl dan C. ternata var. Sundance. Namun, anhydroevox-ine tidak dapat diisolasi senyawa murni dalam satu langkah dari dua spesies ini. Hal ini bisa disebabkan perbedaan dalam kompleksitas dari matriks (ekstrak etanol), yang sebelumnya diamati oleh kelompok kami ketika mengoptimalkan isolasi verbascoside dari spesies Lantana dan Lippia (Leitão et al., 2015) Kedua alkaloid yang lebih diidentifikasi oleh HPLC dalam ekstrak etanol dari dua spesies lain (data tidak ditampilkan).
berdasarkan metodologi diadaptasi oleh Gursoy et al. (2009).
Penentuan produksi spesies oksigen reaktif (ROS) Leukosit dikumpulkan dari kantong udara CRE subkutan ated di daerah dorsal mouse untuk model migrasi sel yang disebabkan oleh 6
Anhydroevoxine (1) diisolasi sebagai kristal putih dan struktur yang tidak diragukan lagi dibentuk dengan cara MS dan NMR analisis dan perbandingan dengan data literatur (Akhmedzhanova et al., 1975).
karagenan dan disimpan dalam botol (10 sel) dalam vol-ume dari 1 ml. Sel Putih kristal padat; R f : 0.52 (kloroform: metanol: air;
◦
lanjut diinkubasi pada 37 C dan 5% CO2selama 1 jam. ekstrak etanol mentah dari tiga spesies Choisya atau senyawa terisolasi kemudian ditambahkan ke sel di con-centration dari 1, 10 dan 30 g / ml dan diinkubasi selama 30 menit lainnya menggunakan kondisi yang sama. Sel-sel kemudian diobati dengan 10 nM phorbol myristate acetate (PMA) dan re-diinkubasi pada kondisi yang sama selama 45 menit. Dua mikroliter larutan 2 -7 dichlorodihydrofluorescein diasetat (DCF-DA) ditambahkan, diikuti oleh masa inkubasi lain 30 menit di Condi-tions yang sama. DCF-DA meresap dengan cepat melalui membran sel. Setelah di rongga intraseluler itu dihidrolisis oleh stearases diubah menjadi 2 -7 -dichlorofluorescin (DCFH), yang merupakan senyawa non-fluoresen kedap membran sel. Di hadapan setiap ROS, DCFH teroksidasi di dalam sel membentuk senyawa fluorescent: 2 -7 -dichlorofluorescin (DCF), yang tetap di rongga intraseluler (Srivastava dan Gonugunta 2009). Flu-orescence diukur dengan aliran cytometry dalam saluran FL-1.
◦
9: 1: 1); mp: 88-92
C; [˛]
2 Cl2 ); EIMSfor
+
20D
0.0 (c0.009, CH +
1
C18 H19 TIDAK 5m / z; 330 [M + H] dan 352 [M + Na] ; H NMR (CDCl3 , 400 MHz) ı: 3,32 (1H, t, J = 10,92, H-2), 4.11 (3H, s, OCH3 -C-8), 4,29 (1H, m, H-1), 4,41 (3H, s, OCH3 -C-4), 7,02 (1H, d, J = 2,4, H-9), 7.22 (1H, d, J = 9,0, H-6), 7,57 (1H, d, J = 2,4, H -10), 7,96 (1H, d, J = 9,0, H-5); 13
C NMR (CDCl 3 , 100 MHz) ı: 18,9 (CH 3 , C-4), 24,6 (CH 3 , C-5), 58,3 (CH, C-
3), 59,0 (OCH3 , C-4), 61,6 (OCH 3 , C-8), 61,7 (CH, C-2), 69,4 (CH 2 , C-1), 102,3 (CH, C-9), 104,6 (C, C-3), 114,8 (CH, C-6), 118,1 (CH, C-5), 141,6 (C, C-8a) , 143,1 (CH, C-10), 143,2 (C, C-8), 151,1 (C, C-7), 155,5 (C-4a), 157,1 (CH, C-4), 164,3 (C-2) .
Choisyine (2) diisolasi sebagai bubuk kekuningan amorf dan strukturnya yang tidak diragukan lagi dibentuk dengan cara MS dan NMR analisis dan perbandingan dengan data literatur (Frolova dan Kuzovkov 1963). Kekuningan amorf padat; R f: 0,44 (chloro-bentuk: metanol: air; 9: 1: 1); ◦
20D
mp: 88-92 C; [˛]
0.0 (c 0,009,
300
GG Leitão et al. / Revista Brasileira de F armacognosia 27 (2017) 297-301
Tabel 1 Korelasi antara parameter diteliti DPPH aktivitas antioksidan dengan jumlah fenolik dan flavonoid setara dengan masing-masing ekstrak etanol.
spesies tanaman
DPPH (EC50 ) (G / ml)
Choisya Aztec-Pearl
25,84 ± 0,005
338,33 ± 0,002
0.59
Choisya ternata 'Sundance'
Sebuah
713,33 ± 0,012
182,77
± 0,003 ± 0,005
Choisya ternata
9.32 ± 0,002
655,00 ± 0.014
37.42
± 0,003
a
Fenolat (g gaes / ekstrak mg)
Flavonoid (g gaes / ekstrak mg)
EC50nilai tidak terdefinisi. Konsentrasi EC 50nilai terlalu rendah untuk memungkinkan interpretasi tetapi merupakan indikasi potensi tinggi. EC 50 untuk Ginkgo biloba dalam uji DPPH adalah 38
±0,005. Setiap assay dilakukan dalam rangkap tiga.
+
CH2 Cl2); EIMS untuk C18 H19 TIDAK 5m / z; 330 [M + H] dan 352 [M + + 1
Na] ; H NMR (CDCl3 , 400 MHz) ı: 1,28 (3H, s, H-4), 1,41 (3H, s, H-5), 2,02 (1H, s, H-1), 3,72 (1H, m, H-3), 3,95 (3H, s, OCH3 -C-7), 4.33 (3H, s, OCH3 -C-4), 4,78 (1H, t, J = 9,5, H-2), 6,97 (1H, d, J = 2,4, H -9), 7,18 (1H, s, H-8), 7,51 (1H , d, J = 2,4, H-10);
13
C NMR (CDCl3 , 100 MHz) ı: 24,1
(CH3 , C-4), 26,1 (CH3 , C-5), 33,7 (CH2, C-1), 55,7 (OCH3 , C-7), 58,8 (OCH3 , C-4), 71,9 (CH, C-3), 90,5 (CH, C-2), 93,08 (C, C-3), 102,7 (C, C4a), 104,6 (C, C-7) , 106,4 (CH, C-8), 118,7 (C, C-5), 142,5 (C, C-8a), 144,5 (C, C-6), 148,3 (C, C-4), 156,5 (CH, C-4), 164,3 (C-2). aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol dari tiga Choisya jenis
DPPH, Total fenolat dan flavonoid setara Ekstrak etanol dari daun Choisya Aztec-Pearl, C. ternata var. Sundance dan C. ternata diuji untuk aktivitas antioksidan dan kemudian dibandingkan (Tabel 1). The DPPH bebas aktivitas antioksidan menggunakan spektrofotometri UV-vis pertama kali digunakan, diikuti oleh Total fenolat dan flavonoid setara. Hal ini jelas dari val-ues bahwa ekstrak etanol daun dari spesies Choisya memiliki aktivitas antioksidan lebih besar daripada ekstrak etanol Ginkgo biloba, yang digunakan sebagai kontrol positif. kontrol negatif hanya terdiri dari etanol dan DPPH. Oleh karena itu, menurut penelitian ini, ketiga sampel merupakan antioksidan lebih kuat dari standar G. biloba. Aktivitas antioksidan fenolat dan turunannya tergantung pada jumlah dan posisi gugus hidroksil terikat pada cincin aromatik, situs mengikat dan posisi saling gugus hidroksil di cincin aromatik dan jenis substituen (Rico et al., 2013). Total kandungan fenolik tertinggi terlihat pada ekstrak C. ternata Aztec-Pearl (713,33 g GAE / ekstrak mg). Hal ini diikuti oleh C. ternata var. ekstrak Sundance dan kemudian ekstrak C. ternata. Flavonoid adalah senyawa fenolik yang bisa responsi-ble untuk kapasitas antioksidan tanaman obat. Menurut hasil dalam penelitian ini, jumlah tertinggi flavonoid, 182,77 ±0,005 setara dengan quercetin, ditemukan, seperti yang diharapkan, untuk C. ternata var. Sundance, spesies berdaun emas. Dari analisis Tabel 1. dapat dilihat bahwa ada korelasi yang jelas antara parameter diteliti (Total pheno-lic konten, flavonoid setara dan aktivitas scavenging DPPH) untuk Choisya Aztec-Pearl, C. ternata dan C. ekstrak ternata Sundance. Kegiatan scavenging diukur dengan DPPH menunjukkan sangat baik cor-kaitannya dengan kuantitas fenol dan flavonoid di masingmasing ekstrak tersebut.
dari 10 g / ml perlindungan adalah sekitar 98% dan pada konsentrasi 30 g / ml ia pergi hingga 99%. Menurut model ini, anhy-droevoxine melindungi sel dengan 71% pada 30 g / ml sedangkan choisyine menganugerahkan 64% perlindungan pada konsentrasi yang sama. Dalam leukosit, ROS terutama dihasilkan oleh NADPH oksidase (Sauer et al., 2001) target protein kinase C, yang diaktifkan oleh PMA (Karlsson et al., 2000). Pembentukan ROS PMAdiinduksi secara signifikan dikurangi dengan spesies Choisya di 10 mM, mencerminkan sifat radikal-pembilasan yang dikenal (Lo et al., 2002). Sebaliknya, spesies Choisya tidak mengganggu PMA-diaktifkan ROS generasi hingga 10 mM, tidak termasuk sifat anti-oksidan tidak spesifik. Hasil ini menunjukkan bahwa C. ternata dan alkaloid yang bisa menghambat pembentukan ROS atau produksi. Penelitian ini juga menunjukkan bahwa Cyathula prostata exhib-ited kegiatan anti-inflamasi dan antinociceptive dan ini dimediasi oleh jalur lain tetapi tidak oleh tindakan langsung pada metabolisme oksidatif (Imbrahim et al., 2012). Poeckel et al. (2008)mengamati bahwa aksi officinalis Rosmarinus officinalis dan Salvia, serta konstituen utama mereka, diterpenes carnosol dan asam carnosic dalam kaitannya dengan aktivitas anti-inflamasi mereka memiliki komponen yang kuat terkait dengan kapasitas antioksidan mereka. Evaluasi generasi spesies oksigen reaktif dalam leuko-cytes dirangsang oleh PMA, diikuti dengan penggunaan diterpenes ini dan ekstrak tumbuhan menunjukkan hubungan kuat antara tindakan anti-inflamasi dan kapasitas antioksidan tertentu.
Hal demikian bisa disimpulkan bahwa tiga spesies Choisya eval-uated dimiliki potensi antioksidan yang sangat tinggi seperti yang digambarkan oleh in vitro dan ex vivo tes yang digunakan dalam penelitian ini. Hal yang sama berlaku untuk dua alkaloid quinoline diisolasi dari C. ternata. Itu juga pertama kalinya bahwa alkaloid quinoline diisolasi dengan cara kromatografi lawan dari spesies ini.
kontribusi penulis
GGL dan JPBP melakukan HSCCC pemisahan dan pilihan pelarut systems. RRC, DRR, PDF dan FB melakukan percobaan antioksidan. FB juga dilakukan pemisahan HSCCC. Konflik kepentingan
Para penulis menyatakan tidak ada konflik kepentingan. Ucapan Terima Kasih
produksi ROS Generasi spesies reaktif oksigen diukur dalam leukosit dengan metode yang dijelaskan sebelumnya. Hal ini diamati bahwa C. ternata dan C. ternata var. Sundance sama dilindungi leuco-cytes dari menghasilkan radikal bebas ketika dirangsang dengan PMA sebesar 83% baik pada 10 g / ml dan dengan 95% dan 92% pada 30 g / ml, masing-masing. Namun, dalam model ini C. Aztec-Pearl menganugerahkan sedikit lebih tinggi pro-tection sel setelah stimulasi dengan PMA; pada konsentrasi
Para penulis dari Brasil ingin mengakui hibah dari CNPq dan FAPERJ. Para penulis dari Irlandia ingin acknowl-tepi Program Otoritas Pendidikan Tinggi untuk Penelitian di Third-Level Lembaga Cycle 5 ini dukungan dana untuk TBSI dan untuk memperkuat pentingnya SFI Program ISCA-Brasil (Grant tidak ada. SFI / 13 / ISCA / 2843) yang berkontribusi terhadap kerja kolaboratif antara Brasil dan Irlandia.
Referensi Akhmedzhanova, VI, Bessonova, IA, Yunusov, SY, 1975. Methylevoxine, baru alkaloid dari Haplophyllum perforatum. Khim. Prir. Soedin. 11, 272. Benson, LD 1943. Revisi status pohon gurun Barat dan semak-semak. II. Saya. J. Bot. 30, 630-632.
GG Leitão et al. / Revista Brasileira de Farmacognosia 27 (2017) 297-301 Boyd, DR, Sharma, ND, Loke, PL, Malone, JF, McRoberts, WC, Hamilton, JTG, 2002. Mutlak tugas konfigurasi dan enantiopurity penentuan alkaloid kiral dan kumarin berasal dari Odan epoksida C-prenyl. Chem. Commun. 24, 3070-3071. Boyd, DR, Sharma, ND, Loke, PL, Malone, JF, McRoberts, WC, Hamilton, JTG 2007 . Sintesis, struktur dan stereokimia alkaloid quinoline dari Choisya ternata. Org. Biomol. Chem. 5, 2983-2991. Conway, WD, 1990. Counter-sekarang Chromatography: Aparatur, Teori dan Aplikasi. VCH Publishers, Inc., NY. Costa, FN, Leitão, GG 2010. Strategi seleksi sistem pelarut untuk isolasi flavonoid oleh Lawan Chromatography. J. September Sci. 33, 336-347. Cruz, GL, 1995. Dicionário de Plantas úteis do Brasil, vol. 5., pp. 436. Dayton, WA, 1931. Penting People Tanaman Barat. US Department of Agricul-mendatang, Miscellaneous Publikasi Nomor 101. De Moura, NF, Ribeiro, HB, Machado, ECS, Ethur, EM, Zanatta, N., Morel, A. 1997. Benzophenanthridine alkaloid dari Zanthoxylum rhoifolium. fitokimia 46, 1443-1446. Fang, L., Liu, Y., Yang, B., Wang, X., Huang, L. 2011. Pemisahan alkaloid dari tumbuhtumbuhan menggunakan kecepatan tinggi k ontra-arus kromatografi. J. September Sci. 34, 2545-2558. Friesen, JB, Pauli, GF 2007. perkembangan rasional dari keluarga siste m pelarut di kontra-arus kromatografi. J. Chromatogr. Sebuah 1151, 51-59. Friesen, JB, McAlpine, JB, Chen, SN, Pauli, GF 2015. pemisahan arus balik produk alami: update. J. Nat. Melecut. 78, 1765-1796. Frolova, VI, Kuzovkov, AD 1963. alkaloid dari Choisya ternata: struktur choisyine. Zl Obshchei Khimii 33, 125. Gonzaga, WA, Weber, AD, Giacomelli, SR, Simionatto, E., Dalcol, II, Dessoy, ECM, Morel, AF, 2003. Komposisi dan antibakteri alkaloid dari Zanthoxylum rhoifolium. Planta Med. 69, 773-775. Grundon, MF, Harrison, DM, Spyropoulos, CG, 1974. Biosintesis dari alkaloid furoquinoline, skimmianine, evoxine dan choisyine: mekanisme pembentukan cincin furan. Waktu hidroksilasi aromatik dan shabu-ylation. J. Chem. Soc. Chem. Comm un., 51-52. Gursoy, N., Sarikurkcu, C., Cengiz, M., Solak, MH, 2009. kegiatan antioksidan, logam isi total fenolat dan flavonoid dari tujuh spesies Morchella. Makanan Chem. Toxicol. 47, 23812388. Imbrahim, B., Abimbola, S., van Rooyen, A., Van de Venter, M. 2012. Antiinflam-matory, kegiatan analgesik dan antioksidan Cyathula prostrata (Linn.) Blume (Amaranthaceae). J. Ethnopharmacol. 141, 282-289. Ito, Y. 2005. aturan emas dan perangkap dalam memilih kondisi optimum untuk kecepatan tinggi kontra-arus kromatografi. J. Chromatogr. Sebuah 1065, 145-168. Ito, Y., Ma, Y., 1996. pH-zona-pemurnian melawan-arus kromatografi. J. Chro-matogr. Sebuah 753, 1-36. Johns, SR, Lamberton, JA, Sioumis, AA, 1967. alkaloid dari Choisya ternata. Itu struktur choisyine. Aust. J. Chem. 20, 1975-1981. Jullian, V., Bourdy, G., Georges, S., Maurel, S., Sauvian, M. 2006. Validasi penggunaan sebuah obat antimalaria tradisional dari French Guiana Zanthoxylum rhoifoliu Lam. J. Ethnopharmacol. 106, 348-352. Karlsson, A., Nixon, JB, McPhail, LC, 2000. menginduksi Phorbol miristat asetat neu-trophil aktivitas NADPH-oksidase oleh dua jalur transduksi sinyal yang terpisah: dependent atau independent dari phosphatidylinositol 3-kinase. J. Leukoc. Biol. 67, 396-404. Lancaster, R., 1991. Semak Melalui Seasons. London, HarperCollins.
301
Leitão, GG, Costa, FN, Figueiredo, F. 2012. Strategi seleksi sistem pelarut untuk isolasi produk alam dengan Lawan Chromatography. Dalam: Rai, M., Cordell, GA, Martinez, JL, Marinoff, M., Rastrelli, L. (Eds.), Tanaman Obat: Keanekaragaman hayati dan Obat, vol. 1. CRC Press (Taylor & Francis Group), Boca Raton, FL, pp. 641-668 (Bab 21). Leitão, GG, Pinto, SC, de Oliveira, DR, Timoteo, P., Guimarães, MG, Cordova, WHP, Leitão, SG 2015. lereng × isokratik elusi CCC di isolasi ver -bascoside dan phenylethanoids lainnya: pengaruh kompleksitas dari matriks. Planta Med. 81, 1609-1613. Liang, J., Meng, J., Wu, D., Guo, M., Wu, S. 2015. Sebuah novel 9 × 9 pelarut berbasis peta strategi pemilihan untuk ditargetkan k ontra-arus isolasi produk alami. J. Chromatogr. Sebuah 1400, 27-39. Lo, AH, Liang, YC, Lin-Shiau, SY, Ho, CT, Lin, JK, 2002. Carnosol, antioksidan di rosemary, menekan diinduksi nitrat oksida sintase melalui down-mengatur Faktor-kappaB nuklir di makrofag tikus. Karsinogenesis 23, 983-991. Mensor, LL, Menezes, FS, Leitão, GG, Reis, AS, dos Santos, TC, Coube, CS, Leitão, SG 2001. Skrining tanaman Brasil ekstrak untuk aktivitas antioksidan dengan penggunaan metode radikal bebas DPPH. Phytother. Res. 15, 127-130. Medina-Remon, A., Barrionuevo-Gonzalez, A., Zamora-Ros, R., Andres-Lacueva, C., Estruch, R., Martinez-Gonzalez, MA, Diez-Espino, J., Lamuela-Raventos, RM 2009. Cepat FolinCiocalteu metode menggunakan microtiter 96-baik kartrid piring untuk ekstraksi fase padat untuk menilai jumlah senyawa fenolik kemih, sebagai biomarker dari total asupan polifenol. Anal. Chim. Acta 634, 54-60. Moreira, DL, Guarim-Neto, G. 2009. Usos múltiplos de plantas lakukan cerrado: um estudo etnobotânico na Comunidade Sítio Pindura, Rosário Oeste, Mato Grosso, Brasil. Polibotânica 27, 159-190. Muller, CH 1940. Sebuah revisi Choisya. Saya. Midl. Nat. 24, 729-742. Poeckel, D., Greiner, C., Verhoff, M., Rau, O., Tausch, L., Hornig, C., Steinhilber, D., SchubertZsilavecz, M., Werz, O. 2008. asam carnosic dan carnosol potently menghambat manusia 5-lipoxygenase dan menekan respon pro-inflamasi dirangsang leukosit polimorfonuklear manusia. Biochem. Pharmacol. 76, 91-97. Pinheiro, MMG, Radulovic, 'NS, Miltojevic,' AB, Boylan, F., Fernandes, PD 2014. ester antinociceptive asam anthranilic N-metil: mekanisme aksi di sakit panas-dimediasi. Eur. J. Pharmacol. 727, 106-114. Radulovic, 'NS, Miltojevic,' AB, McDermott, M., Waldren, S., Parnell, A., Pinheiro, MMG, Fernandes, PD, Menezes, FS 2011. Identifikasi anti baru-nociceptive alkaloid isopropil Nmethylanthranilate dari minyak esensial Choisya ternata Kunth. J. Ethnopharmacol. 135, 610-619. Rico, M., López, A., Santana-Casiano, JM, González, AG, González-Dávila, M., 2013. Variabilitas profil fenolik dalam tricornutum diatom Phaeodactylum tumbuh di bawah tembaga dan besi stres. Limnol. Oceanogr. 58, 144-152. Sauer, H., Wartenberg, M., Hescheler, J. 2001. spesies oksigen reaktif sebagai intracel -utusan lular selama pertumbuhan sel dan diferensiasi. Sel. Physiol. Biochem. 11, 173-186. Srivastava, N., Gonugunta, VK, 2009. produksi oksida nitrat terjadi hilir spesies oksigen reaktif dalam sel penjaga selama penutupan stomata yang disebabkan oleh chitosan di epidermis abaxial dari Pisum sativum. Planta 229, 757-765. Yin, L., Li, Y., Lu, B., Jia, Y., Pen, J. 2010. Tren Counter-sekarang Chromatography: aplikasi untuk pemurnian produk alami. September Purif. Wahyu 39, 33-62. Yowtak, J., Lee, KY, Kim, HY, Wang, J., Kim, HK, Chung, K., Chung, JM, 2011. spesies oksigen reaktif berkontribusi untuk nyeri neuropatik dengan mengurangi GABA tulang belakang melepaskan. Nyeri 152, 844-852.
